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宁波地区妇女宫颈感染HPV58分布与变异谱系分析

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中国预防医学杂志 2017年第2期18卷 91-96页

作者：张姝许国章倪红霞李寿俊吕定峰宁波大学医学院浙江宁波315211 宁波市疾病预防控制中心奉化市疾病预防控制中心宁波市第一医院检验科

目的了解宁波地区人乳头瘤病毒高危亚型HPV58的型别分布和癌相关基因E6、E7区基因变异谱系特征。方法收集调查社区和医院就诊妇女的宫颈脱落细胞样本进行hpv分型检测,并对其中HPV58亚型阳性株进行癌相关基因测序和序列分析。结果778例... 详细信息

目的了解宁波地区人乳头瘤病毒高危亚型HPV58的型别分布和癌相关基因E6、E7区基因变异谱系特征。方法收集调查社区和医院就诊妇女的宫颈脱落细胞样本进行hpv分型检测,并对其中HPV58亚型阳性株进行癌相关基因测序和序列分析。结果778例社区人群样本HPV58阳性16例,检出率2.06%,1 835例就诊人群样本HPV58阳性74例,检出率4.03%;HPV58病毒株E6、E7基因序列分别成功获得6和11条,E6区有2个位点发生碱基颠换:C307T和A388C,E7区有5个位点发生碱基颠换:G694A、T726C、T744G、G761A和T803C;系统进化树分析显示宁波地区HPV58变异株主要位于该亚型基因变异谱系A的A1和A2分支。结论宁波人群HPV58感染率较高,多数感染者携带病毒的癌相关基因发生变异,应加强对人群hpv感染及其持续感染状况的监测,尤其是HPV58阳性人群。

关键词： HPV58 E6 E7 基因变异

预防性重组HPV58-减毒志贺氏杆菌载体活疫苗的研制及免疫学特性

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第12期23卷 1163-1166页

作者：李文生刘红莉张盈涛杨筱风王一理司履生陕西省人民医院西安交通大学医学院第三附属医院陕西西安710068 西安交通大学生命科学与技术学院癌症研究所环境与疾病相关基因教育部重点实验室陕西西安710061

目的:构建预防性重组HPV58-减毒志贺氏杆菌载体活疫苗,并研究其免疫学特性。方法:克隆HPV58L1基因并重组入自杀载体pCVD442,减毒志贺氏杆菌Sf301:ΔvirG、辅助质粒PRK2013、重组自杀载体pCVD442-HPV58L1进行筛选杂交,经氨苄抗性培养基... 详细信息

目的:构建预防性重组HPV58-减毒志贺氏杆菌载体活疫苗,并研究其免疫学特性。方法:克隆HPV58L1基因并重组入自杀载体pCVD442,减毒志贺氏杆菌Sf301:ΔvirG、辅助质粒PRK2013、重组自杀载体pCVD442-HPV58L1进行筛选杂交,经氨苄抗性培养基、刚果红培养基双重选择,获得重组的含HPV58L1基因的减毒志贺氏杆菌菌株。Western blot检测HPV58L1蛋白表达。用豚鼠角结膜炎模型进行疫苗动物免疫试验,ELISA检测豚鼠血清中特异性抗体,ELISPOT检测豚鼠脾及淋巴结中抗原特异性IgG、IgA产生细胞频数。结果:Western blot法证实该菌株可表达HPV58L1蛋白。豚鼠免疫保护试验发现:HPV58L1-减毒志贺氏杆菌不引起角结膜炎,经用野生型sf301攻击后有80%豚鼠不发病。免疫后第20天,免疫豚鼠血中抗HPV58L1特异性IgG、IgA明显升高,而对志贺氏杆菌菌体抗原(LPS)仅产生低效价的IgG抗体。ELISPOT结果显示,脾和淋巴结的IgA-ASC及IgG-ASC明显升高。结论:成功构建了预防性重组HPV58-减毒志贺氏杆菌载体活疫苗,能诱发免疫动物较强的体液免疫反应,激发保护性抗体的产生。

