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ILK、hsp90相互作用及在胃癌中表达的研究

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中国肿瘤临床 2005年第7期32卷 365-370页

作者：刘骞赵玫赵平王晓霞袁兴华余权黄常志中国医学科学院肿瘤研究所肿瘤医院北京市100021

目的:探讨ILK与H sp90在胃癌组织中的相互作用,了解它们及相关因子E-cadherin与胃癌临床病理的关系,以及胃癌患者血清中手术前后ILK与H sp90含量的变化。方法:用免疫共沉淀,蛋白杂交的方法研究ILK与H sp90的直接相互作用,用免疫组织化... 详细信息

目的:探讨ILK与H sp90在胃癌组织中的相互作用,了解它们及相关因子E-cadherin与胃癌临床病理的关系,以及胃癌患者血清中手术前后ILK与H sp90含量的变化。方法:用免疫共沉淀,蛋白杂交的方法研究ILK与H sp90的直接相互作用,用免疫组织化学方法测定ILK,H sp90,E-cadherin和M M P2在胃癌及癌旁组织表达,比较它们与胃癌临床病理的关系,使用Elisa方法,测定ILK与H sp90在胃癌患者血清中手术前后含量的变化。结果:用ILK抗体免疫沉淀下来的蛋白中检测有H sp90蛋白存在。ILK在40例胃癌组织中有28例表达阳性,阳性率为70%,而H sp90则在37例有高表达,阳性率为92.5%。其中28例ILK阳性者中有27位H sp90表达阳性。高分化胃癌分别有50%和75%表达,而低分化者为75%和100%。E-cadherin在正常胃粘膜上皮细胞均为阳性表达,而只有40%的胃癌组织呈阳性。其中高分化者有75%阳性表达,而低分化者仅为32.1%,没有转移的为90%,有转移的仅是23.3%。M M P2在癌组织中的表达阳性率为75%,高于癌旁正常组织,高分化者有50%阳性表达,而低分化者为78.6%,没有转移的为50%,有转移的是83.3%。用Elisa方法测定血清中ILK,H sp90抗体的含量。结果表明,手术前ILK、H sp90的含量分别为171.0ng/m l和199.0ng/m l,而手术后分别下降为142.6ng/m l和161.

关键词：胃癌 hsp90 ILK

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杂色鲍hsp90基因启动子的功能分析

水产学报 2017年第4期41卷 490-497页

作者：张涛张子平贾锡伟王淑红王国栋王艺磊集美大学水产学院农业部东海海水健康养殖重点实验室福建福建农林大学动物科学学院

为探索启动子在热休克蛋白90表达调控中的作用,本研究在课题组已有杂色鲍hsp90基因cDNA的基础上,通过Genome walking、Tail-PCR和常规PCR等技术克隆获得该基因的5′调控区序列。在翻译起始位点（ATG）和第一外显子（长度94 bp）之间有一... 详细信息

为探索启动子在热休克蛋白90表达调控中的作用,本研究在课题组已有杂色鲍hsp90基因cDNA的基础上,通过Genome walking、Tail-PCR和常规PCR等技术克隆获得该基因的5′调控区序列。在翻译起始位点（ATG）和第一外显子（长度94 bp）之间有一个809bp的内含子,第一外显子之前的5′调控区共2800 bp,从预测的转录起始位点（A）起,共2811 bp。在转录起始位点（A）上游–30 bp处存在TATA box。潜在的转录因子结合位点包括ATF、TBP、Sp1、Oct-1、C/EBPalpha、NF-1、NF-κappa B、GATA-1、Sox-2等。CpG岛预测软件分析其含1个CpG岛,长度为131 bp。实验构建了8个启动子缺失片段的萤火虫荧光素酶表达载体,通过瞬时转染293T细胞并进行双荧光素酶报告基因活性检测,确定杂色鲍hsp90基因核心启动子区位于–98;3 bp。在–624;539 bp,Oct-1、C/EBPalpha、NF-1这3个转录因子都起到一定的抑制作用。

