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血清lncRNA hulc、lncRNA HOTAIR水平与前列腺癌肿瘤血管生成及根治术后短期预后的关联性探讨

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国际泌尿系统杂志 2024年第3期44卷 431-436页

作者：刘蜜李宗清湖北省恩施土家族苗族自治州中心医院西医部临床检验中心恩施445000

目的:探讨血清长链非编码RNA(lncRNA)hulc、lncRNA HOTAIR水平与前列腺癌肿瘤血管生成及根治术后短期预后的关联性。方法:选取本院2019年5月至2021年1月接受的98例前列腺癌患者作为实验组,并选取同期97例良性前列腺增生患者作为对照组,... 详细信息

目的:探讨血清长链非编码RNA(lncRNA)hulc、lncRNA HOTAIR水平与前列腺癌肿瘤血管生成及根治术后短期预后的关联性。方法:选取本院2019年5月至2021年1月接受的98例前列腺癌患者作为实验组,并选取同期97例良性前列腺增生患者作为对照组,比较两组患者的血清lncRNA hulc、lncRNA HOTAIR水平及临床资料[年龄、基础病史、前列腺体积、微血管密度(MVD)等];对比实验组患者不同病理特征的血清lncRNA hulc、lncRNA HOTAIR水平;对实验组患者展开为期1年的随访,并按照随访结果将患者分为肿瘤无进展组(70例)和进展组(28例),对比两组患者的临床资料,采用多元logistic回归分析前列腺癌患者根治术后短期进展的独立危险影响因素。结果:实验组的血清lncRNA hulc和lncRNA HOTAIR水平均高于对照组(均Phulc、lncRNA HOTAIR水平均高于TNM分期Ⅰ期、低分化程度、不存在淋巴结转移以及低MVD患者(均Phulc、lncRNA HOTAIR水平更高(均Phulc和lncRNA HOTAIR水平均是引起前列腺癌患者根治术后短期进展的独立危险因素(均Phulc、lncRNA HOTAIR与前列腺癌肿瘤血管生成相关,同时是影响患者根治术后短期预后的独立危险因素。

关键词：前列腺肿瘤 lncRNA hulc lncRNA HOTAIR 血管生成

LncRNA hulc影响PTEN甲基化及组蛋白乙酰化对胶质母细胞瘤增殖和侵袭的作用

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LncRNA HULC影响PTEN甲基化及组蛋白乙酰化对胶质母细胞瘤增殖和...

作者：王一冉安徽医科大学

学位级别：硕士

背景和目的:胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)是最常见的中枢神经系统原发性实体瘤,其WHO分级较高,难以彻底治愈,严重影响临床预后,5年存活率极低。GBM的治疗手段包括外科切除、放疗、化疗,近年分子靶向治疗也广泛应用于临床... 详细信息