关键词： HPV58 减毒志贺氏杆菌疫苗同源重组

58型hpv E6蛋白的原核表达与分离纯化

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云南大学学报（自然科学版） 2012年第S1期34卷 93-98页

作者：黄成铖林洁马岚清华大学深圳研究生院生命与健康学部广东深圳518055 清华大学生命科学学院北京100084 云南大学生命科学学院云南昆明650091

宫颈癌是一种在女性人群中的常见肿瘤,严重威胁着女性的生理和心理健康;而人类乳头瘤状病毒(hpv)的长期感染是宫颈癌发生的主要诱因.因此,hpv病毒的研究对于我们了解和防治宫颈癌有着十分积极的意义.目前,国外的研究比较多的针对于16型... 详细信息

宫颈癌是一种在女性人群中的常见肿瘤,严重威胁着女性的生理和心理健康;而人类乳头瘤状病毒(hpv)的长期感染是宫颈癌发生的主要诱因.因此,hpv病毒的研究对于我们了解和防治宫颈癌有着十分积极的意义.目前,国外的研究比较多的针对于16型和18型的hpv病毒;但是对于我国比较常见的58型hpv病毒却研究甚少.所以,本试验依据实验室现有的表达纯化平台和噬菌体展示多肽筛选平台,设计并构建了HPV58 E6蛋白的原核表达体系,并对E6重组融合蛋白进行了诱导表达.通过对表达获得的包涵体蛋白进行反复的洗涤、亲和层析以及复性等纯化步骤,得到了纯度较高的E6融合蛋白.

关键词：宫颈癌 HPV58 E6蛋白

HPV58 E6的基因克隆及HLA-DQB1*03限制性T细胞表位分析

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第11期23卷 1004-1006页

作者：陈凌沈柱伍津津张菊周杨范雪莉第三军医大学大坪医院野战外科研究所皮肤科第四军医大学西京医院皮肤科第四军医大学全军基因诊断研究所 Department of Medicine University of Massachusetts Medical SchoolWorcesterMA 01605USA

目的:克隆HPV58E6的基因,并对其HLA-DQB1*03限制性T细胞表位进行分析。方法:从宫颈癌组织中提取基因组DNA,通过PCR方法扩增HPV58E6基因,常规方法将目的基因插入pGEM-TEasy载体中。酶切和测序鉴定后,利用位置特异性分数矩阵(PSSM)理论、... 详细信息

目的:克隆HPV58E6的基因,并对其HLA-DQB1*03限制性T细胞表位进行分析。方法:从宫颈癌组织中提取基因组DNA,通过PCR方法扩增HPV58E6基因,常规方法将目的基因插入pGEM-TEasy载体中。酶切和测序鉴定后,利用位置特异性分数矩阵(PSSM)理论、支持向量机(SVM)理论和蛋白酶体酶切位点预测算法分析HPV58E6的HLA-DQB1*03限制性T细胞表位。结果:成功克隆了1株HPV58E6基因(GenBank EF060239),表位47FADLRIAY-RDGNPFA和表位102RCIICQRPLCPQEKK理论上是其HLA-DQB1*03限制性T细胞表位。结论:这两个表位可望作为后续相关实验中表位筛选、鉴定和多肽疫苗研制的候选对象。

关键词： HPV58 E6 基因克隆 T细胞表位

HPV58型衣壳蛋白L1和L2基因的克隆表达及病毒样颗粒的装配

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中国实验诊断学 2010年第11期14卷 1736-1739页

作者：王丽娜陈伟甘义明刘艳丰吉林大学第一医院妇产科吉林长春130021 吉林大学中日联谊医院骨科吉林长春130031 吉林大学附属医院放射线科吉林长春130021

目的大量表达和纯化HPV58衣壳蛋白,形成病毒相似颗粒。方法制备携带HPV58L1和L2基因的重组杆状病毒,转染昆虫细胞,在真核细胞中大量表达HPV58L1和L2蛋白并进行纯化。电镜观察病毒相似颗粒的形成情况。免疫小鼠制备特异性抗血清。结果 HP... 详细信息

