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14-3-3σ蛋白和hsp27在结直肠癌组织中的表达及其生物学意义

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14-3-3σ蛋白和HSP27在结直肠癌组织中的表达及其生物学意义

作者：葛华中南大学

学位级别：硕士

目的:检测14-3-3σ蛋白和hsp27在结直肠癌组织中的表达情况,并探讨其临床病理学意义及与结直肠癌之间的关系。材料与方法:采取免疫组化的方法,检测了结直肠癌50例（有淋巴结转移的25例,无淋巴结转移的25例）、结直肠腺瘤（绒毛管状腺瘤... 详细信息

目的:检测14-3-3σ蛋白和hsp27在结直肠癌组织中的表达情况,并探讨其临床病理学意义及与结直肠癌之间的关系。材料与方法:采取免疫组化的方法,检测了结直肠癌50例（有淋巴结转移的25例,无淋巴结转移的25例）、结直肠腺瘤（绒毛管状腺瘤）25例以及50例对应正常结直肠粘膜组织（标本断端距肿块15cm以上）中的14-3-3σ蛋白和hsp27的表达水平,并分析14-3-3σ蛋白和hsp27各自与结直肠癌临床病理特征以及相互之间的关系。结果:14-3-3σ蛋白在正常组、结直肠腺瘤组和结直肠癌组中的阳性表达率分别为10%、36%、58%,方差分析提示多组间比较具有显著差异（x=25.560,P＜0.001）。进一步进行两组间的比较（检验水平P=0.0125）发现:结直肠腺瘤组与正常组间（x=7.421,P=0.006）、结直肠癌组与正常组间（x=25.668,P＜0.001）的14-3-3σ蛋白阳性表达率均有显著性差异;而结直肠腺瘤组与结直肠癌组间（x=3.227,P=0.072）的14-3-3σ蛋白阳性表达率无显著性差异。临床病理特征分析显示14-3-3σ蛋白与性别、肿瘤分化程度、肿瘤是否侵及浆膜无相关性（P＞0.05）,与年龄（x=7.059,P=0.008）、肿块直径（x=9.043,P=0.003）、淋巴结转移与否（x=4.023,P=0.045）之间存在统计学差异（P＜0.05）。hsp27在正常组、结直肠腺瘤组和结直肠癌组中的阳性表达率分别为16%、20%、54%,方差分析提示多组间比较具有显著差异（x=18.658,P＜0.001）。进一步进行两组间的比较（检验水平P=0.0125）发现:结直肠腺瘤组与结直肠癌组间（x=7.876,P=0.005）、结直肠癌组与正常组间（x=15.868,P＜0.001）的hsp27阳性表达率均有显著性差异;而结直肠腺瘤组与正常组间（x=0.186,P=0.666）的hsp27阳性表达率无显著性差异。临床病理特征分析显示hsp27与性别、年龄、肿瘤分化程度、肿块直径、肿瘤是否侵及浆膜无相关性（P＞0.05）,与淋巴结转移与否（x=3.945,P=0.047）之间存在统计学差异（P＜0.05）。14-3-3σ蛋白和hsp27的表达之间无明显相关。结论:1.14-3-3σ蛋白和hsp27的表达在结直肠癌淋巴结转移中具有重要意义。2.14-3-3σ蛋白的表达与年龄、肿块直径之间有相关性。3.hsp27的表达与性别、年龄、肿瘤分化程度、肿块直径、肿瘤是否侵及浆膜无相关性。4.14-3-3σ蛋白和hsp27在结直肠癌组织中的表达无明显相关。

关键词：结直肠癌免疫组织化学 14-3-3σ蛋白 hsp27

神经母细胞瘤hsp27的表达及与其分期分危和对顺铂耐药的相关性研究

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神经母细胞瘤Hsp27的表达及与其分期分危和对顺铂耐药的相关性研究

作者：王珍妮重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨分析热休克蛋白27(heat shock protein27,hsp27)与儿童神经母细胞瘤分期分危等临床指标及与其对顺铂耐药的相关性。方法:应用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)法检测90例神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)、24例节细胞神... 详细信息

