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三对苯丙素类同分异构体对hepg2细胞系代谢同工酶CYP3A4、1A1酶表达的研究

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三对苯丙素类同分异构体对HepG2细胞系代谢同工酶CYP3A4、1A1酶表...

作者：高庆剑宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的：化合物结构是决定药效发挥的最本质基础，本实验选取三对苯丙素类同分异构体补骨脂素、异补骨脂素、欧前胡素、异欧前胡素、阿魏酸和异阿魏酸，讨论其结构变化对hepg2细胞系药物代谢同工酶CYP3A4、1A1调控的影响，并阐述其相关机... 详细信息

目的：化合物结构是决定药效发挥的最本质基础，本实验选取三对苯丙素类同分异构体补骨脂素、异补骨脂素、欧前胡素、异欧前胡素、阿魏酸和异阿魏酸，讨论其结构变化对hepg2细胞系药物代谢同工酶CYP3A4、1A1调控的影响，并阐述其相关机制，从而为临床中草药的安全合理使用提供理论基础。方法：1.采用MTT比色法测定六种药物作用48h后对体外培养人肝癌hepg2细胞增殖的影响，计算IC50，筛选有效浓度。2.采用流式细胞术测定六种药物对hepg2细胞周期的影响。3.通过实时荧光定量PCR技术测定经六种药物处理细胞后hepg2的CYP3A4和CYP1A1的mRNA的表达变化。4.用免疫荧光法（IF）和蛋白免疫印迹法（WB）定位及定量测定六种药物对hepg2中细胞CYP3A4蛋白酶表达的影响。结果：1.给药48h，六种药物在七个浓度（6.25～200μg/mL）作用下对hepg2细胞系增殖均有抑制作用，并有明显的剂量依赖关系。补骨脂素、异补骨脂素、阿魏酸和异阿魏酸均抑制细胞增殖于G2-M期，而欧前胡素和异欧前胡素阻止细胞增殖于G2-M期和S期。2.六种药物均是CYP3A4mRNA的抑制剂。异补骨脂素的抑制作用比补骨脂素更强;欧前胡素在高中低三个浓度时均为CYP3A4mRNA的弱抑制剂，异欧前胡素的抑制能力明显强于欧前胡素;异阿魏酸对CYP3A4mRNA的抑制作用略强于阿魏酸。3.六种药物均是CYP1A1mRNA的抑制剂。补骨脂素对CYP1A1mRNA的抑制略比异补骨脂素强;异欧前胡素在低浓度时（25、50μg/mL）对1A1mRNA的抑制作用明显强于欧前胡素，而在高浓度时（100μg/mL）两药作用程度无太大区别;异阿魏酸在高中低三个浓度时对1A1mRNA的抑制作用明显强于阿魏酸。4. IF和Western Blot实验证实CYP3A4蛋白主要存在于细胞浆中，六种药物作用后的CYP3A4蛋白表达明显降低。结论:1.六种药物均为CYP3A4和CYP1A1酶的抑制剂，在临床药物合用时应注意因药物积蓄毒性而造成的不良反应。2.六种药物均阻止了细胞mRNA和蛋白质的合成进而抑制肿瘤细胞hepg2增殖，且欧前胡素和异欧前胡素同时减弱了DNA的合成从而抑制细胞生长。3.补骨脂素、异补骨脂素、欧前胡素和异欧前胡素此四者同属呋喃香豆素类化合物，发现呋喃环结构变化是导致此四者对CYP3A4和CYP1A1的mRNA和蛋白差异较大的主要原因;苯环上的酚羟基异构是阿魏酸和异阿魏酸对CYP3A4和CYP1A1酶具有不同抑制强度的原因。

关键词：苯丙素类化合物同分异构体 hepg2细胞系 CYP3A4 CYP1A1

肝癌hepg2细胞系分泌的免疫抑制物质的研究

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肝癌HepG2细胞系分泌的免疫抑制物质的研究

作者：冯瑾首都师范大学

学位级别：硕士

目的：免疫系统与恶性肿瘤细胞之间的相互作用对肿瘤的发展有重要影响。免疫系统有监测和消除癌变细胞的作用。肿瘤细胞亦有逃避免疫攻击的机制。为提高癌症的免疫治疗效果须研究和拮抗肿瘤细胞逃避免疫攻击的机制。方法：... 详细信息

