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hsp60对天祝白牦牛原代培养的支持细胞增殖的影响

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核农学报 2017年第8期31卷 1486-1493页

作者：阮崇美王相生张勇马友记胡俊杰赵兴绪甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 甘肃农业大学动物科技学院甘肃兰州730070

hsp60对动物的睾丸发育、精子发生起着重要的调控作用。支持细胞是睾丸内唯一与生精细胞直接发生联系的体细胞,对精子发生、成熟等过程有直接影响。为研究hsp60对白牦牛睾丸支持细胞增殖的调控作用,本试验通过组合酶消化法分离培养白牦... 详细信息

hsp60对动物的睾丸发育、精子发生起着重要的调控作用。支持细胞是睾丸内唯一与生精细胞直接发生联系的体细胞,对精子发生、成熟等过程有直接影响。为研究hsp60对白牦牛睾丸支持细胞增殖的调控作用,本试验通过组合酶消化法分离培养白牦牛原代支持细胞,通过差速贴壁法和Tris-HCL低渗缓冲液进行纯化处理,运用免疫荧光染色和Feulgen染色鉴定细胞,经流式细胞仪检测得到96.2%高纯度支持细胞。构建hsp60过表达载体p IRES2-EGFP-hsp60,合成靶向siRNA沉默hsp60,瞬时转染支持细胞后,经qPCR检测发现过表达组hsp60 mRNA在24、48、72 h等时间点均上调,沉默组hsp60 mRNA在24、48、72 h等时间点均下调。MTS试验检测细胞的增殖情况,过表达hsp60组中的支持细胞增殖效率各时间点均显著高于空白对照组和空质粒组;沉默hsp60组中支持细胞的增值率各时间点均低于空白对照组和阴性对照组,但差异不显著。qPCR检测细胞增殖标志基因细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和增殖细胞核抗原(PCNA),结果表明,过表达hsp60组的cyclin D1基因在48 h时的表达显著高于空白对照组和空质粒组,PCNA基因的表达在24、48、72 h时均显著高于空白对照组和空质粒组;沉默hsp60组cyclin D1基因和PCNA基因的表达在24、48、72 h时均低于空白对照组和阴性对照组,但差异不显著。综上,hsp60在白牦牛睾丸支持细胞增殖调控中的作用是正向调控。本试验结果为进一步研究hsp60对白牦牛睾丸发育和精子发生的影响奠定了理论基础。

关键词： hsp60 天祝白牦牛支持细胞细胞增殖

MRP-1/CD9和hsp60在膀胱癌中的表达

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中国肿瘤临床 2005年第9期32卷 524-526,529页

作者：杨晓春白进良傅梧马建华马鹏程兰州大学第一医院泌尿外科兰州市730000

目的:探讨MRP-1/CD9和hsp60的表达与膀胱癌发生发展的关系。方法:应用免疫组织化学技术(SP法)检测CD9和hsp60在75例膀胱移行细胞癌标本,15例正常膀胱组织中的表达。结果:CD9和hsp60在正常膀胱组织均高表达,41.2%和42.7%的膀胱癌对CD9和H... 详细信息

目的:探讨MRP-1/CD9和hsp60的表达与膀胱癌发生发展的关系。方法:应用免疫组织化学技术(SP法)检测CD9和hsp60在75例膀胱移行细胞癌标本,15例正常膀胱组织中的表达。结果:CD9和hsp60在正常膀胱组织均高表达,41.2%和42.7%的膀胱癌对CD9和hsp60显示了表达减低。不同临床分期和病理分级的膀胱癌中CD9的表达有差异(Phsp60表达有差异(Phsp60可能与膀胱癌的发生发展有关,它们可能作为判断膀胱癌预后的新指标。

关键词： MRP-1/CD9 hsp60 膀胱癌免疫组织化学

The ATPase activity of molecular chaperone hsp60 is inhibited by immunosuppressant mizoribine

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American Journal of Molecular Biology 2012年第2期2卷 93-102页

