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槲皮素诱导hep g2细胞自噬的分子机制研究

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槲皮素诱导Hep G2细胞自噬的分子机制研究

作者：罗亚男山西大学

学位级别：硕士

荞麦是一种药食同源的食物,含有众多的生物活性物质。其中苦荞中的多种生物活性物质均高于普通荞麦,类黄酮的含量最为丰富,所含的黄酮中又以芦丁、槲皮素为主。近年来,槲皮素由于可抑制肿瘤细胞的增殖而成为具有潜力的抗肿瘤药物,成为... 详细信息

荞麦是一种药食同源的食物,含有众多的生物活性物质。其中苦荞中的多种生物活性物质均高于普通荞麦,类黄酮的含量最为丰富,所含的黄酮中又以芦丁、槲皮素为主。近年来,槲皮素由于可抑制肿瘤细胞的增殖而成为具有潜力的抗肿瘤药物,成为各国学者关注的焦点。最近研究报道,槲皮素可以诱导细胞发生自噬,但是其详细的机制还未见报道,未形成较一致的见解。本文将采用现代分子生物学及细胞学技术,着重研究Ca2+在槲皮素诱导的hep g2细胞自噬中的作用,为揭示槲皮素诱导细胞自噬的分子机制增添新的内容。本文采用荧光染色试剂单丹磺酰尸胺(MDC)及pCMV-gFP-LC3质粒转染hepg2细胞,观察槲皮素诱导hep g2细胞发生自噬;Proteasome-gloTM Cell-Based Reagent检测槲皮素对细胞内蛋白酶体活性的影响;流式细胞术检测槲皮素或钙离子螫合剂作用hep g2细胞后细胞自噬水平的变化及胞内Ca2+浓度的变化;MTT法和流式细胞仪分别检测3-MA存在时细胞增殖率及凋亡率的变化。检测结果显示,在设定的槲皮素浓度(0-50μg/mL)范围内,其对hep g2细胞生长有显著的抑制作用,呈明显的时间、剂量依赖性;槲皮素可诱导hep g2细胞发生自噬和凋亡;槲皮素对hep g2细胞内蛋白酶体trypsin-like、chymotrypsin-like以及caspase-like酶活性均有显著地抑制作用;同时,槲皮素诱导hep g2发生自噬过程中细胞内的Ca2+浓度有所升高;在抑制剂BAPTA-AM存在时,与单独槲皮素组相比,细胞自噬水平明显降低,进一步揭示细胞内增加的钙离子主要来自细胞内钙库中钙离子的释放。当槲皮素浓度为0-50μg/mL,作用时间为24h时,3-MA+槲皮素组比槲皮素组的细胞凋亡率有所提高,表明自噬的抑制促进了细胞的凋亡,进一步揭示自噬对细胞起到一定的保护作用。综上所述,槲皮素能明显抑制hep g2细胞的生长,并诱导其发生保护性自噬。蛋白酶体活性实验分析表明,槲皮素诱导细胞自噬的过程中可能涉及泛素-蛋白酶体降解途径。另一方面槲皮素诱导的hep g2细胞自噬过程中,细胞内游离钙离子的浓度升高,或许主要来源于细胞内钙库钙离子的释放。这些研究结果对深入了解槲皮素诱导肿瘤细胞自噬的分子机制奠定了前期理论基础。

关键词：槲皮素 hep g2细胞自噬钙离子

大豆寡肽（QRPR、HCQRPR）对hep g2细胞凋亡的作用及机制的研究

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大豆寡肽（QRPR、HCQRPR）对Hep G2细胞凋亡的作用及机制的研究

作者：王琳吉林大学

学位级别：硕士

作为食源性活性肽,大豆肽具有各种功能活性,例如抗氧化,降血压和抗炎。食源性活性肽在满足癌症患者的身体功能和营养需求的同时干预癌细胞生长增殖。原发性肝癌是最常见的恶性肿瘤之一,最常见的类型是肝细胞癌(HCC),目前关于癌症患者食... 详细信息