背景和目的:胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)是最常见的中枢神经系统原发性实体瘤,其WHO分级较高,难以彻底治愈,严重影响临床预后,5年存活率极低。GBM的治疗手段包括外科切除、放疗、化疗,近年分子靶向治疗也广泛应用于临床,但治疗仍未达到满意的预期。长链非编码RNA(long noncoding RNA,Lnc RNA)的功能复杂多样,在肿瘤发生与进展中的作用也不尽相同。随着研究不断的更新,Lnc RNA肝癌高表达转录本(highly up-regluated in 1iver cancer,hulc)在肝癌、GBM、胰腺癌等肿瘤中具有促癌作用,但具体的调控机制仍需进一步探索。Lnc RNA hulc已被证实在GBM中可以通过PI3K/AKT信号通路发挥促癌作用,而人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)在该通路中发挥重要作用。PTEN的失活可能导致正常细胞发生恶变。相反,PTEN基因的激活可以抑制PI3K/AKT信号通路的促癌作用,该通路的激活可以促进肿瘤的增殖和侵袭活性。基因表达的调控不仅可以通过改变脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid,DNA)的序列,也可以在表观遗传学、转录、翻译等多个层面进行调控。DNA甲基化、组蛋白乙酰化,都可以在一定程度上影响基因在m RNA水平上的表达情况,相关药物在临床上已得到应用,但其在实体肿瘤当中是否能发挥抗肿瘤疗效仍有争议。PTEN基因的DNA甲基化可能降低PTEN的表达,对PI3K/AKT信号通路的抑制减弱,增强肿瘤增殖和侵袭。本研究通过慢病毒转染hulc的GBM细胞株U251,探讨Lnc RNA hulc影响PTEN启动子甲基化和组蛋白乙酰化水平,促进GBM增殖和侵袭的作用。方法:***细胞株U251稳定转染hulc,分为过表达组、vec空白对照组;2.实时荧光定量聚合酶链式反应(Quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测各组细胞PTEN、hulc的相对表达量;3.亚硫酸氢盐处理后测序(Bisulfite Sequencing PCR,BSP)技术检测各组细胞PTEN启动子甲基化水平;4.蛋白免疫印迹(Western Blotting,WB)检测各组细胞PTEN蛋白、组蛋白H3/H4、乙酰化组蛋白H3/H4的表达水平;5.克隆形成实验、CCK8实验、划痕愈合实验和transwell实验分别检测各组细胞增殖、迁移和侵袭能力。结果:1.q RT-PCR结果表明U251细胞株中Lnc RNA hulc稳定转染后可以显著地提高Lnc RNA hulc的表达水平,较vec空白对照组有明显差异,而Lnc RNA hulc高表达时,PTEN的表达较对照组显著降低,证明了Lnc RNA hulc转染效率可靠,并可在m RNA水平上降低PTEN的表达;***技术结果提示Lnc RNA hulc组PTEN启动子甲基化水平较对照组低,表明PTEN在m RNA水平上的表达差异可能与其启动子甲基化水平有关,Lnc RNA hulc可降低PTEN启动子甲基化水平;***结果表明Lnc RNA hulc组中PTEN的表达显著低于对照组,提示Lnc RNA hulc可在蛋白水平上降低PTEN的表达,Lnc RNA hulc组中组蛋白H3/H4与对照组无差异,而乙酰化组蛋白H3/H4的表达水平较对照组降低;4.克隆形成实验、CCK8实验、划痕愈合实验、transwell实验结果提示Lnc RNA hulc组细胞的增殖、迁移、侵袭能力较vec组显著提高,分别验证了Lnc RNA hulc可以促进GBM的增殖、迁移、侵袭。结论:Lnc RNA hulc降低PTEN启动子甲基化和组蛋白乙酰化水平,抑制PTEN表达,促进GBM的增殖和侵袭。

关键词：胶质母细胞瘤 hulc PTEN 甲基化乙酰化

LncRNA hulc通过miR-3200-5p/ATF4通路调节肝癌细胞铁死亡的机制研究

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LncRNA HULC通过miR-3200-5p/ATF4通路调节肝癌细胞铁死亡的机制...

作者：关璐璐河南科技大学

学位级别：硕士

实验目的:Lnc RNA hulc通过调控miR-3200-5p/ATF4诱导肝癌细胞铁死亡相关的细胞死亡分子机制。实验方法:hulc siRNA转染于肝癌细胞系BEL-7402和SMMC-7721细胞,qRT-PCR检测hulc(肝癌高表达转录本)表达并验证hulc敲低水平。MTT实验检测阴... 详细信息

