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抗hpv11/E2基因Ribozyme对靶RNA的体外剪切研究

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中国病毒学 2001年第2期16卷 146-150页

作者：侯化刘德忠杨光彩广州同和第一军医大学生化教研室广东广州501515

为了寻找hpv11型引起的生殖系统感染的治疗途径和探讨hpv的致病机理 ,本实验以hpv11病毒质粒为模板 ,扩增出hpvll型E2区 6 44bp片段 ,采用pGEM T EasyVector为载体 ,构建 pTV 6 44克隆载体 ,经筛选得到克隆株 ,提取质粒测序鉴定。采用... 详细信息

为了寻找hpv11型引起的生殖系统感染的治疗途径和探讨hpv的致病机理 ,本实验以hpv11病毒质粒为模板 ,扩增出hpvll型E2区 6 44bp片段 ,采用pGEM T EasyVector为载体 ,构建 pTV 6 44克隆载体 ,经筛选得到克隆株 ,提取质粒测序鉴定。采用上海生化所陈农安教授编制的锤头状Ribozyme设计软件进行计算机分析 ,选择Ribozyme对靶基因的最佳剪切位点 ,及进行基因同源性分析和生物学功能分析 ,选择出针对hpvllE2靶基因的RZ2 777,在最适条件下进行体外剪切反应 ,发现人工合成和体外转录得到的Ribozyme分子均能在相应位点准确切割靶RNA分子 ,选择合适的反应条件切割效率达到 6 0 %以上 ,Km和Kcat值分别为 0 .6 3μmol/L、0 .12 μmol/L ,RibozymeL两端的 5′ cis ribozyme和 3′ cis ribozyme自我剪切释放并未影响切割活性 ,但靶RNA侧翼序列影响了Ribozyme的剪切活性。实验研究表明 ,Ribozyme可能成为治疗hpvll型引起的尖锐湿疣的有效手段 ,并有望在分子水平上开辟出基因治疗hpvll病毒感染的另一新天地。

关键词：人乳头瘤病毒11型 E2基因核酶体外剪切 hpv11

基于哨点医院的尖锐湿疣患者流行病学特征及hpv11遗传多样性研究

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基于哨点医院的尖锐湿疣患者流行病学特征及HPV11遗传多样性研究

作者：袁浩闻山东大学

学位级别：硕士

尖锐湿疣(condyloma acuminatum,CA)是由人乳头瘤病毒(human papillomavirus,hpv)感染引起的性传播疾病(sexually transmitted disease,STD)。虽然CA是肛门生殖器区域常见的良性病变,但其经常复发,需要反复治疗,治疗过程痛苦且费用昂贵... 详细信息

