检索结果-南通市图书馆

鸦胆子油乳注射液联合TP方案对晚期非小细胞肺癌患者肿瘤标志物和血清TAP、hsp90α的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

现代生物医学进展 2024年第9期24卷 1682-1685,1766页

作者：方和慧徐婷王晓月刘娜程弯弯徐姝南京医科大学附属脑科医院胸科院区呼吸科江苏南京210024

目的:探讨鸦胆子油乳注射液联合顺铂+紫杉醇(TP)方案对晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤标志物和血清肿瘤异常蛋白(TAP)、热休克蛋白90α(hsp90α)的影响。方法:纳入南京医科大学附属脑科医院呼吸院区呼吸科2018年3月~2020年3月期间收治... 详细信息

目的:探讨鸦胆子油乳注射液联合顺铂+紫杉醇(TP)方案对晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤标志物和血清肿瘤异常蛋白(TAP)、热休克蛋白90α(hsp90α)的影响。方法:纳入南京医科大学附属脑科医院呼吸院区呼吸科2018年3月~2020年3月期间收治的100例晚期NSCLC患者,分组选用随机数字表法,其中研究组50例,TP方案基础上联合鸦胆子油乳注射液治疗,对照组50例,仅TP方案治疗。对比两组疗效、血清肿瘤标志物、TAP、hsp90α和不良反应发生率,随访3年,采用生存曲线分析两组的累积生存率。结果:研究组的客观缓解率、疾病控制率均高于对照组(Phsp90α低于对照组(P0.05)。两组生存资料之无进展生存时间(PFS)和总生存时间(OS)经LogRank检验,均有显著性差异(Phsp90α水平,延长患者生存率。

关键词：鸦胆子油乳注射液 TP方案晚期非小细胞肺癌肿瘤标志物 TAP hsp90α

青海地区非小细胞肺癌患者PLR、NLR、SIRI、hsp90α预测EGFR基因突变的临床价值研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

现代生物医学进展 2024年第2期24卷 358-362页

作者：沙闯李忠诚杨永良虎建国白向豆青海大学附属医院胸外科青海西宁810000

目的:探讨青海地区非小细胞肺癌(NSCLC)患者血小板/淋巴细胞比值(PLR)、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)、系统性炎症反应指数(SIRI)、热休克蛋白90α(hsp90α)预测表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的临床价值。方法:选择2020年3月至2023年... 详细信息

目的:探讨青海地区非小细胞肺癌(NSCLC)患者血小板/淋巴细胞比值(PLR)、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)、系统性炎症反应指数(SIRI)、热休克蛋白90α(hsp90α)预测表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的临床价值。方法:选择2020年3月至2023年3月青海大学附属医院收治的青海地区135例NSCLC且行EGFR基因检测的患者为研究对象,根据EGFR突变发生情况将患者分为EGFR突变型组(64例)与野生型组(71例)。检测PLR、NLR、SIRI、hsp90α。采用多因素Logistic回归分析EGFR基因突变的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析PLR、NLR、SIRI、hsp90α联合应用预测NSCLC患者发生EGFR基因突变的效能。结果:EGFR突变型组血浆hsp90α水平高于野生型组(Phsp90α是NSCLC患者发生EGFR基因突变的危险因素(Phsp90α预测NSCLC患者发生EGFR基因突变的曲线下面积为0.783、0.826、0.815、0.811,联合预测曲线下面积为0.932,高于单独预测。结论:青海地区EGFR基因突变的NSCLC患者PLR、NLR、SIRI降低,hsp90α增高。联合PLR、NLR、SIRI,hsp90α对EGFR基因突变的发生具有较高的预测价值。

关键词：非小细胞肺癌 PLR NLR SIRI hsp90α EGFR基因突变预测价值

栓菌酸通过RhoC/ROCK1通路对肝癌HepG2.2.15细胞迁移侵袭的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国中药杂志 2024年第1期49卷 185-196页

