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红外光谱和圆二色光谱法研究氰根配位的辣根过氧化物酶(hrp)的热伸展过程

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高等学校化学学报 2001年第7期22卷 1131-1133页

作者：蒋俊光王振新刘长伟刘殿骏杨秀荣董绍俊中国科学院长春应用化学研究所长春130022

Detailed circular dichroism(CD) and Fourier transform infrared(FTIR) studies have been carried out to monitor thermal unfolding of horseradish peroxidase isoenzyme C(hrp) inhibited by CN -(hrp CN). The results suggest that hrp CN is quite different from native hrp with different spin states of Fe of heme and different coordinated states. Cyanide becomes the sixth ligand of Fe(Ⅲ) of heme and the hydrogen binding network is destroyed partly at the same time, which cause the drastic decrease of thermal stability of hrp. The FTIR and Soret CD spectra analysis demonstrate that during the heating process there is an intermediate state(I) which has both partly destroyed secondary and tertiary structures of native hrp, then it is the appearance of protein aggregation state(A) after fully unfolding. The unfolding pathway thus can be shown as follows: IIUA.

关键词：辣根过氧化物酶氰根加合物红外光谱圆二色光谱法热变性 hrp 热伸展

A New Chemiluminescence Amplification Reaction for the Determination of hrp and Labelled hrp

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Chemical Research in Chinese Universities 1993年第4期9卷 314-316页

作者： ZHANG Zhu-jun , ZHANG Su-sen and ZHANG Xin-rong (Department of Chemistry, Shaanxi Normal University, Xian, 710062)

A new chemiluminescence amplification reaction has been developed, which is on the coupling of the oxidation of Eosin by hydrogen peroxide under the catalysis of hrp at pH 3. 5 to the chemiluminescent reaction of luminol and hydrogen peroxide catalyzed by hrp at pH 10 to measure the activity of hrp and labelled-hrp. The detection limit of hrp is 10-10 g/mL. The lowest dilution ratio of HBsAb-hrp is 1 : 1. 8×102 and 1 : 106 for the direct method and coupled method respectively.

关键词： Chemiluminescence hrp Labelled hrp Determination

MAP-H_2O_2-hrp伏安酶联免疫分析测定南方菜豆花叶病毒

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高等学校化学学报 2000年第8期21卷 1200-1204页

作者：张书圣焦奎陈洪渊王曼霞张成良张作芳青岛化工学院应用化学系青岛266042 南京大学化学系南京210093 农业部植物检疫实验所北京100029

提出间氨基酚 ( MAP) -H2 O2 -辣根过氧化物酶 ( hrp)伏安酶联免疫分析新体系 ,并用于南方菜豆花叶病毒 ( SBMV)的测定 .以线性扫描二阶导数伏安法检测 hrp催化 H2 O2 氧化 MAP的产物 ,用于游离 hrp及 SBMV的测定 ,灵敏度均高于经典的 E... 详细信息

提出间氨基酚 ( MAP) -H2 O2 -辣根过氧化物酶 ( hrp)伏安酶联免疫分析新体系 ,并用于南方菜豆花叶病毒 ( SBMV)的测定 .以线性扫描二阶导数伏安法检测 hrp催化 H2 O2 氧化 MAP的产物 ,用于游离 hrp及 SBMV的测定 ,灵敏度均高于经典的 ELISA显色光度法 .本法对 hrp测定的线性范围为 1 .0× 1 0 - 8～1 .0× 1 0 - 6 g/L,检测限为 3 .8× 1 0 - 9g/L;对 SBMV测定的线性范围为 4 .0～ 50 0 0 ng/m L,检测限为 4 .0ng/m L.用所建立的方法测定病毒感染病叶澄清液的最高稀释比为 1∶ 1 .5× 1 0 5 ,并与现行的 ELISA显色光度法进行对照。

关键词：南方菜豆花叶病毒 hrp 分析免疫分析伏安法

MAP-H_2O_2-hrp伏安酶联免疫分析新体系的光谱及电化学研究

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化学学报 1999年第8期57卷 922-930页

作者：张书圣陈洪渊焦奎李惠静南京大学化学系南京210093 青岛化工学院应用化学系青岛266042

提出了间氨基酚(MAP)-H_2O_2-辣根过氧化物酶(hrp)伏安酶联免疫分析新体系.本方法以线性扫描二阶导数伏安法检测hrp催化H_2O_2氧化MAP的产物,用于游离hrp和各种hrp标记物的测定,灵敏度均高于经典的ELISA显色光度法.测定游离hrp的线性范... 详细信息