目的:探讨分析热休克蛋白27(heat shock protein27,hsp27)与儿童神经母细胞瘤分期分危等临床指标及与其对顺铂耐药的相关性。方法:应用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)法检测90例神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)、24例节细胞神经母细胞瘤(ganglioneuroblastoma,GNB)及20例节细胞神经瘤(ganglioneuroma,GN)组织中hsp27蛋白的表达;实时荧光定量PCR(fluorescence quantitative pcr,RT-qPCR)检测59例NB/GNB、5例GN组织标本,及人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞和耐顺铂的SH-SY5Y细胞中hsp27mRNA的表达;应用IHC及PCR扩增测序法检测其中18例NB/GNB肿瘤标本化疗药物相关性分子靶标的情况。结果:hsp27蛋白在NB/GNB中阳性表达率为64.9%,明显高于GN的0(χ=28.994,Phsp27阳性表达与肿瘤的分期、危险度、转移和预后有关(P0.05);hsp27 mRNA在NB/GNB中的相对表达量为3.763±1.854,高于GN的2.476±0.698(P>0.05)。检测化疗药物相关性分子靶标5个,结果显hsp27的表达与铂类药物敏感性相关;hsp27 mRNA在耐顺铂细胞中的表达明显高于亲代细胞(F=16.246,Phsp27的表达与NB/GNB的分期、危险度、转移、预后相关,可能参与了NB/GNB的发生发展转移。hsp27的表达与神经母细胞瘤对顺铂耐药相关,需进一步增大检测样本量来验证其相关性。

关键词： hsp27 分子靶标耐药神经母细胞瘤

水杨酸钠致大鼠耳蜗hsp27、Scn8a基因表达的研究

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水杨酸钠致大鼠耳蜗HSP27、Scn8a基因表达的研究

作者：凡启军武汉大学

学位级别：硕士

耳鸣的发生机制目前尚不清楚,而采用水杨酸钠诱导建立的耳鸣动物模型是研究耳鸣的重要手段。前期的研究中我们运用寡核苷酸基因芯片技术分析了水杨酸钠致大鼠耳蜗基因表达谱的改变。本文依据基因表达谱改变的结果,选取基因表达差异较大... 详细信息

耳鸣的发生机制目前尚不清楚,而采用水杨酸钠诱导建立的耳鸣动物模型是研究耳鸣的重要手段。前期的研究中我们运用寡核苷酸基因芯片技术分析了水杨酸钠致大鼠耳蜗基因表达谱的改变。本文依据基因表达谱改变的结果,选取基因表达差异较大的几个基因,应用实时荧光定量PCR技术对其进行验证,并对其中的一个基因表达产物应用免疫组化的方法进行了定位对比研究,从而进一步探讨耳鸣的发生机制。目的了解热休克蛋白27（Heat shock protein27,hsp27）基因在长期大剂量水杨酸钠作用后和神经电压门控钠通道（sodium channel,voltage-gated,type 8,alpha,Scn8a）基因在急性水杨酸钠作用后大鼠耳蜗中基因表达水平,以及长期大剂量水杨酸钠作用后hsp27在大鼠耳蜗的表达分布特点,探讨hsp27和Scn8a在水杨酸钠耳毒性中的作用及意义。方法应用SYBR GREEN I实时检测的逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测长期大剂量水杨酸钠作用后和正常对照组中大鼠耳蜗中hsp27基因的表达以及急性水杨酸钠作用后和正常对照组中大鼠耳蜗中Scn8a基因的表达,并用管家基因β-actin作为为内参;应用免疫组化SP法结合图像分析技术检测长期大剂量水杨酸钠注射后大鼠耳蜗hsp27的表达。结果 1.长期大剂量水杨酸钠作用后大鼠耳蜗中hsp27基因的表达水平高于正常对照组,差异有显著性（P＜0.01）。2.急性水杨酸钠作用后大鼠耳蜗中Scn8a基因的表达水平低于正常对照组,差异有显著性（P＜0.01）。3.hsp27在正常及长期大剂量水杨酸钠作用后大鼠耳蜗各回均有不同程度的染色,主要阳性部位是Corti氏器,螺旋神经节,螺旋韧带和血管纹。但长期大剂量水杨酸钠作用后hsp27在耳蜗各阳性部位的表达均明显增强,其中以Corti氏器的表达更明显,P值均小于0.01。结论 1.SYBR GREEN I荧光定量PCR法可以作为一种良好的定量PCR方法对基因芯片结果进行验证2.慢性水杨酸钠作用后能够明显诱导hsp27基因在大鼠耳蜗中的表达,但急性水杨酸钠作用后Scn8a基因在大鼠耳蜗中的表达受到明显抑制。3.hsp27在大鼠耳蜗组织中的表达有选择性,且与水杨酸盐所致的耳蜗