作为食源性活性肽,大豆肽具有各种功能活性,例如抗氧化,降血压和抗炎。食源性活性肽在满足癌症患者的身体功能和营养需求的同时干预癌细胞生长增殖。原发性肝癌是最常见的恶性肿瘤之一,最常见的类型是肝细胞癌(HCC),目前关于癌症患者食用食源性活性肽的研究报道尚少。本文以免疫活性大豆寡肽QRPR(gln-Arg-Pro-Arg)、HCQRPR(His-Cys-gln-Arg-Pro-Arg)为研究对象,选用hep g2人肝癌细胞为模型细胞,从细胞凋亡角度出发,从分子水平探讨大豆寡肽(QRPR、HCQRPR)抑制hep g2细胞增殖的机制;并从结构与功效的关系入手,探索大豆寡肽(QRPR、HCQRPR)在hep g2细胞增殖过程中发挥的作用。本论文主要研究内容与结果如下:(1)进行大豆寡肽(QRPR、HCQRPR)对hep g2细胞活力影响的评价,选用hep g2细胞作为模型细胞。MTS试验结果表明大豆寡肽(QRPR、HCQRPR)对hep g2细胞增殖有抑制作用,在相同处理浓度和时间条件下,大豆寡肽QRPR、HCQRPR联合处理hep g2细胞比两者单独处理的抑制率高,可显著抑制hep g2细胞增殖(phep g2细胞g1期细胞增多(phep g2细胞从g1期至S期,hep g2的细胞周期受到了影响,从而抑制hep g2细胞增殖。(2)通过体外细胞培养实验,探讨了大豆寡肽(QRPR、HCQRPR)对hep g2细胞凋亡的作用及其机制。透射电镜结果显示,经大豆寡肽QRPR和HCQRPR联合处理后,hep g2细胞的超微结构发生变化,其内部有凋亡小体的产生。Annexin V-FITC/PI双染色试验结果显示大豆寡肽QRPR、HCQRPR可以诱导hep g2细胞凋亡,且两者联合处理比单独处理凋亡率更高,呈浓度及时间依赖性,抑制率最高为54.06±1.38%。这提示我们大豆寡肽QRPR和HCQRPR可诱导hep g2细胞凋亡。进一步试验对大豆寡肽QRPR和HCQRPR诱导凋亡的机制进行研究,通过酶联免疫法对TNF-α表达量进行检测、以及qPCR和Western-blot对caspase-8和caspase-3表达量进行检测。上述试验结果表明,大豆寡肽QRPR和HCQRPR作用于hep g2细胞后,促使TNF-α与TNFRI结合,TNF-α的表达量显著降低(p细胞通路诱导hep g2细胞凋亡。说明大豆寡肽QRPR和HCQRPR抑制hep g2细胞增殖与其诱导凋亡有关。(3)采用圆二色谱、傅里叶红外光谱确定大豆寡肽QRPR、HCQRPR为无规则卷曲结构,通过ANThepROT、Discovery Studio软件预测得到大豆寡肽QRPR和HCQRPR都为带正电荷的、两性多肽及其空间结构的分子构象图,探究了大豆寡肽(QRPR、HCQRPR)的构效关系。综上所述,本文研究了大豆寡肽QRPR、HCQRPR对肝癌细胞hep g2细胞凋亡的作用及机制,为大豆活性肽在功能食品开发及癌症患者饮食中的应用提供了理论依据和科学依据,为进一步提高大豆制品利用率、提高大豆产品的附加值提供了新思路。

关键词：大豆寡肽 hep g2细胞凋亡 TNF细胞通路构效关系

大花旋覆花素对体外hep g2细胞增殖、凋亡和mTORC1信号通路的影响

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实用肝脏病杂志 2022年第4期25卷 468-471页

作者：任洁雯李宗怡任嘉欣赖鸣杰广州中医药大学附属东莞医院消化内科广州市510000 广州中医药大学附属东莞医院内十二科广州市510000 东莞市莞城医院药剂科东莞市中西医结合医院消化内科

目的研究大花旋覆花素肿瘤细胞增殖、凋亡和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTORC1)信号通路的影响。方法取hep g2细胞,分组给予0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L大花旋覆花素处理48 h,采用MTT法检测细胞增殖,使用流式细胞仪检测细胞... 详细信息