目的大量表达和纯化HPV58衣壳蛋白,形成病毒相似颗粒。方法制备携带HPV58L1和L2基因的重组杆状病毒,转染昆虫细胞,在真核细胞中大量表达HPV58L1和L2蛋白并进行纯化。电镜观察病毒相似颗粒的形成情况。免疫小鼠制备特异性抗血清。结果 HPV58L1和L2蛋白在真核细胞中被高效表达,电镜下见表达纯化的病毒衣壳蛋白L1与L2共同组装形成病毒相似颗粒(VLPs),用其免疫小鼠能产生针对HPV58L1蛋白的高滴度的特异性抗体。结论在真核细胞中大量表达HPV58L1和L2蛋白,纯化后能形成病毒相似颗粒,并具备很强的免疫原性,有望用其制作宫颈癌预防性疫苗。

关键词： HPV58 病毒衣壳蛋白病毒相似颗粒(VLPs)

HPV58/52感染与宫内病变发生风险的相关性分析

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河北医药 2014年第9期36卷 1332-1333页

作者：孙晓慧蔺会兰刘俊霞河北省石家庄市第一医院 050011

目的了解石家庄市女性患者高危型人乳头瘤病毒(HR-hpv)感染状况,探讨HPV58/52感染与宫内病变发生的相关性。方法采用核酸分子导流杂交技术(PCR),对参与石家庄市宫颈筛查的2 234例女性患者进行hpv分型检测,同时行液基细胞学检查(TCT)。其... 详细信息

目的了解石家庄市女性患者高危型人乳头瘤病毒(HR-hpv)感染状况,探讨HPV58/52感染与宫内病变发生的相关性。方法采用核酸分子导流杂交技术(PCR),对参与石家庄市宫颈筛查的2 234例女性患者进行hpv分型检测,同时行液基细胞学检查(TCT)。其中HR-hpv感染者812例,根据TCT结果将其分为宫颈炎症组175例、低度鳞状上皮内瘤病变(LISL)组312例、高度鳞状上皮内瘤病变(HSIL)组286例及鳞状细胞癌(SCC)组39例。其中HPV58/52感染者240例,分析HPV58/52感染与宫颈病变发生风险的相关性。结果 812例HR-hpv感染者中感染率较高的是hpv16(30.7%)、hpv52(15.6%)、58(13.9%),明显高于其他HR-hpv基因型(PHPV58/52感染差异有统计学意义(Phpv主要基因型为hpv16、52、58;除公认的hpv16与宫颈癌发生密切相关外,HPV58/52亦存在较强的致病性,为今后宫内病变的防治提供重要依据。

关键词：宫颈病变 HPV58 hpv52 液基细胞学检查

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HPV58与宫颈癌

实用医学杂志 2004年第11期20卷 1314-1316页

作者：徐晓明刘凤英中南大学湘雅二医院妇产科长沙市410011

高危型人乳头瘤病毒(hpv)感染已被认为是宫颈癌及其癌前病变的主要致病因素。世界各地高危型hpv的各型感染率区别较大，除hpv16是公认发病率最高之外，hpv18及HPV58也较常见，特别是HPV58在亚洲地区表现出不同寻常的流行状况。

关键词： HPV58 宫颈癌肿瘤 f流行病学

hpv16、58型感染导致宫颈微环境中免疫因子变化及宫颈细胞中病毒整合的初步研究

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中国免疫学杂志 2014年第10期30卷 1378-1382页

作者：洪慧王鹤广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科南宁530021

目的：探讨人乳头状瘤病毒（Hapillomavirus,hpv）16和58型感染导致宫颈局部微环境中免疫因子白介素（Interleukin,IL）-12、IL-4,干扰素（Interferon,IFN）-γ浓度变化及宫颈细胞中hpv16/58病毒DNA整合与宫颈病变进展的关系。方法：收... 详细信息

