检索结果-南通市图书馆

作者：黄光元海南大学

学位级别：硕士

巴西橡胶树是中国海南省天然橡胶出产的主要热带经济作物之一,其韧皮部的乳管具有制备和贮藏胶乳的功用,次生乳管数量直接影响胶乳的产出。茉莉酸信号通路一直被证实与巴西橡胶树的乳管细胞的分化水平相关,在橡胶树JA通路中,重要激活转... 详细信息

巴西橡胶树是中国海南省天然橡胶出产的主要热带经济作物之一,其韧皮部的乳管具有制备和贮藏胶乳的功用,次生乳管数量直接影响胶乳的产出。茉莉酸信号通路一直被证实与巴西橡胶树的乳管细胞的分化水平相关,在橡胶树JA通路中,重要激活转录因子MYC通过与JAZ蛋白结合来抑制下游相关基因的表达。本实验室在前期的工作中已经成功克隆了3个橡胶树JA通路MYC转录因子,分别为HbMYC2、HbMYC3和HbMYC4。通过Y1H初步鉴定hbmycs对G-box顺式元件具有偏好。此外,本课题组利用自主开发的生物信息学软件在橡胶树全基因组水平上筛选到40个启动子上含G-box的产排胶相关基因,并通过H1Y、荧光素酶报告基因等技术初步证明HbMYC2、HbMYC3和HbMYC4与其中2个基因REF与HMGR1互作。在本篇本论文中,我们对3个MYC转录因子进行了研究,主要开展的研究和结果如下:(1)为探究MeJA处理橡胶苗对hbmycs表达量的影响,我们利用RT-qPCR技术对不同浓度MeJA处理后的橡胶苗叶/茎/根进行了差异性表达检测,结果显示:橡胶苗叶/茎/根经10/50/100μM MeJA处理后,橡胶苗叶/茎/根hbmycs表达量出现先上升后下降的趋势。(2)为研究在四个生长发育时期叶片以及胶乳中hbmycs的表达差异,本文中使用了RT-qPCR技术开展了差异性表达检测,结果显示为:在叶片生长发育过程中,HbMYC2表达量呈先下降后提高的趋势,HbMYC3表达量呈一直降低的趋势,HbMYC4表达量则呈先降低后提高再降低的趋势,胶乳中HbMYC2表达量>HbMYC4表达量>HbMYC3表达量。(3)为探究四个发育时期叶片及胶乳中hbmycs蛋白质的表达差异,我们利用Western blot技术进行了差异性表达检测,结果表明:在叶片发育过程中HbMYC2蛋白表达量呈现先下降再上升的趋势,HbMYC3蛋白表达量呈现一直下降的趋势,HbMYC4蛋白表达量呈现先上升后下降再上升的趋势,胶乳中HbMYC3蛋白质表达量>HbMYC2蛋白质表达量>HbMYC4蛋白质表达量。(4)为进一步证明hbmycs与HbREF、HbHMGR1之间的互作是在G-box区域进行的,我们设计了启动子上含有G-box元件的短序列作为生物素标记探针,并设计突变G-box元件的对应短序列作为生物素标记突变探针,通过凝胶阻滞试验进行了检验,结果表明:HbMYC3、HbMYC4均可以分别与HbREF与HbHMGR1互作,且其互作是在G-box区域进行的。(5)为进一步对hbmycs基因的功能进行鉴定,我们在橡胶类植物橡胶草中进行了表型观察实验,结果表明:转基因hbmycs橡胶草相较于野生型橡胶草叶片长度变长、叶片宽度变宽、叶片数目变多。综上所述,我们得出结论:巴西橡胶树四个发育时期叶片及胶乳中hbmycs的表达量和蛋白质表达量都有差异;MeJA对hbmycs的表达量有影响;HbMYC3和HbMYC4转录因子可以与产胶相关基因HbREF、HbHMGR1互作;转基因hbmycs橡胶草相较于野生型橡胶草叶片面积更大且叶片数目更多,这些都是植物抗逆相关的表型,得出hbmycs与植物抗逆相关,这些结果有助于我们从分子水平上理解JA信号途径与产排胶之间的关系,为提高胶乳产量提供理论依据。

关键词：橡胶树 JA信号通路 hbmycs HbREF HbHMGR1

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巴西橡胶树产胶基因HbREF、HbHMGR1与MYCs转录因子互作

