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Oncology Research 2023年第5期31卷 787-803页

作者： FENGXIANG TANG YANSHI LI MIN PAN ZHIHAI WANG TAO LU CHUAN LIU XIN ZHOU GUOHUA HU Department of Otolaryngology The First Affiliated Hospital of Chongqing Medical UniversityChongqingChina

Lymphatic metastasis(LM)emerges as an independent prognostic marker for hypopharyngeal squamous cell carcinoma(hspSCC),chiefly contributing to treatment *** study aimed to scrutinize the prognostic relevance of hsp90aa1 and its potential regulatory mechanism of concerning LM in ***:In a preceding investigation,hsp90aa1,a differential gene,was discovered through transcriptome sequencing of HPSCC tissues,considering both the presence and absence of *** of hsp90aa1 expression was accomplished via qRT-PCR,western-blotting(WB),and immunohistochemistry(IHC),while its prognostic significance was assessed employing Kaplan–Meier survival analysis(KMSA),log-rank test(LR),and Cox’s regression analysis(CRA).Bioinformatics techniques facilitated the prediction and analysis of its plausible mechanisms in LM,further substantiated by in vitro and in vivo experiments utilizing FaDu cell ***:hsp90aa1 is substantially upregulated in HPSCC with LM and is identified as an independent prognostic risk *** down-regulation of hsp90aa1 can achieve inhibition of tumor cell proliferation,migration and *** in vivo experiments and Bioinformatics exploration hint at promoting LM by Epithelial-mesenchymal transition(EMT),regulated by ***:hsp90aa1,by controlling EMT,can foster LM in *** finding sets the foundation for delving into new therapeutic targets for HPSCC.

关键词： Hypopharyngeal squamous cell carcinoma Lymphatic metastasis hsp90aa1 EMT HNSCC

穿心莲内酯选择性抑制hsp90aa1抗肝癌的药效机制研究

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穿心莲内酯选择性抑制HSP90AA1抗肝癌的药效机制研究

作者：周卫兰州大学

学位级别：硕士

目的:肝癌是世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一。对于肝癌的治疗,手术切除和肝脏移植为首选但费用高昂且捐献者较少,化疗适用于无法手术干预的病人但易产生药源性肝损伤和耐药性,因此开发高效低毒的抗肝癌药物迫在眉睫。课题组前... 详细信息

