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敲低hs6st2激活Caspase-3/PARP1信号通路促进非小细胞肺癌细胞凋亡的分子机制研究

敲低HS6ST2激活Caspase-3/PARP1信号通路促进非小细胞肺癌细胞凋...

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作者：郭小朋云南大学

学位级别：硕士

背景:硫酸乙酰肝素6-O-磺基转移酶2(hs6st2)是硫酸乙酰肝素(hs)磺基转移酶家族成员之一,其功能为催化硫酸盐从3-磷酸腺苷5-磷酸硫酸盐(PAPS)转移到硫酸乙酰肝素N-磺基葡糖胺(GLCN)的6-羟基位并赋予hs生物活性。hs参与细胞与细胞基质的... 详细信息

背景:硫酸乙酰肝素6-O-磺基转移酶2(hs6st2)是硫酸乙酰肝素(hs)磺基转移酶家族成员之一,其功能为催化硫酸盐从3-磷酸腺苷5-磷酸硫酸盐(PAPS)转移到硫酸乙酰肝素N-磺基葡糖胺(GLCN)的6-羟基位并赋予hs生物活性。hs参与细胞与细胞基质的相互作用,与多种配体相互作用,影响细胞增殖、分化、粘连和迁移的能力。根据目前的研究已知hs6st2的异常表达可促进多种人类癌症的进展,其中包括卵巢癌、胃癌、结直肠癌和胰腺癌。然而hs6st2在非小细胞肺癌(NSCLC)进展和发展中的生物学功能尚不清楚。方法:本文首先通过mRNA转录组芯片以及癌症基因组图谱(TCGA)数据库基因表达数据综合分析鉴定hs6st2为NSCLC中显著上调基因。为了研究hs6st2在NSCLC细胞中的作用及其机制,首先,本文中采用小干扰RNA技术(siRNA)沉默hs6st2mRNA来降低蛋白表达水平。随后采用CCK-8法、平板克隆形成实验和实时细胞分析仪(Real Time CellAnalyzer,RTCA)对细胞增殖进行测定,采用流式细胞术分析细胞周期分布以及细胞凋亡数的统计,采用RTCA和Transwell小室检测细胞迁移、侵袭能力,免疫印迹法(Western blotting,WB)检测蛋白表达水平。结果:当转染sihs6st2后NCI-H292和GLC细胞增殖、迁移和侵袭能力均受到明显抑制,并阻碍了细胞G1期向S期的转变,同时促进了细胞凋亡。与之相关的细胞周期蛋白Dl、Bcl-2、E-钙粘蛋白和波形蛋白的蛋白表达水平显著下调,同时活化的半胱天冬酶-3(Active Caspase-3)和其剪切底物PARP1的剪切体(Cleaved PARP1)表达水平显著上调。结论:实验结果表明,hs6st2的上调可能通过Caspase-3/PARP1信号通路抑制NSCLC细胞凋亡。因此,可以推测hs6st2可能是治疗非小细胞肺癌的潜在靶点。

关键词： hs6st2 非小细胞肺癌细胞凋亡 Caspase-3/PARP1信号通路

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