作者：万雨莲汪鋆植袁园叶汪阳李华丽张晓兰张宏岐李莉娥三峡大学天然产物研究与利用湖北省重点实验室湖北宜昌443002 广西医科大学基础医学院广西南宁530021 宜昌人福药业有限责任公司湖北宜昌443000

以Ras同源基因家族成员C(Ras homolog gene family member C, RhoC)为靶点探讨栓菌酸(trametenolic acid, TA)对人肝癌HepG2.2.15细胞迁移侵袭的影响及机制,为栓菌酸的利用提供依据。采用MTT法检测TA对HepG2.2.15细胞增殖的影响;划痕实... 详细信息

以Ras同源基因家族成员C(Ras homolog gene family member C, RhoC)为靶点探讨栓菌酸(trametenolic acid, TA)对人肝癌HepG2.2.15细胞迁移侵袭的影响及机制,为栓菌酸的利用提供依据。采用MTT法检测TA对HepG2.2.15细胞增殖的影响;划痕实验、Transwell实验检测TA对细胞迁移、侵袭的影响;pull down实验检测TA对Ras相似物GTP酶(Ras homologue GTPases, Rho GTPases)活性的影响;Western blot实验检测TA对RhoC从胞质到胞膜转运及对RhoC/Rho相关激酶1(Rho-associated kinase 1, ROCK1)/肌球蛋白轻链(myosin light chain, MLC)/基质金属蛋白酶2(matrix metalloprotease 2, MMP2)/基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotease 9,MMP9)通路相关蛋白表达的影响;采用瞬时质粒转染过表达pcDNA3.1-RhoC,激光共聚焦检测细胞骨架中F-actin的变化,并检测细胞迁移侵袭及RhoC/ROCK1/MLC/MMP2/MMP9通路相关蛋白表达的变化,以及RhoC GTP酶活性;建立BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型,以索拉菲尼为阳性对照(Sora 20 mg·kg^(-1)),测量TA低、中、高剂量组(40、80、120 mg·kg^(-1))瘤体积和质量,瘤组织通过Western blot检测相关蛋白的表达。结果显示,TA呈浓度依赖性抑制HepG2.2.15细胞增殖,24、48 h的IC50分别为66.65、23.09μmol·L^(-1)。裸鼠肿瘤质量、肿瘤体积均显著降低,索拉菲尼,TA低、中、高剂量组的抑瘤率分别为62.23%、26.48%、55.45%、62.36%。TA能显著降低HepG2.2.15细胞迁移侵袭数,且呈浓度依赖性抑制RhoC蛋白的表达及RhoC GTP酶活性,使膜组分RhoC显著下调,减少膜结合RhoC GTP酶的量。体内外实验证实,TA可显著抑制RhoC下游ROCK1、MLC、p-MLC、MMP2、MMP9蛋白表达。HepG2.2.15细胞转染pcDNA3.1-RhoC过表达RhoC后,TA能有效抑制过表达后RhoC、ROCK1、MLC、p-MLC、MMP2、MMP9蛋白的表达水平,及RhoC GTP酶的活性,与过表达前相对抑制水平相似。综上所述,TA可抑制人肝癌HepG2.2.15细胞迁移侵袭,其机制可能是通过靶向抑制RhoC GTP酶的活性,下调RhoC表达,从而抑制RhoC/ROCK1/MLC/MMP2/MMP9信号通路。该研究为利用中药有效成分多靶点优势,开发以热休克蛋白90α(heat shock protein 90α,hsp90α)为靶点的自噬调节剂,达到阻滞肝癌细胞增殖,同时抑制肝癌细胞的侵袭和转移双重作用提供了新思路和方法。