目的:肝癌是世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一。对于肝癌的治疗,手术切除和肝脏移植为首选但费用高昂且捐献者较少,化疗适用于无法手术干预的病人但易产生药源性肝损伤和耐药性,因此开发高效低毒的抗肝癌药物迫在眉睫。课题组前期从天然产物库中筛选出具有体外抗肝细胞癌活性的小分子化合物穿心莲内酯,并确定了其抑制肝癌(Hep G2)细胞蛋白质合成,干预细胞氨基酸代谢、脂肪酸代谢和糖代谢,诱导细胞凋亡,产生浓度依赖性杀伤肝癌细胞Hep G2的作用。本研究拟在课题组前期研究的基础上,确证穿心莲内酯在体内抗肝癌的作用,深入探究其在体外发挥抗肝细胞癌作用的直接药效靶标,希望为肝细胞癌的治疗及新的抗癌药物开发提供新思路。方法:首先,利用二乙基亚硝胺构建小鼠(C57BL/6j)肝细胞癌模型,评价穿心莲内酯的体内抗肝癌活性。其次,采用基于竞争性标记的化学蛋白质组学策略(Competitive iso TOP-ABPP),系统性地描述了肝癌细胞中穿心莲内酯靶向的蛋白质和可能结合的半胱氨酸位点。然后,在找到穿心莲内酯靶向的蛋白质后,本课题利用RNA干扰技术对目标蛋白进行了敲低,利用细胞活力实验检测了靶标蛋白对穿心莲内酯抗癌活性的影响。接着,在确定靶点为肝癌指标蛋白质、且穿心莲内酯对其发挥抑制作用的基础上,通过细胞活力实验检测了穿心莲内酯抗癌活性与靶标蛋白在癌细胞中表达量的相关性,通过RNA干扰技术和细胞活力实验比较了穿心莲内酯与已有抑制剂的作用。最后,本课题利用小分子-蛋白质对接技术验证了蛋白质组学鉴定的氨基酸残基是穿心莲内酯的结合位点,并通过细胞活力实验和穿心莲内酯的药效检测实验验证了鉴定的目标氨基酸在穿心莲内酯抗癌活性中的作用。结果:首先,动物实验结果表明,100 mg/kg穿心莲内酯具有较强的体内抗肝癌活性,其可改善二乙基亚硝胺诱导的肝细胞癌小鼠的精神状态、存活率、肝脏病理状态,降低肝癌小鼠的谷丙转氨酶、谷草转氨酶、甲胎蛋白、尿酸、乳酸脱氢酶水平,使肝癌得以缓解。其次,对Competitive iso TOP-ABPP实验结果进行分析,发现穿心莲内酯直接结合的蛋白质靶标主要干扰了Hep G2细胞蛋白质合成代谢。然后,对“内质网中的蛋白质加工”通路中的蛋白质进行RNA干扰;细胞活力实验结果表明,敲低hsp90aa1可抑制Hep G2细胞活力,而敲低hsp90aa1后降低了穿心莲内酯对HepG2细胞的活力抑制作用,由此我们认为穿心莲内酯是hsp90aa1的抑制剂。接着,细胞活力实验结果表明,穿心莲内酯具有广泛的体外抗癌活性,癌细胞hsp90aa1的m RNA水平越低则穿心莲内酯抗癌活性越强;RNA干扰技术和细胞活力实验结果表明,穿心莲内酯对hsps家族的hsp90aa1具有选择性,且穿心莲内酯对hsp90aa1的抑制效果强于已报道的hsp90aa1选择性抑制剂BS-50350、选择性优于已报道的hsp90抑制剂17-aaG,至此,确证了穿心莲内酯对于hsp90aa1的选择性抑制作用。最后,通过反向遗传学的手段,本论文发现hsp90aa1上的第597位半胱氨酸和第598位半胱氨酸是导致肝癌细胞凋亡,维持抗肝癌活性的重要氨基酸残基。结论:综上所述,本研究课题利用了多学科研究手段,系统性地分析了穿心莲内酯抗肝癌活性的生物学过程。实验结果表明,穿心莲内酯具有抑制肝癌细胞的活性,且对肝癌小鼠具有治疗作用;利用竞争性的化学蛋白质组学策略,我们发现热休克蛋白是穿心莲内酯在肝癌细胞中主要的靶向蛋白;通过生物化学的方法,我们发现穿心莲内酯通过结合hsp90aa1的碳端半胱氨酸(C597、C598),从而选择性抑制hsp90aa1,进而抑制Hep G2细胞的蛋白质折叠进程,最终诱导Hep G2细胞发生凋亡。本论文的研究揭示了穿心莲内酯抗肿瘤的分子生物学机制,为开发靶向癌症治疗药物和设计热休克蛋白的选择性抑制剂提供了数据支持。

关键词：穿心莲内酯肝细胞癌 Competitive isoTOP-ABPP hsp90aa1 细胞凋亡

血清hsp90α和癌组织基因hsp90aa1在肺癌中的高表达及预后价值

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安徽医科大学学报 2022年第7期57卷 1034-1040页

作者：董晓玉钟涛叶元滋郑美娟沈继龙安徽医科大学附属巢湖医院检验科巢湖238000 安徽医科大学第一附属医院输血科合肥230022 安徽医科大学第一附属医院病理科合肥230022 安徽医科大学第一附属医院检验科合肥230022 安徽医科大学病原生物学教研室安徽省病原生物学重点实验室合肥230032

目的探讨肺癌患者血清热休克蛋白90α(hsp90α)和癌组织基因hsp90aa1在肺癌中的高表达及其预后价值。方法收集109例肺癌患者为实验组;36例肺部炎症患者为参照组;以及30例健康体检者为对照组,比较三组间血清hsp90α水平的差异;分析hsp90... 详细信息

目的探讨肺癌患者血清热休克蛋白90α(hsp90α)和癌组织基因hsp90aa1在肺癌中的高表达及其预后价值。方法收集109例肺癌患者为实验组;36例肺部炎症患者为参照组;以及30例健康体检者为对照组,比较三组间血清hsp90α水平的差异;分析hsp90α与临床参数的关系;从癌症基因图谱(TCGA)数据库下载数据分析hsp90aa1在癌组织中的表达,同时探讨hsp90aa1与患者临床病理资料的相关性及对预后的影响。结果实验组血清hsp90α水平高于参照组和对照组(Phsp90α诊断肺癌的ROC曲线下面积是0.898(Phsp90α表达高于腺癌组(Phsp90α表达降低,病情进展期hsp90α表达显著升高(Phsp90aa1表达癌组织高于癌旁组织,且肺鳞癌癌组织hsp90aa1表达高于肺腺癌(Phsp90aa1表达与肺癌患者的年龄、性别、临床分期、肿瘤残余均无关;K-M生存分析单因素、多因素Cox回归分析显示hsp90aa1高表达降低肺癌患者的整体生存率(OS),hsp90aa1表达水平是肺癌患者的独立预后因素。结论肺癌患者血清hsp90α及癌组织hsp90aa1水平升高,癌组织高表达hsp90aa1是患者的独立预后因素;hsp90α和hsp90aa1可作为肺癌的一种辅助诊断指标;其表达水平对肺癌患者疗效观察及生存状态预测具有临床应用价值。

