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当归芍药散含药血清对Et-1诱导的hsc-t6细胞内p-MLCⅡ,MLCⅡ蛋白表达的影响

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中国实验方剂学杂志 2019年第2期25卷 14-19页

作者：蒋沙莎潘永福杨沫王运来尹丹丹许钒安徽中医药大学药学院中药复方安徽省重点实验室

目的:探究内皮素-1(endothelin-1,Et-1)对大鼠肝星状细胞hsc-t6内磷酸化肌球蛋白轻链Ⅱ(phosphorylated myosin light chainⅡ,p-MLCⅡ),肌球蛋白轻链Ⅱ(myosin light chainⅡ,MLCⅡ)蛋白表达的影响及当归芍药散(Danggui Shaoyao San)含药血清对其的干预作用。方法:将hsc-t6细胞种板后,各组每孔加入DMEM和终体积分数分别为2. 5%,5%,10%,15%,20%的空白大鼠血清,采用噻唑蓝(Mtt)比色法测定hsc-t6细胞的活力,筛选出适合的大鼠血清浓度范围;将细胞分为空白血清组(5%,10%,15%)和当归芍药散含药血清组(5%,10%,15%),酶联免疫吸附测定(ELISA)检测基础状态下细胞培养上清液中Et-1的含量;细胞分为空白血清组(10%),当归芍药散含药血清低、中、高剂量组(5%,10%,15%),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测基础状态下细胞培养上清液中Et-1 mRNA的水平;将细胞分为空白血清组(10%),模型组(10%),当归芍药散含药血清低、中、高剂量组(5%,10%,15%),Y-27632抑制剂组(100μmol·L^-1),除空白血清组外,其余各组均加入10 nmol·L^-1Et-1诱导hsc-t6细胞,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Et-1诱导的hsc-t6细胞中p-MLCⅡ,MLCⅡ蛋白表达。结果:选用血清浓度为5%,10%,15%作为含药血清浓度。与空白血清组比较,当归芍药散含药血清组明显降低基础状态下Et-1含量,Et-1 mRNA相对含量(P 细胞内p-MLCⅡ,MLCⅡ蛋白表达水平均显著升高(P 632抑制剂组均可明显下调p-MLCⅡ,MLCⅡ蛋白表达(P t-1的含量,抑制Et-1的自分泌,从而下调p-MLCⅡ,MLCⅡ蛋白表达。

关键词：当归芍药散含药血清 hsc-t6细胞内皮素-1(Et-1) 磷酸化肌球蛋白轻链Ⅱ(p-MLCⅡ)

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褐藻素对hsc-t6细胞生长和凋亡的影响

中国病理生理杂志 2016年第6期32卷 1132-1137页

作者：戴启心宋伟张润锦王恺邹书兵南昌大学第二附属医院肝胆外科南昌330006

目的：探讨褐藻素对hsc-t6细胞生长和凋亡的影响。方法：将hsc-t6细胞分为空白对照组、阴性对照组及药物组,用不同浓度的褐藻素培养hsc-t6细胞。采用CCK-8检测在24 h、48 h和72 h褐藻素对hsc-t6细胞活力变化的影响,流式细胞术检测细胞... 详细信息