关键词：水杨酸纳耳蜗荧光定量PCR hsp27 Scn8a

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乳腺癌中hsp27功能研究

乳腺癌中Hsp27功能研究

作者：谷明波浙江理工大学

学位级别：硕士

乳腺癌发病率高、危害性大。有研究表明,hsp27可能参与乳腺癌发生、增殖、转移与凋亡等生理过程。患者对治疗药物产生抗性也可能与其体内hsp27高表达有关。本实验通过构建hsp27差异表达细胞株,筛选出受hsp27表达量变化影响的蛋白质。根... 详细信息

乳腺癌发病率高、危害性大。有研究表明,hsp27可能参与乳腺癌发生、增殖、转移与凋亡等生理过程。患者对治疗药物产生抗性也可能与其体内hsp27高表达有关。本实验通过构建hsp27差异表达细胞株,筛选出受hsp27表达量变化影响的蛋白质。根据得到的蛋白质信息,力图侧面阐明hsp27在乳腺癌发生、发展过程中扮演的角色。MDA-MB-231 hsp27高表达细胞株与MDA-MB-361 hsp27高表达细胞株,与相应的MDA-MB-231空载体细胞株和MDA-MB-361空载体细胞株相比,hsp27表达量均明显提高。双向电泳分析结果显示MDA-MB-231 hsp27差异表达细胞株中有26个蛋白表达量变化,通过MALDI-TOF-TOF质谱分析,鉴定出其中6个差异点;而MDA-MB-361 hsp27差异表达细胞株中筛选得到4个差异蛋白点,质谱鉴定得到2个蛋白的详细信息。鉴定得到的蛋白包括hUCRP、CDK1、MMP-1、hsp27、CAP-G、未知蛋白C8orf59、Cep27和MUSKELIN。其中MMP-1是基质金属蛋白酶,能够降解细胞间质胶原蛋白,已被证明与包括乳腺癌在内的多种恶性肿瘤的转移有关;CAP-G是肌动蛋白调节蛋白,介导微丝等细胞骨架结构合成,调节有丝分裂过程,与乳腺癌增殖有关。实验结果表明,hsp27可能是通过某种信号途径增加MMP-1表达量,以增强乳腺癌转移和浸润能力。同时,CAP-G因受到hsp27高表达影响,表达受到抑制,或者通过某种渠道被降解,理论上应能减小乳腺癌危害性,具体情况如何,尚有待于进一步研究。

关键词： hsp27 乳腺癌双向凝胶电泳质谱

早期应用甲基强的松龙上调大鼠受损脊髓神经细胞内hsp27蛋白表达的实验研究

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早期应用甲基强的松龙上调大鼠受损脊髓神经细胞内HSP27蛋白表达...