关键词：肺癌热休克蛋白90a hsp90aa1 腺癌鳞癌

麦角硫因通过hsp90aa1改善精索静脉曲张介导的大鼠睾丸损伤

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麦角硫因通过HSP90AA1改善精索静脉曲张介导的大鼠睾丸损伤

作者：陈奇南方医科大学

学位级别：硕士

目的:精索静脉曲张(Varicocele,VC)是导致男性不育的重要原因之一,本研究旨在探讨麦角硫因(Ergothioneine,EGT)对于精索静脉曲张所致睾丸细胞损伤的保护作用。方法:1)18只6周龄的雄性Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为3组,即假手术组、VC... 详细信息

目的:精索静脉曲张(Varicocele,VC)是导致男性不育的重要原因之一,本研究旨在探讨麦角硫因(Ergothioneine,EGT)对于精索静脉曲张所致睾丸细胞损伤的保护作用。方法:1)18只6周龄的雄性Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为3组,即假手术组、VC模型组以及VC+EGT治疗组,每组6只。其中,假手术组仅游离左肾静脉;VC组和VC+EGT组先半结扎左肾静脉4周,VC+EGT组再使用EGT(10mg/kg)灌胃 4 周。2)利用过氧化氢(H2O2)构建小鼠源性精原细胞系(GC1)和精母细胞细胞系(GC2)细胞氧化应激模型,模拟VC细胞损伤。将细胞各分为3组,分别为对照组、H2O2+EGT组和H2O2组。对照组仅用细胞培养基;H2O2+EGT组用H2O2和EGT共处理12h;H2O2组用H2O2处理12h。3)运用网络药理学检索麦角硫因在VC中的潜在靶基因,利用String数据库构建蛋白质互作网络,并确定hsp90aa1作为关键基因。4)利用WB和免疫组化技术对各组大鼠和细胞进行hsp90aa1的检测,分析EGT对VC模型中hsp90aa1的作用。5)利用 GeneMANIA 数据库(http://***/)对 hsp90aa1 基因进行检索,取相关程度前100个基因,并利用R软件(version 3.6.3)中的ClusterProfiler 包(https://***/clusterProfiler)进行GO 和KEGG富集分析,p值或q值≤0.05认为有统计学差异。结果:1)EGT改善了 VC导致的睾丸损伤水平。通过检测各组大鼠睾丸的凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2发现,EGT可有效降低VC导致的睾丸细胞凋亡损伤。HE染色也表明EGT改善了曲精小管的结构紊乱,表现为Johnson评分的提高。且EGT还可以改善VC导致的大鼠精子质量降低,增加精子总数和精子的前向运动率。通过检测各组GC1和GC2细胞发现EGT可改善由H2O2导致的细胞凋亡。2)基于网络药理学和生信分析,我们发现hsp90aa1是EGT治疗VC最主要的靶基因之一。我们通过在各组大鼠和细胞检测发现,EGT能够抑制VC中的hsp90aa1蛋白降解。结论:EGT能够在体内外通过抑制hsp90aa1蛋白降解,从而有效地减少VC导致的细胞凋亡,提高精子质量,对VC导致的睾丸损伤起到一定的治疗作用。

关键词：精索静脉曲张麦角硫因凋亡 hsp90aa1

热激蛋白hsp90aa1介导ETEC诱导的IPEC-J2细胞焦亡研究

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热激蛋白HSP90AA1介导ETEC诱导的IPEC-J2细胞焦亡研究

作者：朱悦河北农业大学

学位级别：硕士

产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是一类肠道致病菌,可引起仔猪断奶后腹泻(Post-weaning diarrhea,PWD),给养猪业带来巨大的经济损失。深入探究ETEC的致病机理,及其与宿主细胞的相互作用机制对更好的防治断奶... 详细信息

