检索结果-南通市图书馆

作者：高锦阳复旦大学

学位级别：硕士

宫颈癌是妇科肿瘤中仅次于乳腺癌的第二大杀手。1995年,国际癌症研究协会(IARC)认定人类乳头瘤病毒(human papillomavirus, hpv)16型和18型具有高致癌性。进一步的研究表明,hpv持续感染是宫颈癌发生的必要起因,而且除了16型和18型,31、3... 详细信息

宫颈癌是妇科肿瘤中仅次于乳腺癌的第二大杀手。1995年,国际癌症研究协会(IARC)认定人类乳头瘤病毒(human papillomavirus, hpv)16型和18型具有高致癌性。进一步的研究表明,hpv持续感染是宫颈癌发生的必要起因,而且除了16型和18型,31、33、35、45、51、52、58和59型均具有高度致癌危险性。hpv不同型别的检出率存在地域差异,其中,我国尤其是东南部地区是hpv58型的高发地区之一,在某些地区的检出率甚至高于18型,仅次于16型。人乳头瘤病毒是一种双链环状DNA病毒,目前已鉴定出的亚型约有200种。它由6个早期蛋白(E1、E2、E4、E5、E6、E7)和两个晚期蛋白(L1、L2)构成,其中E1蛋白在整个hpv家族中是保守性最强的蛋白之一。E1蛋白是病毒DNA复制的启动蛋白,并能与E2蛋白共同作用影响宿主细胞生长周期。鉴于hpv58型在我国的高发病率以及人乳头瘤病毒E1蛋白的高保守性和重要功能,鉴定hpv58型E1蛋白的线性B细胞抗原表位对于研制相关疫苗和抗体药物并最终为宫颈癌的诊断与治疗提供新的方案具有重要作用。我们利用pET-28b原核表达载体实现了hpv58型E1蛋白N端和C端的表达、纯化,以N端和C端重组蛋白为抗原分别免疫三只雄性新西兰大白兔,获得抗血清。随后,我们采用了改良的生物合成肽法,使用pXXGST-1短肽表达载体合成了70条覆盖E1蛋白N端和C端的相互重叠9个氨基酸残基的18肽,利用制备的抗E1-N及E1-C抗血清进行免疫印迹鉴定。我们鉴定出hpv58型E1蛋白全部24个主要B细胞线性表位,包括5个优势表位(DETADDSGTDLIEFIDD SVQSTTQAEA, CTHRKRKIIELEDSGYGN, MSNISDVQGTTPEWIDRL, TVLQH SFNDDIFDLSEMI, EFNNPFPFDANGNPVYKI).本研究为后续hpv58型E1蛋白精细线性B细胞抗原表位作图奠定了基础,对于研制相关疫苗和抗体药物并最终为宫颈癌的诊断与治疗提供新的方案具有重要作用。

关键词：宫颈癌 hpv58型 E1蛋白生物合成肽法线性B细胞抗原表位

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hpv58型病毒E1^E4蛋白B细胞线性表位研究

HPV58型病毒E1^E4蛋白B细胞线性表位研究

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作者：薛冰复旦大学

学位级别：硕士

宫颈癌是世界上第三常见的影响女性健康的癌症,而高危型hpv是感染是宫颈癌的病因,其中以hpv16型检出率最高,危害性也最大。hpv58型作为15种高危型hpv的一种,虽然在世界范围内的感染率比hpv16和hpv18低,却存在较大的地区分布的差异,特别... 详细信息