作者：王文刚郑州大学

学位级别：硕士

脊髓作为中枢神经的一部分，不但是支配肢体运动、感觉、内脏活动的低级中枢，而且是联系高级神经中枢(大脑)和外周神经系统的关键结构，上、下行神经传导束密集，即使局部的损伤也会带来严重的后果，损伤平面以下的机体部分与大脑的联... 详细信息

脊髓作为中枢神经的一部分，不但是支配肢体运动、感觉、内脏活动的低级中枢，而且是联系高级神经中枢(大脑)和外周神经系统的关键结构，上、下行神经传导束密集，即使局部的损伤也会带来严重的后果，损伤平面以下的机体部分与大脑的联系中断，可导致永久性的偏瘫或四肢瘫及其瘫痪部位感觉功能丧失，或伴有疼痛、运动和自主反射加强等症状。近年来，随着交通和建筑业的发展，脊髓损伤(Spinal Cord Injury,SCI)的发生率每年都在上升。脊髓损伤后神经功能的保护和恢复对于医学界仍然是世界性的一大难题。脊髓损伤分为原发性损伤和继发性损伤，脊髓的原发性损伤是指受伤时由于骨折的移位、脱位引起椎间盘脱入椎管及骨折片刺入脊髓而造成的脊髓压迫、冲击、撕裂、挫裂及剪切伤，是在受伤的一瞬间由外力产生的不可逆的损伤，目前尚无法针对其进行有效的治疗。继发性损伤是脊髓的原发性损伤之后由于各种因素引起的脊髓再损伤，所产生的脊髓损害有时远远超过了原发性损伤。为了改善脊髓损伤后的结果，大量的各种各样的实验主要都是针对继发性损伤进行的。神经细胞在遭受应激性刺激后会迅速产生所谓的应激蛋白或热休克蛋白(heat shock proteins，hsps)。从其他的的实验研究中我们已经知道其中一些hsps，如热休克蛋白27(hsp27)能够通过各种机制，对神经细胞发挥保护作用。一个亚致死性的刺激如热休克、暂时性缺血能够诱导神经细胞产生hsp27，帮助细胞更好地抵抗严重的损伤性刺激。但由于这种刺激不能控制hsps表达区域、表达强度和表达类型，临床大部分脊髓损伤都为突发性，这种方法无法应用于临床。基因技术已经能够使有机体在特定的组织和细胞中大量表达hsp27，包括中枢神经系统、神经细胞，但目前还仅限于体外培养的细胞和部分动物体内，要应用于脊髓损伤病人，仍需较长时间。目前，如果能够通过药物诱导hsp27在脊髓内大量地表达，对临床治疗脊髓损伤则具有重要的现实意义。临床上一些严重脊髓压迫的病人，由于脊髓缺血一再灌注损伤，在手术解除脊髓压迫后，病人可能发生瘫痪;脊柱畸形矫正手术很可能导致脊髓牵拉伤。这些情况如果能够通过手术中、手术后使用药物诱导脊髓神经细胞大量表达hsp27，则对术中、术后脊髓神经功能的维护和恢复具有积极的意义。甲基强的松龙(Methylprednisolone，MP)是美国FDA批准的唯一一个用于治疗急性脊髓损伤的药物。其标准治疗方案已经在世界各地广泛应用。研究表明MP，通过多方面机理发挥其对脊髓的保护作用，但是否存在这样一个机理—MP通过诱导hsp27表达而在某种程度上发挥它对脊髓神经细胞的保护作用?目前尚未见相关报道。本课题通过制作急性脊髓损伤动物模型，然后8小时内治疗性应用大剂量甲基强的松龙，免疫组织化学法检测脊髓组织细胞内hsp27的表达，来探讨甲基强的松龙是否通过诱导脊髓组织细胞内hsp27的表达而在某种程度起到神经保护作用及其可能的作用机制。材料与方法1．动物模型制作和分组SD雌性大鼠50只，质量240±20g。随机分成三组：对照组单纯手术组(OP组)10只，仅行椎板切除术，5min后按体重计算从尾静脉注入生理盐水(量与相应MP治疗组量同);模型组(SCI组)20只，行椎板切除后重物打击，5min后按体重计算从尾静脉注入生理盐水(量与相应MP治疗组量同);实验组20只(MP组)，行椎板切除后重物打击，5min后按体重计算从尾静脉注入甲基强的松龙30mg/kg。采用Allen重物打击法，脊髓损伤后24h标本取材。2．病理标本取材实验动物麻醉后用4％多聚甲醛全身灌注，后取损伤脊髓远端0.5cm处脊髓，长1.0cm，常规甲醛固定，脱水，石蜡包埋，切片，HE染色。3．免疫组织化学染色和图像分析切片免疫组织化学染色。采用图像分析系统测量阳性染色物质吸光度：每张片随机选取6个不同视野，400高倍镜下用计算机计算出平均吸光度值A，A反应染色强度，代表相对含量。4．统计学处理用SPSS11.0统计分析软件处理实验数据，所有数据均用均数加减标准差((?)±s)表示，按α=0.01检验水准，三样本均数量两两间行双侧t检验。结果1．大鼠脊髓损伤后，损伤段脊髓有明显出血、水肿、变性、空泡、坏死等病理变化，打击两端的继发性损伤严重。2．单纯手术组脊髓内hsp27的表达呈弱阳性，单纯损伤组脊髓神经细胞内hsp27表达明显增加。3．早期大剂量使用MP后，脊髓的继发性损伤减轻;hsp27的表达明显增强，显示为强阳性。4．hsp27的表达水平上，MP组与SCI组相比统计学上有显著性差异(P＜0.01);SCI组与OP组相比统计学上有显著性差异(P＜0.01)。