产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是一类肠道致病菌,可引起仔猪断奶后腹泻(Post-weaning diarrhea,PWD),给养猪业带来巨大的经济损失。深入探究ETEC的致病机理,及其与宿主细胞的相互作用机制对更好的防治断奶仔猪腹泻至关重要。细胞焦亡是一种细胞死亡方式,主要通过炎症小体介导Gasdermin家族成员发生剪切,造成细胞穿孔,引起细胞死亡和炎性因子释放。目前尚未有研究报道ETEC感染可诱导猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)焦亡。本研究首先建立了 ETEC感染IPEC-J2细胞炎性模型,并利用透射电镜观察细胞显微形态,与对照组细胞相比,炎症模型组细胞发生明显肿胀、膜穿孔及破裂,细胞内容物释放;同时,qRT-PCR及Western blot结果表明ETEC感染后细胞焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1以及GSDMD mRNA和蛋白表达量较对照组显著升高,并激活了 GSDMD和Caspase-1的切割;同时检测到损伤组培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性及炎性因子(IL-1β和IL-18)释放量显著增加;此外,通过流式细胞术检测Caspase-1信号强度间接检测焦亡细胞在总细胞的占比发现感染组Caspase-1信号强度明显增强,焦亡细胞比例较对照组明显变大。以上结果均证实,ETEC感染诱导了 IPEC-J2细胞焦亡。为了找到在ETEC感染诱导IPEC-J2细胞焦亡过程中的关键作用分子,通过高通量测序的方法对ETEC感染IPEC-J2细胞的炎性细胞模型进行了转录组学分析,并通过实时荧光定量PCR对随机挑选的10条差异表达mRNA进行验证,证实测序结果可靠。随后进行差异表达分析,共发现529条差异表达mRNA,其中表达上调的有236条,表达下调的有293条;随后对其进行GO功能富集分析,发现差异表达mRNA功能主要富集于细胞组分、细胞进程、代谢过程及酶结合反应等。KEGG通路主要富集于mTOR信号通路、Toll样受体(TLR)信号通路、黏附连接、细胞周期以及细菌入侵上皮细胞通路等,证明ETEC感染IPEC-J2细胞的调控网络与经典免疫信号通路和小肠黏膜结构和屏障功能通路相关。高通量测序结果显示热激蛋白hsp90aa1在ETEC感染后显著上调,提示hsp90aa1可能参与ETEC诱导的细胞焦亡。为了证明这一假说,首先通过转染hsp90aa1过表达载体和siRNA的方法,分别建立了 hsp90aa1的过表达和敲低的IPEC-J2细胞模型,而后采用ETEC感染各细胞模型及相关对照。经透镜电镜观察发现,ETEC感染的hsp90aa1敲低细胞形态与对照组无明显差异;焦亡相关蛋白NLRP3、GSDMD的mRNA和蛋白表达量均显著下调;细胞上清中LDH、IL-1 β和IL-18的释放量显著降低;流式细胞术检测到焦亡细胞占比显著减少。相反,ETEC感染的hsp90aa1过表达细胞显微形态严重损伤,部分细胞膜接近破裂,细胞结构近乎解体,线粒体呈空泡样;NLRP3、GSDMD的mRNA和蛋白表达量显著上调,切割的GSDMD-N和Caspase-1 p20显著上调;细胞上清中LDH、IL-1β和IL-18的表达量显著增加;焦亡细胞占总细胞比例显著升高。为了进一步验证hsp90aa]对ETEC感染诱导的IPEC-J2细胞焦亡的调控作用是否依赖于下游NLRP3,在hsp90aa1过表达细胞模型中敲低NLRP3,经ETEC感染后检测各项焦亡表征,结果发现敲低NLRP3组较对照组细胞焦亡形态有所改善,细胞上清中LDH、IL-1β和IL-18含量显著减少,焦亡相关蛋白表达水平下调。以上结果共同证实,hsp90aa1通过NLRP3/Caspase-1/GSDMD经典焦亡通路促进ETEC感染IPEC-J2细胞诱导的细胞焦亡。综上所述,本研究阐明了 ETEC感染诱导IPEC-J2细胞焦亡的主要宿主调控分子hsp90aa1及相关信号通路,为探讨ETEC致病机理和寻找防治仔猪腹泻新方法提供理论基础和依据。

关键词：产肠毒素大肠杆菌猪小肠上皮细胞 hsp90aa1 细胞焦亡转录组测序

hsp90aa1: a novel target gene of miR-1 in cardiac ischemia / reperfusion injury

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中国病理生理杂志 2015年第10期 1787-1788页