目的：探讨褐藻素对hsc-t6细胞生长和凋亡的影响。方法：将hsc-t6细胞分为空白对照组、阴性对照组及药物组,用不同浓度的褐藻素培养hsc-t6细胞。采用CCK-8检测在24 h、48 h和72 h褐藻素对hsc-t6细胞活力变化的影响,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blot法分别检测Bcl-2和Bax的蛋白表达。结果：与空白对照组相比,CCK-8检测的结果表明,褐藻素在一定浓度范围内（15~75μmol/L）内能显著抑制hsc-t6细胞的活力（P〈0.01）,呈剂量和时间依赖性。流式细胞术结果显示,24 h后高浓度（60μmol/L）组对hsc-t6细胞周期影响的效果显著（P〈0.01）,G_1期比例显著下降（P〈0.01）,G_2期和S期的比例显著升高（P〈0.01）,48 h后低浓度（15μmol/L）和中浓度（30μmol/L）组对hsc-t6细胞周期的阻滞作用增强,呈剂量依赖性（P〈0.05）;低、中、高浓度组早期凋亡率和总凋亡率都显著升高,呈剂量依赖性（P〈0.05）。蛋白印迹法实验结果表明,低、中、高浓度组Bax的蛋白表达显著上调,中、高浓度组Bcl-2的蛋白表达显著下调（P〈0.05）。结论：褐藻素可以通过使细胞周期阻滞于S期和G2期而抑制hsc-t6细胞生长;同时能通过下调Bcl-2和上调Bax的表达而诱导hsc-t6细胞凋亡。

关键词：褐藻素 hsc-t6细胞细胞活力细胞周期细胞凋亡 Bcl-2 Bax

积雪草酸抑制hsc-t6细胞Ⅰ型胶原蛋白表达

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第四军医大学学报 2007年第13期28卷 1178-1180页

作者：汤丽霞杨光谭家驹佛山市第一人民医院临床研究所广东佛山528000

目的:研究外源性tGF-β对肝星状细胞系(hsc-t6)的激活作用,以及积雪草酸抑制hsc-t6细胞Ⅰ型胶原蛋白合成的药理作用.方法:用LDH和Mtt实验测定积雪草酸对hsc-t6细胞的细胞毒性和细胞增殖的影响.检测hsc-t6细胞受不同剂量和不同时间tGF-... 详细信息

目的:研究外源性tGF-β对肝星状细胞系(hsc-t6)的激活作用,以及积雪草酸抑制hsc-t6细胞Ⅰ型胶原蛋白合成的药理作用.方法:用LDH和Mtt实验测定积雪草酸对hsc-t6细胞的细胞毒性和细胞增殖的影响.检测hsc-t6细胞受不同剂量和不同时间tGF-β刺激后表达Ⅰ型胶原蛋白的最佳剂量和时间.以不同剂量的积雪草酸作用于tGF-β活化的hsc-t6细胞,提取细胞总蛋白,以Western Blot方法检测积雪草酸对tGF-β活化的hsc-t6细胞Ⅰ型胶原蛋白表达的影响.结果:tGF-β刺激hsc-t6细胞表达Ⅰ型胶原蛋白的最佳剂量为1ng/mL,最佳时间24h.10～30μmol/L积雪草酸可以抑制tGF-β诱导的hsc细胞Ⅰ型胶原蛋白表达.结论:外源性tGF-β可激活hsc-t6细胞表达Ⅰ型胶原蛋白;积雪草酸抑制hsc-t6细胞Ⅰ型胶原蛋白表达.

关键词：积雪草酸 Ⅰ型胶原蛋白 hsc-t6细胞转化生长因子-β

三甲益肝颗粒含药血清对hsc-t6细胞tGF-β1 mRNA和tIMP-1 mRNA表达的影响

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第四军医大学学报 2009年第18期30卷 1718-1720页

作者：杨道坤梁海军申保生孙屹峰乔汉臣新乡医学院第一附属医院感染疾病科河南新乡453100

目的:观察三甲益肝颗粒(S-JG)含药血清对肝星状细胞hsc-t6细胞转化生长因子β1(tGF-β1)mRNA和基质金属蛋白酶组织抑制因子1(tIMP-1)mRNA表达的影响.方法:不同的剂量的三甲益肝颗粒(1.7,3.4和6.8 g/kg)灌胃大鼠,制备含药血清,作用于hsc... 详细信息