目的：免疫系统与恶性肿瘤细胞之间的相互作用对肿瘤的发展有重要影响。免疫系统有监测和消除癌变细胞的作用。肿瘤细胞亦有逃避免疫攻击的机制。为提高癌症的免疫治疗效果须研究和拮抗肿瘤细胞逃避免疫攻击的机制。方法：将预先收集的肝癌细胞系hepg2和对照细胞系的培养上清液加入PHA活化的人淋巴细胞中，共同培养72小时后~3H-胸腺嘧啶核苷掺入法检测增殖。结果：肝癌细胞系hepg2的培养上清液有明显抑制T淋巴细胞增殖的功能，而另一些肝癌细胞系的培养上清液无此功能。肝癌细胞系hepg2的培养上清液中抑制T细胞增殖的物质有多种，并且都是大于100KD的不耐热的蛋白质。其中外泌体起到了抑制T淋巴细胞增殖的作用。结论：肝癌细胞系hepg2细胞能分泌多种蛋白物质抑制人T淋巴细胞的增殖。其中hepg2细胞系分泌的外泌体起了重要的作用。

关键词：免疫逃逸肝癌 hepg2细胞系外泌体

tTS真核表达载体构建及稳定转染hepg2细胞系的建立

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山西农业大学学报（自然科学版） 2010年第4期30卷 336-339页

作者：帅丽芳赵勇张若霜银涛唐博恒广州军区疾病预防控制中心广东广州510507 中山大学实验动物中心广东广州510080

为了构建tTS真核表达载体,转染hepg2细胞,建立稳定转染的hepg2细胞系,采用PCR方法,以质粒pTet-tTS为模板扩增tTS基因的编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pApoE-rtTA-Neo,经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染hepg... 详细信息

为了构建tTS真核表达载体,转染hepg2细胞,建立稳定转染的hepg2细胞系,采用PCR方法,以质粒pTet-tTS为模板扩增tTS基因的编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pApoE-rtTA-Neo,经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染hepg2细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的hepg2细胞系,用RT-PCR、Western blot法检年测tTS的表达,成功构建了pApoE-rtTA-tTS-Neo真核表达载体,并建立了稳定转染的hepg2细胞系,成功地表达目的基因。真核表达载体成功构建和稳定转染hepg2细胞系的建立为进一步研究tTS的功能奠定良好的实验基础。

关键词： tTS 基因表达真核表达载体 hepg2细胞系

正肝方药物血清对甲胎蛋白刺激的AFPsiRNA hepg2细胞系凋亡的影响

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中西医结合肝病杂志 2016年第3期26卷 169-170页

作者：冉云杨大国陈文林邓欣刘成海深圳市龙岗区中医院肝病科广东深圳518172 深圳市第三人民医院上海中医药大学肝病研究所

目的:观察正肝方药物血清对甲胎蛋白(AFP)刺激的AFPsiRNA hepg2细胞凋亡的影响。方法:正肝方浸膏粉经灌胃给药制备正肝方大鼠血清。体外培养AFPsiRNA hepg2细胞,将细胞分为5%正常大鼠血清组、5%正肝方大鼠血清组、10%正常大鼠血清组、10... 详细信息

目的:观察正肝方药物血清对甲胎蛋白(AFP)刺激的AFPsiRNA hepg2细胞凋亡的影响。方法:正肝方浸膏粉经灌胃给药制备正肝方大鼠血清。体外培养AFPsiRNA hepg2细胞,将细胞分为5%正常大鼠血清组、5%正肝方大鼠血清组、10%正常大鼠血清组、10%正肝方大鼠血清组、5%正常大鼠血清+AFP组、5%正肝方血清+AFP组、10%正常大鼠血清+AFP组、10%正肝方大鼠血清+AFP组共8组,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:无AFP刺激时,正肝方大鼠血清与正常大鼠血清对hepg2细胞凋亡相比较,差异无显著性意义(P>0.05);当有AFP刺激时,正肝方血清与正常大鼠血清对细胞凋亡相比较,差异有显著性意义(Phepg2细胞凋亡。其机制是通过影响AFP介导的肝癌细胞凋亡通路来实现的。

