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作者：辛李宁昆明医科大学

学位级别：硕士

研究目的本文旨在探讨N-甲基-D-天氡氨酸离子能谷氨酸受体2A基因(N-methyl-D-aspartate receptor 2A, GRIN2A) (rs1070487、rs4587976、 rs1650420)、阿片受体1基因(Opioid receptor 1, OPRD1) (rs581111、rs2236857、 rs2236855)、环磷腺苷效应元件结合蛋白基因(cAMP-response element binding protein, CREb) (rs3025684)、5-羟色胺受体1b基因(5-hydroxytryptamine receptor 1b, htr1b) (rs130058)单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)位点与云南傣族男性海洛因依赖的相关性。研究方法按照《精神疾病诊断及统计手册第4版》(Diagnostic & Statistic Manuel of Mental Disorders Ⅳ,DSM-Ⅳ)诊断标准,选择云南省西双版纳州劳教所的强制戒毒人员海洛因依赖患者106例作为研究对象,同时选取与上述病例组相匹配的100例健康前科人员作为对照。采用饱和酚-氯仿法提取全血基因组DNA,建立8-plex SNPs复合扩增体系,应用SNaPshot方法及测序技术检测海洛因依赖患者组和健康对照组在GRIN2A、OPRD1、CREb、htr1b基因8个SNPs位点中的基因型和等位基因频率。采用SPSS 17.0软件、Haploview4.2软件、Shesis软件对结果进行相关统计学分析。研究结果1、单位点分析结果本实验在云南傣族男性海洛因依赖患者组和健康对照组8个SNPs位点基因型检测中,rs1070487、rs4587976、rs2236857、rs22368554个SNPs位点只检测到1种基因型,其余SNPs位点均检测到3种基因型。rs581111、rs3025684和rs130058位点基因型频率分布在海洛因依赖患者组与对照组差异具有统计学意义(P1070487、rs4587976、rs1650420、rs2236857和rs2236855位点等位基因频率与基因型频率分布在海洛因依赖组与对照组差异无统计学意义。2、连锁不平衡分析在云南傣族男性中,16号染色体(rs1650420、rs3025684)多态性位点在海洛因依赖患者组与对照组存在连锁不平衡现象,连锁程度较弱(D’16号染色体2个SNPs位点构建单体型分析,rsl650420-rs3025684构建的A-A单体型频率分布在海洛因依赖患者组和对照组中差异有统计学意义(P1基因rs581111多态性、CREb基因rs3025684多态性、htr1b基因rs130058多态性与云南傣族男性海洛因依赖相关联,并且rs3025684位点GG基因型可能为云南傣族人群海洛因依赖保护因素,携带rs3025684 A等位基因的个体可能更容易对海洛因产生依赖。rsl 650420-rs3025684构成的单倍型A-A可能是海洛因依赖的风险因素。GRIN2A基因rs1070487、rs4587976和OPRD1基因rs2236857、rs2236855四个SNPs位点可能在云南傣族群体中具有种族特异性。

关键词： GRIN2A OPRD1 CREb htr1b 海洛因依赖多态性 SNaPshot 多重PCR 云南傣族

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食管滴酸刺激诱导内脏致敏大鼠岛叶基因表达谱的改变

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世界华人消化杂志 2009年第14期17卷 1437-1442页

作者：许树长王琛郜恒骏孔炫王志勇姚莉雯朱立人同济大学附属同济医院消化科上海市200065 上海芯超生物科技有限公司上海市200000

目的:观察酸刺激模式下经腹腔卵清蛋白(OVA)致敏大鼠岛叶中基因谱的改变.方法:SD大鼠20只分为3组:A组于实验前1d腹腔注射OVA与氢氧化铝混合液[OVA100mg,Al(OH)3200mg]1.5mL致敏;b组于实验前1d腹腔注射生理盐水1.5mL作假手术对照;C组不... 详细信息

目的:观察酸刺激模式下经腹腔卵清蛋白(OVA)致敏大鼠岛叶中基因谱的改变.方法:SD大鼠20只分为3组:A组于实验前1d腹腔注射OVA与氢氧化铝混合液[OVA100mg,Al(OH)3200mg]1.5mL致敏;b组于实验前1d腹腔注射生理盐水1.5mL作假手术对照;C组不予处理作空白对照.实验第14天,对A、b、C组动物分别进行食管酸灌注,使用0.1mol/L盐酸滴注,滴注液保持37℃,速度10mL/h,共50min.通过脑定位仪定位岛叶并取材保存,对标本进行RNA抽提和纯化后,采用基因芯片进行寡核苷酸芯片杂交,并对芯片差异基因进行数据分析.结果:在食管滴酸灌注致敏SD大鼠后,31099个待测基因中,3组间显著差异表达基因389条(1.25%),其中已知功能基因158条,未知功能基因231条,有显著性功能的基因有21条(4.88%).这些基因主要涉及到初级代谢产物、转移酶活性、ATP结合物、阳离子结合物,细胞定位,阳离子转运等.下调的基因中包括了调控与内脏感觉相关的5-HT1b受体基因.结论:岛叶皮层中枢可能存在有通过中枢下行抑制的减弱致内脏高敏感的中枢机制,htr1b基因的下调可能在调控食管内脏感觉中发挥着重要的作用.