作者： Masako Tanabe Ryuichi Ishida Fumiko Izuhara Atsushi Komatsuda Hideki Wakui Kenichi Sawada Michiro Otaka Nobuhiro Nakamura Hideaki Itoh Department of Gastroenterology Juntendo University School of Medicine Tokyo Japan Department of Hematology Nephrology and Rheumatology Akita University Graduate School of Medicine Akita Japan Department of Life Science Graduate School and Faculty of Engineering and Resource Science Akita University Akita Japan Department of Molecular Biosciences Faculty of Life Sciences Kyoto Sangyo University Kamigamo Kyoto Japan

The molecular chaperone hsp60 is a chaperonin homolog of GroEL. We had previously shown that the immunosuppressant mizoribine is bound directly to hsp60 and inhibited its chaperone activity. However, the inhibitory mechanisms of hsp60 by mizoribine have not yet been fully understood. In the present study, we investigated the influence of mizoribine on a folding cycle of hsp60 and co-chaperone hsp10. Our results showed that mizoribine inhibited the folding cycle of hsp60/hsp10. The ATPase activity of hsp60/hsp10 was decreased in the presence of mizoribine and the dissociation of hsp10 from hsp-60 was also decreased by mizoribine. The same functions of GroEL and/or GroES were slightly affected by mizoribine. Based on our findings, we discuss the inhibitory mechanisms of hsp60 by mizoribine.

关键词： hsp60 GroEL Mizoribine Inhibition Mechanisms Conformational Change

马铃薯甲虫热激蛋白基因Ld-hsp60的克隆、序列分析及温度胁迫下的表达

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昆虫学报 2017年第5期60卷 523-532页

作者：魏长平蒋健李祥瑞张云慧张方梅程登发郭文超刘怀西南大学植物保护学院重庆400716 中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室北京100193 信阳农林学院河南信阳464000 新疆农业科学院植物保护研究所乌鲁木齐830091

【目的】马铃薯甲虫Leptinotarsa decemlineata是一种世界性检疫害虫,对温度胁迫具有极强的适应性,为进一步明确其对温度胁迫适应性的分子机制,研究了热激蛋白hsp60在马铃薯甲虫温度胁迫应答过程中的作用。【方法】采用RT-PCR及RACE技... 详细信息

【目的】马铃薯甲虫Leptinotarsa decemlineata是一种世界性检疫害虫,对温度胁迫具有极强的适应性,为进一步明确其对温度胁迫适应性的分子机制,研究了热激蛋白hsp60在马铃薯甲虫温度胁迫应答过程中的作用。【方法】采用RT-PCR及RACE技术克隆马铃薯甲虫热激蛋白hsp60基因的cDNA全长序列;利用生物信息学软件分析该基因及其编码蛋白质的序列特性;运用实时荧光定量PCR技术分析该基因在温度胁迫下的表达模式。【结果】克隆得到马铃薯甲虫热激蛋白hsp60基因,命名为Ld-hsp60(Gen Bank登录号:KC556801),其cDNA全长2 234 bp,开放阅读框(ORF)长1 731 bp,编码576个氨基酸,相对分子量约为61.27 kD,理论等电点为5.51,5'端非翻译区(UTR)长101 bp,3'UTR长402 bp。氨基酸序列中含有hsp60家族典型的特征序列。实时荧光定量PCR结果表明,低温胁迫(-10和0℃)下未检测到马铃薯甲虫雌雄成虫中Ld-hsp60的诱导表达;高温胁迫(38和44℃)诱导马铃薯甲虫雄成虫Ld-hsp60上调表达,随着胁迫温度的升高Ldhsp60表达量呈现先升高后降低的趋势,38℃高温胁迫下表达量最高,胁迫时间越长Ld-hsp60表达量也越高。【结论】相比其他热激蛋白,hsp60对温度敏感性较低,推测hsp60可能在马铃薯甲虫雄成虫抵御高温胁迫中发挥作用。

关键词：马铃薯甲虫热激蛋白 hsp60 基因克隆温度胁迫实时荧光定量PCR

运动后血清和骨骼肌hsp60的关系及对骨骼肌的保护作用

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西安体育学院学报 2007年第6期24卷 64-66页

作者：张自刚西安体育学院体育系西安710068

目的探讨运动后血清、骨骼肌hsp60含量变化、相关关系及其对骨骼肌的保护作用。方法26名成人(15男11女)进行60 min的功率脚踏车运动,运动负荷为70%的最大摄氧量(VO2max)。于运动开始30 min,结束后即刻、1、2、8、244、8 h采集血样、股... 详细信息