实验目的:Lnc RNA hulc通过调控miR-3200-5p/ATF4诱导肝癌细胞铁死亡相关的细胞死亡分子机制。实验方法:hulc siRNA转染于肝癌细胞系BEL-7402和SMMC-7721细胞,qRT-PCR检测hulc(肝癌高表达转录本)表达并验证hulc敲低水平。MTT实验检测阴性对照组和敲低组细胞存活率。Western blot实验来检测caspase-3(半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3;),Bcl-2(白血病-2基因)和MMP-2(基质金属蛋白酶2)的表达水平。转染hulc siRNA后,细胞克隆形成实验检测si-NC组与si-hulc组细胞的克隆形成能力;细胞划痕实验用来检测si-NC组与si-hulc组在0、24、48h细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞不同时期的凋亡水平;铁死亡相关指标MDA(丙二醛)实验检测阴性对照组与敲低组脂质过氧化物分解产物的含量;GSH(谷胱甘肽)实验检测抗氧化剂的水平;ROS(活性氧)实验检测细胞的活性氧水平。验证hulc与miR-3200-5p存在ce RNA调控模式。通过加入mimic/inhibitor miR-3200-5p以及ATF4 siRNA,qRT-PCR验证基因水平上hulc,miR-3200-5p与ATF4的基因表达水平及其之间存在的靶向调控关系;Western blot实验在蛋白水平上验证hulc与miR-3200-5p及ATF4的相关性调控;铁死亡相关指标MDA实验检测丙二醛的含量;GSH实验检测细胞加入mimic/inhibitor miR-3200-5p后谷胱甘肽的含量;ROS试验检测活性氧水平。铁的含量是铁死亡的关键标志,用铁检测试剂盒检测各分组中Fe的含量。实验结果:(1)将si-hulc转染与BEL-7402和SMMC-7721细胞中将hulc的表达敲低,与阴性对照相比72h敲低hulc组细胞存活率明显下降,Phulc组细胞克隆形成能力较阴性对照组降低;划痕实验结果表明敲低hulc后与对照组相比分别在24h,48h迁移率降低,Phulc相比敲低hulc后其凋亡水平增加。Western blot结果显示Bcl-2表达降低,MMP-2表达水平降低,Caspase-3表达升高,以上均与阴性对照相比Phulc后,在基因水平miR-3200-5p的表达水平增高,Phulc的表达水平下降与阴性对照相比Phulc后与阴性对照相比二价铁的表达含量增高,当si-hulc与inhibitor共转,可以逆转敲低hulc影响的Fe升高,Phulc通过与miR-3200-5p存在海绵样结构ce RNA发挥功能,且调控miR-3200-5p/ATF4促进肝癌细胞铁死亡相关的细胞死亡。

关键词：肝细胞癌铁死亡 hulc miR-3200-5p ATF4

长链非编码RNA hulc通过下调miR-29的表达促进肝细胞癌生长的机制

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中华肿瘤杂志 2019年第9期41卷 659-666页

作者：朱李茹封建立刘晓吉王军梅湖北文理学院附属医院襄阳市中心医院医学检验部 441021 解放军324医院泌尿科重庆400020 湖北襄阳市谷城县中医院 441700

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)hulc通过下调微小RNA-29(miR-29)的表达促进肝细胞癌(HCC)细胞增殖的作用及分子机制。方法运用实时荧光定量PCR法检测HCC组织和细胞中hulc和miR-29的表达水平,并进行相关性分析。HCC细胞转染hulc过表达质... 详细信息

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)hulc通过下调微小RNA-29(miR-29)的表达促进肝细胞癌(HCC)细胞增殖的作用及分子机制。方法运用实时荧光定量PCR法检测HCC组织和细胞中hulc和miR-29的表达水平,并进行相关性分析。HCC细胞转染hulc过表达质粒或以小干扰RNA(siRNA)敲低hulc的表达,以实时荧光定量PCR检测miR-29和靶基因SET结构域分支1(SETDB1)的表达水平。通过生物信息学预测hulc序列上存在的miR-29结合位点,构建报告基因质粒与miR-29模拟物、miR-29抑制物共转染HCC细胞,通过双荧光素酶报告基因实验验证hulc靶向调控miR-29的分子机制。以细胞计数盒8(CCK-8)法检测miR-29对hulc的促HCC细胞增殖作用的影响。以实时荧光定量PCR法检测Ki-67的表达。建立Hep3B细胞移植瘤模型,瘤内注射miR-29模拟物、miR-29抑制物、miR-29阴性对照,观察肿瘤体积。采用免疫组化法检测小鼠肿瘤组织中肿瘤增殖抗原Ki-67的表达。结果与癌旁组织和正常肝细胞比较,hulc在HCC组织和HCC细胞中均呈高表达(Phulc和miR-29在HCC组织(r=-0.754,Phulc组Huh7细胞中miR-29表达明显降低,而miR-29靶基因SETDB1 mRNA的表达升高(Phulc组Hep3B细胞中miR-29表达明显升高,而miR-29靶基因SETDB1 mRNA的表达降低(Phulc-WT质粒组但不能抑制转染突变(psi-hulc-Mut)组Hep3B细胞的荧光素酶活性,而miR-29抑制物可拮抗miR-29模拟物对psi-hulc-WT荧光素酶活性的抑制作用(Phulc过表达组Huh7细胞的增殖率分别为(43.87±3.82)%、(83.45±7.46)%和(123.34±8.67)%,与对照组[分别为(13.45±1.77)%、(23.54±1.37)%和(38.21±2.09)%]比较,差异有统计学意义(Phulc通过分子吸附miR-29、并下调miR-29的表达促进HCC细胞增殖。hulc下调miR-29表达可能是其参与促进HCC生长的新机制。