目的研究大花旋覆花素肿瘤细胞增殖、凋亡和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTORC1)信号通路的影响。方法取hep g2细胞,分组给予0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L大花旋覆花素处理48 h,采用MTT法检测细胞增殖,使用流式细胞仪检测细胞凋亡,采用Western bloting法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl2、Caspase3及mTORC1信号通路蛋白mTORC1和70S6K表达。结果5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L大花旋覆花素处理组细胞增殖率分别为(89.56±8.11)%、(66.40±6.61)%和(41.78±5.79)%,均显著低于0μmol/L大花旋覆花素对照组【(100.00±10.01)%,P细胞凋亡率分别为(14.75±1.34)%、(19.11±1.87)%和(27.45±1.99)%,均显著高于对照组【(7.01±0.89)%,P2)、(3.57±0.33)和(3.92±0.47)、(7.33±0.52)和(6.94±0.53),显著高于对照组【分别为(0.98±0.11)和(0.87±0.15),P2表达分别为(4.71±0.52)、(2.36±0.36)和(0.89±0.14),显著低于对照组【(8.05±0.65),P2±0.08)和(0.79±0.08)、(0.63±0.06)和(0.58±0.05)、(0.51±0.05)和(0.43±0.04),显著低于对照组【(0.96±0.11)和(0.99±0.09),P细胞体外增殖,诱导其凋亡,发挥显著的抗肿瘤效应。

关键词： hep g2细胞大花旋覆花素细胞增殖凋亡 mTORC1信号通路

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益艾康含药血清对hep g2细胞脂代谢相关基因的影响

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益艾康含药血清对Hep G2细胞脂代谢相关基因的影响

猫棒束孢对IR-hep g2细胞氧化应激的改善作用及机制

中华中医药学会防治艾滋病分会2018年学术年会

作者：沈俊岭任周新李强余海滨罗珊桑锋岳静宇王宗耀徐立然河南中医药大学第一附属医院河南省病毒性疾病中医药防治重点实验室河南省洛阳正骨医院河南省骨科医院

目的:观察益艾康(YAK)含药血清对利托那韦诱导的体外培养的hep g2细胞脂代谢相关基因的影响。方法:制备益艾康含药血清,观察含药血清作用下hep g2细胞的生长情况,MTT法检测益艾康含药血清和利托那韦作用下的细胞增殖变化;荧光定量PCR方... 详细信息

目的:观察益艾康(YAK)含药血清对利托那韦诱导的体外培养的hep g2细胞脂代谢相关基因的影响。方法:制备益艾康含药血清,观察含药血清作用下hep g2细胞的生长情况,MTT法检测益艾康含药血清和利托那韦作用下的细胞增殖变化;荧光定量PCR方法检测益艾康含药血清对利托那韦刺激后的hep g2细胞株脂代谢相关基因的表达,探讨益艾康对其作用机制。结果:与空白血清组相比,利托那韦组和利托那韦与益艾康各浓度血清共培养组培养24小时和48小时对hep g2细胞活力有明显的抑制作用,培养48小时较24小时细胞活力明显升高。益艾康含药血清能够上调hep g2细胞CYP7A1、LDLR、ApoAII、ApoCII和HL基因表达,下调HMgCoA-R和PPARα基因表达。结论:益艾康可能通过抑制hep g2细胞内源性胆固醇的生成、促进脂肪酸的摄取转运及脂质的清除而发挥降脂作用。

关键词：益艾康含药血清利托那韦 hep g2细胞脂代谢基因表达

来源： cnki会议评论

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西部医学 2023年第2期35卷 172-175,181页

作者：陈静静陈丽霞赵莉莉杨永明杨喜花山西医科大学公共卫生学院山西太原030001 山西医科大学附属肿瘤医院实验动物中心山西太原030013

目的探讨猫棒束孢(IF)对胰岛素抵抗hep g2(IR-hepg2)细胞氧化应激的保护作用及其机制。方法MTT法测定不同浓度IF和胰岛素对hep g2细胞增殖的影响,用含10-8 mol·L^(-1)胰岛素的高糖DMEM培养基诱导hep g2细胞48 h,建立hep g2细胞胰岛素... 详细信息