目的:观察三甲益肝颗粒(S-JG)含药血清对肝星状细胞hsc-t6细胞转化生长因子β1(tGF-β1)mRNA和基质金属蛋白酶组织抑制因子1(tIMP-1)mRNA表达的影响.方法:不同的剂量的三甲益肝颗粒(1.7,3.4和6.8 g/kg)灌胃大鼠,制备含药血清,作用于hsc-t6细胞48 h,以逆转录定量PCR方法测定其对hsc-t6细胞tGF-β1 mRNA和tIMP-1mRNA表达的影响.结果:水飞蓟宾组,三甲益肝颗粒低、中、高剂量组的tGF-β1 mRNA,tIMP-1 mRNA表达水平分别为1.65±0.05,1.67±0.04,1.23±0.07,0.72±0.02,2.23±0.12,2.17±0.12,1.41±0.03,0.49±0.09,与对照组的tGF-β1 mRNA和tIMP-1 mRNA表达水平(2.11±0.11,2.72±0.11)比较,具有显著性差异(Phsc-t6细胞tGF-β1 mRNA,tIMP-1 mRNA表达水平,从分子水平上证明其抗肝纤维化的作用.

关键词：三甲益肝颗粒 hsc-t6细胞细胞转化生长因子β1 基质金属蛋白酶组织抑制因子1 逆转录PCR

4-羟基苯并恶唑-2-酮对hsc-t6细胞增殖的影响

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时珍国医国药 2011年第10期22卷 2371-2372页

作者：林军樊惠广西医科大学广西南宁530021

目的研究4-羟基苯并恶唑-2-酮(HBOA)对hsc-t6细胞增殖的影响。方法 hsc-t6细胞分别在药物处理组(HBOA浓度分别为0.008,0.04,0.2,1,5 mg/ml)及对照组(单纯培养液)中体外培养32 h。应用四甲基偶氮唑盐法(Mtt法)检测细胞增殖情况;荧光倒置... 详细信息

目的研究4-羟基苯并恶唑-2-酮(HBOA)对hsc-t6细胞增殖的影响。方法 hsc-t6细胞分别在药物处理组(HBOA浓度分别为0.008,0.04,0.2,1,5 mg/ml)及对照组(单纯培养液)中体外培养32 h。应用四甲基偶氮唑盐法(Mtt法)检测细胞增殖情况;荧光倒置显微镜下观察对照组和药物处理组hsc-t6细胞的形态学变化。结果药物处理组hsc-t6细胞的增殖率均低于对照组,浓度为0.008 mg/ml的药物处理组与对照组相比无显著性差别(P>0.05);其他药物处理组分别与对照组比较能显著地抑制细胞增值(Phsc细胞的增殖抑制率均随着药物作用浓度的升高而逐渐升高;经吖啶橙染色后,在荧光倒置显微镜下观察,均可见细胞数量减少、体积缩小、核破裂、核浓缩等变化,且随着作用浓度的增加变化更加明显。结论 HBOA对hsc-t6细胞具有抑制增殖的功效。

关键词： 4-羟基苯并恶唑-2-酮 hsc-t6细胞吖啶橙

复方861对hsc-t6细胞基质分解素1mRNA表达水平影响的研究

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临床肝胆病杂志 2002年第3期18卷 168-170页

作者：阴赪宏马红王爱民马雪梅贾继东王宝恩首都医科大学附属北京友谊医院肝病研究中心北京100050 解放军252医院实验中心保定071000

为观察复方 86 1对hsc -t6细胞基质分解素 1(MMP3 )mRNA表达水平的影响 ,复方 86 1以 0 2 5mg/ml、0 5mg/ml、1 0mg/ml等浓度作用于hsc -t6细胞 48小时 ,以逆转录定量PCR方法测定其对hsc -t6细胞MMP3 mRNA表达水平的影响。结果表明 ,... 详细信息