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分子植物育种 2020年第13期18卷 4253-4258页

作者：党丹翟金玲海南大学热带农林学院海口570228

天然橡胶主要来自巴西橡胶树,巴西橡胶树是海南省主要的经济作物之一。胶乳在乳管中合成储存,乳管数量影响胶乳产量。乳管分化一直被证明与茉莉酸信号途径相关,本实验室已在前期研究中鉴定了茉莉酸信号途径中的关键转录因子MYCs与G-box... 详细信息

天然橡胶主要来自巴西橡胶树,巴西橡胶树是海南省主要的经济作物之一。胶乳在乳管中合成储存,乳管数量影响胶乳产量。乳管分化一直被证明与茉莉酸信号途径相关,本实验室已在前期研究中鉴定了茉莉酸信号途径中的关键转录因子MYCs与G-box顺式作用元件的互作,为了验证hbmycs是否与含G-box(CACGTG)顺式作用元件的产胶相关基因互作,本研究克隆了两个产胶相关基因HbREF与HbHMGR1的全长启动子序列,并设计了相应的单荧光素酶报告基因实验,经生物信息学分析发现,2个基因的启动子上均含G-box(CACGTG)顺式作用元件,单荧光素酶报告基因实验的结果表明,HbREF和HbHMGR1分别与Hb MYC2、Hb MYC3、Hb MYC4互作,且受hbmycs转录因子的正向调控,说明茉莉酸信号通路中的转录因子可以调控橡胶产排胶基因的表达,对阐明橡胶树产排胶机理具有重要意义。

关键词：巴西橡胶树(Hevea brasiliensis) JA信号通路 hbmycs HbREF HbHMGR1

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橡胶树茉莉酸信号途径相关基因表达与橡胶产量的相关性

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广西植物 2019年第5期39卷 641-649页

作者：杨署光赵悦陈月异李言张世鑫田维敏中国热带农业科学院橡胶研究所农业农村部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地-海南省热带作物栽培生理学重点实验室海南儋州571737 中国农业大学农学院北京100193

割胶促进橡胶树合成天然橡胶与激活乳管细胞的茉莉酸信号途径密切相关,但茉莉酸信号途径关键环节的基因表达水平与干胶产量的相关性尚不清楚。为了找到与产量相关的分子标记,该研究采用qPCR技术,分析了割胶条件下茉莉酸信号途径关键环节... 详细信息

割胶促进橡胶树合成天然橡胶与激活乳管细胞的茉莉酸信号途径密切相关,但茉莉酸信号途径关键环节的基因表达水平与干胶产量的相关性尚不清楚。为了找到与产量相关的分子标记,该研究采用qPCR技术,分析了割胶条件下茉莉酸信号途径关键环节的9个相关基因在5个橡胶树魏克汉种质和5个1981’IRRDB种质乳管细胞中的表达。结果表明:大多魏克汉种质的株次干胶产量显著高于1981’IRRDB种质。在9个基因中,除了HbMYC4和HbMYC5,其余7个基因在大多橡胶树魏克汉种质中的表达量均显著高于1981’IRRDB种质,尤其是HbMYC3基因表达差异性好,与干胶产量相关性高,有望作为橡胶树产量育种的一个分子标记。这对育种周期长的橡胶树产量育种具有实际应用价值。

关键词：巴西橡胶树割胶橡胶生物合成茉莉酸信号途径 HbCOI1 HbJAZs hbmycs 基因表达

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巴西橡胶树MYC转录因子参与产排胶调控机理研究

巴西橡胶树MYC转录因子参与产排胶调控机理研究

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作者：党丹海南大学

学位级别：硕士

天然橡胶主要产自巴西橡胶树,巴西橡胶树是海南省主要的经济作物之一。胶乳在乳管中合成储存,次生乳管的数量影响胶乳产量。乳管分化一直被证明与茉莉酸信号途径相关,在该途径中,JAZ蛋白通过与MYC转录因子结合来抑制下游基因的表达,MYC... 详细信息