目的探讨猫棒束孢(IF)对胰岛素抵抗hep g2(IR-hepg2)细胞氧化应激的保护作用及其机制。方法MTT法测定不同浓度IF和胰岛素对hep g2细胞增殖的影响,用含10-8 mol·L^(-1)胰岛素的高糖DMEM培养基诱导hep g2细胞48 h,建立hep g2细胞胰岛素抵抗模型。采用试剂盒测定葡萄糖消耗量、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、胰岛素受体底物1(IRS-1)、磷脂酰肌醇-3-羟基酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)的含量。结果在IF浓度为5μg·mL^(-1)和10μg·mL^(-1)对细胞生长无显著促进作用,故浓度选用于5μg·mL^(-1)和10μg·mL^(-1);胰岛素处理48 h后只有10-8 mol·L^(-1)剂量组对照细胞生长无显著抑制作用,故选用胰岛素浓度为10-8 mol·L^(-1),培养48 h建立胰岛素抵抗模型。与正常组比较,模型组IR-hep g2细胞葡萄糖消耗量显著下降(Phep g2细胞的葡萄糖消耗量显著上升(Phep g2细胞的SOD含量显著下降(Phep g2细胞模型的糖代谢和氧化应激水平,并通过调控IRS-1/PI3K/Akt信号通路起到改善胰岛素抵抗的作用。

关键词：猫棒束孢胰岛素抵抗 hep g2细胞氧化应激胰岛素信号通路

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盐酸川芎嗪对hep g2肝癌细胞诱导分化及相关细胞因子表达的影响

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盐酸川芎嗪对Hep G2肝癌细胞诱导分化及相关细胞因子表达的影响

作者：侯清玉首都师范大学

学位级别：硕士

目的:检测盐酸川芎嗪对hep g2肝癌细胞增殖与分泌甲胎蛋白(AFP),以及细胞TgF-β与VEgF mRNA及蛋白表达影响,探讨盐酸川芎嗪对hep g2肝癌细胞的诱导分化作用。方法:体外培养hep g2肝癌细胞,用不同浓度(0.1、0.2、1、2、10、20、50、100... 详细信息

目的:检测盐酸川芎嗪对hep g2肝癌细胞增殖与分泌甲胎蛋白(AFP),以及细胞TgF-β与VEgF mRNA及蛋白表达影响,探讨盐酸川芎嗪对hep g2肝癌细胞的诱导分化作用。方法:体外培养hep g2肝癌细胞,用不同浓度(0.1、0.2、1、2、10、20、50、100和200μg/ml)的盐酸川芎嗪处理细胞,MTT法检测细胞增殖情况;相差显微镜观察细胞形态学变化;放射性免疫法检测细胞培养液上清中甲胎蛋白的含量;Realtime-PCR检测细胞内TgF-β与VEgF的mRNA表达水平,Western Blot检测细胞TgF-β与VEgF蛋白的表达水平。结果: 1.与对照组相比,一定浓度的盐酸川芎嗪对hep g2肝癌细胞存在增殖抑制作用,且增殖抑制作用呈浓度相关性,作回归曲线,得出半数抑制浓度(IC50)为167.18μg/ml。 2.盐酸川芎嗪对hep g2肝癌细胞形态存在一定影响,1000μg/ml盐酸川芎嗪对hep g2肝癌细胞具有明显的细胞毒性,于培养后48小时即可看到明显的细胞死亡现象。 3.盐酸川芎嗪可抑制hep g2肝癌细胞AFP的表达,在10μg/ml时即具有明显抑制作用,与对照组相比差异显著(P＜0.05)。 4.盐酸川芎嗪对hep g2肝癌细胞中TgF-β与VEgF的基因转录均有一定抑制作用。 5.盐酸川芎嗪对hep g2肝癌细胞中TgF-β与VEgF的蛋白表达均有一定抑制作用。结论:盐酸川芎嗪在一定的较低浓度范围内对hep g2肝癌细胞的增殖及其特异性高表达的AFP均有显著抑制作用,并在转录和蛋白水平抑制TgF-β和VEgF表达,较高浓度时显著抑制细胞增殖并导致细胞死亡,是一种潜在的细胞毒性药物及肿瘤细胞诱导分化剂。