为观察复方 86 1对hsc -t6细胞基质分解素 1(MMP3 )mRNA表达水平的影响 ,复方 86 1以 0 2 5mg/ml、0 5mg/ml、1 0mg/ml等浓度作用于hsc -t6细胞 48小时 ,以逆转录定量PCR方法测定其对hsc -t6细胞MMP3 mRNA表达水平的影响。结果表明 ,复方 86 10 2 5mg/ml、0 5mg/ml、1 0mg/ml等不同浓度的hsc -t6细胞mRNA表达水平依次为 2 75± 0 35、3 0 0± 0 0 1、3 5 0± 0 71,与空白对照组比较 ,可明显提高MMP3 mRNA表达水平 (P 6 1提高hsc -t6细胞MMP3 mRNA表达水平 ,可能是其促进胶原降解 ,抗肝纤维化的作用机理之一。

关键词：表达水平基质分解素复方861 hsc-t6细胞 MMP3 mRNA 逆转录PCR 肝纤维化

褐藻素对hsc-t6细胞生长和凋亡的影响及相关机制的研究

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褐藻素对HSC-T6细胞生长和凋亡的影响及相关机制的研究

作者：戴启心南昌大学

学位级别：硕士

目的:探讨褐藻素(fucoxanthin,FU)对hsc-t6细胞生长和凋亡的影响及相关机制的研究。方法:将hsc-t6细胞分为空白对照组、阴性对照组及药物组,用不同浓度的褐藻素培养hsc-t6细胞。采用CCK-8检测在24 h、48 h和72 h褐藻素对hsc-t6细胞活力... 详细信息

目的:探讨褐藻素(fucoxanthin,FU)对hsc-t6细胞生长和凋亡的影响及相关机制的研究。方法:将hsc-t6细胞分为空白对照组、阴性对照组及药物组,用不同浓度的褐藻素培养hsc-t6细胞。采用CCK-8检测在24 h、48 h和72 h褐藻素对hsc-t6细胞活力的变化,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,蛋白印迹法分别检测Bcl-2和Bax的蛋白表达。结果:与空白对照组相比,CCK-8检测的结果表明,褐藻素在一定浓度范围内(155μmol/L)内能显著抑制hsc-t6细胞的活力(P细胞术检测结果显示,24 h后高浓度(60μmol/L)组对hsc-t6细胞周期影响的效果显著(Phsc-t6细胞周期的阻滞作用增强,呈剂量依赖性(Phsc-t6细胞周期阻滞于S期和G2期抑制hsc-t6细胞生长;同时能通过下调Bcl-2和上调Bax的表达诱导hsc-t6细胞凋亡。

关键词：褐藻素 hsc-t6细胞细胞活力细胞周期凋亡 Bcl-2 Bax

基于PI3K/Akt和tLR4/NF-κB信号通路研究异牡荆素对hsc-t6细胞的抑制作用及机制

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基于PI3K/Akt和TLR4/NF-κB信号通路研究异牡荆素对HSC-T6细胞的...

作者：雅凤广西医科大学

学位级别：硕士

目的:本研究以PI3K/Akt和tLR4/NF-κB信号通路为靶标,探讨壮药天胡荽单体活性成分异牡荆素（Isovitexin）对大鼠肝星状细胞（hsc-t6）的抑制作用及其机制。方法:将hsc-t6细胞分为6组:正常对照组、模型组（20μg/L PDGF-BB）、阳性药组... 详细信息