宫颈癌是世界上第三常见的影响女性健康的癌症,而高危型hpv是感染是宫颈癌的病因,其中以hpv16型检出率最高,危害性也最大。hpv58型作为15种高危型hpv的一种,虽然在世界范围内的感染率比hpv16和hpv18低,却存在较大的地区分布的差异,特别是在我国东部和南部部分地区及其他亚洲东部地区有着很高的感染率和致死率。E1^E4是hpv一个早期非结构蛋白,它的表达关系到病毒的复制和侵袭,但其具体功能还未被人们完全了解,hpv58型E1^E4蛋白的相关研究报道更是缺乏,准确获得其全部表位信息对宫颈癌诊断、疫苗和抗体药物的研发具有参考作用。我们首先从生物信息学的角度对E1^E4蛋白进行了分析,E1^E4是一个亲水性蛋白,内部有几个亲水性较高的区域,在溶液中不稳定。利用现有的B细胞表位预测算法(亲水性算法、可及性算法、可塑性算法、二级结构预测算法)和软件(ABCpred、BepiPred)对hpv58型E1^E4蛋白B细胞线性表位进行预测,在对不同算法预测的B细胞线性表位结果进行整合时,我们发现这些结果有一定的一致性,分析出了该蛋白可能的B细胞线性表位所在区域,从整体上对hpv58型E1^E4蛋白B细胞表位有了大致认识。我们对hpv58型E1^E4蛋白进行了原核表达、纯化,并免疫三只雄性新西兰白兔,获得了其抗血清。随后,我们采用了改良的生物合成肽法,使用pXXGST-1短肽表达载体合成了13条覆盖整个hpv58E1＾E4蛋白并相互重叠9个氨基酸的15肽,利用制备的E1^E4蛋白抗血清进行免疫印迹,综合三种抗血清的结果,我们鉴定出hpv58型E1^E4蛋白全部的B细胞线性表位共9个,集中在蛋白N端,并确定其中QSDDDSIYQTPETTP为hpv58E1＾E4蛋白线性B细胞优势抗原表位。我们首次对hpv58型E1^E4蛋白全部B细胞线性表位作了初步研究,研究结果对hpv相关诊断试剂、疫苗和抗体药物的研发具有一定意义。

关键词： hpv58型 E1^E4蛋白生物合成肽法 B细胞线性表位

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hpv58型E6蛋白B细胞表位预测与分析

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温州医科大学学报 2018年第8期48卷 547-551页

作者：叶晓鲜毛珊珊宋易玲王路得蒋朋飞朱珊丽张丽芳温州医科大学微生物学与免疫学教研室浙江温州325035

目的:预测分析高危型人乳头瘤病毒(hpv)58型E6蛋白的B细胞线性表位及其结构。方法:从瑞士生物信息研究所提供的Swissprot蛋白质数据库中检索到E6蛋白序列,采用计算机辅助生物信息学软件进行分析,用Expasy服务器在线软件分析预测E6蛋白... 详细信息

目的:预测分析高危型人乳头瘤病毒(hpv)58型E6蛋白的B细胞线性表位及其结构。方法:从瑞士生物信息研究所提供的Swissprot蛋白质数据库中检索到E6蛋白序列,采用计算机辅助生物信息学软件进行分析,用Expasy服务器在线软件分析预测E6蛋白的理化性质、二级结构及三维空间结构,采用DNASTAR软件包中的protean软件进一步分析亲水性、柔韧性、表面可及性、抗原性与极性等特性,再结合氨基酸抗原指数(AI)计算法算出平均AI,根据AI大小预测hpv58型E6蛋白的B细胞线性表位的可能肽段,并进行同源性匹配分析。结果:hpv58型E6蛋白的B细胞线性表位可能位于以下肽段位置:N端8~15(KPRTLHDL)、27~44(ELKCVECKKTLQRSEVYD)、108~127(RPLCPQEKKRHVDLNKRFHN)、141~147(RPRRRQT)肽段及其周围。同源性分析得出肽段27~44、141~147为可能的B细胞线性表位,为hpv58型E6蛋白B细胞表位的独特序列,肽段8~15与hpv33型E6蛋白同源性匹配为100%,108~127与hpv33型E6、hpv9型E6蛋白同源性匹配为100%。结论:27~44、141~147肽段为可能的hpv58型E6蛋白的B细胞优势表位。

关键词： hpv58型 E6蛋白 B细胞表位预测生物信息学分析

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