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hira基因在斑马鱼发育中的作用

Hira基因在斑马鱼发育中的作用

作者：李卫华中师范大学

学位级别：硕士

斑马鱼因其繁殖周期短、产卵量多、胚胎整体透明、便于观察操作、易于饲养等优点,已成为发育生物学研究的常用模式脊椎动物。本实验室前期以雌核发育银鲫为主要的研究对象,研究了hira基因对其发育的作用,发现hira在银鲫精核解凝和胚胎... 详细信息

斑马鱼因其繁殖周期短、产卵量多、胚胎整体透明、便于观察操作、易于饲养等优点,已成为发育生物学研究的常用模式脊椎动物。本实验室前期以雌核发育银鲫为主要的研究对象,研究了hira基因对其发育的作用,发现hira在银鲫精核解凝和胚胎发育过程中起重要作用。由于银鲫繁殖季节短,取材不太方便,为进一步研究hira基因在鱼类发育过程中的作用,本实验采用模式生物斑马鱼为研究对象,采用实时荧光定量PCR、胚胎整体原位杂交、Morpholino基因敲降等技术研究了hira基因在斑马鱼发育中的所起的作用。荧光定量PCR分析表明,hira基因在斑马鱼胚胎发育的不同时期表达水平不同,hira基因在斑马鱼成熟的卵中表达量较高,受精后30min表达量迅速下降,到尾芽期其表达水平又有所恢复。hira基因在受精后其表达量低,可能是hira基因的mRNA用于胚胎早期发育所需的一些蛋白质的合成,本实验组前期的研究结果表明,hira基因在鱼类精核解凝过程中起着重要作用,斑马鱼hira基因在成熟卵中表达量高,而受精后迅速下降,可能是因为其转录产物参与了精核解凝及雄性原核的形成过程;到胚胎发育的后期hira的表达量又有所恢复,表明合子型的hira的转录可能开始,其表达产物参与胚胎后期的发育过程。荧光定量分析hira基因在斑马鱼不同组织中的表达情况表明,hira基因在斑马鱼卵巢及精巢中表达量较高,其次是肌肉、脑、心脏、肝脏,这表明hira可能在斑马鱼生殖系统、肌肉组织、神经系统及循环系统的发育中具有重要的调节作用。同时,原位杂交结果表明,在斑马鱼早期胚胎中,能观察到明显的杂交信号,说明hira基因在斑马鱼早期胚胎发育阶段有一定的表达,对胚胎的发育起着一定的作用。另外,在尾芽期和肌效期,可以看到头部及体节处有杂交信号,可能hira基因对斑马鱼神经系统及体轴的发育有一定的作用。 Morpholino敲降斑马鱼胚胎中的hira基因后,斑马鱼的胚胎发育出现了异常的现象。主要表现有：胚胎发育延缓,原肠期胚盘下包缓慢,与对照组相比,发育延迟大约3个小时;大部分胚胎在发育第一天死亡;卵黄吸收慢,体轴较短;围心腔水肿;胚胎体节发育异常;出苗后,敲降组鱼苗在水中的活力明显降低;胚胎死亡率较高等,表明hira基因对斑马鱼的胚胎正常发育是必需的。另外,雌核发育银鲫因其独特的生殖方式而成为发育生物学中研究生殖细胞的发生及受精机制的优良材料。银鲫能够行使两性生殖及雌核发育两种生殖方式,这是因为银鲫在受精过程中对同源和异源的精核有不同的应答机制：同源精子(银鲫的精子)受精后,精核能够正常解除浓缩状态,并形成雄性原核,与雌性原核共同参与到子代的发育过程,这种生殖方式产生的虽然大部分是雌性后代,但也能够产生一定比例的雄性后代;而当异源精子(非银鲫的精子)受精后,精核不能解除浓缩状态,其遗传物质不能参与到子代的发育过程,这种生殖方式产生的后代全为雌性个体。目前关于银鲫对同源和异源精核的应答机制已有了一定的研究,本实验室前期研究了组蛋白伴侣hira在鱼类精核解凝中的作用,研究结果表明,hira可能是参与鱼类精核解凝的一种重要的蛋白因子,母源性组蛋白H2a的变体H2aflo在受精后不能沉积到异源精核中,可能是导致异源精核在银鲫卵细胞中不能解除浓缩状态的原因之一。为进一步研究其它母源性的组蛋白在精核解凝过程中的作用,本研究采用了免疫荧光共定位技术,结合体外精核解凝系统,研究了乙酰化的组蛋白H4在鱼类精核解凝过程中的作用。结果发现,在银鲫卵细胞提取液中培育时不能解除浓缩状态的异源精核中,没有观察到乙酰化的组蛋白H4的荧光信号,而在其它解除浓缩状态的同源精核中却能观察到荧光信号,在两性生殖彩鲫卵母细胞提取液中培育的银鲫精核(异源精核)也能解除浓缩状态,变得比较蓬松,此类精核中也有乙酰化组蛋白H4的荧光信号。这说明,银鲫卵细胞和异源精子受精后,母源性的乙酰化组蛋白H4不能进入到异源精核中,可能也是导致银鲫异源精核不能正常解凝的原因之一。

