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消癌平对肝癌组织“干性”特征的调控作用及相关通路的初步研究

消癌平对肝癌组织“干性”特征的调控作用及相关通路的初步研究

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作者：占静华中科技大学

学位级别：硕士

背景与目的:肝癌是常见的消化道恶性肿瘤,肝癌的死亡率居每年世界肿瘤相关死亡原因的第三位。研究表明,肝癌的增殖、侵袭、转移、耐药和复发都与肝癌干细胞相关。因此调控肿瘤干细胞及干性特征成为目前肿瘤研究的热点之一。目前研究表... 详细信息

背景与目的:肝癌是常见的消化道恶性肿瘤,肝癌的死亡率居每年世界肿瘤相关死亡原因的第三位。研究表明,肝癌的增殖、侵袭、转移、耐药和复发都与肝癌干细胞相关。因此调控肿瘤干细胞及干性特征成为目前肿瘤研究的热点之一。目前研究表明化疗及靶向治疗可以导致肿瘤干细胞或肿瘤干性发生改变,但中药在肝癌中的干性调控机制仍尚不清楚。中药消癌平在临床上已经处于经验用药阶段,为进一步明确消癌平是否有效,本课题拟通过体内实验观察消癌平对肝癌生长是否有抑制作用以及肝癌干性标记物是否有变化,并进一步探索消癌平对于肝癌干性相关通路调节因子的调控机制,以期为消癌平治疗肝癌提供理论依据。方法:1.构建Hep3B的肝癌裸鼠皮下移植瘤模型。在4～5周龄的BALB/C裸鼠右侧背部近腋窝处皮下注射状态良好浓度为1×10个Hep3B细胞,将些小鼠随机分成2组,每组6只,分别通过灌胃的方式给予消癌平和生理盐水。2.观察不同组别移植瘤大小和小鼠体重变化。每隔2天对所有小鼠进行体重测量、用游标卡尺进行肿瘤体积测量以及绘制生长和体重变化曲线。3.m RNA水平检测干性标记物和干性通路。给药2周后收获肿瘤组织,称重,用Trizol法提取m RNA,用q PCR检测肿瘤干性标记物Ep CAM、CD13、CD90、ALDH1、CD44、CD45等和全能因子Sox2、Nanog、Oct4相关基因的变化。4.蛋白水平检测干性标记物。将给与2周后收获的肿瘤组织用BCA法提取蛋白质,用Western Blot检测肿瘤干性标记物Ep CAM、CD13、CD90、ALDH1、CD44、CD45等和全能因子Sox2、Nanog、Oct4的表达情况。5.关键信号通路的变化。将肿瘤组织提取m RNA和蛋白后,检测Notch信号通路、Wnt/β-catenin通路、Hedgehog通路和Hippo通路的m RNA和蛋白表达情况。使用SPSS18.0对所有数据进行统计学分析。结果:1.裸鼠皮下移植瘤模型构建成功。2.消癌平组裸鼠的肿瘤体积明显小于对照组(P<0.05),消癌平组裸鼠重量与对照组相比无明显差异。最终所剥离的肿瘤,消癌平组均小于对照组(1.54g±0.29g/1.15g±0.31g)(P=0.05),差异有明显统计学意义。3.消癌平对干性标记物及全能因子的在m RNA水平影响不尽相同。消癌平下调Ep CAM、CD24、CD47、Sox2、Oct4、SALL4的表达,上调CD13和ALDH1的表达。4.消癌平对干性标记物及全能因子在蛋白水平结果与q PCR检查结果相一致。消癌平上调ALDH1A1,但下调Ep CAM、SOX2和Oct4。5.消癌平对干性信号通路的影响:无论是m RNA和还是蛋白水平,消癌平抑制了Hippo信号通路、Wnt信号通路和Hedgehog通路。结论:1.消癌平体内实验有抑制肿瘤效果。2.消癌平对干性标记物主要发挥抑制效应。3.消癌平可能通过Hippo信号通路、Wnt信号通路和Hedgehog通路介导的肝癌干性发挥其抗癌作用。

关键词：消癌平肝癌 Wnt Hippo Hedehog

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