关键词：正肝方/药理作用甲胎蛋白 AFPsiRNA hepg2细胞系细胞凋亡

p100蛋白慢病毒干扰载体及p100沉默的hepg2稳定细胞系的构建

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天津医药 2012年第6期40卷 529-532,I0001页

作者：黄丽尹洁丁建民宋娟高星杰经翔杨洁天津医科大学免疫教研室 300070 天津医科大学基础医学研究中心 300070 天津市第三中心医院

目的:用表达shRNA的干扰慢病毒载体系统构建p100基因稳定沉默的hepg2人肝癌细胞系。方法:通过RNAi序列设计软件进行p100干扰片段设计,筛选出p100基因的RNAi有效靶序列,进一步合成靶序列的OligoDNA并构建pLKO.3G-p100I慢病毒载体,用双酶... 详细信息

目的:用表达shRNA的干扰慢病毒载体系统构建p100基因稳定沉默的hepg2人肝癌细胞系。方法:通过RNAi序列设计软件进行p100干扰片段设计,筛选出p100基因的RNAi有效靶序列,进一步合成靶序列的OligoDNA并构建pLKO.3G-p100I慢病毒载体,用双酶切及测序进行鉴定。将构建好的p100shRNA表达质粒与慢病毒包装质粒共转染至包装细胞293T,包装产生病毒颗粒。运用病毒颗粒感染hepg2细胞,获得p100稳定沉默的细胞系。荧光显微镜下观察感染效率,利用Westernblot方法检测稳定细胞株中p100的沉默效果。结果:成功构建了具有p100干扰效果的慢病毒载体,并获得了稳定沉默p100及对照的hepg2细胞株。慢病毒感染hepg2细胞后,荧光显微镜下观察到90%以上细胞发出绿色荧光,Westernblot证实干扰p100后,hepg2细胞株中p100蛋白表达水平明显降低。结论:成功构建了具有p100干扰效果的慢病毒干扰载体及p100稳定沉默的hepg2细胞系。

关键词： RNA干扰细胞系肿瘤质粒慢病毒载体 p100蛋白 hepg2细胞系

人肝癌细胞系hepg2在遗传毒物检测中的应用及其进展

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世界华人消化杂志 2007年第2期15卷 145-150页

作者：姚晓峰仲来福大连医科大学毒理学研究室辽宁省大连市116027

外来化合物的体外遗传毒性实验常用于各种致癌物和致突变物的快速筛选.hepg2是一种分化好的人肝胚细胞瘤细胞系,保留了较完整的代谢酶及其活性.以hepg2细胞作为实验系统检测各种致癌及非致癌物,在多个观察终点均获得相应的阳性及阴性结果.

关键词：人肝癌细胞系 hepg2细胞系遗传毒物体外遗传毒性实验

MMP2和MMP9在hepg2肝癌细胞系及HCC组织中表达的比较研究

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哈尔滨医科大学学报 2010年第1期44卷 29-32页

作者：吴丹冯华赵然王天真金晓明哈尔滨医科大学病理学教研室黑龙江哈尔滨150081 黑龙江中医药大学附属第一医院病理科黑龙江哈尔滨150040

目的分析MMP2和MMP9在hepg2细胞系及肝细胞癌(HCC)组织中的表达,探讨不同的基质金属蛋白酶(MMPs)与肝细胞癌侵袭转移的特异相关性。方法免疫细胞化学检测hepg2细胞系中MMP2和MMP9的表达,免疫组织化学检测38例HCC肝癌组织中MMP2和MMP9的... 详细信息