关键词：脊髓损伤 hsp27 甲基强的松龙神经保护

雌激素对去势雌鼠牙周炎模型中hsp27表达的观察研究

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雌激素对去势雌鼠牙周炎模型中HSP27表达的观察研究

作者：王毅山西医科大学

学位级别：硕士

研究目的： 1．在大量查阅国内外文献的基础上，构建SD（Sprague-Dawley）雌鼠实验性牙周炎模型，并在不同的雌激素水平干预下，分别观察大鼠牙周炎的发展;通过HE染色观察大鼠组织形态学的改变，为研究雌激素对牙周炎发展的影响提供前... 详细信息

研究目的： 1．在大量查阅国内外文献的基础上，构建SD（Sprague-Dawley）雌鼠实验性牙周炎模型，并在不同的雌激素水平干预下，分别观察大鼠牙周炎的发展;通过HE染色观察大鼠组织形态学的改变，为研究雌激素对牙周炎发展的影响提供前提和实验条件。 2．对不同雌激素水平下大鼠血液指标进行检测，对检测数据进行比较与分析;并对其牙周炎病理变化过程中hsp27的表达及变化状况进行观察，探讨牙周炎发病机制中hsp27所起的作用及意义。研究方法： 1．构建内源性雌激素缺乏的大鼠模型：取健康清洁级雌性SD大鼠33只（由山西医科大学实验动物中心提供），鼠龄26周左右，体重约240g左右，牙列完整，咬合正常，无龋坏及牙周病。随机分为3组，分别为：SHAM组（11只），OVX组（11只），OVX+E组（11只），在大鼠适应性喂养7d后，对各组行假手术或行双侧卵巢切除手术。OVX+E组在术后第二天皮下注射17β—雌二醇，规格为20μg/kg，三天一次。OVX组在整个实验过程中不以任何形式补充17β—雌二醇。 2．构建SD雌鼠实验性牙周炎动物模型：以上三组在术后第三周行牙周结扎术。使用正畸结扎丝对大鼠左侧上颌第一磨牙进行结扎，打结于腭侧，并将结扎处置于大鼠龈下。右侧大鼠牙齿留作对照，不做处理。于牙周结扎术后第2、4、6周观察各组大鼠牙周炎发展的临床表现，并分别对三组随机抽取3只大鼠行内眦静脉取血后处死。同时取各组大鼠双侧上颌牙槽骨标本。 3．检测阶段：内眦血常规化验雌激素含量，观察雌激素水平的变化;大鼠双侧上颌骨标本经脱钙，包埋，组织切片，H.E染色等过程，在光学显微镜观察牙周组织病理改变，并加入hsp27抗体，在免疫组化染色后电子扫描显微镜观察hsp27的表达范围及强度，并进行分析。研究结果： 1．体重变化结果：本课题三组雌鼠的体重在实验前及手术后一周组间均无显著差异;在假手术或双侧卵巢切除手术后第二周至实验结束每周OVX组大鼠体重的增长值较SHAM组和OVX+E组高，OVX组大鼠体重增长速度快;在假手术或双侧卵巢切除手术后第二周至实验结束SHAM组和OVX+E组每周大鼠体重的增长值无显著差异。 2．本课题成功构建内源性雌激素缺乏的大鼠模型。