关键词：肝细胞癌长链非编码RNA hulc 微小RNA29 细胞增殖

长链非编码RNA hulc影响下游相关靶点调控肝癌细胞的迁移和侵袭行为

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中华肝脏病杂志 2018年第7期26卷 513-518页

作者：周超邬昊刘彦尹川杨波成都市第一人民医院急诊科 610000 重庆医科大学附属第二医院 400010 成都市第五人民医院消化内科 610000

目的探讨长链非编码RNAhulc影响下游相关靶点调控肝癌细胞的迁移和侵袭行为及其作用机制。方法qPCR检测肝癌和癌旁正常肝组织、不同肝癌细胞中hulc的表达情况；分析hulc和肝癌患者的临床病理资料之间的关联；双荧光素酶实验报告基因检测... 详细信息

目的探讨长链非编码RNAhulc影响下游相关靶点调控肝癌细胞的迁移和侵袭行为及其作用机制。方法qPCR检测肝癌和癌旁正常肝组织、不同肝癌细胞中hulc的表达情况；分析hulc和肝癌患者的临床病理资料之间的关联；双荧光素酶实验报告基因检测hulc与miR-186的相互作用；细胞计数试剂盒-8细胞增殖实验检测hulc对肝癌细胞的增殖能力的影响；Transwell侵袭实验检测抑制hulc后肝癌细胞侵袭能力的变化；划痕实验检测抑制hulc后肝癌细胞迁移能力的变化；裸鼠皮下成瘤实验检测抑制hulc后肝癌细胞体外成瘤体积和质量变化。用单因素方差分析比较组间差异。P〈0．05为差异有统计学意义。结果与癌旁正常肝组织相比，肝癌组织中hulc表达明显增高[（0．23±0．05）比（1．79±0．25），P〈0．05]；肝癌细胞HepG3中hulc的表达水平最高；hulc能与miR-186的3。UTR特异性结合，调控miR-186的表达活性；抑制hulc的表达后肝癌细胞增殖[72h（0．82±0．16）比（0．35±0．09），P〈0．05；96h（1．28±0．19）比（0．42±0．08），P〈0．05]、迁移和侵袭的能力相对减弱[24h（23．5％±3．6％）比（11．2％±1．6％），P〈0．05；48h（38．6％±5．6％）比（18．6％±3．0％），P〈0．05；72h（69．6％±7．6％）比（43．6％±5．3％），P〈0．05]；抑制hulc的表达后，荷瘤小鼠的肿瘤体积和体质量都明显减小[体积（2．89±0．29）cm^3比（0．89±0．18）cm^3，P〈0．05；体质量（3．18±0．41）g比（0．45±0．09）g，P〈0．05]。结论hulc在肝癌的发生和发展过程中起重要作用，可以通过调节下游相关靶点的表达影响肝癌细胞的生物学行为。

