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齐口裂腹鱼HSP60 cDNA克隆及其在无乳链球菌感染中的mRNA表达

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水产学报 2022年第9期46卷 1680-1688页

作者：陈德芳芦路蒲云丹瞿炼石刘博黄小丽欧阳萍李志琼耿毅四川农业大学动物科技学院四川农业大学动物医学院雅安市渔业发展中心

为探究齐口裂腹鱼热休克蛋白60基因(SpHSP60) cDNA序列的分子特征和在细菌感染中的响应情况，实验利用RACE技术克隆获得了2 277 bp的SpHSP60 cDNA序列，预测编码575个氨基酸，其与脊椎动物具有较高的保守性。齐口裂腹鱼的组织表达模式... 详细信息

为探究齐口裂腹鱼热休克蛋白60基因(SpHSP60) cDNA序列的分子特征和在细菌感染中的响应情况，实验利用RACE技术克隆获得了2 277 bp的SpHSP60 cDNA序列，预测编码575个氨基酸，其与脊椎动物具有较高的保守性。齐口裂腹鱼的组织表达模式分析显示，SpHSP60在肝胰脏中表达量最高，血液次之，而在皮肤、肌肉和肠道中表达量低。无乳链球菌感染过程中，血液、肝胰脏、中肾和脾脏的SpHSP60 mRNA表达量在感染后6 h发生显著变化，提示组织中SpHSP60能快速响应感染。肝胰脏和中肾在感染后6～72 h表达量变化均显著高于对照组，而脾脏则显著低于对照组。研究表明，SpHSP60可能通过快速响应参与齐口裂腹鱼对抗细菌感染的过程，研究为肝胰脏和中肾组织中HSP60 mRNA表达量作为齐口裂腹鱼感染无乳链球菌的危险信号分子提供基础数据。

关键词：齐口裂腹鱼 HSP60 无乳链球菌克隆感染

S100A1、HSP60在透明细胞肾细胞癌高级别转化及预后预测中的作用

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临床与实验病理学杂志 2023年第3期39卷 281-286页

作者：王鑫李云霞张伟蒋艳霞李玉军于文娟青岛大学基础医学院病理学系青岛266000 青岛大学附属医院病理科青岛266003 海军第九七一医院病理科青岛266071

目的探讨S100A1、HSP60在透明细胞肾细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,CCRCC)中的表达及在CCRCC高级别转化中的作用。方法应用组织芯片及免疫组化法检测100例单一核级别和22例高、低核级别并存的CCRCC中S100A1和HSP60的表达,分... 详细信息

目的探讨S100A1、HSP60在透明细胞肾细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,CCRCC)中的表达及在CCRCC高级别转化中的作用。方法应用组织芯片及免疫组化法检测100例单一核级别和22例高、低核级别并存的CCRCC中S100A1和HSP60的表达,分析其表达与CCRCC临床病理特征的关系。电镜下观察4例S100A1表达高低不同的CCRCC细胞超微结构特征。结果100例单一核级别CCRCC中,S100A1和HSP60的高表达率分别为43%(43/100)和27%(27/100),两者高表达均与肿瘤坏死、组织学类型及WHO/ISUP核分级相关,两者在单一核级别CCRCC中的表达呈正相关;生存分析显示,S100A1或HSP60高表达组患者术后生存期低于低表达组。22例高、低核级并存的CCRCC中,S100A1、HSP60在高、低级别成分中的表达差异有统计学意义(63.64%vs 27.27%,54.55%vs 18.18%)。电镜下见S100A1高表达肿瘤细胞常染色质丰富,胞质内见多少不一的脂滴空泡;S100A1蛋白阴性肿瘤细胞异染色质增多,块状或边聚,胞质内见较多脂滴空泡及脂质溶酶体。结论S100A1和HSP60在CCRCC中高表达是患者预后不良的重要指标;高、低核级成分并存的CCRCC中两种蛋白的表达与核分级密切相关;S100A1高表达细胞常染色质增多、转录活性增高;S100A1和HSP60表达呈正相关,两者可能对CCRCC的高级别转化具有共同驱动作用,S100A1和HSP60有可能成为肾细胞癌靶向治疗的候选基因。