在牙周结扎术后2、4、6周对三组雌鼠内眦血常规化验，结果表明，OVX组的雌激素水平的降低程度在各个时点差异明显;SHAM组和OVX+E组的雌激素水平组间与组内在各个时点无显著差异;OVX组的雌激素水平与SHAM组和OVX+E组各个时点差异明显。实验结束后大鼠尸解发现OVX组大鼠子宫较SHAM组明显萎缩，也无法找到卵巢，说明卵巢切除术可成功建造雌激素缺乏模型。但OVX+E组子宫较SHAM组有不同程度的增粗与肥大，可见雌激素对子宫有直接作用。并不一定与卵巢存在与否有直接关系。 3．本课题成功构建大鼠实验性牙周炎动物模型。三组雌鼠在牙周结扎术前后饲养环境不变，仍为12h日夜更替，饲料均为大鼠标准饲料，各组大鼠自由饮水。在牙周结扎术后2w、4w、6w观察各组大鼠牙周炎的临床表现，并取标本进行HE染色切片观察。结果表明，在牙周结扎术后2w各组大鼠牙龈略显红色，探诊有轻度出血等状况，各组在2w、4w、6w牙周探诊程度加深，在实验过程中OVX组较SHAM组和OVX+E组牙周炎程度较重。实验表明，本课题成功构建了雌鼠牙周炎模型。 4．hsp27的表达结果：在牙周炎发展的过程中，雌激素的水平对hsp27的表达有着不同程度的影响。牙周炎发展的早、中期各组大鼠牙周组织中hsp27表达高于同体对侧正常水平;牙周炎晚期各组大鼠牙周组织HE切片中hsp27表达与同体对侧正常水平无显著差异。雌激素治疗对hsp27表达的影响表现为，在牙周炎早、中期雌激素水平越低，牙周组织中hsp27表达高于同体对侧正常水平，牙周炎发展的晚期各组大鼠牙周组织中hsp27表达与同体对侧正常水平无显著差异。本课题实验结果提示，雌激素对牙周组织中hsp27表达的影响是通过干预牙周炎的进程为中介的，但起作用机制还有待探讨。结论： 1．雌激素水平的高低会对大鼠的体重会产生影响，随着时间的推移，大鼠雌激素缺乏或水平较低将会会引起大鼠体重的快速增长。 2．雌激素水平高低会影响牙周炎的病理发展过程，大鼠内源性的雌激素缺乏会加重牙周炎的程度。 3．在牙周炎发展的早、中期hsp27的表达与炎症程度呈正相关，与雌激素水平呈负相关。在牙周炎发展的晚期，hsp27的表达趋于正常水平。hsp27表达水平变化的机制有待进一步研究。

关键词：雌激素牙周炎 hsp27 免疫组化

八种菜田害虫和天敌昆虫hsp27与hsp70热激表达的研究

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八种菜田害虫和天敌昆虫HSP27与HSP70热激表达的研究

作者：姜浩福建农林大学

学位级别：硕士

热激蛋白(Heat shock protein)是一种广泛存在于原核和真核生物体中的一类在遗传上具有高度保守性的特殊蛋白,在胁迫条件下能够大量应激表达。热激蛋白在生物体中具有分子伴侣、抗细胞凋亡、增强细胞耐热性、调节机体生理活动等重要功... 详细信息