尖锐湿疣(condyloma acuminatum,CA)是由人乳头瘤病毒(human papillomavirus,hpv)感染引起的性传播疾病(sexually transmitted disease,STD)。虽然CA是肛门生殖器区域常见的良性病变,但其经常复发,需要反复治疗,治疗过程痛苦且费用昂贵,给患者造成了严重的心理压力和经济负担,降低患者的生活质量。目前已经鉴定出200多种hpv基因型,根据致癌风险将其分类为高危型(high-risk,HR)和低危型(low-risk,LR),至少有40种基因型与肛门生殖器区域的感染相关联,其中90%的CA主要是由hpv6和hpv11感染引起,hpv11则是导致CA的重要低危型hpv之一。有研究发现,hpv11也与肛门鳞状细胞癌、喉乳头状瘤的恶性转化有关。目前,关于hpv11全基因组序列特征的资料仅有国外研究报道,中国大陆地区尚未见有开展该类研究的报道,与国外的病毒株同源性及核苷酸变异等情况均不清楚。山东省作为CA报告病例较高的省份,关于CA患者的流行特征及hpv基因型分布的资料较为有限,特别是对CA患者心理及生活质量状况的了解也极为缺乏。因此,本研究通过对山东省两地区三家哨点医院在2019年8月～2021年6月就诊的CA患者进行个案调查及实验室检测,分析山东省CA患者的流行病学特征;通过二代测序技术对hpv11单一阳性样本进行测序,探讨hpv11全基因组的遗传多样性及流行情况。本研究结果阐明了山东省CA患者的流行病学特征,也为研究hpv11遗传多样性与CA的联系提供分子依据,对山东省CA的防治具有指导意义。目的1.掌握山东省CA患者的疾病特征,为山东省CA防治策略的制定提供数据支持。2.了解CA患者心理及生活质量状况,为临床对CA患者的心理干预提供参考。3.分析CA患者感染的hpv11全基因组特征,为研究hpv11遗传多样性与CA的联系提供分子依据。方法***患者个案调查:对2019年8月～2021年6月在山东省两地区三家哨点医院就诊的CA患者进行一对一问卷调查。问卷内容包括CA患者的人口学特征、性行为特征、临床特征、CA知识知晓情况以及心理和生活质量评价量表。心理及生活质量调查包括SDS、CECA10、DLQI及ED-5D-5L四个量表。通过Epidata软件录入问卷,建立Excel数据库,使用SPSS 23.0软件进行统计分析。***分型检测及测序:样本采集自接受问卷调查后同意进行hpv分型检测的患者。提取脱落细胞样本中的核酸并进行PCR扩增,使用PCR-反向斑点印迹杂交方法鉴别hpv基因型。选取分型结果为hpv11单一阳性的样本,分片段扩增hpv11全基因组序列,通过二代测序技术进行测序。***11遗传多样性分析:测序数据使用CLC Genomics Workbench v12.0.2软件进行拼接整理。所得序列使用MAFFT v7.490软件进行全局比对,运用PhyML v3.0软件基于最大似然法来构建系统进化树,MEGA X软件P-distance法计算hpv11两两序列间的核苷酸差异,DnaSP v6软件分析所测得的hpv11核苷酸变异位点情况。结果1.2019年8月～2021年6月间,共招募1201例CA患者进行个案调查,收到有效问卷1185份,其中男性870例,女性315例。患者平均年龄为34.85±13.60岁,男性相对女性患者年龄更大(Phpv引起的患者则有41.4%。知晓hpv传播途径和预防方法的患者则分别有52.0%和32.7%。女性患者相比于男性对hpv 了解程度更高(P11例患者为复发病例,复发率为34.7%。13.5%的患者性伴侣也患有CA,有34例患者合并感染其他性传播疾病。男性患者感染部位主要在冠状沟、包皮及肛周,女性患者感染部位主要在尿道阴道口、大小阴唇及会阴。有46.5%的患者累及多个部位感染。4.接受hpv分型检测的880例CA患者中,hpv总体感染率为91.4%。最常见的hpv 基因型是 hpv6(57.8%)、hpv11(37.2%)、hpv16(13.7%)和 hpv42(10.3%)。在这些病例中,低危型hpv感染占主导地位,感染率为91.3%,其中87.4%为hpv6和(或)hpv11感染。与女性相比,男性低危型hpv感染率更高(P<

关键词：尖锐湿疣人乳头瘤病毒流行病学特征 hpv11 遗传多样性

新疆部分地区儿童复发性喉乳头状瘤hpv11病毒感染与复发

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中外医疗 2013年第23期32卷 92-93页

作者：再努拉.艾未肉拉吴梅新疆自治区人民医院耳鼻喉一科新疆乌鲁木齐830001

目的探讨儿童喉乳头状病hpv11毒类型与儿童复发性喉乳头状瘤病发生发展的关系。方法所采用的hpv6以及hpv11均为GENERAYBIOTECH公司所合成,结合新疆医科大学第一附属医院耳鼻喉科所收治的42例儿童复发性呼吸道乳头状瘤的相关资料进行回... 详细信息

目的探讨儿童喉乳头状病hpv11毒类型与儿童复发性喉乳头状瘤病发生发展的关系。方法所采用的hpv6以及hpv11均为GENERAYBIOTECH公司所合成,结合新疆医科大学第一附属医院耳鼻喉科所收治的42例儿童复发性呼吸道乳头状瘤的相关资料进行回顾分析。结果对hpv6和hpv11进行检验,42例患儿中41例患儿hpv检验结果均呈现为阳性,占97.61%,其中26例为hpv11阳性,另15例为hpv6阳性,另有7例患儿两则均为阳性;14例发病患儿中,11例检验结果为hpv11阳性。通过分析发现,该组资料中27例为女性患儿,且hpv11感染率也明显高于男性。女性70.37%,男性50%。该组JRRP15例患儿中,10例气管切开,占66.67%,但3例患儿术后病情复发,占20%。而26例hpv11阳性患儿中,23例气管切开,占88.46%,11例术后病情复发,占42.30%。结论儿童复发性喉乳头状瘤hpv11病毒感染与复发与患儿的个体免疫力、内分泌以及激素等方面是分不开的。在治疗的过程中,可结合该特点,针对性地进行治疗,使更多地患儿及其家属能够建立起治愈的信心,这也警惕医生,在临床治疗过程中,切忌使用一次根治,以免对患儿的喉部造成过大的刺激。

关键词：喉乳头状瘤儿童 hpv11 聚合酶链反应(PCR) 复发

密码优化的hpv11晚期基因在293T细胞中的表达

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中国麻风皮肤病杂志 2010年第4期26卷 229-232页