关键词：斑马鱼 hira基因基因敲降银鲫精核乙酰化的组蛋白H4

hira基因在鱼类卵子发生和胚胎发育过程中的作用

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Hira基因在鱼类卵子发生和胚胎发育过程中的作用

作者：郭秋红华中师范大学

学位级别：硕士

Hir/hira(histone regulation)基因是组蛋白基因表达的负调节因子,其产物包含一组保守的蛋白家族,广泛存在于从酵母、果蝇、鱼、爪蟾、鸡、植物以及到哺乳动物小鼠和人类等多种生物体当中。在果蝇中的研究发现,hira基因与受精卵中精核... 详细信息

Hir/hira(histone regulation)基因是组蛋白基因表达的负调节因子,其产物包含一组保守的蛋白家族,广泛存在于从酵母、果蝇、鱼、爪蟾、鸡、植物以及到哺乳动物小鼠和人类等多种生物体当中。在果蝇中的研究发现,hira基因与受精卵中精核的解凝和雄性原核的形成有关系,而对果蝇的存活没有影响。然而对高等脊椎动物鸡和小鼠的研究表明,hira基因对发育是必需的,其突变将导致胚胎死亡。银鲫(Carassius auratusgibelio)属于天然雌核发育两性鱼类,卵子发生、受精过程以及胚胎发育具有不同于两性生殖鱼类的特征。考虑到银鲫受精的表型与果蝇hira基因突变的表型类似,我们将hira基因引入到银鲫的发育生物学研究中,探讨其在鱼类卵子发生、胚胎发育和雌核发育中的调控作用。本研究组在前期的工作中已经克隆出了银鲫和两性生殖彩鲫hira基因的全长,并制备了银鲫hira蛋白的的多克隆抗体。本次研究首先采用原位杂交、免疫荧光定位等方法,检测了hira基因mRNA和蛋白质在银鲫和彩鲫卵子发生过程中的动态变化,然后又采用反义吗啡林寡核苷酸(Morpholino,MO)技术敲降了hira蛋白的表达,观察了hira蛋白表达下降对胚胎发育的影响。本次研究将为揭示雌核发育银鲫鱼的卵子发生和胚胎发育中的关键问题提供依据,而且会大大丰富发育生物学的理论知识,促进鱼类基因功能方面的进一步研究。银鲫和彩鲫卵子发生过程中hira基因转录产物的变化基本一致,在Ⅰ期卵母细胞的细胞核中大量表达,至Ⅱ期卵母细胞时转至细胞质中均匀分布,在Ⅲ期卵母细胞中,杂交信号逐渐移向细胞的周边,到Ⅳ期时随着卵黄物质大量积累,杂交信号几乎不见。hira蛋白在银鲫和彩鲫卵子发生过程中的变化略有差别,即在彩鲫中出现得较早。hira蛋白在银鲫Ⅰ期卵母细胞中没有表达,在Ⅱ期卵母细胞的细胞质中有弱表达,在Ⅲ期早期卵母细胞的周边有强烈表达。而在彩鲫Ⅰ期卵母细胞中就有hira蛋白的弱表达,在Ⅱ期时hira蛋白在细胞质中大量表达,Ⅲ期早期卵母细胞的细胞质中有弱表达。在银鲫和彩鲫Ⅲ期末和Ⅳ期卵母细胞中都很难观察到荧光信号。其原因可能是后期卵母细胞体积急剧增大,以至于hira基因产物的相对密度下降,用原位杂交和免疫荧光染色的方法很难观察到。hira mRNA和蛋白质在银鲫和彩鲫早期卵母细胞中有较强表达,且在银鲫和彩鲫卵子发生过程中没有显著差异,说明其可能对于脊椎动物卵子发生和减数分裂没有显著影响,而是在受精或胚胎发育过程中起作用。在银鲫受精后1细胞期,采用反义吗啡林寡核苷酸(Morpholino,MO)敲降(Knock down)的方法研究了hira基因对银鲫胚胎发育的影响。Western Blot分析发现,早期注射hira-MO组与对照组胚胎中hira蛋白的表达没有明显差异,但到心跳期,hira-MO注射组的蛋白表达开始明显下降,虽然在孵化期蛋白表达水平又得以恢复,但还是引起了严重的胚胎发育缺陷,注射组胚胎在原肠作用过程中,下包速度较对照组慢,围心腔水肿,卵黄吸收产生障碍,尾部扭曲变形,血液循环受阻等。胚胎在出苗前就大量死亡。少数可以孵出的鱼苗,神经系统发育异常,神经管内神经细胞的分布发生了改变,集中在神经管的中央。此外,消化系统发育也不正常,表明了hira蛋白除了与雄性原核的形成有关系外,在胚胎发育过程中也起着很重要的作用。