热激蛋白(Heat shock protein)是一种广泛存在于原核和真核生物体中的一类在遗传上具有高度保守性的特殊蛋白,在胁迫条件下能够大量应激表达。热激蛋白在生物体中具有分子伴侣、抗细胞凋亡、增强细胞耐热性、调节机体生理活动等重要功能。目前关于热激蛋白的研究主要集中在医学方面,而关于热激蛋白与昆虫之间的研究则比较少,仅在果蝇中有较深入的研究。本文主要通过酶联免疫分析(Enzymes-linked immunosorbent assay,ELISA),研究了热胁迫对十字花科菜田部分害虫和天敌hsp27和hsp70热激表达的影响,通过分析不同温度梯度及时间处理后昆虫体内热激蛋白的变化过程,探讨热胁迫条件下昆虫热激蛋白的表达变化,以及不同昆虫之间在相同温度下的变化规律,同时还研究了高温诱导对昆虫不同抗性水平间hsp27和hsp70的影响,初步探讨热胁迫对不同昆虫间热激蛋白的影响。研究结果表明:(1)不同昆虫的hsp27和hsp70的表达量均随着温度的变化而表现出差异显著性(Phsp27和hsp70表达规律不相同。(2)在昆虫致死温度内,hsp27和hsp70的表达量并非完全和温度的高低呈正相关的线性关系,即高温并不绝对能够诱导hsp27和hsp70的应激表达。(3)hsp27和hsp70在昆虫体内的热激表达没有必然的相关性。本文通过对龟纹瓢虫Propylea japonica、小菜蛾Plutella xlostella、菜粉蝶Pieris rapae crucivora、蝶蛹金小蜂Pteromaluspuparum、黄曲条跳甲Phyllotreta striolata、菜溢管蚜Lipaphis erysimi、小猿叶甲Phaedon brassicae bally、四斑月瓢虫Chilomenes quadrilagiata等昆虫 hsp27 和 hsp70的热激表达后发现,hsp27与hsp70的诱导表达均表现出独立表达的模式,两者无必然相关性。(4)通过分析龟纹瓢虫、菜缢管蚜及小菜蛾不同抗性品系之间hsp27和hsp70的热激表达,发现在常温下(25℃)同种昆虫其敏感性品系hsp27和hsp70的表达量通常会低于抗性品系,而在经过相同的温度及时间热激后,高温对敏感品系昆虫hsp27和hsp70的诱导表达程度要显著高于对抗性品系的诱导表达,即敏感性品系相对于抗性品系来说,hsp27和hsp70更容易被热激诱导表达。综上所述,通过ELISA方法检测昆虫hsp27和hsp70在热应激条件下的表达变化,再次证明hsp27和hsp70具有热应激表达的特性,hsp27和hsp70在昆虫遭受高温逆境下能够对昆虫起着重要的保护作用,但这种保护作用是有限的。同时,不同昆虫间hsp27和hsp70在热胁迫下的诱导表达特点各不相同,且hsp27和hsp70在热胁迫下的诱导表现出独立表达的模式,即两者无必然相关性。通过研究不同抗性水平间昆虫hsp27和hsp70的热激表达,探讨了热胁迫条件下昆虫抗药性的适合度代价。通过本实验的这些研究丰富了热胁迫与hsps之间相关关系的认识,同时也表明hsp27和hsp70甚至整个hsps大家族在高温胁迫下的诱导机制复杂多变,目前热胁迫对hsps的作用机制仍不明确,还有待进一步大量的研究。

关键词：昆虫热胁迫 ELISA hsp27 hsp70

沙鼠脑缺血再灌注损伤后hsp27和IGF-1的表达变化及神经保护作用

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沙鼠脑缺血再灌注损伤后HSP27和IGF-1的表达变化及神经保护作用

作者：程坤中南大学

学位级别：硕士

目的研究沙鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织中hsp27和IGF-1的表达变化、相应的神经保护机制及二者有无相关性。方法(1)动物分组:健康雄性蒙古沙鼠30只,随机分为正常对照组、假手术组、缺血再灌注组(I/R);观察在脑缺血再灌注后6h、1d、3d、7... 详细信息