作者： ZHU Jie-ning ZHU Wen-si FU Yong-heng LIN Qiu-xiong GUO Wei ZOU Xiao LIANG Ye-you TAN Ning SHAN Zhi-xin Guangdong Cardiovascular Institute Guangdong General HospitalGuangdong Academy of Medical Sciences

The present study aimed to investigate the expression and potential target of microRNA-1(miR-1)in the myocardium of a rat model of ischemia/reperfusion(I/R).The apoptosis of cardiomyocytes in the ischemic rat myocardium increased on day 1,and then decreased on post-I/R day 3 and day *** miR-1 was decreased,the reduced heat shock protein 90(hsp90)aa1 protein,not

关键词： reperfusion injury hsp90aa1 a novel target gene of miR-1 in cardiac ischemia

hsp90aa1识别狂犬病病毒磷蛋白截短体及磷酸化位点突变体的研究

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动物医学进展 2018年第7期39卷 32-36页

作者：许运斌孙玉章刘娟颜焰高兴红罗果王欢遵义医学院贵州省普通高等学校传染病与生物安全特色重点实验室贵州遵义563000 青岛蔚蓝生物股份有限公司/国家动物用保健品工程技术研究中心山东青岛266000 浙江大学农业部动物病毒学重点实验室浙江杭州310058

为了探究热休克蛋白90aa1(hsp90aa1)识别狂犬病病毒(RV)磷蛋白(P)截短体及磷酸化位点突变体的能力,构建RV P蛋白多种截短体和磷酸化位点突变体,分别与hsp90aa1真核表达载体共转染于鼠神经瘤母细胞(N2a)。免疫共沉淀分析显示hsp90aa1能... 详细信息

为了探究热休克蛋白90aa1(hsp90aa1)识别狂犬病病毒(RV)磷蛋白(P)截短体及磷酸化位点突变体的能力,构建RV P蛋白多种截短体和磷酸化位点突变体,分别与hsp90aa1真核表达载体共转染于鼠神经瘤母细胞(N2a)。免疫共沉淀分析显示hsp90aa1能够广泛识别RV P蛋白的多种截短体和不同的磷酸化突变体。结果提示,hsp90aa1在RABV感染过程中有着广泛的作用,这对解析RABV复杂的复制机理具有重要的意义。

关键词： hsp90aa1 狂犬病病毒磷蛋白相互作用

hsp90aa1/hspA8在伴抑郁情绪肝癌患者中的表达及临床意义

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HSP90AA1/HSPA8在伴抑郁情绪肝癌患者中的表达及临床意义

作者：韦珏伶广西医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨hsp90aa1/hspA8在伴抑郁情绪的肝癌患者中的表达情况,分析其临床意义,及对伴抑郁情绪肝癌患者预后的影响。方法:选择2015年9月至2017年3月在广西医科大学附属肿瘤医院首诊且接受根治性肝切除术治疗的肝癌患者（未接受任何药物... 详细信息