关键词：银鲫彩鲫 hira基因卵子发生反义吗啡林寡核苷酸基因敲降胚胎发育

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彩鲫hira基因片段的克隆及表达分析

水生生物学报 2007年第2期31卷 220-225页

作者：杜新征王玉凤桂建芳华中师范大学生命科学学院武汉430079 中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室武汉430072

hir/hira基因最先作为组蛋白基因表达的一种负调节因子从酵母中被鉴定出来。现已证实,hira包含一组保守的蛋白家族,广泛存在于低等真核生物、无脊椎动物和脊椎动物等多种生物体当中,为生命发育所必需。关于hira基因在动物发育过程中的... 详细信息

hir/hira基因最先作为组蛋白基因表达的一种负调节因子从酵母中被鉴定出来。现已证实,hira包含一组保守的蛋白家族,广泛存在于低等真核生物、无脊椎动物和脊椎动物等多种生物体当中,为生命发育所必需。关于hira基因在动物发育过程中的具体作用研究还不是很多,为了进一步探讨hira基因在鱼类发育过程中的作用,作者根据已知hira基因保守序列设计一对简并引物,分别以彩鲫基因组DNA和卵巢cDNA为模板克隆了彩鲫hira基因(Cahira)片段,该片段基因组序列为2181bp,基因组片段含有6个内含子,长度分别为118bp、275bp、372bp、84bp、472bp、86bp;cDNA序列为759bp,编码253个氨基酸,具有5个WD结构域。对其氨基酸序列进行比较,结果表明,彩鲫hira基因的氨基酸序列与河、爪蟾、鸡、小鼠、人的hira基因氨基酸序列具有非常高的同源性,分别高达92%、89%、89%、87%和88%。组织特异性表达分析表明,所检测的彩鲫组织除了精巢和肌肉中未检测到hira基因表达外,其余组织均有表达。其中卵巢和肝脏中表达很强,而在脑、心、脾、肾中表达较弱,说明该基因可能在维持卵巢和肝脏组织的功能方面起一定作用。

关键词：彩鲫 hira基因克隆组织表达

hira基因突变对绵羊颗粒细胞中mRNA和蛋白表达及细胞激素分泌的影响

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上海农业学报 2023年第2期39卷 76-81页

作者：周梅刘秋月孙庆田志龙向光明狄冉王翔宇储明星中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业农村部动物遗传育种与繁殖重点实验室北京100193 安徽省农业科学院畜牧兽医研究所猪分子数量遗传学安徽省农业科学院重点实验室畜禽产品安全工程安徽省重点实验室合肥230001