关键词：杂色鲍 hsp90 启动子瞬时转染功能分析

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异色瓢虫的hsp90基因的克隆与特性分析

中山大学学报（自然科学版） 2010年第2期49卷 72-78页

作者：唐斌王世贵王峰巍庞虹张帆杭州师范大学杭州市动物适应与进化重点实验室浙江杭州310036 北京市农林科学院植保环保所北京100089 中山大学生命科学学院广东广州510275

采用同源克隆和锚定PCR技术,从异色瓢虫Harmonia axyridis(Pallas)中克隆到热休克蛋白hsp90基因的cDNA全序列(Genbank number:FJ501962)。cDNA全长2 480 bp,包含3′非编码区域(UTR)为200 bp和5′UTR为126 bp,开放阅读框(ORF)长2 154 bp,编码717个氨基酸。预测的相对分子质量为82 230,理论等电点为4.96,无糖基化位点、跨膜结构和信号肽。在N端具有hsp90基因保守的ATPase结构,含有hsp90家族的C末端的保守序列EEVD。与赤拟谷盗Tribolium castaneum相比较,同源性高达90%,系统发育分析也表明两者的亲缘关系最近。Haahsp90基因的克隆和比较分析为进一步深入研究异色瓢虫的抗逆机理及其进化具有重要意义。

关键词：异色瓢虫 hsp90 克隆特性分析序列分析

苹果hsp90家族基因鉴定及高温胁迫下的表达分析

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园艺学报 2021年第5期48卷 849-859页

作者：姚富文王枚阁宋春晖宋尚伟焦健王苗苗王昆白团辉郑先波河南农业大学园艺学院郑州450002 中国农业科学院果树研究所辽宁兴城125100

为了探究热激蛋白(hsp90)基因家族成员在苹果(Malus×domestica Borkh.)耐热中的作用,利用生物信息学方法对苹果hsp90基因家族成员进行鉴定,并分析其在高温胁迫下和不同组织中的表达规律。结果表明,苹果hsp90基因家族有11个成员,分布于1... 详细信息

为了探究热激蛋白(hsp90)基因家族成员在苹果(Malus×domestica Borkh.)耐热中的作用,利用生物信息学方法对苹果hsp90基因家族成员进行鉴定,并分析其在高温胁迫下和不同组织中的表达规律。结果表明,苹果hsp90基因家族有11个成员,分布于10条染色体上,其氨基酸序列大小介于104~818 aa,蛋白质分子质量介于11.81~93.58 kD。转录组分析显示,11个Mdhsp90家族成员中,有4个基因,Mdhsp90-1、Mdhsp90-3、Mdhsp90-5和Mdhsp90-11在高温胁迫下显著上调;亚细胞定位显示这4个基因中前三者定位在细胞膜与细胞核上,而后者定位在细胞核上;进一步通过qR T-PCR分析发现这4个基因在两种苹果砧木平邑甜茶(Malus hupehensis)和变叶海棠(Malus toringoides)中的表达趋势基本一致,其表达量在高温胁迫早期大幅升高,在中后期有所下降;不同苹果组织中均能检测到这4个基因的表达,高温处理可不同程度地激活这些基因的表达,表明它们可能在苹果耐热胁迫中具有重要作用。

关键词：苹果 hsp90 高温基因结构基因表达

hsp90 and ECM29 Are Important to Maintain the Integrity of Mammalian 26S Proteasome

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Advances in Biological Chemistry 2015年第7期5卷 255-265页

作者： Jean-Rene Q. Acquah Kousuke Haratake Randeep Rakwal Heiichiro Udono Tomoki Chiba Graduate School of Life and Environmental Sciences University of Tsukuba Ibaraki Japan Organization for Educational Initiatives University of Tsukuba Ibaraki Japan Graduate School of Medicine Dentistry and Pharmaceutical Sciences Okayama University Okayama Japan

The proteasome is a protease complex composed of a core particle (CP) and regulatory particles (RPs) that bind to both ends of the CP. ECM29 is a protein that associates with the proteasome and is involved in the maintenance and regulation of the proteasome assembly. However, ECM29 deficient mice can form functional proteasome. In this paper we sought to identify the mechanisms and/or proteins that help and allow the maintenance of the proteasome activity in the absence of ECM29. We analyzed the proteasome components of ECM29-deficient mice and identified hsp90 as a protein associated with the proteasome. Furthermore, the inhibition of hsp90 led to a partial disassembly of the proteasome only in ECM29-deficient cells. Those findings attest to the importance of hsp90 for the maintenance of the proteasome integrity in the absence of ECM29.