目的:探讨hsp90aa1/hspA8在伴抑郁情绪的肝癌患者中的表达情况,分析其临床意义,及对伴抑郁情绪肝癌患者预后的影响。方法:选择2015年9月至2017年3月在广西医科大学附属肿瘤医院首诊且接受根治性肝切除术治疗的肝癌患者（未接受任何药物和侵入性治疗）,无严重心、脑、肺、肾、传染病等疾病。术前采用一般资料问卷、医院焦虑抑郁量表-抑郁亚量表（HADS-D）、抑郁自评量表（SDS）进行评价。根据纳入标准,完成各种量表评估的肝癌患者共131例,根据患者的抑郁情绪程度分为三组:无抑郁组（n=45）;轻度抑郁组（n=38）;中重度抑郁组（n=48）。通过应用实时定量PCR、蛋白质免疫印迹以及免疫组织化学染色法对三组患者癌组织中hsp90aa1/hspA8及VEGF/VEGFR2-PI3K-AKT通路指标的表达情况进行检测,比较三组患者无瘤生存期。结果:1、本研究共入组行根治性肝切除术肝癌患者131例,采用HADS-D联合SDS两个量表的患者抑郁情绪进行筛查评分,其中无抑郁情绪患者45例（34.4%）;抑郁情绪患者86例（65.6%）,包括轻度抑郁患者38例（29.0%）和中重度抑郁患者48例（36.6%）。患者一般资料比较,中重度抑郁组、轻度抑郁组和无抑郁组三组同时比较,谷草转氨酶（AST）差异有统计学意义（P0.05）。2、随访截至日期为2019年3月,共有67例（51.1%）患者出现肿瘤复发,其中无抑郁组20例（44.4%）,轻度抑郁组18例（47.3%）,中重度抑郁组29例（60.4%）。纳入的所有患者中位无瘤生存期为10个月,6个月无瘤生存率为65.3%,12个月为47.3%,24个月为36.7%。中重度抑郁组6个月的无瘤生存率显著低于轻度抑郁组和无抑郁组（52.8%vs 64.8%vs 65.9%）,12个月（36.1%vs 50.0%vs 52.1%）和24个月（28.9%vs 40.1%vs 41.6%）。中重度抑郁组中位无瘤生存期为8个月,轻度抑郁组为13个月,无抑郁组为14个月,无抑郁组与轻度抑郁组比较差异无统计学意义（P=0.752）。3、以年龄、性别、肿瘤情况、血生化指标等作为变量进行单因素分析,结果显示,血管侵犯和中重度抑郁可能是影响肝癌患者复发的危险因素（Phsp90aa1/hspA8进行检测,通过Western blotting以及qRT-PCR对三组肝癌患者癌组织中VEGF/VEGFR2-PI3K-AKT通路相关指标表达情况进行检测:（1）qRT-PCR结果显示,中重度抑郁组hspA8 mRNA平均水平（4.21?1.17）明显高于轻度抑郁组（3.07±1.69,Phsp90aa1 mRNA平均水平（5.46±2.31）显著高于轻度抑郁组（4.29±1.85,PhspA8 mRNA和hsp90aa1 mRNA表达水平差异均无统计学意义（P>0.05）。（2）Western blotting结果显示,中重度抑郁组hsp90aa1的平均蛋白水平（2.29±0.36）高于轻度抑郁组（1.70±0.11,P=0.019）和无抑郁组（0.56±0.09,PhspA8的平均蛋白水平（2.13±0.17）高于轻度抑郁组（1.47±0.16,P=0.009）和无抑郁组（0.36±0.10,PhspA8的平均蛋白水平明显高于其他两组（χ=88.154,P=0.044）;中重度抑郁组hsp90aa1的平均蛋白水平亦明显高于其他两组（χ=14.334,P=0.006）。（4）Western blotting和qRT-PCR检测中重度抑郁组和无/轻度抑郁组hsp90aa1、hspA8及VEGF/VEGFR2-PI3K-AKT通路相关蛋白和基因,结果显示,相对于无/轻度抑郁组,中重度抑郁组hsp90aa1、hspA8、VEGF、VEGFR2、PI3K、AKT1蛋白和mRNA表达增加,Caspase9、BAD蛋白和mRNA表达降低。结论:1、肝癌患者抑郁的发生率较高,存在不同程度的抑郁状态,应重视肝癌

关键词：抑郁肝细胞癌 hsp90aa1 hspA8 VEGF

hsp90aa1及其抑制剂在影响胃恶性肿瘤增殖及迁移过程中的实验研究

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HSP90AA1及其抑制剂在影响胃恶性肿瘤增殖及迁移过程中的实验研究

作者：姜程遥中国医科大学

学位级别：硕士

目的:hsp90α是hsp90的一种亚型,位于胞质内,由730个氨基酸组成。hsp90aa1是hsp90α的功能基因。拟通过质粒转染对hsp90aa1进行过表达和敲减处理,在体外实验及体内实验中探讨该基因在胃癌增殖及转移过程中所发挥的作用。17-DMAG作为hsp9... 详细信息