关键词：栓菌酸肝癌 RhoC 迁移侵袭 hsp90α

hsp90α通过调控气道上皮细胞内质网应激加重屋尘螨诱导的哮喘气道炎症

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

南方医科大学学报 2022年第3期42卷 347-353页

作者：黄浩华乔妤婕黄奕董航明南方医科大学南方医院呼吸与危重症医学科广东广州510515

目的探讨热休克蛋白90(hsp90α)参与屋尘螨(HDM)诱导的哮喘气道炎症的作用及调控气道上皮细胞内质网应激的机制。方法人气道上皮细胞HBE体外培养,由HDM诱导哮喘体外模型,浓度梯度刺激24 h,分为正常对照组;200 U/mL组;400 U/mL组;800 U... 详细信息

目的探讨热休克蛋白90(hsp90α)参与屋尘螨(HDM)诱导的哮喘气道炎症的作用及调控气道上皮细胞内质网应激的机制。方法人气道上皮细胞HBE体外培养,由HDM诱导哮喘体外模型,浓度梯度刺激24 h,分为正常对照组;200 U/mL组;400 U/mL组;800 U/mL组。随后分别使用sihsp90α干扰序列转染及hsp90抑制剂17-AAG干预,分为HBE正常对照组、HBE+HDM组(800 U/mL,24 h)、HBE+HDM(800 U/mL,24 h)+sihsp90α(50 nmol,12 h)组、HBE+HDM(800 U/mL,24 h)+17-AAG(900 nmol,6 h)组,测定hsp90α以及内质网应激标志物的表达水平。C57BL/6小鼠由HDM诱导哮喘体内模型,分为正常对照组、17-AAG滴鼻组、HDM滴鼻组、HDM+17-AAG滴鼻组,测定气道炎症水平与内质网应激标志物的表达水平。结果在HDM诱导的HBE细胞哮喘体外模型中,蛋白电泳结果显示hsp90α(P=0.011)表达上调,琼脂糖凝胶电泳结果显示内质网应激标志物XBP-1(P=0.044)、ATF-6α(P=0.030)和GRP-78(P=0.027)表达水平显著上调;而敲低hsp90α和使用17-AAG会显著抑制HDM诱导的XBP-1(P=0.008)上调;在HDM诱导的哮喘小鼠模型中,相较于HDM组,H&E染色和瑞氏-姬萨姆染色显示HDM+17-AAG组的气道炎症改善,炎症细胞聚集明显减少。肺泡灌洗液计数显示,炎症细胞数量显著减少(P=0.014)。ELISA法显示肺泡灌洗液中炎症因子IL-4(P=0.030)、IL-5(P=0.035)显著降低。免疫组织化学染色显示气道上皮细胞XBP-1和GRP-78表达明显减少。结论 hsp90α加重HDM诱导的哮喘气道炎症,可能通过上调内质网应激实现的。

关键词：哮喘内质网应激 hsp90α 屋尘螨

The molecular chaperone hsp90α deficiency causes retinal degeneration by disrupting Golgi organization and vesicle transportation in photoreceptors

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Journal of Molecular Cell Biology 2020年第3期12卷 216-229页

作者： Yuan Wu Xiudan Zheng Yubo Ding Min Zhou Zhuang Wei Tao Liu Kan Liao Key Laboratory of Systems Biology CAS Center for Excellence in Molecular Cell ScienceShanghai Institute of Biochemistry and Cell BiologyChinese Academy of SciencesUniversity of Chinese Academy of SciencesShanghai 200031China Department of Ophthalmology Eye and ENT Hospital of Fudan UniversityShanghai 200031China