天然橡胶主要产自巴西橡胶树,巴西橡胶树是海南省主要的经济作物之一。胶乳在乳管中合成储存,次生乳管的数量影响胶乳产量。乳管分化一直被证明与茉莉酸信号途径相关,在该途径中,JAZ蛋白通过与MYC转录因子结合来抑制下游基因的表达,MYC是b HLH类的转录因子,可与G-box顺式作用元件互作。本课题组已在前期研究中证明HbJAZ1与HbMYC3互作,并初步鉴定了MYCs与G-box顺式作用元件的互作。为了进一步筛选鉴定橡胶树JA信号通路中hbmycs转录因子调控的下游与产排胶相关的靶基因,本实验室通过利用自主开发的生物信息学软件,在橡胶树全基因组水平上筛选启动子上含有G-box元件的产排胶相关基因,最终筛选到40个符合条件的基因。在本篇论文中,我们对其中两个基因REF与HMGR1进行了研究,主要研究内容与结果如下:(1)为进一步验证用于实验的HbREF与HbHMGR1的启动子序列上含G-box(CACGTG)顺式作用元件,我们利用在线启动子分析软件Plant CARE与PLACE对两个目的基因的启动子序列进行生物信息学分析,结果表明,两基因的启动子上均含有G-box顺式作用元件。(2)以橡胶树全基因组DNA为模板,克隆了产胶相关基因HbREF与HbHMGR1的全长启动子序列,大小分别为:805bp与589bp。(3)为验证hbmycs是否可以与含G-box顺式作用元件的HbREF与HbHMGR1互作,我们利用酵母单杂交试验进行了检验,结果表明:HbMYC2、HbMYC3、HbMYC4均可以分别与HbREF与HbHMGR1互作。(4)为进一步验证hbmycs与HbREF、HbHMGR1之间的互作,我们利用单荧光素酶报告基因试验进行了检验,结果表明:HbMYC2、HbMYC3、HbMYC4均可以分别与HbREF与HbHMGR1互作,且与HbREF的互作更为强烈。(5)为进一步验证hbmycs与HbREF、HbHMGR1之间的互作,我们利用双荧光素酶报告基因试验进行了检验,结果表明:HbMYC3、HbMYC4均可以分别与HbREF与HbHMGR1互作,且与HbREF的互作更为强烈。(6)为探究橡胶树四个不同时期橡胶叶片中hbmycs的表达差异,我们利用RT-PCR技术进行了差异性表达检测,结果表明:从第一到第三时期的MYCs表达量呈现出一直下降的趋势,而在第四时期时,hbmycs的表达量又有了一个回升。(7)我们想进一步探究Me JA处理四时期橡胶叶片后对MYCs表达量的影响,因此,我们利用RT-PCR技术对Me JA处理后不同时段的四时期叶片进行了差异性表达检测,结果表明:一期叶片经100μM Me JA处理后,MYCs表达量先上升后下降,二期、三期橡胶叶片经100μM Me JA处理后,MYCs表达量先下降后上升,四期橡胶叶片经100μM的Me JA处理后,MYCs表达量趋势不规律。(8)为进一步对hbmycs基因的功能进行鉴定,我们在拟南芥中进行了表型观察实验,结果表明:myc2/3/4三突变体萌发率明显降低、根长明显缩短、叶片面积减小、植株体型变小,myc2与myc3突变体均有根长加长、叶片颜色变深、表皮毛增加、叶面积变小、早花、株高较高的表型,用HbMYC2互补myc2突变体后,对应表型消失,HbMYC3过表达后,出现相反表型。(9)为进一步证明hbmycs与HbREF、HbHMGR1之间的互作是在G-box区域进行的,我们设计了启动子上含有G-box元件的短序列,以及突变掉G-box元件的对应短序列,并将这些短序列分别构建在Ab Ai载体上,用于后续单杂实验。(10)为了进一步证明hbmycs转录因子是通过C端与HbREF、HbHMGR1互作的,我们构建了AD-MYCs C端,AD-MYCs D端载体,用于后续单杂实验。(11)构建了28a-MYCs原核表达载体,为后续EMSA打下了基础。综上所述,我们得出结论:hbmycs转录因子可以与产胶相关基因HbREF、HbHMGR1互作;Me JA对MYCs的表达量有影响;HbMYC2可以互补拟南芥突变体的表型,与At MYC2的同源性较好;此外,由于根长偏长、早花、表皮毛增加都属于植物抗逆的表型,因此推测,HbMYC2、HbMYC3与植物抗逆相关,这些结论都为橡胶树产排胶机制与茉莉酸信号通路之间的联系提供了更多理论依据。

关键词：巴西橡胶树 JA信号通路 hbmycs HbREF HbHMGR1

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