目的：探讨人乳头状瘤病毒（Hapillomavirus,hpv）16和58型感染导致宫颈局部微环境中免疫因子白介素（Interleukin,IL）-12、IL-4,干扰素（Interferon,IFN）-γ浓度变化及宫颈细胞中hpv16/58病毒DNA整合与宫颈病变进展的关系。方法：收集2012年8月～2013年5月在广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科住院行hpv DNA分型检测,且组织病理结果诊断为宫颈癌患者的宫颈灌洗液共89例及宫颈脱落细胞140例,根据hpv分型结果将89例宫颈灌洗液分组为：1hpv16（＋）58例;2HPV58（＋）31例。应用酶联免疫法（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法检测89例患者宫颈微环境中免疫因子IL-12、IL-4、IFN-γ的浓度;将140例宫颈脱落细胞根据hpv分型结果分组为：1hpv16（＋）106例;2HPV58（＋）34例。采用荧光定量PCR（qRT-PCR）检测hpv16/58的E2和E6基因,根据E2/E6拷贝数比值判定hpv16/58 DNA的存在状态。结果：1 hpv16（＋）组中IL-4浓度明显高于HPV58（＋）组（P〈0.05）;IL-12、IFN-γ的浓度明显低于HPV58（＋）组（P〈0.05）。2hpv16 DNA与HPV58 DNA的存在状态有着显著差异（P〈0.05）,hpv16 DNA整合比率比HPV58 DNA整合比率明显增大。结论：hpv16和58型感染不但可以导致宫颈细胞外局部免疫微环境中的IL-12、IFN-γ的降低和（或）IL-4的升高,还可导致病毒在宫颈细胞内整合,通过宫颈细胞内外变化导致宫颈病变甚至宫颈癌的发生;hpv16较HPV58更容易造成宫颈组织发生癌变。

关键词： hpv16 HPV58 免疫因子病毒整合

Foxp3^+T细胞与人乳头瘤病毒58型基因组整合在宫颈病变发展中的关系

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中国实用妇科与产科杂志 2014年第2期30卷 139-143页

作者：朱佳妮周佳任张晶马宁耶张瑶常晓晗丁爱萍张淑兰中国医科大学附属盛京医院妇产科辽宁沈阳110004

目的通过检测不同宫颈病变组织中Foxp3+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的表达及人乳头瘤病毒(human papilloma virus,hpv)基因组整合状态,研究Treg与人乳头瘤病毒整合状态在宫颈病变发病机制中的作用及意义。方法选取2012年11月至... 详细信息

目的通过检测不同宫颈病变组织中Foxp3+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的表达及人乳头瘤病毒(human papilloma virus,hpv)基因组整合状态,研究Treg与人乳头瘤病毒整合状态在宫颈病变发病机制中的作用及意义。方法选取2012年11月至2013年7月间,中国医科大学附属盛京医院妇产科住院的119例单一HPV58阳性患者的宫颈脱落细胞标本及相应宫颈组织石蜡标本。包括正常宫颈22例、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)79例、宫颈癌(cervical cancer,CC)18例。多重PCR技术同时检测HPV58型E2和E6基因,通过E2/E6比值法评估HPV58型基因组在不同宫颈病变中的整合状态。免疫组化方法检测宫颈组织中Foxp3表达情况。结果 HPV58的总整合率为81.51%,HPV58的整合率在正常组中为72.73%,CINⅠ组为76.19%,CINⅡ组为81.82%,CINⅢ组为88.00%,CC组为88.89%。HPV58的整合率随宫颈病变加重呈逐渐升高,差异有统计学意义(χ2=8.399,P=0.004,线性趋势χ2检验)。Foxp3表达强度与宫颈病变严重程度呈正相关,差异有统计学意义(r s=0.538,P=0.000,Spearman等级相关分析)。Foxp3表达强度在hpv不同整合状态下是不同的,差异有统计学意义(χ2=12.058,P=0.002,Kruskal Wallis检验)。结论 HPV58基因组的整合与Foxp3+Treg在宫颈病变发展中密切相关。

关键词：宫颈病变 HPV58 病毒整合调节性T细胞 Foxp3