作者：袁春蓉吴剑波盛晚香严月华武汉大学中南医院皮肤科武汉430071

目的:检测密码优化的hpv晚期基因在293T细胞中的表达。方法:对hpv11晚期基因进行密码优化,然后将其构建在哺乳动物细胞内质粒上。通过瞬时转染,将hL1、hL1+hL2、h(L1+L2)质粒分别导入宿主293T细胞。应用免疫组化技术,检测hpv11衣壳蛋白... 详细信息

目的:检测密码优化的hpv晚期基因在293T细胞中的表达。方法:对hpv11晚期基因进行密码优化,然后将其构建在哺乳动物细胞内质粒上。通过瞬时转染,将hL1、hL1+hL2、h(L1+L2)质粒分别导入宿主293T细胞。应用免疫组化技术,检测hpv11衣壳蛋白的存在。结果:***1细胞爬片行免疫组化染色为阳性,可见部分细胞呈棕黄着色,293T.(hLI+hL2)细胞及293T.h(L1+L2)细胞爬片行免疫组化染色为阳性,可见大量细胞均呈棕黄着色,不含hpv11晚期基因的对照组***1细胞衣壳抗原免疫组化未见阳性着色。结论:经过密码优化的hpv11晚期基因可产生高表达的衣壳蛋白。

关键词： hpv11 晚期基因优化密码转染

CD80作为分子佐剂增强hpv11 E7免疫效果的观察

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第7期26卷 658-658页

作者：李莉华黄朝晖郭子健任金冬刘志辉宋明旭周希科王飞毕志刚苏州大学附属无锡第四医院中心实验室无锡市肿瘤防治研究所无锡214062 南京医科大学附属第一医院皮肤科

构建的人乳头状瘤病毒（human papillomavirus，hpv）11型E7基因DNA真核表达质粒，在真核细胞获得有效表达。为增强其作为尖锐湿疣治疗性疫苗的免疫效果，现将E7基因与协同刺激分子CDS0（B7-1）进行连接重组，构建hpv11E7-CD80嵌合DNA... 详细信息

构建的人乳头状瘤病毒（human papillomavirus，hpv）11型E7基因DNA真核表达质粒，在真核细胞获得有效表达。为增强其作为尖锐湿疣治疗性疫苗的免疫效果，现将E7基因与协同刺激分子CDS0（B7-1）进行连接重组，构建hpv11E7-CD80嵌合DNA真核表达质粒，并将其免疫小鼠，研究其诱导的免疫效应。

关键词： E7基因免疫效果 hpv11 分子佐剂 CD80 DNA真核表达质粒人乳头状瘤病毒协同刺激分子治疗性疫苗真核细胞

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孕妇宫颈拭子hpv11、16及18检出率

国际妇产科学杂志 1991年第1期 47-47页

作者：樊尚荣

流行病学研究相信宫颈癌很象是一种潜伏期很长的性传播疾病,很多种有传染性的病原体视为其致病因子,其中人乳头状瘤病毒(hpv)最重要,为了解生殖道hpv感染情况,作者自1986年7月至1987年10月随机在产前门诊收集1362名孕妇(其中包括妊娠早... 详细信息

流行病学研究相信宫颈癌很象是一种潜伏期很长的性传播疾病,很多种有传染性的病原体视为其致病因子,其中人乳头状瘤病毒(hpv)最重要,为了解生殖道hpv感染情况,作者自1986年7月至1987年10月随机在产前门诊收集1362名孕妇(其中包括妊娠早期83例、中期897例、晚期22例及360名早孕人工流产)宫颈拭子,用印迹杂交法(FISH)检查hpv,998例(73%)同时作宫颈细胞学检查,另364例(27%)因一年内有正常宫颈刮片而未作。方法:用二根棉拭子分别从宫颈内口旋转及宫颈外口擦取脱落细胞,置于磷酸盐缓冲液中细胞计

关键词： hpv11 宫颈检出率孕妇拭子

女阴尖锐湿疣与假性湿疣、乳头状瘤的hpv_(11)、HSV_2、EB病毒检测分析

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汕头大学医学院学报 2004年第1期17卷 45-46页

作者：李曼红邱前程林莹汕头大学医学院第一附属医院病理科广东汕头515041

目的 :探讨女阴尖锐湿疣 (CA)与假性湿疣 (PV)、乳头状瘤 (SP)和病毒感染的关系。方法 :分析 83例女阴CA、PV、SP的病理组织学特点 ,并作乳头状瘤病毒 11型 (hpv1 1 )、泡状病毒 2型 (HSV2 )和EB病毒免疫组织化学检查。结果 :在 3种疣... 详细信息