关键词：肾肿瘤透明细胞肾细胞癌 S100A1 HSP60

热休克蛋白60（HSP60）在心脏发育中的作用研究

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热休克蛋白60（HSP60）在心脏发育中的作用研究

作者：申涛安徽医科大学

学位级别：硕士

先天性心脏病是所有出生缺陷中最为常见的一类,尽管人们在针对先天性心脏病的手术和药物治疗上取得了显著性的进步,但是许多介入性治疗都是保守治疗而不是治愈性的,而且一些幸存者仍然具有明显的血流动力学和电传导的异常,并长期经历心... 详细信息

先天性心脏病是所有出生缺陷中最为常见的一类,尽管人们在针对先天性心脏病的手术和药物治疗上取得了显著性的进步,但是许多介入性治疗都是保守治疗而不是治愈性的,而且一些幸存者仍然具有明显的血流动力学和电传导的异常,并长期经历心血管并发症的困扰。考虑到先天性心脏病的高发性、致死率以及对出生后心血管疾病的诱发等方面的因素,直接针对先天性心脏病发生发展的病理原因的研究显得尤为重要。越来越多的研究表明线粒体功能障碍是心肌细胞功能障碍和死亡的一个重要标志,大量研究也发现线粒体结构、功能等稳态的改变对于心脏发育、胚胎存活及正常的心脏功能十分重要。线粒体分子伴侣作为线粒体蛋白质质量控制系统的重要部分为线粒体结构和功能稳态维持奠定了基础。其中热休克蛋白60(HSP60)是主要存在于线粒体内的分子伴侣蛋白,研究发现编码HSP60基因的突变与人类遗传性疾病相关。针对这些遗传性疾病的研究表明HSP60可能对于神经系统以及全身各组织的正常发育和功能具有重要作用。此外,有研究发现HSP60是成年小鼠心脏结构功能维持及存活的关键调节分子。但是HSP60在心脏发育过程中的具体作用及功能尚不十分清楚。为了探究HSP60在胚胎心脏发育过程中的作用。本研究引入了HSP60条件敲除小鼠(HSP60),并与心肌细胞特异性表达Cre重组酶的α-MHC-Cre转基因小鼠杂交,从而实现在小鼠心肌细胞中特异性敲除HSP60。本研究首先发现,利用α-MHC-Cre重组酶在小鼠心肌细胞中特异性敲除HSP60(α-MHC-Cre,HSP60)会引起小鼠心脏发育异常,主要表现为心脏心室壁变薄,同时心肌细胞的增殖速率下降,最后导致小鼠在胚胎期14.5天(E14.5)到E16.5天出现大量死亡。此外,为了探究HSP60调控心脏发育的分子机制,本研究通过RNA-Seq技术对HSP60敲除之后的转录组水平变化进行了分析,结果表明HSP60敲、除之后影响了p21基因的表达以及PI3K-AKT信号通路,进而参与调控心肌细胞的增殖。综上所述,本研究通过构建心肌细胞中特异性敲除HSP60小鼠,证明了HSP60在小鼠胚胎心脏发育的过程中具有关键的作用:小鼠心肌细胞中敲除HSP60会导致小鼠胚胎心脏发育异常及胚胎死亡。同时我们还发现HSP60敲除以后可以调控PI3K-AKT信号通路以及p21的表达,进而影响心肌细胞的增殖。本研究为先天性心脏病的发展机制提供了新的实验证据。