关键词：盐酸川芎嗪 hep g2细胞诱导分化 MTT 甲胎蛋白 TgF-β VEgF

hep g2、Bel-7402细胞裸鼠皮下移植性肝癌模型的实验研究

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Hep G2、Bel-7402细胞裸鼠皮下移植性肝癌模型的实验研究

作者：牛凯山西医科大学

学位级别：硕士

背景肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，其中肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）是肝癌中最常见的类型，占到病例总数的70%~80%。为了深入研究肝癌的发病机理，探索新的治疗方法，建立科学的肝癌动物模型是实验的关键。 ... 详细信息

背景肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，其中肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）是肝癌中最常见的类型，占到病例总数的70%~80%。为了深入研究肝癌的发病机理，探索新的治疗方法，建立科学的肝癌动物模型是实验的关键。本课题拟通过比较hep g2、Bel-7402两种人肝癌细胞在不同条件下行裸鼠皮下移植时成瘤率的不同，以及两种细胞成瘤后肿瘤形态、肿瘤体积变化规律及AFP表达方面的差异，从中选择一种合适的肿瘤细胞，并探索其最佳的成瘤条件，为进一步实验提供数据。目的 1．比较hep g2、Bel-7402两种人肝癌细胞在不同条件下行裸鼠皮下移植时成瘤率与成瘤潜伏期的差别。 2．比较hep g2、Bel-7402两种细胞荷瘤鼠皮下肿瘤生长速度的差别，并归纳其肿瘤增长规律。 3.比较hep g2、Bel-7402两种细胞荷瘤鼠肿瘤大体形态学差异，检测血清AFP浓度并做肿瘤组织的病理、免疫组化分析。方法 1．将90只BALB/c裸鼠按照肿瘤细胞悬液的浓度及鼠龄随机平均分成9组，其中8组分别皮下注射hep g2细胞和Bel-7402细胞，第9组为对照组。比较hep g2、Bel-7402这两种人肝癌细胞在不同条件下成瘤率与成瘤潜伏期的差别。 *** g2、Bel-7402两种细胞裸鼠皮下成瘤后每周用游标卡尺测量瘤体大小。肿瘤体积的计算公式V=π ab2/6（V：体积，a：肿瘤长径，b：肿瘤短径）。 3．裸鼠成瘤后，利用化学发光法检测裸鼠血清AFP浓度，观察hep g2、Bel-7402两种细胞形成的裸鼠皮下肿瘤大体形态的差异，将切下的肿瘤组织行免疫组化法检测AFP及hep Par1表达。结果 1.当hep g2细胞悬液浓度达到5.0×107/ml，4~8周龄和8~12周龄的裸鼠均能得到很高的成瘤率（均为100%）。而对于Bel-7402细胞，细胞悬液浓度必须达到5.0×107/ml，且仅在4~8周龄的裸鼠皮下注射才能得到较高的成瘤率（80%）。 2. hep g2、Bel-7402两种细胞在同等条件下裸鼠个体间的出瘤时间并不恒定，hep g2细胞平均成瘤时间为19.4±5.2天;而Bel-7402细胞平均成瘤时间为34.3±15.7天。 3. hep g2细胞裸鼠皮下肿瘤的典型表现为多发的节结样突起，肿瘤组织内部由多个白色的节结样团块组成。Bel-7402细胞皮下肿瘤的表面则为较平滑，肿瘤组织内部周边较韧，瘤体中心则主要是豆腐渣样坏死组织。 4.两种细胞荷瘤鼠成瘤后第4周查血清AFP均阴性。免疫组化检测hep g2细胞肿瘤hepPar1表达呈阳性、Bel-7402细胞肿瘤hep Par1表达呈阴性;而两种细胞AFP表达均为阴性。结论 1．建立裸鼠肝癌动物模型时，hep g2细胞较Bel-7402细胞更易裸鼠皮下成瘤。 *** g2细胞较Bel-7402细胞成瘤潜伏期更短，并且成瘤后肿瘤增长速度更快。 *** g2细胞、Bel-7402两种细胞AFP表达均呈阴性。