Heat shock protein 90(hsp90)is an abundant molecular chaperone with two isoforms,hsp90α and hsp90p.hsp90β deficiency causes embryonic lethality,whereas hsp90α deficiency causes few abnormities except male sterility.In this paper,we reported that hsp90α was exclusively expressed in the retina,testis,and brain.Its deficiency caused retinitis pigmentosa(RP),a disease leading to blindness.In hsp90α-deficient mice,the retina was deteriorated and the outer segment of photoreceptor was deformed.Immunofluorescence staining and electron microscopic analysis revealed disintegrated Golgi and aberrant intersegmental vesicle transportation in hsp90α-deficient photoreceptors.Proteomic analysis identified microtubule-associated protein IB(MAP1B)as an hsp90α-associated protein in photoreceptors.hspcx deficiency increased degradation of MAP1B by inducing its ubiquitination,causing a-tubulin deacetylation and microtubule destabilization.Furthermore,the treatment of wild-type mice with 17-DMAG,an hsp90 inhibitor of geldanamycin derivative,induced the same retinal degeneration as hsp90α deficiency.Taken together,the microtubule destabilization could be the underlying reason for hsp90α deficiency-induced RP.

关键词： hsp90α retinitis pigmentosa Golgi disintegration vesicle transportation MAP1B acetylatedα-tubulin microtubule cytoskeleton

hsp90α mRNA金纳米探针的构建及肿瘤耐热性治疗中的应用

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

HSP90α mRNA金纳米探针的构建及肿瘤耐热性治疗中的应用

作者：张勤山东师范大学

学位级别：硕士

纳米材料作为一类新兴材料,表现出诸多优异的性质,如合成过程简单、表面易于多功能修饰、良好的生物安全性、尺寸大小可控等。基于这些优点,纳米材料在能源环境、材料科学、生物医学等领域备受关注。其中,金纳米粒子（Au NPs）因其独特... 详细信息

纳米材料作为一类新兴材料,表现出诸多优异的性质,如合成过程简单、表面易于多功能修饰、良好的生物安全性、尺寸大小可控等。基于这些优点,纳米材料在能源环境、材料科学、生物医学等领域备受关注。其中,金纳米粒子（Au NPs）因其独特的表面等离子共振、优异的荧光猝灭性能、良好的生物相容性在癌症诊断、药物运载、癌症治疗等方面有着广阔的应用前景。光热治疗是一种新型的肿瘤治疗方法,具有微创性、副作用低、疗效高的优点。然而,光热治疗也存在一些无法避免的问题,它会增强癌细胞在热应激条件下的耐受性,使癌细胞产生耐热性,从而降低其疗效并导致肿瘤复发。相关研究表明,肿瘤细胞的耐热性与hsp90α相关,细胞在热刺激下会产生大量hsp90α,以保护相关癌蛋白折叠,使癌细胞免受光热治疗带来的损伤。因此,设计出既能够检测和下调肿瘤细胞内的hsp90α,又能提高纳米材料光热治疗效果的纳米探针至关重要。基于此,本论文主要研究了以下两方面的内容:一、构建了一种新型粘性耀斑纳米探针Au-DNA1/DNA2,通过将FAM修饰的DNA2耀斑链与巯基修饰的DNA1互补识别链组装在13 nm Au表面,实现了对肿瘤细胞胞质内过表达的hsp90αm RNA的高灵敏性检测和特异性示踪。该探针通过靶分子hsp90αm RNA与DNA2耀斑链的精确碱基互补配对,将DNA2耀斑链从金纳米探针上置换下来,形成更加稳固的DNA双链体结构,恢复了连在DNA2耀斑链上的FAM的荧光,并根据荧光信号强度实现了细胞内hsp90αm RNA的快速、高效、高选择性分析。体外实验表明,Au-DNA1/DNA2纳米探针与hsp90αm RNA的浓度之间呈现良好的线性关系,线性相关系数达0.9958;细胞实验表明,Au-DNA1/DNA2纳米探针对hsp90αm RNA具有优异的胞内成像和追踪性能,能够用来区分肿瘤细胞和正常细胞。该粘性耀斑纳米探针的构建为肿瘤细胞内其他活性物种的检测提供了思路。二、在上述研究基础上,我们又合成了Au-DNA3纳米探针,在克服肿瘤细胞耐热性的情况下实现了金聚集体对肿瘤组织的有效光热治疗。当Au-DNA1/DNA2与Au-DNA3两种探针分别孵育肿瘤细胞后,Au-DNA1/DNA2纳米探针会特异性识别靶标hsp90αm RNA并与之粘附,达到检测和沉默hsp90αm RNA的目的,从而抑制hsp90α总蛋白的合成,降低了肿瘤细胞的耐热性;而Au-DNA3纳米探针可以与Au-DNA1通过碱基互补配对的方式在细胞内发生自组装,导致金纳米粒子动态聚集,实现了激光照射下对肿瘤细胞的高效光热治疗。该金纳米聚集系统的设计对肿瘤细胞和正常细胞均显示出优异的生物相容性,为其他DNA诱发纳米颗粒自组装系统的设计提供了一条思路。