目的研究沙鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织中hsp27和IGF-1的表达变化、相应的神经保护机制及二者有无相关性。方法(1)动物分组:健康雄性蒙古沙鼠30只,随机分为正常对照组、假手术组、缺血再灌注组(I/R);观察在脑缺血再灌注后6h、1d、3d、7d的各相应时间点hsp27及IGF-1的表达;(2)模型制作:对照组沙鼠予以夹闭双侧颈总动脉10min后再灌注;假手术组沙鼠仅分离双侧颈总动脉不予以夹闭,然后建立缺血再灌注模型;(3)HE染色观察脑组织的病理变化;(4)免疫组织化学染色观察hsp27和IGF-1的表达情况;(5)所有统计分析均用SPSS 15.0统计软件包完成;结果(1)HE染色:正常对照组和各假手术组的脑组织形态结构没有明显的变化;脑缺血再灌注组根据时间点的不同可见胶质细胞增生、肥大,细胞间质和细胞水肿,神经元坏死。(2)免疫组化:正常对照组和各假手术组的脑组织中均有hsp27及IGF-1的表达,但表达很低。缺血再灌注损伤后hsp27的表达上调,于第三天达到高峰,与对照组比较有显著差异(p＜0.05),七天开始下降但仍高于正常组和假手术组。IGF-1在脑缺血再灌注后表达明显增高,于第三天达到高峰,与对照组比较有显著差异(p＜0.05),随后逐渐减少。结论1.hsp27在缺血再灌注的脑组织中表达增高并发挥神经保护作用;2.缺血再灌注脑组织中IGF-1增高并且通过不同的机制减轻缺血再灌注导致的脑损伤;3.缺血再灌注脑组织中hsp27和IGF-1的表达具有一定的相关性。

关键词：脑缺血再灌注 hsp27 IGF-1 蒙古沙鼠

17β-雌二醇介导hsp27在甲状腺乳头状癌中的表达及其分子机制的研究

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17β-雌二醇介导Hsp27在甲状腺乳头状癌中的表达及其分子机制的研...

作者：莫小梅重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨17β-雌二醇对甲状腺乳头状癌细胞hsp27表达的影响及分子机制。方法:用10-8 mol/L的17β-雌二醇(E2)处理K1和BCPAP细胞不同时间,Real-time PCR检测细胞中hsp27 mRNA的表达,Western blot检测细胞中hsp27蛋白的表达;分别用E2、PP... 详细信息

目的:探讨17β-雌二醇对甲状腺乳头状癌细胞hsp27表达的影响及分子机制。方法:用10-8 mol/L的17β-雌二醇(E2)处理K1和BCPAP细胞不同时间,Real-time PCR检测细胞中hsp27 mRNA的表达,Western blot检测细胞中hsp27蛋白的表达;分别用E2、PPT(ERα激动剂)和DPN(ERβ激动剂)处理K1和BCPAP细胞,Western blot检测细胞中hsp27蛋白的表达;设计合成ERαsiRNA、ERβsiRNA并转染K1和BCPAP细胞,Western blot检测细胞中ERα、ERβ和hsp27蛋白的表达;ChIP检测ERα、ERβ对hsp27基因启动子的影响;MTT检测细胞存活率;酶标分析仪检测caspase-3活性;免疫共沉淀检测细胞中hsp27与Procaspase-3的相互作用。结果:用10-8 mol/L的E2处理K1和BCPAP细胞不同时间,随着E2处理时间增加,K1和BCPAP细胞中hsp27的mRNA和蛋白表达水平逐渐增高,在24 h达到峰值(Phsp27蛋白的表达(Phsp27蛋白的表达(Phsp27蛋白的表达水平降低(Phsp27蛋白的表达水平升高(Phsp27基因启动子区域结合。MTT和caspase-3活性检测结果发现E2通过ERα诱导hsp27的上调,可以促进细胞的增殖,同时可以抵抗TNF-α引起的细胞凋亡(Phsp27 siRNA的K1和BCPAP细胞24 h,与E2处理组相比,hsp27与Procaspase-3的相互作用均减弱。结论:17β-雌二醇可以通过ERα促进K1和BCPAP细胞中hsp27表达水平的增高,同时hsp27具有抗细胞凋亡作用。

关键词： 17β-雌二醇 hsp27 雌激素受体甲状腺乳头状癌细胞凋亡