目的探讨运动后血清、骨骼肌hsp60含量变化、相关关系及其对骨骼肌的保护作用。方法26名成人(15男11女)进行60 min的功率脚踏车运动,运动负荷为70%的最大摄氧量(VO2max)。于运动开始30 min,结束后即刻、1、2、8、244、8 h采集血样、股外侧肌活检,检测hsp60、肌酸激酶骨骼肌同工酶(CK-MM)含量。结果血清hsp60和骨骼肌内hsp60含量变化是一致的,血清CK的变化相比hsp60的变化是上升的晚,下降的早。结论剧烈运动后hsp60在血清及骨骼肌内含量增加,血清hsp60可能是由骨骼肌细胞分泌。

关键词：运动 hsp60 肌酸激酶酶联免疫吸附实验

hsp60在胃癌中的表达与微血管生成的关系及临床意义

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HSP60在胃癌中的表达与微血管生成的关系及临床意义

作者：官明山东大学

学位级别：硕士

目的检测热休克蛋白-60（hsp60）在胃癌组织及细胞系中的表达及其与肿瘤微血管生成的关系,初步探讨其在胃癌新生血管生成的作用机理及临床意义,并评价其在胃癌发生发展中的价值。方法： 1.应用免疫组织化学SP法检测hsp60蛋白... 详细信息

目的检测热休克蛋白-60（hsp60）在胃癌组织及细胞系中的表达及其与肿瘤微血管生成的关系,初步探讨其在胃癌新生血管生成的作用机理及临床意义,并评价其在胃癌发生发展中的价值。方法： 1.应用免疫组织化学SP法检测hsp60蛋白在85例胃癌组织及35例癌旁正常胃组织中的分布及表达情况,探讨其与胃癌临床病理特点关系。 2.应用免疫组织化学SP法通过测定CD34蛋白来检测微血管密度（microvesseldensity, MVD）在85例胃癌组织及35例癌旁正常组织分布情况,探讨其与胃癌临床病理特点的关系。并应用spearman秩相关检验,检验hsp60和MVD表达间的相关性。 3.应用实时定量PCR法检测hsp60在20例胃癌组织及相应癌旁正常胃组织中的表达,证实hsp60的表达在癌组织与正常组织间存在差异。 4.应用实时定量PCR检测胃癌细胞系AGS、BGC-823、SGC-7901、MKN-45、 MKN-28和HGC-27中hsp60的表达。 5.应用ELISA法对53例胃癌及46例健康体检者血浆标本进行检测,比较不同组间hsp60表达水平的差异,运用ROC曲线评估hsp60在胃癌早期诊断中的价值,探讨hsp60在胃癌早期诊断及临床应用中的价值。结果 1.免疫组化染色结果显示,hsp60蛋白在85例胃癌患者的胃癌组织中的阳性表达率达70.5882%（60/85）,而35例癌旁正常胃组织中无表达（0/35）,二者有显著的统计学差异（P＜0.01）。hsp60的阳性表达与胃癌患者的肿瘤大小、分化程度、浸润程度相关（P＜0.05）,而与年龄、性别无统计学差异（P＞0.05）。 2.MVD在胃癌组织中的阳性表达率达62.3529%（60/85）,而癌旁正常胃组织中表达为低值,二者有显著的统计学差异（P＜0.01）。hsp60的阳性表达与胃癌患者的肿瘤大小、分化程度、浸润程度显著相关（P＜0.05）,而与年龄、性别无统计学差异（P＞0.05） 3.Spearman秩相关检验分析,hsp60蛋白和MVD表达具有显著相关性（r=0.404,P＜0.001）。 4.实时定量PCR法结果显示,hsp60蛋白在20例胃癌患者的胃癌组织中的表达显著高于癌旁正常胃组织中无表达,二者有显著的统计学差异（P＜0.01）。 5. hsp60mRNA及在胃癌细胞系AGS、BGC-823、SGC-7901、MKN-45、MKN-28和HGC-27中均高表达,各细胞系之间无差异。显著高于正常组织对照（P＜0.01）。 6.胃癌组血浆中hsp60（154.8pg/ml）表达水平均显著高于健康对照组（67.48pg/ml）（P＜0.001）。hsp60诊断的ROC曲线AUC为0.923,同时ROC曲线确定hsp60的诊断临界值为112.4,其诊断胃癌的敏感度为73.5%,特异度为93.5%,从而证实hsp60的应用有助于胃癌的早期诊断结论： hsp60是hsps家族的一个重要成员,其在人类多种肿瘤均呈高表达。热休克蛋白作为一种重要的物质参与了调控肿瘤的增殖与凋亡。本研究发现hsp60在胃癌组织比正常胃粘膜组织呈明显升高趋势,且与胃癌患者的肿瘤大小、分化程度、浸润程度相关。提示hsp60高表达与早期胃癌的发生密切相关,检测hsp60对早期胃癌的诊断有参考价值。近年来对肿瘤血管生成的研究表明,血管生成在实体肿瘤的恶变、生长、转移等方面起至关重要的作用,肿瘤生长所形成的血管范围直接与肿瘤转移有关,而肿瘤的微血管密度（MVD）定量地反映肿瘤的血管形成。而研究同样表明,MVD在早期胃癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织,二者间差异具有统计学意义。应用相关分析,在胃癌组织中hsp60蛋白和MVD的具有显著相关性。胃癌组织中hsp60表达水平明显升高,并且与微血管生成密切相关密切相关。因此在临床中通过联合检测hsp60蛋白和MVD的含量,作为早期胃癌诊断及评估其预后的重要参考指标之一,并为胃癌的靶向治疗提供新的方向。通过在胃癌肿瘤标志物的研究,提示hsp60在胃癌早期诊断中有一定的优势,具有潜在的临床应用价值。