关键词： Mammalian Proteasome ECM29 hsp90 Proteasome Structure

冷应激促进PCOS大鼠的hsp90表达及疾病进展

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中国优生与遗传杂志 2022年第4期30卷 597-601页

作者：汪艳屈萍西安高新医院产科陕西西安710000

目的探究冷应激促进PCOS大鼠的hsp90表达及疾病进展。方法选取40只SPF级SD雌性大鼠,随机分为正常(N)组、模型(M)组、促肾上腺皮质激素(A)组、冷应激(C)组,每组10只,H-E染色法检测卵巢组织病理形态,ELISA法及放射免疫法检测大鼠血清中... 详细信息

目的探究冷应激促进PCOS大鼠的hsp90表达及疾病进展。方法选取40只SPF级SD雌性大鼠,随机分为正常(N)组、模型(M)组、促肾上腺皮质激素(A)组、冷应激(C)组,每组10只,H-E染色法检测卵巢组织病理形态,ELISA法及放射免疫法检测大鼠血清中生殖激素水平,免疫组化法检测卵巢组织中hsp90的蛋白表达。结果与N组比较,M组动情前期、卵巢指数、LH、E_(2)、T、INS明显升高(Phsp90蛋白明显降低(Phsp90蛋白降低明显(Phsp90改变PCOS大鼠的血清生殖激素水平,诱导PCOS发生发展。

关键词：冷应激 hsp90 多囊卵巢综合征生殖激素

姜黄素衍生物C1209抑制慢性粒细胞白血病细胞增殖与阻断hsp90伴侣功能的关系

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中国药理学通报 2018年第3期34卷 393-400页

作者：范莹娟周义湘张连茹许建华福建医科大学药学院福建省天然药物药理学重点实验室福建福州350108 厦门市仙岳医院药学部福建厦门361012 厦门大学生命科学学院福建厦门361005

目的研究姜黄素衍生物C1209抑制慢性粒细胞白血病细胞增殖与阻断hsp90伴侣功能的关系。方法采用荧光光谱法,研究不同浓度C1209与hsp90、其N端片段(Nhsp90)、M端片段(Mhsp90)、C端片段(Chsp90)的相互作用,以及不同温度(293 K、303 K、310... 详细信息

目的研究姜黄素衍生物C1209抑制慢性粒细胞白血病细胞增殖与阻断hsp90伴侣功能的关系。方法采用荧光光谱法,研究不同浓度C1209与hsp90、其N端片段(Nhsp90)、M端片段(Mhsp90)、C端片段(Chsp90)的相互作用,以及不同温度(293 K、303 K、310 K)下,C1209与hsp90的相互作用;实验选取280 nm为激发波长,290~510 nm的波长范围内进行荧光光谱扫描。采用孔雀绿磷钼酸铵-无机磷检测法,研究C1209对hsp90-ATPase活性的抑制。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)染色法体外检测C1209对白血病细胞K562及耐伊马替尼(IM)的白血病细胞K562/G01细胞的增殖抑制作用;应用蛋白免疫印迹法检测hsp90客户蛋白及其下游蛋白、hsp90分子伴侣的表达。结果C1209解离常数为(14.733±0.713)μmol·L^(-1);C1209与hsp90之间的主要作用力为静电作用力;C1209与hsp90的C端片段结合能力最强。当ATP为1 mmol·L^(-1)时,C1209作用于hsp90的IC50值为11.4μmol·L^(-1)。C1209呈剂量依赖性地抑制K562和K562/G01细胞的增殖,作用24 h的IC50为1.14μmol·L^(-1)和0.56μmol·L^(-1);C1209影响hsp90的分子伴侣功能,且下调K562和K562/G01细胞中Bcr-Abl、Akt、MEK、ERK、c-Raf及其相应磷酸化蛋白p-Akt、p-MEK、p-ERK等hsp90客户蛋白及其下游蛋白的表达。结论姜黄素衍生物C1209是hsp90抑制剂,对K562和耐IM的白血病细胞K562/G01具有明显的增殖抑制作用,可能与其抑制hsp90的分子伴侣功能、下调hsp90客户蛋白有关。