关键词：肝肿瘤侵袭行为 hulc 微小RNA 186

长链非编码RNA hulc沉默表达对人脑胶质母细胞瘤细胞SHG44增殖和凋亡的影响

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中山大学学报（医学版） 2019年第1期40卷 31-36页

作者：李倩尹恬恬胡宇辰吴景张敏何杰安徽医科大学附属省立医院//中国科学技术大学附属第一医院安徽合肥230031 中国科学技术大学附属第一医院西区//安徽省肿瘤医院安徽合肥230031

【目的】探讨长链非编码RNA肝癌高表达转录本(LncRNA hulc)沉默表达对人脑胶质母细胞瘤细胞株SHG44增殖和凋亡的影响。【方法】实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证hulc沉默表达组(hulc-siRNA)及其阴性对照组(NC组)hulc的表达水平。CCK8增殖... 详细信息

【目的】探讨长链非编码RNA肝癌高表达转录本(LncRNA hulc)沉默表达对人脑胶质母细胞瘤细胞株SHG44增殖和凋亡的影响。【方法】实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证hulc沉默表达组(hulc-siRNA)及其阴性对照组(NC组)hulc的表达水平。CCK8增殖实验和平板克隆形成实验检测瘤细胞的增殖能力。细胞周期和细胞凋亡实验检测瘤细胞的周期分布及凋亡能力。【结果】qRT-PCR证实hulc-siRNA组较NC组的hulc表达量显著降低(P=0.003)。CCK8增殖实验显示hulc-siRNA组较NC组细胞增殖率显著降低(第2天P=0.003;第3天P=0.005;第4天P=0.009)。平板克隆形成实验显示NC组和hulc-siRNA组的克隆形成率分别为(34.11±1.24)%,(14.44±0.87)%,沉默表达hulc后细胞克隆形成率显著降低(Phulc-siRNA组的细胞数分别为G1期(36.89±4.09、51.74±0.68),S期(46.95±2.49、36.89±2.13),沉默表达hulc后细胞周期明显被阻滞在G1/S期(G1期P=0.023,S期P=0.038)。细胞凋亡实验显示NC组和hulc-siRNA组的早期凋亡率分别为(2.57±0.22)%,(7.063±0.71)%,沉默表达hulc后细胞早期凋亡率显著增加(P=0.004)。【结论】LncRNA hulc沉默表达后可抑制胶质母细胞瘤细胞的增殖,促进其凋亡。

关键词：胶质母细胞瘤 LncRNA hulc 增殖凋亡

长链非编码RNA-hulc对结直肠癌细胞生长和转移的影响

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武汉大学学报（医学版） 2018年第6期39卷 895-898页

作者：徐飞刘九洋黄超群彭春伟熊斌杨肖军湖北省英山县人民医院普外一科武汉大学中南医院胃肠外科

目的:研究长链非编码RNA(lncRNA)hulc对结直肠癌(CRC)细胞增殖、侵袭、转移、凋亡以及体内成瘤等功能的影响。方法:通过si-RNA干扰技术构建肝癌高表达基因(hulc)低表达CRC细胞系,下调hulc表达水平后,用细胞克隆形成实验、Transwell侵袭... 详细信息

目的:研究长链非编码RNA(lncRNA)hulc对结直肠癌(CRC)细胞增殖、侵袭、转移、凋亡以及体内成瘤等功能的影响。方法:通过si-RNA干扰技术构建肝癌高表达基因(hulc)低表达CRC细胞系,下调hulc表达水平后,用细胞克隆形成实验、Transwell侵袭/转移实验以及流式细胞技术检测hulc对CRC细胞生物学行为的影响。进一步通过小鼠体内成瘤验证hulc的作用。结果:细胞克隆形成实验提示hulc可促进CRC细胞增殖,流式实验发现hulc可显著抑制CRC细胞的凋亡能力,Transwell侵袭和转移实验均发现hulc能显著促进CRC细胞的迁移及侵袭能力。动物实验发现稳定转染sh-hulc组的肿瘤大小和重量,以及肿瘤组织内Ki-67的染色阳性率明显小于对照组。结论:LncRNA-hulc表达可以促进结直肠癌细胞的生长、迁移和侵袭,并抑制凋亡。