关键词：胃癌 hsp60 MVD

大鼠急性高眼压模型视网膜组织中hsp60的表达及功能

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国际眼科杂志 2009年第3期9卷 458-461页

作者：沙倩乔喜珍聂庆珠姚志斌王英爽肖伟高殿文中国医科大学附属盛京医院眼科 110004 黑龙江省第四医院眼科 150500 中国医科大学附属医院眼科 110032 哈尔滨爱尔眼科医院 150001

目的:探讨hsp60(热休克蛋白60)在大鼠急性青光眼模型视网膜组织中的表达及其与血清中相应抗体的关系。方法:将SD大鼠70只随机分为高眼压组60只,正常对照组10只。大鼠全身及表面麻醉后,将一盛有等渗的生理盐水的储容器相连的7号针头于3... 详细信息

目的:探讨hsp60(热休克蛋白60)在大鼠急性青光眼模型视网膜组织中的表达及其与血清中相应抗体的关系。方法:将SD大鼠70只随机分为高眼压组60只,正常对照组10只。大鼠全身及表面麻醉后,将一盛有等渗的生理盐水的储容器相连的7号针头于3∶00位的角膜缘处刺入前房,提升储容器的高度,使眼内压达到110mmHg,但不超过150mmHg,观察大鼠眼前段变白,且视网膜色白,未见红色反光时即为视网膜缺血,缺血1h后再灌注,并于再灌注后2,6,12,24,72,168h将大鼠麻醉过量致死,处死前测眼压,抽血2mL,供酶联免疫吸附测定使用,分析视网膜组织内hsp60抗原产生的血清中相应抗体水平。并立即取出眼球,同时对鼠眼视网膜组织进行石蜡切片,采用免疫组化法检测视网膜组织中hsp60的表达及分布情况,并对检测结果进行统计学分析。结果:急性高眼压诱导的视网膜缺血/再灌注组眼压明显升高,视网膜组织中的hsp60阳性表达率在术后各时间点,高眼压组与正常对照组比较,差异有统计学意义(F=97.21,40.72,83.85,95.82,48.63及44.37,均Phsp60阳性表达随着眼压升高及高眼压持续时间延长逐渐增强,且视网膜神经纤维层中也出现较明显的hsp60阳性表达。结论:hsp60表达增强可能在急性高眼压所致的视神经病变中具有重要作用。