目的分析MMP2和MMP9在hepg2细胞系及肝细胞癌(HCC)组织中的表达,探讨不同的基质金属蛋白酶(MMPs)与肝细胞癌侵袭转移的特异相关性。方法免疫细胞化学检测hepg2细胞系中MMP2和MMP9的表达,免疫组织化学检测38例HCC肝癌组织中MMP2和MMP9的表达。结果MMP9在hepg2细胞系的表达高于MMP2的表达。MMP9和MMP2在HCC组织中均有所表达,但MMP9的表达率84.2%(32/38)明显高于MMP2的表达52.6%(20/38),二者有显著差异(P2、MMP9的表达在体内外呈现出一致性,即MMP9在体内外的表达均高于MMP2,推测可能MMP9与HCC的侵袭转移关系更为密切。

关键词： hepg2细胞系肝细胞癌 MMP2 MMP9

肝癌多药耐药细胞系hepg2/ADM的建立及耐药机制研究

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中国实验诊断学 2006年第5期10卷 460-463页

作者：王宁李玉刘洁沈阳军区总医院放射肿瘤介入治疗科辽宁沈阳110015 中国医科大学实验技术中心

目的建立人肝癌多药耐药细胞系并研究其耐药特性及机制。方法应用人肝癌细胞株hepg2,采用阿霉素(ADM)浓度梯度递增诱导法,建立多药耐药细胞系hepg2/ADM。相差显微镜观察细胞,用MTT法检测该耐药细胞株对多种化疗药物的多药耐药性,采用流... 详细信息

目的建立人肝癌多药耐药细胞系并研究其耐药特性及机制。方法应用人肝癌细胞株hepg2,采用阿霉素(ADM)浓度梯度递增诱导法,建立多药耐药细胞系hepg2/ADM。相差显微镜观察细胞,用MTT法检测该耐药细胞株对多种化疗药物的多药耐药性,采用流式细胞术检测该耐药细胞表面多药耐药基因(mdr)的表达产物P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)及谷胱甘肽硫转移系统(GSH/GST)的表达情况,应用RT-PCR检测MDR、MRP基因表达水平。结果hepg2/ADM对多种抗癌药物产生耐药,对阿霉素的耐药性提高了89.38倍。流式细胞仪分析发现(45.5±5.1)%的hepg2/ADM细胞表面P-gp表达阳性,而对照细胞hepg2表达仅为(11.3±1.2)%,二者差异有显著性(Phepg2/ADM和hepg2细胞的MRP及GSH/GST表达无明显变化(P>0.05)。RT-PCR检测发现hepg2/ADM中MDR mRNA高表达。结论hepg2/ADM具有明确的多药耐药性,其多药耐药相关基因MDR mRNA表达升高。

关键词：肝癌 hepg2细胞系阿霉素药物耐受性

在hepg2细胞系上建立四环素(Tet-On)基因调控系统表达P4502E1(英文)

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皖南医学院学报 2004年第2期23卷 102-105页

作者：刘晓平皖南医学院药理学教研室安徽芜湖241001

目的　在hepg2细胞系上建立四环素 (Tet On)基因调控系统 ,调控表达P4 5 0 2E1(CYP2E1)。方法　先后转导调控蛋白基因及CYP2E1cDNA(已与四环素反应启动子整合 )入hepg2细胞。用多西环素调控CYP2E1的表达 ,用RT PCR和Westernblot检测其... 详细信息

目的　在hepg2细胞系上建立四环素 (Tet On)基因调控系统 ,调控表达P4 5 0 2E1(CYP2E1)。方法　先后转导调控蛋白基因及CYP2E1cDNA(已与四环素反应启动子整合 )入hepg2细胞。用多西环素调控CYP2E1的表达 ,用RT PCR和Westernblot检测其表达高低。结果　RT PCR和Westernblot均检测出CYP2E1被多西环素调控表达。结论　四环素 (Tet On)基因调控系统 (表达CYP2E1)已在hepg2细胞系上成功建立。

关键词： hepg2细胞系四环素基因调控系统表达 P450 2E1