提出了间氨基酚(MAP)-H_2O_2-辣根过氧化物酶(hrp)伏安酶联免疫分析新体系.本方法以线性扫描二阶导数伏安法检测hrp催化H_2O_2氧化MAP的产物,用于游离hrp和各种hrp标记物的测定,灵敏度均高于经典的ELISA显色光度法.测定游离hrp的线性范围为1.0×10^(-8)～1.0×10^(-6)g/L,检测限达3.8×10^(-9) g/L.制备出了hrp催化H_2O_2氧化MAP的产物纯品,并应用电化学分析,高效液相色谱,元素分析,紫外-可见光谱,红外光谱,~1H核磁共振谱,^(13)C核磁共振谱及质谱等技术对体系酶促反应进行了深入的研究.在选择的酶促反应条件下,生成的产物为2-氨基-5-[(3-羟苯基)氨基]-2,5-环己二烯基-l,4-二酮.提出了酶催化反应机理及其产物的电极还原过程.

关键词：免疫分析酶联免疫分析间氨基酚 hrp 伏安法

流动注射化学发光免疫分析研究 Ⅱ.偶合反应测定hrp及其标记物

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化学学报 1997年第6期55卷 590-594页

作者：邵谦马望百封满良章竹君陕西师范大学化学系西安710062

本文详细考查了壳质胺,多孔玻璃和粗孔硅胶作为流动注射免疫分析免疫反应器基质的可行性,在此基础上将hrp催化H_2Q_2氧化K_4Fe(CN)_6生成K_3Fe(CN)_6的反应,与H_2O_2和K_3Fe(CN)_6对luminol的共氧化化学发光反应相偶合首次提出了一种新... 详细信息

本文详细考查了壳质胺,多孔玻璃和粗孔硅胶作为流动注射免疫分析免疫反应器基质的可行性,在此基础上将hrp催化H_2Q_2氧化K_4Fe(CN)_6生成K_3Fe(CN)_6的反应,与H_2O_2和K_3Fe(CN)_6对luminol的共氧化化学发光反应相偶合首次提出了一种新的流动注射兔疫分析的最终检测手段,由于酶促反应与化学发光反应在检测系统的不同位置进行,因而这种方法克服了已报道的流动注射化学发光免疫分析不能协调酶催化和化学发光反应的最佳pH,底物与酶不能充分接触及载体对光的散射等缺点,具有灵敏度高、精密度好等优点,该方法测定hrp及其标记物检测限均可达f mol级,测定时间为1～2min,相对标准偏差为3.9%.

关键词：流动注射免疫分析化学发光 hrp

偶合反应化学发光酶免疫分析研究 Ⅰ.hrp及其标记物的化学发光测定

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化学学报 1991年第4期49卷 389-393页

作者：章竹君拜明岐张新荣陕西师范大学化学系西安710062

本文将辣根过氧化物酶(hrp)催化过氧化氢氧化KI生成I_2的反应与Lumnol-I_2的化学发光反应相偶合,提出了测定hrp及其抗原、抗体标记物的高灵敏度的化学发光法.检测下限为7pg,线性范围为10—6000pg.较通常使用的hrp直接催化Luminol-H_2O_... 详细信息

本文将辣根过氧化物酶(hrp)催化过氧化氢氧化KI生成I_2的反应与Lumnol-I_2的化学发光反应相偶合,提出了测定hrp及其抗原、抗体标记物的高灵敏度的化学发光法.检测下限为7pg,线性范围为10—6000pg.较通常使用的hrp直接催化Luminol-H_2O_2化学发光法灵敏度高10—100倍;克服了固相吸附法直接测定hrp标记物的缺陷,提高了测定的选择性.文中还对该偶合反应的机理及其动力学特性进行了研究.