关键词： hsp90α 金聚集体耐热性检测光热治疗

重度哮喘生物标志物的探索研究-hsp90α、 IL-1β、IFN-β

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

重度哮喘生物标志物的探索研究-Hsp90α、 IL-1β、IFN-β

作者：郑莉英南方医科大学

学位级别：硕士

背景及目的:支气管哮喘(以下简称哮喘)是常见的慢性气道疾病,虽然大部分哮喘患者对吸入激素(ICS)/长效β支气管扩张剂(LABA)治疗反应良好,但重度哮喘患者从ICS/LABA治疗中获益有限。奥马珠单抗是第一个用于治疗重度哮喘的抗IgE单抗,可... 详细信息

背景及目的:支气管哮喘(以下简称哮喘)是常见的慢性气道疾病,虽然大部分哮喘患者对吸入激素(ICS)/长效β支气管扩张剂(LABA)治疗反应良好,但重度哮喘患者从ICS/LABA治疗中获益有限。奥马珠单抗是第一个用于治疗重度哮喘的抗IgE单抗,可以减少重度哮喘的急性发作率,改善生活质量。然而,目前缺乏有效的生物标志物来评估奥马珠单抗治疗重度哮喘的疗效。本研究旨在探究hsp90α、IL-1β、IFN-β在重度哮喘患者中的临床意义。方法:本研究纳入了 33名哮喘患者(13名非重度哮喘患者,10名重度哮喘患者未行奥马珠单抗治疗,10名重度哮喘患者已行奥马珠单抗治疗)和19名健康对照者。分离哮喘患者和健康对照组的外周血清样本,用ELISA方法检测血清中hsp90α、IL-1β、IFN-β的水平。通过SPSS 24.0软件分析各组中临床特征及血清中hsp90α、IL-1β、IFN-β水平有无统计学差异。结果:我们的结果表明:(1)哮喘患者组血清中hsp90α水平(83.39±28.77 pg/mL,p=0.0030.05)和IFN-β水平(59.83±23.53pg/mL,p=0.743>0.05)稍高于健康对照组(7.95±2.45pg/mL)(55.71±12.91pg/mL),但未达到统计学差异。(2)重度哮喘患者组血清中IL-1β水平(9.59±2.60 pg/mL,p=0.013hsp90α(100.98±9.75pg/mL,p=0.007hsp90α(93.91±11.01 pg/mL,p=0.028hsp90α(64.28±13.63 pg/mL,p=0.007hsp90α水平显著高于健康人。(2)重度哮喘血清中IL-1β水平显著高于非重度哮喘。(3)哮喘急性发作期血清中hsp90α、IFN-β水平显著高于哮喘稳定期。(4)哮喘未控制组血清中hsp90α水平显著高于哮喘控制组。(5)经过奥马珠单抗治疗的重度哮喘血清中hsp90α、IL-1β水平显著低于未行奥马珠单抗治疗的重度哮喘。血清hsp90α、IL-1β、IFN-β可能是哮喘的生物标志物,尤其是hsp90α和IL-1β可能在重度哮喘及其临床治疗中具有重要作用。

关键词：重度哮喘 hsp90α IL-1β IFN-β 生物标志物奥马珠单抗治疗

中耳胆脂瘤上皮中HIF-1α、VEGF及hsp90的表达及其在中耳胆脂瘤发生中的可能机制及相互关系的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中耳胆脂瘤上皮中HIF-1α、VEGF及HSP90的表达及其在中耳胆脂瘤发...