关键词：先天性心脏病 HSP60 线粒体心肌细胞 p21 细胞增殖

致病性嗜水气单胞菌耐受性及其相关蛋白HSP60的分离与鉴定

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养殖与饲料 2024年第6期23卷 1-6页

作者：张杰福建省闽东水产研究所福建宁德352100

[目的]为了了解致病性嗜水气单胞菌的耐受性调控机制。[方法]根据GBT18652—2002《致病性嗜水气单胞菌检验方法》从病鱼病灶上分离获得致病性嗜水气单胞菌,进行耐盐、耐酸碱、耐药性试验及不同环境影响下该菌的菌体蛋白提取,并对差异蛋... 详细信息

[目的]为了了解致病性嗜水气单胞菌的耐受性调控机制。[方法]根据GBT18652—2002《致病性嗜水气单胞菌检验方法》从病鱼病灶上分离获得致病性嗜水气单胞菌,进行耐盐、耐酸碱、耐药性试验及不同环境影响下该菌的菌体蛋白提取,并对差异蛋白进行质谱鉴定。[结果]该致病性嗜水气单胞菌在35‰盐度和pH=6的环境下增长快;对喹诺酮类药物最为敏感,对磺胺类和氯霉素类抗生素具有耐药性;对35~73ku处有明显变化的条带进行蛋白分离,质谱鉴定为HSP60。[结论]该菌的HSP60蛋白受盐度和酸碱度影响,参与耐受性调控。

关键词：致病性嗜水气单胞菌分离耐受性环境 HSP60

Neuritin与HSP60表达水平与肝细胞凋亡调节的相关性

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中国老年学杂志 2020年第20期40卷 4373-4378页

作者：武文博朱美意欧阳军石河子大学医学院第一附属医院急诊外科新疆石河子832000

目的探讨Neuritin与HSP60在肝细胞中的表达水平及对细胞凋亡调节的分子机制。方法将含有肝细胞的培养皿,随机分为4大组,分别为Neuritin低表达组、Neuritin高表达组、HSP60低表达组、HSP60高表达组。每个大组分为5个小组,对照组(n=4)和... 详细信息

目的探讨Neuritin与HSP60在肝细胞中的表达水平及对细胞凋亡调节的分子机制。方法将含有肝细胞的培养皿,随机分为4大组,分别为Neuritin低表达组、Neuritin高表达组、HSP60低表达组、HSP60高表达组。每个大组分为5个小组,对照组(n=4)和实验组(n=16),对照组不做任何处理,Neuritin低表达组分别给予0.1、0.3、0.5、0.7μg/ml的Neuritin抗体;Neuritin高表达组分别给予0.5、1.0、1.5、2.0μg/ml的Neuritin蛋白;HSP60低表达组分别给予0.6、0.8、1.0、1.2μg/ml的HSP60抗体;HSP60高表达组分别给予10×10^-3、50×10^-3、100×10^-3、200×10^-3μg/ml的HSP60蛋白,BRI肝细胞培养48 h后使用Western印迹测定Neuritin、HSP60及Caspase-3在肝细胞中的表达水平。结果与对照组相比,Neuritin低表达、高表达各剂量组Neuritin相对表达程度渐渐减低、增高,差异均有统计学意义(PHSP60相对表达水平差异无统计学意义(P>0.05);Caspase-3相对表达水平逐渐增高、减低,差异有统计学意义(PHSP60低表达、高表达各剂量组HSP60相对表达程度渐渐减低和增高,差异有统计学意义(P0.05);Caspase-3相对表达量渐渐增高和减低,差异有统计学意义(PHSP60表达量与Caspase-3表达量呈明显负相关性(r=-0.996,PHSP60蛋白的表达变化与凋亡蛋白Caspase-3呈现相反的变化趋势,提示Neuritin和HSP60可能通过某种协同作用共同参与肝细胞的抗凋亡调控机制。

关键词： Neuritin HSP60 Caspase-3 肝细胞凋亡

靶向HSP60的金纳米颗粒及其对乳腺癌肿瘤细胞的光热杀伤作用研究

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靶向HSP60的金纳米颗粒及其对乳腺癌肿瘤细胞的光热杀伤作用研究