关键词：食管感觉食管酸灌注基因芯片 htr1b

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htr1a参与黑线仓鼠攻击行为的脑内调控

Htr1a参与黑线仓鼠攻击行为的脑内调控

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作者：高桂彬曲阜师范大学

学位级别：硕士

黑线仓鼠(Cricetulus barabensis)是中国北方地区农田害鼠的优势种之一,因为其繁殖能力强,种群数量大,严重危害了农业生产活动,并且它还是流行病的传染源,因此对其加强防控治理已是迫在眉睫。黑线仓鼠还是典型的独居型鼠种,是研究动物... 详细信息

黑线仓鼠(Cricetulus barabensis)是中国北方地区农田害鼠的优势种之一,因为其繁殖能力强,种群数量大,严重危害了农业生产活动,并且它还是流行病的传染源,因此对其加强防控治理已是迫在眉睫。黑线仓鼠还是典型的独居型鼠种,是研究动物行为的良好动物模型。探究黑线仓鼠的行为调控机制对研究黑线仓鼠社群结构、种群密度波动以及种群扩散机制的影响提供资料,对制定合理高效的农业鼠害治理措施具有十分重要的意义。攻击行为是直接影响动物领域、繁殖和取食等行为的重要因素,也是影响动物个性特征的因素之一。动物攻击行为受到机体神经调节和体液调节的复杂调控,尤其是其脑内调控的分子机制尚不清楚。五羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT),又名血清素(Serotonin)是一种重要的信号分子和神经递质,参与调解多种精神活动及动物的行为活动。htr1a(五羟色胺1a受体)和htr1b(五羟色胺1b受体)是5-HT调控动物攻击行为作用的主要受体。为了从受体层面探究5-HT对不同性格的动物攻击行为的影响及其脑内调控机制,本研究以雄性黑线仓鼠为动物材料,在克隆测序htr1a和htr1b序列的基础上,主要探究不同性格的雄性黑线仓鼠攻击行为的变化及其大脑内htr1a和htr1b mRNA的差异表达的关系,目的在于更好的理解htr1a和htr1b受体调控行为的脑内机制。首先,以在山东省曲阜市农田中捕获的野生黑线仓鼠为动物材料。用RT-PCR技术分别克隆了黑线仓鼠htr1a和htr1b的CDS区序列,运用生物信息学方法对htr1a和htr1b核酸序列以及编码氨基酸序列进行功能分析。结果表明:实验成功克隆到黑线仓鼠htr1a序列1486bp(Genbank登录号:MH169583),htr1b序列1414bp(Genbank登录号:MH169584),分别编码422个和386个氨基酸。密码子偏性分析显示,htr1a、htr1b的同义密码子有非均衡使用现象,但非均衡使用现象并不显著,表明htr1a、htr1b进化过程的保守性和功能的稳定性。理化性质及功能位点分析表明,htr1a和htr1b属于G蛋白偶联受体家族,均符合膜受体蛋白的特性且都是疏水性蛋白质,都具有多个蛋白质结合位点和多个功能位点。二级结构和三级结构预测表明它们都有一个高度保守的功能结构域,且htr1a的结构稳定,而htr1b的结构相对不稳定。同源性比对和聚类分析显示,htr1a和htr1b序列均相对保守。预测分析htr1a、htr1b之间的相互作用表明,两种受体结构之间的相互作用可能参与五羟色胺释放,从而起到对5-HT系统功能的调节。其次,以购自山西医科大学实验动物中心的雄性黑线仓鼠为材料(许可证编号:scxk(晋)2015-0001),通过Handling-bag实验根据其挣扎撕咬的时间长短对雄性黑线仓鼠进行性格分组,筛选出温柔组和暴躁组个体各12只;通过Panlab的红外旷场实验系统检测动物在面临陌生环境时的开场行为,通过中立竞技场实验视频分析检测相同性格两个体之间的攻击行为的变化特征。结果表明:温柔组和暴躁组个体的总运动距离(P=0.603)、最大运动速度(P=0.326)、休息时间占总时间的百分比(P=0.603)、缓慢移动时间与总时间的百分比(P=0.488)、快速移动时间与总时间的百分比(P=0.977)、后肢站立次数(P=0.644)、中央区域停留时间(P=0.885)、修饰次数(P=0.953)均无显著性差异,说明不同性格的黑线仓鼠在面临陌生环境时的开场行为无差异。温柔组的基础攻击行为与暴躁组无显著差异(P=0.106),但温柔组的激烈攻击行为极显著低于与暴躁组(P=0.001),温柔组的防御行为显著低于暴躁组(P=0.021),两组的社会行为无显著性差异(P=0.194),说明不同性格的黑线仓鼠在攻击行为上有显著性差异。Spearman相关分析表明,Handling-bag实验中动物挣扎时间与中立竞技场实验中的激烈攻击行为频次(r=0.686,P=0)、防御行为频次(r=0.482,P=0.017)均呈显著正相关。最后,利用克隆得到的htr1a、htr1b序列设计引物,通过荧光定量PCR法检测不同性格组黑线仓鼠大脑中htr1a、htr1b mRNA的相对表达量。结果表明:Handling-bag实验中动物挣扎时间与大脑内htr1a mRNA相对表达量(r=0.772,P=0.003)均呈显著正相关。同时,htr1a mRNA相对表达量与激烈攻击行为频次(r=0.720,P=0.008)呈显著正相关。htr1b mRNA相对表达量则无此相关关系。以上结果提示:(1)本研究成功克隆到黑线仓鼠htr1a、htr1b的CDS区序列,初步预测两种受体之间的相互关系,为进一步探究

关键词：黑线仓鼠雄性性格攻击行为 htr1a htr1b

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