关键词： C1209 hsp90 ATPase活性荧光光谱法相互作用抑制作用

姜黄素衍生物C085与hsp90及其不同片段相互作用以及对hsp90 ATPase活性的影响

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中国药理学通报 2014年第10期30卷 1408-1413页

作者：范莹娟张连茹刘洋许建华福建医科大学药学院福建省天然药物药理学重点实验室福建福州350004 厦门大学生命科学学院福建厦门361005

目的：研究姜黄素衍生物C085与hsp90的结合作用,及其对hsp90-ATPase 活性抑制作用。方法采用荧光光谱法,研究不同浓度C085与hsp90、Nhsp90、Mhsp90、Chsp90的相互作用以及293K、303K和310K下,C085与hsp90的相互作用；实验选取280nm为激... 详细信息

目的：研究姜黄素衍生物C085与hsp90的结合作用,及其对hsp90-ATPase 活性抑制作用。方法采用荧光光谱法,研究不同浓度C085与hsp90、Nhsp90、Mhsp90、Chsp90的相互作用以及293K、303K和310K下,C085与hsp90的相互作用；实验选取280nm为激发波长,290-510 nm的波长范围内进行荧光光谱扫描。采用孔雀绿磷钼酸铵-无机磷检测法,研究 C085对 hsp90-ATPase 活性的抑制。结果C085解离常数为（11．163±0．316）μmol · L-1；C085与hsp90之间的主要作用力为静电作用力；C085与hsp90的C端片段结合能力最强。当ATP为1 mmol · L-1时, C085作用于hsp90的IC50值为6．04μmol · L-1。结论经过荧光光谱分析,可以确定C085与hsp90的结合机制,且C085能抑制hsp90-ATPase活性。

关键词： C085 hsp90 ATPase活性荧光光谱法相互作用抑制作用

hsp90基因在南方根结线虫和番茄中的表达研究

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沈阳农业大学学报 2012年第4期43卷 435-443页

作者：朱峰王芳王东左青朱晓峰王媛媛段玉玺陈立杰沈阳农业大学植物保护学院/北方线虫研究所沈阳110161

hsp90基因是真核生物中广泛存在且非常保守的热激蛋白基因家族中的重要成员，在生物的抗逆胁迫过程中起重要作用。从番茄基因组扩增hsp90基因，连接到载体pCAMBIAl302上，构建了表达载体pCAM—hsp90，利用实时定量荧光技术检测了番茄接... 详细信息

hsp90基因是真核生物中广泛存在且非常保守的热激蛋白基因家族中的重要成员，在生物的抗逆胁迫过程中起重要作用。从番茄基因组扩增hsp90基因，连接到载体pCAMBIAl302上，构建了表达载体pCAM—hsp90，利用实时定量荧光技术检测了番茄接种南方根结线虫后hsp90基因的表达水平，结果表明：在20～25dpi后番茄根部S1一hsp90基因大量表达。此外，南方根结线虫的雌虫和二龄幼虫J2的Mi—hsp90基因在高温和低温胁迫时表达量都高于对照，而且在35℃时表达量要高于4℃时的表达量，在J2中的表达量高于雌虫的表达量。说明hsp90基因在番茄抗线虫侵染以及线虫适应环境方面起到非常重要的作用。南方根结线虫J2在35℃高温下hsp90的高表达使其能够保持较高的活力并侵染番茄的根部，从而使南方根结线虫更适合在较高温度下生存。本试验进一步证明热激蛋白在番茄抗线虫侵染和线虫对环境的适应性过程中起到重要作用，同时为利用生态控制的方法防治根结线虫病害提供理论依据。

关键词： hsp90 实时定量荧光PCR技术南方根结线虫番茄表达载体构建