作者：孙博北京协和医学院

学位级别：硕士

目的:乳腺癌已超过肺癌成为全球最常见的癌症,且患者年龄趋于年轻化,但是,在治疗上仍亟需研发更为有效的治疗方法,提高患者生存率。根据分子分型,乳腺癌可分为以下四种:LuminalA型、LuminalB型、HER-2过表达型和三阴性乳腺癌。目前,乳... 详细信息

目的:乳腺癌已超过肺癌成为全球最常见的癌症,且患者年龄趋于年轻化,但是,在治疗上仍亟需研发更为有效的治疗方法,提高患者生存率。根据分子分型,乳腺癌可分为以下四种:LuminalA型、LuminalB型、HER-2过表达型和三阴性乳腺癌。目前,乳腺癌的治疗方法主要有:手术、放疗、化疗、内分泌治疗（针对表达雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）的乳腺癌）和靶向治疗（抗HER-2治疗）。三阴性乳腺癌由于其表面雌激素受体、孕激素受体和HER2均低表达,因而缺乏有效的靶向药物。开发三阴性乳腺癌的潜在治疗靶点具有重要的科学研究意义和临床应用价值。热休克蛋白60（Heat Shock Protein 60,HSP60）是一种重要的分子伴侣,属于热休克蛋白（Heat Shock Protein,hsp）家族,存在于所有的原核生物和真核生物的线粒体、高尔基体、细胞质和细胞膜上。HSP60在肿瘤发生中能够抑制线粒体凋亡,并且促进肿瘤组织中的血管生成和癌症转移。越来越多的研究表明,HSP60在乳腺癌组织或细胞中的含量显著高于正常的组织或细胞。从正常乳腺上皮细胞到原位导管癌再到侵袭性乳腺癌,HSP60的含量逐渐增加。这表明,HSP60可能成为乳腺癌的诊断标志物或潜在的治疗靶点。所在实验室前期研发出了一种能够与HSP60特异性结合的多肽（命名为P17）。本研究拟将此靶向多肽与金纳米颗粒（Gold nanoparticles,AuNPs）相结合,构建光热治疗用靶向金纳米颗粒,在小鼠三阴性乳腺癌细胞株4T1细胞上研究其光热杀伤效果。金纳米颗粒作为光热转换剂具有光热转换效率高的优势,同时它的生物相容性好,表面易于修饰;而光热疗法具有高选择性和低副作用的优点,是一种新的肿瘤治疗方法。方法:首先,使用柠檬酸钠还原氯金酸HAuCl4制备AuNP;使用透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope,TEM）对 AuNP 的形貌进行表征。使用人工合成多肽P17修饰AuNP,制备得到连接了 P17的AuNP（AuNP-P17）,通过紫外-可见-近红外吸收光谱（UV-vis-NIR spectroscopy）获得AuNP-P1 7的特征光谱;通过动态光散射方法（Dynamic Light Scattering,DLS）检测AuNP-P17的粒径和Zeta电势。使用流式细胞术检测小鼠乳腺癌细胞株4T1细胞表面和细胞内的HSP60的表达、P17与4T1细胞的结合。使用倒置显微镜观察AuNP和AuNP-P17被4T1细胞的摄取情况。使用便携式热电偶温度计测定4T1细胞与AuNP或AuNP-P17孵育24 h后经激光照射2或4 min的温度。采用CCK-8试剂盒测定不同浓度P17、AuNP和AuNP-P17在光照前后对4T1细胞活性的影响。结果:AuNP呈颗粒状,大小均匀,并且分散性好;在528 nm左右具有经典SPR单峰。当与P17共孵育后,随P17浓度的增加,AuNP的SPR吸收峰强度有所降低,且长波处吸收值抬高,表明P17连接到AuNP上。DLS结果显示,AuNP表面连接P17后,平均粒径随着P17比例增加而增大,从（51.8±0.1）nm变为（52.1± 2.2）、（60.8±1.9）和（64.5 ± 2.5）nm。Zeta电势从（-29.3± 0.3）mV变为（-29.6±0.6）、（-26.4±0.4）和（-26.9±2.5）mV。流式细胞术结果显示,在4T1细胞膜和细胞内均有HSP60表达。P17能够与4T1细胞膜上和细胞内HSP60有效结合。细胞活性实验结果表明,P17在20μM范围以下对4T1细胞的活性几乎没有影响;与此同时,在金原子浓度不超过100μg/mL浓度下,AuNP或AuNP-P17对4T1细胞的活性均无显著影响。这些结果说明,P17、AuNP和AuNP-P17本身具有良好的生物相容性。倒置显微镜观察结果显示,在两种纳米颗粒与4T1细胞共孵育4、6或8h时,AuNP处理组与对照组相比,细胞颜色无明显变化,表明AuNP与4T1细胞的结合不明显;而AuNP-P17处理组的细胞中可见金纳米颗粒的红色,说明AuNP-P17与4T1细胞的结合非常明显,P17促进了4T1细胞对金纳米颗粒的摄取,表明AuNP-P17具有靶向性。当4T1细胞在与AuNP和AuNP-P17共孵育后,被激光照射时其培养基温度发生变化,AuNP-P17处理组在激光照射4分钟后,培养基的温度从（22.9±0.4）℃升高到（52.0±3.9）℃;对于AuNP处理组,细胞培养基的温度只升高到（47.2±0.6）℃,而对照组仅升温到（38.2±2.4）℃。细胞活性检测结果显示,在激光照射2分钟时,AuNP、AuNP-P17处理组的细胞活性与对照组相比,无显著性变化。当激光照射4分钟后,AuNP-P17处理组细胞的相对活性降低到（1.3±2.8）%,AuNP处