关键词：长链非编码RNA hulc 结直肠癌增殖转移

hulc在肝细胞癌中表达的病理学意义及与上皮间质转化作用的探讨

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HULC在肝细胞癌中表达的病理学意义及与上皮间质转化作用的探讨

作者：熊淑晨新疆医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨hulc(high up-regulated in liver cancer,hulc)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达与临床病理学的意义及与上皮间质转化(epithelial-mesenchmal transition,EMT)的关系。方法:收集中国人民解放军兰州军区乌鲁木齐总医院2009年4月至2015年4月手术切除并经过病理检查证实肝细胞癌组织及癌旁组织70例、肝脏良性病变组织30例,运用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)法检测近三年(22例)肝细胞癌组织及癌旁组织中hulc的表达;免疫组织化学方法检测肝细胞癌组织、癌旁组织及肝脏良性病变组织中Vimentin和E-cadherin蛋白的表达,并分析各自与临床病理学特征的关系,以及hulc与Vimentin、E-cadherin之间的相关性。结果:qRT-PCR检测结果显示:肝癌组织中hulc的表达量高于癌旁组织,差异有统计学意义(P=0.037),且hulc的高表达与脉管内癌栓有关,差异有统计学意义(P=0.024)。免疫组化结果显示:肝细胞癌组织Vimentin表达显著高于癌旁组织及肝脏良性病变组织(P=0.000),E-cadherin在肝细胞癌、癌旁组织及肝脏良性病变组织中均表达,但在肝细胞癌组织中表达强度下降,差异具有统计学意义(P=0.018)。Vinentin的表达与E-cadherin的表达呈负相关(r=-0.292,P=0.048);此外,E-cadherin表达与脉管内癌栓相关,与其余临床病理学特征无显著相关性,Vimentin表达与临床病理学特征无显著相关性。近三年22例标本中,Vimentin阳性表达标本的hulc表达量高于阴性表达标本(P=0.029),E-cadherin表达减弱的标本hulc表达量高于E-cadherin阳性及强阳性表达的标本(P=0.019)。结论:肝细胞癌组织hulc高表达与E-cadherin的表达减低、Vimentin的表达增高相关,提示hulc可能通过参与上皮间质转化过程,促进肝细胞癌的侵袭和转移。

关键词：肝细胞癌长链非编码RNA hulc 上皮间质转化

实时荧光定量PCR检测hulc lncRNA方法的建立及初步应用

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激光杂志 2013年第3期34卷 94-96页

作者：汪先桃郭变琴梁勤东涂植光重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

目的:建立实时荧光定量PCR检测长链非编码RNAhulc的方法,探讨其在作为肝癌标志的应用价值。方法:根据Genebank中的hulc lncRNA(AY914050.1)全序列,设计hulc基因的特异引物,构建hulc基因的T克隆载体,命名为pMD18-T-hulc;以pMD18-T-hulc... 详细信息

目的:建立实时荧光定量PCR检测长链非编码RNAhulc的方法,探讨其在作为肝癌标志的应用价值。方法:根据Genebank中的hulc lncRNA(AY914050.1)全序列,设计hulc基因的特异引物,构建hulc基因的T克隆载体,命名为pMD18-T-hulc;以pMD18-T-hulc为实时荧光定量PCR检测hulc的标准品,建立实时荧光定量PCR检测hulc的方法并进行方法学评价。应用此方法检测8种肿瘤细胞株、肝癌组织、其它癌及癌旁组织中hulc lncRNA的表达。结果:hulc实时荧光定量PCR检测方法学的最低检测限为1.8×103拷贝/L,线性范围为1.8×103拷贝/L至4.6×109拷贝/L;该法的批内变异系数(CV)hulc lncRNA表达量(hulc lncRNA的方法,hulc lncRNA可望作为肝癌的标志。

关键词： hulc lncRNA 实时荧光定量PCR 肝癌