以绵羊颗粒细胞为研究对象,利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和免疫荧光技术检测组蛋白细胞周期调节(histone cell cycle regulator,hira)基因g.71874104G>A和g.71833755T>C位点突变引起的mRNA和蛋白表达以及孕酮(progesterone,P4)和雌二醇(estradiol,E2)分泌水平在绵羊卵巢颗粒细胞中的变化。结果表明:g.71874104G>A和g.71833755T>C位点突变均导致卵巢颗粒细胞中hira蛋白表达发生显著变化(Phira基因的mRNA表达量均无明显差异,并且仅g.71874104G>A突变位点对P4和E2的分泌有显著影响(Phira基因的g.71874104G>A和g.71833755T>C两个突变位点通过改变绵羊卵巢颗粒细胞中hira蛋白表达量,进而影响后续的受精和胚胎发育过程,最终影响绵羊的生殖能力。

关键词：绵羊 hira基因蛋白表达激素分泌

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银鲫和彩鲫hira基因的表达分析

银鲫和彩鲫Hira基因的表达分析

作者：周励华中师范大学

学位级别：硕士

Hir/hira(histone regulation)为组蛋白调节基因,是组蛋白基因表达的一种负调节因子。hira基因产物包含一组保守的蛋白家族,广泛存在于从植物、酵母、果蝇、鱼、爪蟾、鸡以及到哺乳动物小鼠和人类等多种生物体当中,但有关其在生物体发... 详细信息

Hir/hira(histone regulation)为组蛋白调节基因,是组蛋白基因表达的一种负调节因子。hira基因产物包含一组保守的蛋白家族,广泛存在于从植物、酵母、果蝇、鱼、爪蟾、鸡以及到哺乳动物小鼠和人类等多种生物体当中,但有关其在生物体发育过程中的具体功能还不甚清楚。对果蝇的研究表明,hira基因产物可能在受精时精核的解凝过程和雄性原核的正常形成过程中起重要作用。在本实验室前期已经分别克隆出雌核发育银鲫和两性生殖彩鲫的hira基因(Caghira和Cahira)的基础之上,本研究首先采用半定量RT-PCR的方法分别研究了Caghira和Cahira基因在银鲫和彩鲫不同胚胎发育阶段的转录表达情况。结果显示,在银鲫的未受精卵中和胚胎发育不同阶段均可以检测到转录产物,且表达量没有明显变化,表明hira基因可能在银鲫雌核发育过程中发挥一定作用;而在彩鲫中,从未受精卵到胚胎发育的各个时期虽然均可检测到表达,但表达量发生明显波动,受精卵中转录本水平较高,受精后迅速降低,在受精后30min、多细胞期、桑椹期、囊胚期等四个发育阶段,转录本水平显著下降(p＜0.05),至原肠期表达量又上升到成熟的未受精卵时的水平,并—直保持到出苗,没有大的波动。hira基因在两亲缘种成熟卵子受精前后表达情况不同,可能与两种鱼不同的生殖方式有关。同时我们也采用胚胎整体原位杂交的方法检测了Caghira在银鲫胚胎发育阶段的定位情况。结果显示,Caghira基因的转录本在银鲫胚胎发育早期广泛分布,而在胚胎发育后期主要集中于头部、神经轴、心脏及尾芽尖部,表明其对其神经系统和心脏的发育有一定作用。为了进一步研hira基因在鱼类发育过程中的作用,我们制备了银鲫CAGhira蛋白的抗体。根据银鲫Caghira基因的特异区域,设计一对引物,以银鲫成熟卵母细胞总RNA逆转录出的eDNA为模板,扩增出hira基因的特异片段,构建原核表达载体,诱导重组蛋白表达,用纯化的蛋白免疫小鼠,获得了银鲫hira蛋白的多克隆抗体。Western blot实验结果表明,其特异性好,效价也比较高。对银鲫hira蛋白的组织特异性表达分析发现,该蛋白仅在成熟卵巢组织中特异表达,故表明hira可能对鱼类卵子发生和/或早期胚胎发育具有重要作用;对彩鲫hira蛋白的组织特异性表达分析发现,彩鲫hira蛋白在卵巢、脑、心、肝、脾、肾中均有表达,在卵巢和肝脏中表达较强,而肌肉和精巢的表达量相对较低,表明它可能在卵巢发育和卵子发生过程中发挥一定作用。对银鲫和彩鲫不同胚胎发育阶段hira蛋白表达分析表明,未受精卵和胚胎发育不同阶段的hira蛋白的表达与RT-PCR实验所得结果一致,在银鲫中表达量没有较大变化,而在彩鲫的受精后30min、多细胞期、桑椹期、囊胚期等四个发育阶段蛋白表达量下降。在果蝇中的研究已经表明hira基因与精核解凝形成雄性原核有关。由于彩鲫是两性生殖方式鱼类,在受精前hira基因大量表达,可能为受精时精子进入卵后精核解凝形成雄性原核做准备。而银鲫具有雌核发育生殖方式,精核不需要完全解凝形成雄性原核,只是起到刺激卵核发育的作用,因此hira基因的表达水平没有大的波动。这说明,hira基因可能在鱼类精核解凝过程中也发挥重要作用。彩鲫后期合子型hira基因的激活以及银鲫不同胚胎发育阶段都监测到hira基因表达,说明hira基因可能在鱼类胚胎的后期发育过程中也起着一定的作用。实际上,胚胎整体原位杂交的结果已经初步表明Caghira基因对银鲫神经系统和心脏的发育可能有一定功能。