目的:hsp90α是hsp90的一种亚型,位于胞质内,由730个氨基酸组成。hsp90aa1是hsp90α的功能基因。拟通过质粒转染对hsp90aa1进行过表达和敲减处理,在体外实验及体内实验中探讨该基因在胃癌增殖及转移过程中所发挥的作用。17-DMAG作为hsp90的靶向抑制剂,验证其对胃恶性肿瘤细胞增殖及迁移的影响,并与多西他赛联合应用,观察联合用药的效果,明确其与多西他赛在治疗胃恶性肿瘤过程中具有协同效应。研究方法:第一部分:(1)收集辽宁省肿瘤医院胃癌患者的癌及癌旁组织标本,提取蛋白,明确hsp90α在癌及癌旁组织中的表达水平;(2)对AGS、SGC-7901、MGC-803、HGC-27、GES-1等细胞系进行q PCR及Western Blot检测,找出hsp90α表达水平最高及最低的细胞系;通过转染si RNA对hsp90aa1表达水平最高的细胞系进行敲减,并通过对hsp90aa1表达水平最低的细胞系进行质粒转染,建立hsp90aa1过表达细胞系;(3)通过运用PCR以及Western Blot等基础实验技术,在转录水平及功能蛋白表达水平对胃恶性肿瘤细胞系中的hsp90aa1进行验证,明确转染的效率。(4)用CCK8法及细胞克隆形成实验检测胃癌细胞的增殖率及克隆形成能力;(5)对hsp90aa1过表达及hsp90aa1干扰后的胃癌细胞进行划痕实验以及Transwell实验,判断hsp90aa1在肿瘤细胞迁移与侵袭方面的作用。(6)Western Blot实验检测E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、Vimentin、Snail等的表达,上述蛋白与上皮间质转化关系密切,用以判定hsp90aa1在该种生物学行为方面的作用。第二部分:首先选取6-8周龄的Balb/c实验用雌性裸鼠,将这些裸鼠随机分配到对照组、空质粒组、hsp90aa1-sh RNA组,每组裸鼠数量为5只。分别经腹腔注射HGC-27胃癌细胞,HGC-27空质粒,及HGC-27 hsp90aa1-sh RNA,建立小鼠腹腔内种植瘤模型,分别设为Control组,NC组及hsp90aa1-sh RNA组。在经过腹腔注射后的第3、6、9、12、15、18、21、24、27、30天测量成瘤体积,体积=(肿瘤长径*肿瘤短径)/2,具体数据可使用游标卡尺精准测量,依据测量结果绘制出肿瘤的生长曲线。裸鼠成瘤实验30天后,将所有小鼠采用脱颈椎的方式处死,行外科方式将成瘤组织完整取出,取出过程注意操作精细避免瘤体破损。将裸鼠与瘤体配对拍照,称重记录。提取各成瘤组织的蛋白,WB及PCR检测hsp90aa1;Ki-67;PCNA表达情况。第三部分:(1)当17-DMAG在不同应用浓度以及不同作用时间,采用CCK-8法对各种胃癌细胞系的增殖水平进行检测。(2)采用流式细胞术检测,在相同作用时间,不同浓度的17-DMAG对各种胃癌细胞系凋亡的影响。(3)当17-DMAG与多西他赛联合应用时,CCK-8法检测对目的胃癌细胞与正常胃粘膜上皮细胞增殖的影响,同时计算半数抑制浓度(IC50)以及联合用药协同指数(CI)。(4)当17-DMAG与多西他赛联合应用时,采用流式细胞术检测胃癌细胞的周期改变与单药应用组的变化,同时验证周期相关蛋白的表达情况。(5)当17-DMAG与多西他赛联合应用时,采用流式细胞术检测胃癌细胞的凋亡改变与单药应用组的变化,同时验证凋亡相关蛋白的表达情况。(6)当17-DMAG与多西他赛联合应用时,采用划痕实验检测胃癌细胞的迁移改变与单药应用组的变化,同时验证迁移相关蛋白的表达情况。结果:第一部分:(1)hsp90α在胃癌组织中高表达;HGC-27细胞系中hsp90α表达水平最高,用于构建目的基因敲减细胞系。SGC-7901细胞系中hsp90α表达水平最低,用于构建目的基因过表达细胞系。PCR及WB验证转染效果成功。(2)根据CCK-8实验的结果表明:SGC-7901在hsp90aa1过表达转染48小时后增殖明显增加;HGC-27在hsp90aa1敲减转染72小时后增殖明显下降;细胞克隆形成实验结果在过表达组细胞集落个数明显增多,在敲减组细胞集落个数明显减少;(3)划痕实验及Transwell实验:敲减组迁移及侵袭能力减低,而hsp90aa1过表达时,细胞迁移以及细胞侵袭的能力均表现为增强。(4)敲减hsp90aa1抑制胃癌细胞的上皮间质转化,伴随Vimentin,Snail-1表达下降以及E-cadherin表达升高。过表达hsp90aa1促进胃癌细胞的上皮间质转化,伴随着Vimentin,Snail-1表达升高以及E-cadherin表达下降。第二部分:(1)成功建立小鼠腹腔种植瘤模型,成功率100%(15/15)。(2)Control组与NC组肿瘤体积生长曲线基本重合

关键词：胃癌 hsp90 hsp90aa1 17-DMAG 多西他赛增殖迁移

hsp90aa1和hsp90aa2基因多态性与SLE遗传易感性、糖皮质激素疗效及HRQoL改善的关联研究

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HSP90AA1和HSP90AA2基因多态性与SLE遗传易感性、糖皮质激素疗效...