关键词：肝细胞癌动物模型甲胎蛋白 hep g2细胞 Bel-7402细胞

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南葶苈子与白芥子寒热药性的细胞学方法评价

中华中医药杂志 2021年第5期36卷 2949-2952页

作者：赵文杰范铭沁姚方圆孙艳妮刘建利张宁西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室西北大学生命科学学院西安710069

目的:用细胞学方法评价南葶苈子与白芥子的寒热药性。方法:用噻唑蓝(MTT)比色法考察南葶苈子与白芥子对hepg2细胞、SMMC7721细胞、HCT116细胞体外增殖的影响,倒置显微镜观察南葶苈子与白芥子对细胞形态的影响,台盼蓝染色法分析南葶苈子... 详细信息

目的:用细胞学方法评价南葶苈子与白芥子的寒热药性。方法:用噻唑蓝(MTT)比色法考察南葶苈子与白芥子对hepg2细胞、SMMC7721细胞、HCT116细胞体外增殖的影响,倒置显微镜观察南葶苈子与白芥子对细胞形态的影响,台盼蓝染色法分析南葶苈子与白芥子的细胞毒作用。结果:南葶苈子在2~800μg/mL浓度范围内对3种细胞的生长增殖表现出抑制作用,随着浓度的增大,抑制率增大,判定为寒性;白芥子在2~800μg/mL浓度范围内对3种细胞的生长增殖表现出低浓度促进、高浓度抑制作用,判定为热性。南葶苈子能使细胞密度减小,固缩变圆;白芥子低浓度下使细胞密度增加,细胞结构致密,生长旺盛,高浓度下使细胞密度降低,固缩变圆。南葶苈子与白芥子对于这3种细胞没有细胞毒作用。结论:南葶苈子和白芥子寒热药性细胞学方法评价结果与文献记载一致;细胞学方法可用于南葶苈子与白芥子寒热药性研究。

关键词：南葶苈子白芥子 MTT法 hep g2细胞 SMMC7721细胞 HCT116细胞台盼蓝染色寒热药性

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姜黄素对人肝癌hepg2细胞Notch1和NF-κB表达的影响

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现代预防医学 2017年第4期44卷 714-716+720页

作者：杨晓梅龚明玉张力承德医学院附属医院肿瘤放化疗科承德医学院

目的研究姜黄素作用于人肝癌hepg2细胞后Notch1、NF-κB的表达,探讨姜黄素抑制肝癌细胞增殖的机制。方法将肝癌细胞株hepg2培养至对数生长期,分组加入不同浓度(20、40、80μmol/L)的姜黄素干预后继续培养24 h,并设立空白对照组。用MTT... 详细信息

目的研究姜黄素作用于人肝癌hepg2细胞后Notch1、NF-κB的表达,探讨姜黄素抑制肝癌细胞增殖的机制。方法将肝癌细胞株hepg2培养至对数生长期,分组加入不同浓度(20、40、80μmol/L)的姜黄素干预后继续培养24 h,并设立空白对照组。用MTT法观察姜黄素对体外培养的肝癌细胞生长的抑制作用;q RT-PCR法检测各组Notch1m RNA表达量,Western blot法检测各组Notch1、NF-κB蛋白的表达水平。结果 MTT比色法测定显示,姜黄素对肝癌细胞hepg2的抑制作用呈剂量依赖性,对照组及不同浓度姜黄素作用组的抑制率分别为0%,25.36%±2.54%,44.64%±2.98%,74.94%±3.62%。q RT-PCR及Western blot法提示,与对照组相比,姜黄素作用组的Notch1及NF-κB的表达量均下降且呈剂量依赖性。结论姜黄素抑制肝癌细胞hepg2的增殖,其机制可能与其下调Notch1、NF-κB的表达有关。

关键词：姜黄素 hep g2细胞 Notch1 NF-κB