目的:本研究以PI3K/Akt和tLR4/NF-κB信号通路为靶标,探讨壮药天胡荽单体活性成分异牡荆素（Isovitexin）对大鼠肝星状细胞（hsc-t6）的抑制作用及其机制。方法:将hsc-t6细胞分为6组:正常对照组、模型组（20μg/L PDGF-BB）、阳性药组（20μmol/l LY294002）、异牡荆素高、中、低剂量组（120、60、30μmol/l Isovitexin）。按照实验分组对细胞进行相应处理,随后进行以下实验:***对hsc-t6细胞增殖的影响CCK-8法检测Isovitexin对hsc-t6细胞的毒性,然后检测Isovitexin对hsc-t6细胞增殖活化的影响;此外,试剂盒检测Isovitexin对hsc-t6细胞ALt、ASt活性的影响。***对hsc-t6细胞炎症的影响ELISA试剂盒检测Isovitexin对hsc-t6细胞炎症因子IL-1β、tNF-α生成水平的影响,评估Isovitexin在炎症反应中的作用。***对hsc-t6细胞凋亡的影响AO/EB实验观察Isovitexin对hsc-t6细胞凋亡形态学的影响;流式细胞术检测Isovitexin对hsc-t6细胞凋亡率的影响;Western blot实验检测Isovitexin对hsc-t6细胞内凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的影响。***对hsc-t6细胞内胶原沉积的影响Western blot实验检测Isovitexin对hsc-t6细胞内α-SMA、Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ胶原相关蛋白的表达情况,并且也检测细胞内金属基质酶MMP-2和tIMP-1蛋白的表达情况。***对hsc-t6细胞PI3K/Akt信号通路蛋白的影响Western blot实验检测细胞内PI3K/Akt通路相关蛋白Akt、PI3K、m-tOR和P70S6K的表达及其磷酸化水平的表达情况;Rt-q PCR检测Akt、PI3K m RNA表达,评估Isovitexin对hsc-t6细胞PI3K/Akt信号通路的调控作用。***对hsc-t6细胞tLR4/NF-κB信号通路蛋白的影响Western blot实验检测细胞内tLR4/NF-κB通路相关蛋白p-NFκBp65、NF-κBp65、tLR4、My D88的表达水平,探究Isovitexin对hsc-t6细胞的潜在的保护作用机制,Rt-q PCR检测NFκBp65m RNA的表达。结果:***能有效抑制hsc-t6细胞增殖CCK-8实验结果经过SPSS计算得出Isovitexin对hsc-t6细胞作用的24h的IC50为180.65μmol/l;而细胞增殖实验显示,20μg/L PDGF-BB刺激明显促进hsc-t6细胞增殖（P＜0.05）,Isovitexin对hsc-t6细胞进行干预后,hsc-t6细胞增殖受到了不同程度的抑制,随着药物浓度增加,抑制效果也相应增加;此外,生化试剂盒检测hsc-t6细胞ALt、ASt释放结果显示,模型组中可见大量的ALt、ASt释放,Isovitexin治疗可明显抑制ALt、ASt的释放。***能抑制hsc-t6细胞炎症反应ELISA实验结果显示,PDGF-BB刺激可以促进hsc-t6细胞内IL-1β、tNF-α的释放增加,而Isovitexin能有效的抑制这些炎症因子的释放。表明,Isovitexin可以通过减少炎症因子的生成从而抑制炎症反应的进一步发生。***能明显诱导hsc-t6细胞凋亡,减少肝细胞受损AO/EB结果显示,PDGF-BB刺激对hsc-t6细胞凋亡无明显影响。Isovitexin处理组能够明显促进活化的hsc-t6细胞凋亡,且随着给药浓度的增加,促进凋亡作用也明显增强（P＜0.05）;流式细胞术检测细胞凋亡率也显示出了相似的结果;Western blot实验结果显示,Isovitexin能显著上调Bax、Caspase 3/8/9的表达水平,抑制Bcl-2的表达（P＜0.05）。表明,Isovitexin可能通过调控凋亡相关蛋白表达,抑制hsc-t6细胞活化,促进细胞凋亡,从而起到抗肝纤维化的作用。***能显著抑制hsc-t6细胞内胶原生成、沉积Western blot实验结果显示,相对于正常对照组,20μg/L PDGF-BB刺激后,hsc-t6细胞内α-SMA、Collagen-I和Collagen-Ⅲ蛋白表达明显增加（P＜0.05）,而经过Isovitexin治疗之后,α-SMA、Collag

关键词：肝纤维化异牡荆素 hsc-t6细胞 PI3K/Akt信号通路 tLR4/NF-κB信号通路

广西眼镜蛇毒细胞毒素-4N的分离纯化及其对hsc-t6细胞ERK信号通路的影响

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广西眼镜蛇毒细胞毒素-4N的分离纯化及其对HSC-T6细胞ERK信号通路...

