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hsv-tk基因表达载体构建与检测

青海医学院学报 2005年第2期26卷 110-111,127页

作者：杨生玺青海大学医学院生物教研室

目的构建含有hsv-tk基因的逆转录病毒载体。方法将hsv-tk基因导入质粒,用电转法或CaCl2法转化感受态大肠杆菌进行扩增。结果经限制性酶切分析及PCR方法鉴定,目的基因大小、位置、方向均正确无误。结论hsv-tk载体的成功构建为肿瘤基因治... 详细信息

目的构建含有hsv-tk基因的逆转录病毒载体。方法将hsv-tk基因导入质粒,用电转法或CaCl2法转化感受态大肠杆菌进行扩增。结果经限制性酶切分析及PCR方法鉴定,目的基因大小、位置、方向均正确无误。结论hsv-tk载体的成功构建为肿瘤基因治疗提供部分实验基础。

关键词： hsv—tk基因构建检测

hsv-tk/GCV自杀基因系统对骨肉瘤细胞体外杀伤效应

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第四军医大学学报 2004年第3期25卷 204-207页

作者：胡铁山李贵涛广东省177医院骨科广东广州510317

目的 :观察hsv tk/GCV系统对骨肉瘤细胞SAOS 2的体外杀伤作用 .方法 :构建tk基因逆转录表达载体pL(tk)SN ,在lipofectamine2 0 0 0介导下转染PA31 7包装细胞 ,G4 1 8筛选 ,直至出现抗性克隆 ,扩大培养 ,用NIH3T3测定病毒滴度 ,将重组病... 详细信息

目的 :观察hsv tk/GCV系统对骨肉瘤细胞SAOS 2的体外杀伤作用 .方法 :构建tk基因逆转录表达载体pL(tk)SN ,在lipofectamine2 0 0 0介导下转染PA31 7包装细胞 ,G4 1 8筛选 ,直至出现抗性克隆 ,扩大培养 ,用NIH3T3测定病毒滴度 ,将重组病毒感染人骨肉瘤细胞SAOS 2 ,G4 1 8筛选出抗性克隆命名为SAOS/tk ,以RT PCR及Southernblot检测tk基因的整合及表达 .观察tk基因修饰细胞生长状况及MTT法观察前药对tk基因修饰骨肉瘤细胞的杀伤效应 .结果 :RT PCR及South ernblot分析证明tk基因在人骨肉瘤细胞系SAOS 2中有整合及表达 ;SAOS/tk与未转基因的原肿瘤细胞相比 ,两者生长速度及形态结构无明显差别 ;在前药敏感性试验中 ,GCV对SAOS/tk细胞的杀伤作用十分明显 ,半数致死量约为 1mg/L ,而亲本细胞SAOS 2和空白质粒转染SAOS/0细胞 ,半数致死量大于 1 0 0mg/L .tk基因修饰细胞与不同比例亲本细胞混合后经GCV治疗 ,SAOS/tk占混合细胞总数的 2 0 %时即可杀伤约 5 0 %的混合培养细胞 .结论 :人骨肉瘤细胞系SAOS 2对hsv tk/GCV系统高度敏感 ,并且有明显的旁观者效应。

关键词：骨肉瘤 hsv—tk基因基因治疗

HRE增强hTERT启动子-tk/GCV基因系统对缺氧环境肿瘤细胞的杀伤作用

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吉林大学学报（医学版） 2010年第1期36卷 14-19,F0002页

作者：胡薇艾永兴郑梅竹张玉静吉林农业大学生命科学学院生物化学教研室吉林长春130118 吉林大学人兽共患病研究所吉林长春130062

目的:探讨缺氧反应元件(HRE)增强hTERT启动子-tk/GCV逆转录病毒基因系统对缺氧环境肿瘤细胞的体外杀伤作用。方法:构建由HRE缺氧反应元件修饰的hTERT杂合启动子和hTERT单一启动子引导单纯疱疹病毒胸苷激酶(hsv-tk)基因表达的重组逆转录... 详细信息

目的:探讨缺氧反应元件(HRE)增强hTERT启动子-tk/GCV逆转录病毒基因系统对缺氧环境肿瘤细胞的体外杀伤作用。方法:构建由HRE缺氧反应元件修饰的hTERT杂合启动子和hTERT单一启动子引导单纯疱疹病毒胸苷激酶(hsv-tk)基因表达的重组逆转录病毒载体,在脂质体介导下分别转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆。将重组病毒感染人肺癌细胞SPC-A1和人肝癌细胞Bel-7402,G418筛选出抗性克隆肿瘤细胞。实验分为对照组、SPC-A1/tk组和Bel-7402/tk组。在缺氧处理条件下,MTT法检测前体药物丙氧鸟苷(GCV)对SPC-A1/tk和Bel-7402/tk细胞的杀伤效应,流式细胞仪检测其细胞凋亡率和细胞周期的变化。结果:与对照组比较,缺氧环境培养的SPC-A1/tk和Bel-7402/tk细胞对GCV的敏感性明显增强,其中细胞凋亡率明显升高(Ptk基因系统组细胞比较,[HRE]hTERT杂合启动子引导的tk基因系统组肿瘤细胞存活率更低(Ptk/GCV自杀基因系统对缺氧环境中肿瘤细胞的体外杀伤作用。

关键词：肿瘤 hTERT启动子缺氧反应元件 hsv—tk基因缺氧

hsv-tk/GCV系统对人Tenon囊成纤维细胞的旁观者效应及其机制研究

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眼科研究 2006年第3期24卷 281-284页

作者：王继兵葛坚段山刘炳乾郑建樑中山大学中山眼科中心广州510060

目的观察hsv-tk/GCV系统对人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)的旁观者效应并研究其作用机制。方法将转hsv-tk基因HTFs(HTFs-tk)与正常HTFs于两种接种密度下以不同比例混合,加入5μg/m l更昔洛韦作用5 d,MTT法检测对HTFs的杀伤作用;染料传输法观... 详细信息

目的观察hsv-tk/GCV系统对人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)的旁观者效应并研究其作用机制。方法将转hsv-tk基因HTFs(HTFs-tk)与正常HTFs于两种接种密度下以不同比例混合,加入5μg/m l更昔洛韦作用5 d,MTT法检测对HTFs的杀伤作用;染料传输法观察HTFs细胞间隙连接细胞间通讯(G JIC)的能力;免疫细胞化学检测Cx43分布;RT-PCR及W estern b lot检测Cx43表达。结果旁观者效应随HTFs-tk/HTFs比例增加而增强,高细胞接种密度组明显强于低密度组;染料通过G JIC传输6级以上;Cx43主要分布于HTFs细胞膜并检测到其mRNA与蛋白表达。结论旁观者效应需要细胞间密切接触,Cx43介导G JIC可能是hsv-tk/GCV系统对HTFs产生旁观者效应的主要机制,HTFs表达Cx43可能在结膜伤口愈合反应中发挥重要作用。

关键词：旁观者效应 hsv—tk基因 Tenon囊成纤维细胞人

逆转录病毒介导的hsv—tk/GCV对肝癌细胞的影响

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逆转录病毒介导的HSV—tk/GCV对肝癌细胞的影响