关键词：银鲫彩鲫 hira基因 RT-PCR 原位杂交抗体制备组织表达

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银鲫和彩鲫hira基因的克隆及表达分析

银鲫和彩鲫hira基因的克隆及表达分析

作者：杜新征华中师范大学

学位级别：硕士

Hir/hira(histonc regulation)基因是组蛋白基因表达的负调节因子,其产物包含一组保守的蛋白家族,广泛存在于从酵母、果蝇、鱼、爪蟾、鸡以及到哺乳动物小鼠和人类等多种生物体当中。本研究通过PCR和RACE的方法,分别从天然雌核发育银鲫... 详细信息

Hir/hira(histonc regulation)基因是组蛋白基因表达的负调节因子,其产物包含一组保守的蛋白家族,广泛存在于从酵母、果蝇、鱼、爪蟾、鸡以及到哺乳动物小鼠和人类等多种生物体当中。本研究通过PCR和RACE的方法,分别从天然雌核发育银鲫和两性生殖彩鲫成熟卵细胞的SMART cDNA文库中克隆出hira全长基因。通过与其它已知的hira家族基因比对,同源性非常高,证明所获得的新全长基因为hira家族成员。从银鲫中新克隆的基因被命名为Carassius auratus gibelio hira(Caghira),从彩鲫中新克隆的基因被命名为Carassius auratus hira(Cahira)。其中Caghira基因全长3828bp,含有一个3033bp的开放阅读框,编码一个由1011个氨基酸残基组成的蛋白质;Cahira基因全长3722bp,开放阅读框位于187～3220bp之间,编码1011个氨基酸。两者的氨基酸序列均具有7个WD结构域,且具有高度的同源性,同源性高达99%。hira蛋白家族在N端的7个WD重复区,推测形成一个β螺旋结构,该β螺旋结构可能与蛋白质—蛋白质互作有关。Caghira和Cahira的N端同样具有7个WD结构域,由于含有WD结构域的蛋白具有调节信号传递和mRNA前体加工的功能,可以推测银鲫和彩鲫hira蛋白可能同样具有调节组蛋白基因表达的作用。采用RT-PCR方法并结合整体原位杂交的方法分析了银鲫Caghira在不同组织中和胚胎发育不同阶段中的表达特征。成鱼组织中,Caghira在卵巢和脑中均有表达,但脑中表达量较弱,说明该基因在维持卵巢和脑组织作用中起一定作用。在银鲫的未受精卵中和胚胎发育不同阶段均可以检测到少量的转录产物,表达量未检测到明显变化,表明hira基因可能在银鲫雌核发育过程中发挥一定作用。胚胎原位杂交显示,hira基因的转录本在银鲫胚胎早期广泛分布,而在胚胎后期主要集中于头部、心脏及尾芽尖部,说明也对其脑部和心脏的发育有影响。本论文同时采用RT-PCR方法分析了彩鲫Cahira在不同组织中和胚胎发育不同阶段中的表达特征。成鱼组织中,Cahira在卵巢、脑、心、肝、脾、肾中均有表达,在卵巢和肝脏中表达较强,而在精巢和肌肉中不表达,表明它可能在卵巢发育和卵子发生过程中发挥一定作用。在彩鲫中,从未受精卵到胚胎发育的各个时期均可检测到表达,但表达量发生明显变化,受精后表达量迅速下降,直到原肠胚期表达量有所上升,并一直保持到出苗。hira基因在两亲缘种成熟卵子受精前后表达情况不同,可能与两种鱼不同的生殖方式有关。在果蝇中的研究已经表明hira基因与精核解凝形成雄性原核有关。由于彩鲫是两性生殖方式鱼类,在受精前hira基因大量表达,可能为受精时