作者：孙林广西医科大学

学位级别：硕士

目的:为了获得高纯度的眼镜蛇毒细胞毒素-4N(Cytotoxin-4N,CtX-4N),探索眼镜蛇毒中细胞毒素-4N对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,hsc-t6)的增殖抑制作用和CtX-4N通过ERK信号通路对hsc-t6细胞凋亡的影响,从而阐明CtX-4N通过ERK... 详细信息

目的:为了获得高纯度的眼镜蛇毒细胞毒素-4N(Cytotoxin-4N,CtX-4N),探索眼镜蛇毒中细胞毒素-4N对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,hsc-t6)的增殖抑制作用和CtX-4N通过ERK信号通路对hsc-t6细胞凋亡的影响,从而阐明CtX-4N通过ERK信号通路诱导肝星状细胞凋亡的机制。方法:采用DEAE-SepharoseCL-6B阴离子交换柱、SpehadexG-50凝胶层析柱、Macro-prep High S阳离子交换柱结合的方法对眼镜蛇毒蛋白进行分离纯化。采用hsc-t6增殖抑制实验对每一步分离后的各峰蛋白CtX-4N进行活性检测。收集活性最强的蛋白峰,在用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定其纯度。采用蛋白质谱法鉴定其成分及分子量大小。用CCK-8方法检测不同浓度的CtX-4N对hsc-t6的增殖抑制作用。采用流式细胞术检测CtX-4N对hsc-t6细胞凋亡的影响。采用Western-Blot检测CtX4-N作用hsc-t6细胞不同时间后,ERK信号通路中ERK1/2的磷酸化水平的变化;以及在加入抑制剂PD98059处理hsc-t6细胞后,ERK信号通路中ERK1/2磷酸化水平的变化。抑制剂实验分组:空白对照组、CtX-4N组、抑制剂组和CtX-4N+抑制剂组。结果:通过DEAE-SepharoseCL-6B阴离子交换柱、SpehadexG-50凝胶层析柱、Macro-prep High S阳离子交换柱分离纯化后得到一个电泳纯度的蛋白,蛋白质谱鉴定为CtX-4N,分子量约为9.605 KDa。不同浓度的CtX-4N对hsc-t6细胞具有增殖抑制作用,随着浓度的增加而增强,最小抑制浓度为2μg/mL,呈剂量-效应关系,IC50为(12.836±0.045)μg/mL。不同浓度的CtX-4N对hsc-t6细胞的凋亡作用随着浓度的增加而增强,且诱导hsc-t6凋亡的最小浓度为4μg/mL。以4μg/mL的CtX-4N作用hsc-t6不同时间后,各时间点的ERK1/2蛋白表达没有变化,而磷酸化ERK1/2蛋白的表达一开始是随着作用时间的延长而表达增加,作用10min后磷酸化ERK1/2表达水平最高,随后就开始降低,到60min后其表达低于对照组(P﹤0.05)。以10μmol/L的PD98059和4μg/mL的CtX-4N作用hsc-t6细胞后,ERK1/2蛋白的表达没有发生改变,而可以显著的抑制磷酸化ERK1/2的表达。结论:广西眼镜蛇毒通过DEAE-SepharoseCL-6B阴离子交换柱、SpehadexG-50凝胶层析柱、Macro-prep High S阳离子交换柱分离纯化获得电泳纯度的CtX-4N。CtX-4N能使hsc-t6细胞发生凋亡作用,对ERK信号通路中的磷酸化ERK1/2表达具有抑制作用,因此,CtX-4N可能通过ERK信号通路诱导hsc-t6凋亡,来干预肝纤维化的发生和发展。

关键词：细胞毒素 hsc-t6细胞 ERK信号通路 PD98059 细胞凋亡