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Development of Fok-I based nested polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism analysis for detection of hepatitis B virus X region V5M mutation

引用

World Journal of Gastroenterology 2015年第47期21卷 13360-13367页

作者： Hong Kim Seok-Hyun Hong Seoung-Ae Lee Jeong-Ryeol Gong Bum-Joon Kim Department of Biomedical Sciences Microbiology and Immunology and Liver Research Institute Seoul National University College of Medicine

AIM: To develop a Fok-I nested polymerase chain reaction(PCR)-restriction fragment length polymorphism analysis(PRA) method for the detection of hepatitis B virus X region(HBx) V5 M ***: Nested PCR was applied into DNAs from 198 chronic patients at 2 different stages [121 patients with hepatocellular carcinoma(HCC) and 77 carrier patients]. To identify V5 M mutants, digestion of nested PCR amplicons by the restriction enzyme Fok-I(GGA TGN9↓) was done. For size comparison, the enzymetreated products were analyzed by electrophoresis on 2.5% agarose gels, stained with ethidium bromide, and visualized on a UV ***: The assay enabled the identification of 69 patients(sensitivity of 34.8%; 46 HCC patients and 23 carrier patients). Our data also showed that V5 M prevalence in HCC patients was significantly higher than in carrier patients(47.8%, 22/46 patients vs 0%, 0/23 patients, P < 0.001), suggesting that HBx Ag V5 M mutation may play a pivotal role in HCC generation in chronic patients with genotype C ***: The Fok-I nested PRA developed in this study is a reliable and cost-effective method to detect HBx Ag V5 M mutation in chronic patients with genotype C2 infection.

关键词： Hepatitis B virus X antigen Polymerasechain reaction-restriction fragment length polymorphismanalysis V5M mutation hepatocellur carcinoma

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