作者：张曼安徽医科大学

学位级别：硕士

目的探讨hsp90aa2基因多态性与系统性红斑狼疮（Systemic Lupus Erythematosus,SLE）遗传易感性、糖皮质激素（Glucocorticoids,GCs）对 SLE的治疗效果及SLE患者健康相关生命质量（Health-Related Quality of Life,HRQoL）的改善之间是否存在关联。方法研究首先采用病例对照设计方案,从医院收集470例SLE患者和470例正常对照,利用多重 SNaP shot 技术对 hsp90aa2 基因 SNPs（Single Nucleotide Polymorphisms,SNPs）位点分型。随后,对病例组中符合条件的444例SLE患者进行为期12周的随访（其中425例完成随访,19例失访）,根据SLE疾病活动指数（SLE Disease Activity Index,SLEDAI）评估患者对GCs的敏感性,并将患者分为敏感组和不敏感组。采用SF-36健康调查简表分别在基线和第12周时评估SLE患者的HRQoL,将评分的变化作为HRQoL改善情况的评价指标。采用本杰明-汉伯格（Benjamini-Hochberg,BH）方法进行多重比较的校正。结果病例对照研究中,rs1826330在显性模型（OR=0.738,95%CI=0.570-0.955,P=0.021）和加性模型（OR=0.761,95%CI=0.616-0.940,P=0.011）下与 SLE 遗传易感性之间存在关联,但经多重校正后,关联均消失（显性模型PBH=0.063,加性模型PBH=0.063）;rs1826330的T等位基因与SLE的易感性降低有关（OR=0.765,95%CI=0.621-0.941,P=0.011）;在单倍型分析中,hsp90aa2的TT单倍型在病例组与对照组之间的分布差异具有统计学意义（OR=0.765,95%CI=0.621-0.941,P=0.011,PBH=0.033）。随访研究中,未发现hsp90aa2基因多态性与GCs疗效之间的关联,但在HRQoL分析中发现rs6484340与SLE患者的生理机能（显性模型PBH=0.047,隐性模型PBH=0.029,加性模型PBH=0.026）、生理职能（隐性模型PBH=0.041）、精神健康（显性模型PBH=0.047）、生理健康总评（显性模型PBH=0.047,隐性模型PBH=0.029,加性模型PBH=0.026）及SF-36总分（显性模型PBH=0.047,隐性模型PBH=0.029,加性模型PBH=0.026）的改善存在显著相关性。结论hsp90aa2基因多态性可能与SLE遗传易感性及SLE患者HRQoL的改善有关,但与GCs对SLE的疗效无相关性。目的探讨hsp90aa1基因多态性与系统性红斑狼疮（Systemic Lupus Erythematosus,SLE）遗传易感性及SLE患者健康相关生命质量（Health-Related Quality of Life,HRQoL）的改善之间是否存在关联。方法研究首先采用病例对照的研究方法,共纳入526例SLE患者和526例正常对照。利用HapMap数据库和Haploview软件筛选hsp90aa1基因的标签SNPs（Single Nucleotide Polymorphisms,SNPs）,利用多重 SNaP shot 技术对标签 SNPs分型。随后,对病例组中符合条件的489例SLE患者进行为期12周的随访（其中470例完成随访,19例失访）,使用SF-36健康调查简表分别在基线和第12周时对SLE患者的HRQoL进行定量评价,将HRQoL总分及各个维度评分的变化作为SLE患者HRQoL改善情况的评价指标。采用本杰明-汉伯格（Benjamini-Hochberg,BH）法校正多重比较。结果在病例对照研究中,hsp90aa1基因多态性与SLE遗传易感性之间未发现相关性（P＞0.05）。在HRQoL分析中,发现rs11547523与生理职能（隐性模型P=0.028,加性模型P=0.017）、情感职能（隐性模型P=0.017,加性模型P=0.008）的改善之间存在关联,rs2298877与生理职能（隐性模型P=0.025,加性模型P=0.026）的改善之间存在关联,rs10873531与生理职能（隐性模型P=0.014,加性模型P=0.021）、生理健康总评（隐性模型P=0.045）的改善之间存在关联,然而,经多重校正后这些关联均消失（PBH＞0.05）。此外,我们发现rs7160651与生理职能（隐性模型P=0.003,加性模型P=0.009）、躯体疼痛（隐性模型P=0.019）、生理健康总评（隐性模型P=0.003,加性模型P=0.013）和SF-36总分（隐

关键词：系统性红斑狼疮 hsp90aa2 糖皮质激素健康相关生命质量基因多态性 hsp90aa1 遗传易感性