作者：樊慧娟山西医科大学

学位级别：硕士

目的:检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)及热休克蛋白90α(hsp90α)、热休克蛋白90β(hsp90β)在中耳胆脂瘤上皮中的表达情况,探讨它们在该疾病病理机制中的可能作用及相互关系。方法:选取山西医科大学第一临床医... 详细信息

目的:检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)及热休克蛋白90α(hsp90α)、热休克蛋白90β(hsp90β)在中耳胆脂瘤上皮中的表达情况,探讨它们在该疾病病理机制中的可能作用及相互关系。方法:选取山西医科大学第一临床医学院耳鼻咽喉-头颈外科因中耳胆脂瘤行乳突根治术的22例患者,收集22例患者中耳胆脂瘤石蜡标本及临床病历资料,选取中耳胆脂瘤患者手术时新鲜的正常外耳道皮肤标本10例作为对照,采用免疫组织化学二步法检测HIF-1α、VEGF、hsp90α及hsp90β在所有标本中的分布和表达,采用计算机图像定量分析系统计算平均光密度值作为相应标本的测量结果。结果:1.HIF-1α、VEGF、hsp90α及hsp90β蛋白的免疫组化阳性染色呈棕黄色,HIF-1α、VEGF表达于中耳胆脂瘤上皮和正常外耳道皮肤全层,基底层表达较弱,主要着色部位在细胞质,部分细胞核也有着色,在正常外耳道皮肤中染色较淡。hsp90α、hsp90β表达于中耳胆脂瘤上皮和正常外耳道皮肤全层,主要着色部位在细胞质,部分细胞核也有着色,在正常外耳道皮肤中染色较淡。2.HIF-1α、VEGF、hsp90α及hsp90β在中耳胆脂瘤上皮中的表达较正常外耳道皮肤均增高,其中HIF-1α的光密度值分别为0.0192士0.00869,O.0127士0.00289;VEGF的光密度值分别为0.0175士0.00728,O.0072士0.00174;hsp90α的光密度值分别为0.0252士0.00956,O.0144士0.00431;hsp90β的光密度值分别为0.0302士0.01252,O.0125士0.00305,各指标两组间比较采用独立样本t检验,两组间比较差异均有统计学意义(Phsp90β相关系数r=0.431,P=0.045,Phsp90β相关系数r=0.431,P=0.045,Phsp90α,VEGF与hsp90α,hsp90α与hsp90β相互之间没有相关性(P>0.05)。结论:1.HIF-1α、VEGF、hsp90α及hsp90β在中耳胆脂瘤上皮中均过度表达,表明它们在中耳胆脂瘤的形成中起重要作用;2.在中耳胆脂瘤上皮中HIF-1α与VEGF,HIF-1α与hsp90β,VEGF与hsp90β的表达具有显著相关性,说明它们在中耳胆脂瘤中可能共同起作用;而HIF-1α与hsp90α,VEGF与hsp90α,hsp90α与hsp90β相互之间没有相关性,hsp90α可能通过不同方式单独促进胆脂瘤的形成。

关键词：中耳胆脂瘤 HIF-1α VEGF hsp90 hsp90α hsp90β

外泌体携带hsp90α通过调控mTOR信号通路影响血管肉瘤细胞自噬的机制初探

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

外泌体携带HSP90α通过调控mTOR信号通路影响血管肉瘤细胞自噬的...