关键词：偶合反应化学发光酶免疫分析 hrp

后海穴区CB-hrp轴浆运输追踪的神经元节段性分布及相应运动神经无形态观察

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中国医学科学院学报 1997年第5期19卷 379-383页

作者：谭会兵石葛明林嘉友刘克左志林万选才中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所北京农学院

用CB－hrp对大鼠后海穴区进行神经节段性分布的研究。在L6～S木水平标记出该穴相关运动神经元（Mn）的树突形成软膜下树突丛和空管膜下树突丛，两者均为嫌高尔基树突。有些远端树突穿越到对侧灰质。在背角和背连合核（DCN，S1～2）区域... 详细信息

用CB－hrp对大鼠后海穴区进行神经节段性分布的研究。在L6～S木水平标记出该穴相关运动神经元（Mn）的树突形成软膜下树突丛和空管膜下树突丛，两者均为嫌高尔基树突。有些远端树突穿越到对侧灰质。在背角和背连合核（DCN，S1～2）区域内CB-hrp标记的初级跨节感觉纤维和标记的前终末纤维可与送行标记的Mn树突汇聚和重叠。电针或免疫注射动物的Mn，其树突软膜下丛和室管膜下丛减少。结果提示后海穴区的神经支配在脊髓内形成传A-DCN整合-传出模式的神经反射回路，相关Mn（L6～S1）可能参与后海穴位作用。

关键词：后海穴 CB hrp 骶髓背连合核运动神经元

对氟苯酚-H_2O_2-hrp体系酶联荧光免疫分析方法研究

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化学通报 2000年第8期63卷 31-33,30页

作者：茹晓荣章竹君陕西师范大学化学系西安710032

hrp可催化对氟苯酚和H2O2的反应,反应所生成的F-的量与hrp的活性成正比,通过离子选择性电极测定反应所生成的F-的量就可对hrp及其标记物进行定量测定[1～4],但灵敏度不高.根据上述原理采用荧光法对hrp进行定量测定的方法目前还未见文献... 详细信息

hrp可催化对氟苯酚和H2O2的反应,反应所生成的F-的量与hrp的活性成正比,通过离子选择性电极测定反应所生成的F-的量就可对hrp及其标记物进行定量测定[1～4],但灵敏度不高.根据上述原理采用荧光法对hrp进行定量测定的方法目前还未见文献报道.据文献[5,6]报道,F-可增强锆-钙黄绿素蓝二元配合物的荧光强度,但不改变其激发和发射波长.用此体系测酶促反应所释放的F-,就建立了一个新的测定hrp的荧光方法.该方法测定hrp及其标记物,具有灵敏、线性范围宽和检出限低的特点.该法用于测定人体外周血中乙肝表面抗原(HBsAg)和表面抗体(HBsAb),与ELISA显色法[7]作对照,结果令人满意.

关键词：对氟苯酚荧光免疫分析 HBsAg HBsAb 乙肝 hrp

hrpE基因在水稻条斑病菌hrp pilus形成和致病性中起重要作用

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植物病理学报 2009年第4期39卷 392-398页

作者：王寅鹏邹丽芳周丹陈功友南京农业大学植物保护学院农业部病虫监测与治理重点开放实验室南京210095 上海交通大学农业与生物学院上海200240

水稻条斑病菌(Xanthomonas ***,Xooc)的hrp(hypersensitive response and pathogenicity)基因簇编码形成Ⅲ型分泌系统(T3SS),将致病性的效应分子通过hrpF转位装置注入水稻细胞中,从而导致水稻产生抗(感)病性,但Xooc的hrpE是否形成hrp pilus还不清楚。本研究对Xooc的hrpE基因进行突变,发现hrpE突变体在水稻上丧失致病性和在烟草上丧失激发HR的能力。与水稻互作结果显示,hrpE突变体不能够与水稻细胞互作,其在水稻组织中的生长能力显著下降。电镜结果显示,hrpE突变体不能够形成hrp pilus,从而导致水稻条斑病菌丧失在水稻上的致病性。功能互补结果显示,完整的hrpE基因可以恢复hrpE突变体在烟草上激发HR反应的能力、在水稻上的致病性以及在水稻薄壁细胞间形成hrp pilus的能力,表明hrpE基因形成hrp pilus是水稻条斑病菌分泌致病性效应分子的重要条件。

关键词：水稻条斑病菌 hrpE hrp pilus 致病性过敏反应