关键词： HSP60 金纳米颗粒光热治疗 P17 4T1细胞

Neuritin与HSP60在急性肝损伤修复中的表达变化及意义

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实用医学杂志 2018年第12期34卷 1959-1964,1969页

作者：王朝阳朱美意欧阳军张宏伟石河子大学医学院第一附属医院普通外科新疆石河子832000

目的探讨Neuritin与HSP60在肝损伤修复过程中的表达变化以及可能的分子机制,为研究肝损伤修复提供实验基础。方法将48只Sprague-Dawley(SD)大鼠,随机分为空白组(n=6)和实验组(n=42),空白组不做任何处理,实验组均行70%肝左叶切除以诱导... 详细信息

目的探讨Neuritin与HSP60在肝损伤修复过程中的表达变化以及可能的分子机制,为研究肝损伤修复提供实验基础。方法将48只Sprague-Dawley(SD)大鼠,随机分为空白组(n=6)和实验组(n=42),空白组不做任何处理,实验组均行70%肝左叶切除以诱导急性肝损伤,并于术后6、12、24、48 h和3、7、14 d再次切除残余肝左叶,采用免疫印迹技术(Western blot)检测Neuritin与HSP60在相应时间点肝组织中的表达变化差异,行苏木精-伊红染色(HE)观察各时间点肝脏病理学改变,同时于尾缘静脉采血检测ATL和AST水平变化。结果 (1)与空白组相比,实验组于术后6、12、24、48 h血清ALT、AST含量持续增高并于48 h达到高峰,3 d开始降低、7 d几乎接近正常,差异具有统计学意义(PHSP60的表达变化呈现截然相反的差异,Neuritin的表达与肝损伤的加重或修复存在显著的负相关性(PHSP60的表达与肝损伤的加重或修复存在显著的正相关性(PHSP60的表达逐渐升高,并在第48小时达到最高;(3)Neuritin与HSP60的表达变化与肝损伤修复过程密切相关(P<0.001),呈现出一定变化规律,两者可能通过某种相互作用而产生相应的生物效应,共同参与并促进了肝损伤的再生修复。