作者：蔡文平石河子大学

学位级别：硕士

目的:探究血管肉瘤干细胞样细胞(Sphere细胞)外泌体来源的hsp90α可以通过抑制血管肉瘤细胞(ISOHAS细胞)自噬促进肿瘤进展的机制研究,明确hsp90α影响ISOHAS细胞自噬的分子机制及其对细胞增殖的影响。方法:(1)基于超高速离心法从细胞培... 详细信息

目的:探究血管肉瘤干细胞样细胞(Sphere细胞)外泌体来源的hsp90α可以通过抑制血管肉瘤细胞(ISOHAS细胞)自噬促进肿瘤进展的机制研究,明确hsp90α影响ISOHAS细胞自噬的分子机制及其对细胞增殖的影响。方法:(1)基于超高速离心法从细胞培养上清液中分离外泌体,透射电镜观察其形态、大小及免疫胶体金标记,以确定hsp90α在外泌体上的定位情况,Western blot检测外泌体标记CD63、CD81的表达及其携带hsp90α的水平。(2)PKH67分别标记ISOHAS细胞及Sphere细胞来源的外泌体,与ISOHAS细胞孵育后,Cell Mask标记细胞膜,DAPI标记细胞核,荧光倒置显微镜下观察外泌体被ISOHAS细胞的摄取情况;Western blot检测外泌体对ISOHAS细胞hsp90α表达的调节及对自噬相关分子Beclin 1、P62、LC3的影响;MDC染色及AO染色观察自噬囊泡形成情况。(3)Western blot验证在ISOHAS细胞及Sphere细胞中hsp90α的表达及自噬相关分子Beclin 1、P62、LC3的表达是否与外泌体对ISOHAS细胞的影响一致;MDC染色及AO染色观察自噬囊泡形成情况。(4)应用hsp90α过表达质粒与si RNA分别对ISOHAS细胞中的hsp90α进行过表达和沉默,进一步使用Western blot观察干预hsp90α对自噬相关分子Beclin 1、P62、LC3的表达的影响;MDC染色及AO染色观察自噬囊泡形成情况;免疫荧光染色标记LC3B,观察阻断自噬流后,干预hsp90α表达对自噬流的影响。(5)借助String数据库筛选与hsp90α具有较高可信度的相互作用蛋白,免疫共沉淀验证hsp90α与互作蛋白是否存在蛋白水平结合;使用Western blot验证干预hsp90α表达后PI3K-Akt-mTOR信号通路的激活状态。(6)应用CCK8检测hsp90α对ISOHAS细胞增殖活力的影响;进一步使用自噬诱导剂RAPA、自噬抑制剂3-MA评估自噬对ISOHAS细胞增殖活力的影响。结果:(1)外泌体来源的hsp90α定位于外泌体表面,ISOHAS细胞及Sphere细胞来源的外泌体与ISOHAS细胞孵育后均能被ISOHAS细胞摄取,进而上调ISOHAS中hsp90α、Beclin 1、P62的表达(Phsp90α、Beclin 1、P62的上调作用以及对LC3II/LC3I的比值的下调作用更为显著(Phsp90α、Beclin 1、P62呈高表达(Phsp90α可促进Beclin 1、P62的表达(Phsp90α后自噬小体数量减少,自噬流减弱。(4)抑制hsp90α的表达,可抑制Beclin 1(Phsp90α后自噬小体数量增多,自噬流增强。(5)String数据库筛选出与hsp90α具有高可信度(Score值=0.999)的相互作用蛋白,并确定了AKT1可能与hsp90α相互作用参与mTOR信号通路作用而影响自噬过程;免疫共沉淀验证hsp90α与AKT具有直接结合作用,过表达hsp90α后,PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR表达上调(Phsp90α后,PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR表达下调(Phsp90α可能通过与Akt结合激活mTOR信号通路抑制自噬。(6)过表达hsp90α显著促进ISOHAS细胞增殖(Phsp90α显著抑制ISOHAS细胞增殖(Phsp90α表达抑制细胞自噬促进肉瘤细胞增殖(2)hsp90α可能通过与Akt结合进而激活mTOR信号通路抑制自噬,促进血管肉瘤细胞增殖。

关键词：血管肉瘤外泌体 hsp90α 自噬 mTOR信号通路