关键词：急性高眼压视网膜 hsp60 酶联免疫吸附测定

赤点石斑鱼hsp60基因克隆及弧菌应激前后的组织表达特性分析

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海洋学报 2011年第1期33卷 111-120页

作者：曲朦施晓峰张之文丁少雄厦门大学海洋与环境学院福建厦门361005

hsp60(heat shock protein 60,热休克蛋白60)作为高度保守的热休克蛋白家族的一员,不仅可以在应激状态下帮助其他蛋白正确折叠并恢复天然构象,还可作为危险信号作用于天然免疫系统。基于hsp60的EST序列设计特异引物,采用RACE技术成功克... 详细信息

hsp60(heat shock protein 60,热休克蛋白60)作为高度保守的热休克蛋白家族的一员,不仅可以在应激状态下帮助其他蛋白正确折叠并恢复天然构象,还可作为危险信号作用于天然免疫系统。基于hsp60的EST序列设计特异引物,采用RACE技术成功克隆获得赤点石斑鱼hsp60 cDNA全序列及基因组全序列。其cDNA序列全长2 351 bp,包括75 bp的5′UTR,539 bp的3′UTR和1 737 bp的开放阅读框,共编码578个氨基酸。核苷酸及氨基酸序列比对结果显示该基因与其他脊椎动物的相似性很高。基于氨基酸序列构建的系统进化树与传统物种树基本吻合,说明hsp60可能是1个潜在的可用于物种系统进化研究的良好标记。所获得的赤点石斑鱼hsp60基因组全序列含有8个内含子和9个外显子,也与已知其他硬骨鱼类基本一致。这种在序列特征、蛋白空间结构及基因组结构上的高度保守性意味着hsp60在动物生命活动中可能发挥着至关重要的作用。通过实时PCR检测结果发现hsp60在赤点石斑鱼各组织中均有表达,而攻毒后鱼体肝的表达量显著增高(Phsp60基因在鱼类非特异性免疫应答中发挥了作用。

关键词：赤点石斑鱼 hsp60 克隆组织表达特性

hsp60在糖尿病诱导的晶状体上皮细胞凋亡中的作用

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广东医学 2015年第24期36卷 3769-3771页

作者：付书华肖昊戎刘菲仇晶晶张倩游志鹏南昌大学第二附属医院眼科南昌330006 南昌大学医学院

目的观察hsp60在早期糖尿病大鼠晶状体上皮细胞上的表达及其对糖尿病诱导的晶状体上皮细胞凋亡的影响,探讨hsp60在糖尿病性白内障病变中的作用。方法鼠龄为6~8周的SD大鼠随机分成糖尿病组及对照组,每组8只,糖尿病组在禁食12 h后一次性... 详细信息

目的观察hsp60在早期糖尿病大鼠晶状体上皮细胞上的表达及其对糖尿病诱导的晶状体上皮细胞凋亡的影响,探讨hsp60在糖尿病性白内障病变中的作用。方法鼠龄为6~8周的SD大鼠随机分成糖尿病组及对照组,每组8只,糖尿病组在禁食12 h后一次性腹腔注射1%链脲佐菌素诱发糖尿病模型,成功诱导成糖尿病模型4周后应用免疫组织化学法及Western blot检测晶状体上皮细胞上hsp60的表达。晶状体上皮细胞（SRA01/04细胞珠）在含20%胎牛血清的低糖（5.5 mmol/L）DMEM培养液中培养传代后加入含高渗葡萄糖（25mmol/L）的培养液中,分为两组,其中一组加入10 mg/L hsp60蛋白,培养72 h后Western blot检测caspase-3的含量。结果在对照组大鼠晶状体上皮细胞上未发现有hsp60表达,糖尿病组大鼠可见晶状体上皮细胞上有hsp60表达,Western blot检测hsp60差异有统计学意义（P〈0.05）。细胞培养实验结果显示,加入hsp60蛋白后,晶状体上皮细胞中caspase-3的表达量下降。结论早期糖尿病大鼠晶状体上皮细胞能够表达hsp60,且对高渗糖诱导的晶状体上皮细胞凋亡有保护作用。

关键词： hsp60 糖尿病晶状体上皮细胞调亡