关键词：银鲫彩鲫 hira基因克隆时空表达

Wolbachia感染对果蝇hira基因表达的影响

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Wolbachia感染对果蝇Hira基因表达的影响

作者：任盼盼华中师范大学

学位级别：硕士

Wolbachia是广泛存在于节肢动物和线虫体内的一类微生物,属于立克次氏体,可通过宿主卵的细胞质传递给子代。Wolbachia能够通过多种机制调节其宿主的生殖方式,如细胞质不相容(cytoplasmic incompatibility, CI)、孤雌生殖、雌性化以及杀... 详细信息

Wolbachia是广泛存在于节肢动物和线虫体内的一类微生物,属于立克次氏体,可通过宿主卵的细胞质传递给子代。Wolbachia能够通过多种机制调节其宿主的生殖方式,如细胞质不相容(cytoplasmic incompatibility, CI)、孤雌生殖、雌性化以及杀雄等,通过这些机制使其在宿主种群内广泛传播。CI是Wolbachia共生引起的一种最普遍的表型,表现为Wolbachia感染的雄性宿主与未感染或感染了不同品系Wolbachia的雌性宿主交配后,子代死亡或仅有部分能够存活。但感染相同Wolbachia的雌雄宿主交配后能够产生正常的后代。关于CI的分子机制虽然有一些研究,但目前还是不甚清楚,且存在很多争议。Hir/hira(Histone regulation)基因是组蛋白H3.3的一种伴侣蛋白编码基因,果蝇hira (hira)基因的突变对果蝇存活没有影响,但导致雌性果蝇不育,因为突变果蝇的卵受精后精核不能正常解凝,无法形成正常的雄性原核,因此后代在胚胎早期死亡,其表型与Wolbachia诱导的CI表型类似。考虑到hira基因对雄性原核形成的影响,以及Wolbachia感染导致宿主CI的表型,我们用荧光定量RT-PCR方法研究了Wolbachia诱导的CI强度与果蝇hira基因表达量之间的关系,结果表明,wRi品系感染引起拟果蝇(Drosophila simulans)产生强烈的CI表型,即当1d感染果蝇(Dsim wRi)的雄体与未感染果蝇(Dsim T)雌体交配后,胚胎的孵化率只有7.67±2.18%,而wAu品系感染则没有产生CI表型,胚胎孵化率为87.62±2.67%,与未感染果蝇交配组胚胎孵化率(92.76±3.83%)没有显著差异。在雄性果蝇中,与未感染的果蝇相比,wRi感染引起hira的表达水平显著下调(Dsim wRi/Dsim T:0.42±0.11) (P

关键词：果蝇 Wolbachia 细胞质不亲和(CI) hira基因

萍乡红鲫hira基因及其启动子的特征和在卵巢周年发育中的研究

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萍乡红鲫Hira基因及其启动子的特征和在卵巢周年发育中的研究

作者：刘志鹏南昌大学

学位级别：硕士

萍乡红鲫（pingxiang red-transparent crucian carp, curassius auratus var. pingxiangnesis）,通体透明,体呈肉红色,是江西省萍乡地区分布的一种天然三倍体野生鲫鱼的突变种。在2008年被国家水产原、良种委员会审定为一个新的养殖品... 详细信息