关键词：肝损伤肝修复大鼠 Neuritin HSP60

热应激对猪睾丸HSP60和hsp90表达与定位的影响

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动物医学进展 2019年第12期40卷 12-17页

作者：申慧范小瑞冀睿岳美杉刘怡慧李清宏贺俊平山西农业大学动物科技学院

建立了环境热应激和睾丸局部热处理猪动物模型,用qRT-PCR和Western blot法检测了热休克蛋白家族成员HSP60和hsp90 mRNA和蛋白表达水平的变化,用免疫组织化学方法检测HSP60和hsp90在猪睾丸的组织细胞学定位。qRT-PCR和Western blot结果显... 详细信息

建立了环境热应激和睾丸局部热处理猪动物模型,用qRT-PCR和Western blot法检测了热休克蛋白家族成员HSP60和hsp90 mRNA和蛋白表达水平的变化,用免疫组织化学方法检测HSP60和hsp90在猪睾丸的组织细胞学定位。qRT-PCR和Western blot结果显示,与对照组相比,环境热应激组和局部睾丸热应激组HSP60和hsp90 mRNA和蛋白的表达量均显著升高。免疫组织化学结果显示,对照组HSP60主要表达在精母细胞和支持细胞的细胞质,环境热应激组和局部睾丸热应激组HSP60免疫阳性从精母细胞的细胞质转移至精原细胞的细胞核。热处理前后hsp90定位于精原细胞和长形精子细胞。环境高温热应激和局部睾丸热刺激导致HSP60和hsp90表达升高,提示HSP60和hsp90在热应激猪睾丸精子发生过程中发挥重要作用。

关键词：热应激猪睾丸精子发生 HSP60 hsp90

HSP60对天祝白牦牛原代培养的支持细胞增殖的影响

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核农学报 2017年第8期31卷 1486-1493页

作者：阮崇美王相生张勇马友记胡俊杰赵兴绪甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 甘肃农业大学动物科技学院甘肃兰州730070

HSP60对动物的睾丸发育、精子发生起着重要的调控作用。支持细胞是睾丸内唯一与生精细胞直接发生联系的体细胞,对精子发生、成熟等过程有直接影响。为研究HSP60对白牦牛睾丸支持细胞增殖的调控作用,本试验通过组合酶消化法分离培养白牦... 详细信息

HSP60对动物的睾丸发育、精子发生起着重要的调控作用。支持细胞是睾丸内唯一与生精细胞直接发生联系的体细胞,对精子发生、成熟等过程有直接影响。为研究HSP60对白牦牛睾丸支持细胞增殖的调控作用,本试验通过组合酶消化法分离培养白牦牛原代支持细胞,通过差速贴壁法和Tris-HCL低渗缓冲液进行纯化处理,运用免疫荧光染色和Feulgen染色鉴定细胞,经流式细胞仪检测得到96.2%高纯度支持细胞。构建HSP60过表达载体p IRES2-EGFP-HSP60,合成靶向siRNA沉默HSP60,瞬时转染支持细胞后,经qPCR检测发现过表达组HSP60 mRNA在24、48、72 h等时间点均上调,沉默组HSP60 mRNA在24、48、72 h等时间点均下调。MTS试验检测细胞的增殖情况,过表达HSP60组中的支持细胞增殖效率各时间点均显著高于空白对照组和空质粒组;沉默HSP60组中支持细胞的增值率各时间点均低于空白对照组和阴性对照组,但差异不显著。qPCR检测细胞增殖标志基因细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和增殖细胞核抗原(PCNA),结果表明,过表达HSP60组的cyclin D1基因在48 h时的表达显著高于空白对照组和空质粒组,PCNA基因的表达在24、48、72 h时均显著高于空白对照组和空质粒组;沉默HSP60组cyclin D1基因和PCNA基因的表达在24、48、72 h时均低于空白对照组和阴性对照组,但差异不显著。综上,HSP60在白牦牛睾丸支持细胞增殖调控中的作用是正向调控。本试验结果为进一步研究HSP60对白牦牛睾丸发育和精子发生的影响奠定了理论基础。

关键词： HSP60 天祝白牦牛支持细胞细胞增殖