萍乡红鲫（pingxiang red-transparent crucian carp, curassius auratus var. pingxiangnesis）,通体透明,体呈肉红色,是江西省萍乡地区分布的一种天然三倍体野生鲫鱼的突变种。在2008年被国家水产原、良种委员会审定为一个新的养殖品种。经过连续多代人工选育,得到生长速度快、适应性强、营养价值高、易养易繁、抗病力强等优良经济性状,且遗传性状基本稳定的后代。现已证实萍乡红鲫具有两性生殖和雌核发育两种生殖方式。在对银鲫、果蝇等一些生物的研究中,hira基因在雌核发育中与精核解凝有关。实验从三个方面对萍乡红鲫hira基因做了相关工作,以探讨其在萍乡红鲫生殖调控中的作用。一、实验采用RACE-PCR技术克隆得到萍乡红鲫hira基因cDNA全长,序列全长为3851bp,开放阅读框3033bp,编码1010个氨基酸。通过氨基酸序列比对,同源分析发现hira基因存在较大的种属特异性和稳定性。萍乡红鲫hira蛋白与银鲫、普通鲫鱼及斑马鱼的hira蛋白同源性较高,与两栖类、爬行类、鸟类以及哺乳类动物的hira蛋白同源关系较远。信号肽分析表明hira基因无信号肽,推测hira蛋白可能为可溶性蛋白于细胞质基质或进入细胞核发挥功能,符合其作为组蛋白伴侣而行使调控基因转录的特性。二、利用Genome Walker法进行hira基因启动子的步移,经过2次步移,测序后MEGA软件拼接得到启动子序列3.6kb。Proscan软件分析表明在hira基因翻译起始位点ATG上游-1278bp～-1035bp段可能为基因的强启动区,含有1个TATA-BOX,1个CAATBOX,1个EBOX和一个POU1Fla,这些结构域序列可能对于hira基因的表达,起到了重要的调控作用。三、利用荧光定量PCR方法检测了hira基因在萍乡红鲫自出苗后至性腺成熟的成体鱼的卵巢组织中的表达变化情况。结果显示,hira基因在卵巢组织中表达的周年内总体表现为上升趋势,出苗后1～5月龄表达量较小,在第6月龄突然增加,相对量达到3月龄时的1947倍,之后急剧减少。第7月龄～第10月龄,hira基因的表达量相对第6月龄时表现为急剧减少趋势。第11月龄时又突然增加到全年中表达量最大值,为出苗后半月龄的3383倍,之后在第12月龄时又有减少情况。

关键词：萍乡红鲫 hira基因荧光定量启动子克隆

hira基因g.71874104G>A和g.71833755T>C位点对小尾寒羊排卵数的影响

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中国草食动物科学 2021年第6期41卷 1-5页

作者：周梅郭晓飞孙庆向光明狄冉王翔宇张效生张金龙刘秋月储明星中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业农村部动物遗传育种与繁殖重点实验室北京100193 安徽省农业科学院畜牧兽医研究所猪分子数量遗传学安徽省农业科学院重点实验室畜禽产品安全工程安徽省重点实验室合肥230001 天津市畜牧兽医研究所天津300381

旨在探究组蛋白细胞周期调节(Histone cell cycle regulator,hira)基因g.71874104G>A和g.71833755T>C位点对绵羊排卵数的影响,为绵羊高排卵数主效基因的筛选提供基因来源。筛选出含g.71874104G>A和g.71833755T>C两个突变位点的不同基因... 详细信息

旨在探究组蛋白细胞周期调节(Histone cell cycle regulator,hira)基因g.71874104G>A和g.71833755T>C位点对绵羊排卵数的影响,为绵羊高排卵数主效基因的筛选提供基因来源。筛选出含g.71874104G>A和g.71833755T>C两个突变位点的不同基因型小尾寒羊母羊,并在同期发情之后利用活体腹腔镜观测法对排卵数进行测定。同时,利用放射免疫法对绵羊血清中促卵泡素(Follicle-stimulating hormone,FSH)、促黄体素(Luteinizing hormone,LH)、孕酮(Progesterone,P4)以及雌二醇(Estradiol,E2)浓度进行测定,并分析2个位点突变对绵羊血清激素分泌的影响。结果表明,hira基因的2个突变位点对绵羊个体排卵数和血清中生殖激素FSH、LH和P4的分泌均无显著影响(P>0.05),但对E2的分泌有显著影响(Phira基因的g.71874104G>A和g.71833755T>C两个突变位点可能不是影响小尾寒羊排卵数的关键位点。

关键词：绵羊 hira基因排卵数激素分泌