目的 :探讨女阴尖锐湿疣 (CA)与假性湿疣 (PV)、乳头状瘤 (SP)和病毒感染的关系。方法 :分析 83例女阴CA、PV、SP的病理组织学特点 ,并作乳头状瘤病毒 11型 (hpv1 1 )、泡状病毒 2型 (HSV2 )和EB病毒免疫组织化学检查。结果 :在 3种疣状增生病变中 ,CAhpv1 1 感染率明显高于PV和SP(P hpv1 1 感染率明显高于HSV2 和EB病毒 (P hpv感染关系密切且与HSV2 。

关键词：女阴尖锐湿疣假性湿疣乳头状瘤 hpv11 HSV2 EB 病毒检测

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椿乳凝胶抗低危型人乳头瘤病毒的作用研究

中草药 2022年第14期53卷 4399-4408页

作者：吴梦瑶彭冬冬龚云彭印张鹏张小冬唐小燕张妙红姜德建株洲千金药业股份有限公司湖南株洲412000 新药药效与安全性评价湖南省重点实验室湖南长沙410331 湖南普瑞玛药物研究中心有限公司湖南长沙410331

目的研究椿乳凝胶抗低危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,hpv)的作用。方法建立低危型hpv6、hpv11假病毒感染人胚肾293FT细胞模型,评价椿乳凝胶对hpv感染能力及对细胞周期的影响。将hpv6、hpv11假病毒注入苯甲酸雌二醇预处理的雌... 详细信息

目的研究椿乳凝胶抗低危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,hpv)的作用。方法建立低危型hpv6、hpv11假病毒感染人胚肾293FT细胞模型,评价椿乳凝胶对hpv感染能力及对细胞周期的影响。将hpv6、hpv11假病毒注入苯甲酸雌二醇预处理的雌性小鼠阴道内建立hpv感染动物模型,病毒感染48 h后检测病毒定植情况,将定植成功的小鼠模型随机分为模型组、鬼臼毒素(1 mg/只)和椿乳凝胶低、中、高剂量(0.01、0.02、0.04 g/只)组,另设对照组,每组16只。每天阴道给予相应药物1次,连续20 d,分别于给药第10、20天检测小鼠阴道外观、pH值,末次给药后观察小鼠阴道及宫颈组织病理形态学变化,以及hpv6、hpv11假病毒的病毒滴度,E6、E7基因和蛋白表达,评价椿乳凝胶对低危型hpv病毒的体内抑制作用。结果体外实验结果显示,椿乳凝胶对hpv6、hpv11假病毒感染能力和所致细胞周期改变具有一定抑制作用。体内实验结果显示,椿乳凝胶能降低hpv6、hpv11假病毒感染能力(Phpv6、hpv11假病毒E6、E7基因和蛋白的表达(Phpv6、hpv11假病毒能较好地模拟低危型hpv病毒感染过程,而椿乳凝胶对低危型hpv病毒具有明显的抑制作用,对低危型hpv病毒引起的感染有一定治疗作用。

关键词：低危型人乳头瘤病毒 hpv6 hpv11 假病毒椿乳凝胶

人乳头瘤病毒11型L1基因原核表达系统的构建及鉴定

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中国地方病学杂志 2004年第2期23卷 163-165页

作者：庄敏谷鸿喜孔卫兰李迪魏兰兰李金梁林道红哈尔滨医科大学微生物学教研室 150086 第一临床医学院皮肤科

目的构建人乳头瘤病毒11型(hpv11)L1原核表达系统pBAD(B)鄄hpv11L1,表达hpvL1蛋白,为进一步制备基因工程疫苗奠定基础。方法PCR法从尖锐湿疣组织标本中扩增人乳头瘤病毒11型L1基因片段,克隆至pBluescript质粒,并测序。将其从克隆重组质... 详细信息

目的构建人乳头瘤病毒11型(hpv11)L1原核表达系统pBAD(B)鄄hpv11L1,表达hpvL1蛋白,为进一步制备基因工程疫苗奠定基础。方法PCR法从尖锐湿疣组织标本中扩增人乳头瘤病毒11型L1基因片段,克隆至pBluescript质粒,并测序。将其从克隆重组质粒中切下连入表达载体,建立pBAD(B)鄄hpv11L1原核表达重组质粒,在大肠杆菌宿主菌Top10中,经阿拉伯糖诱导,表达融合蛋白L1,经SDS鄄PAGE电泳和Westernblot进行鉴定。结果3株hpv11L1经测序发现变异一致,每株均有2个核苷酸变异,但未影响氨基酸变化。经SDS鄄PAGE鉴定L1蛋白相对分子质量为59×103,与预期值相同,Westernblot证明表达蛋白能与单克隆抗体反应,成功构建了pBAD(B)鄄hpv11L1原核表达系统。结论所构建的pBAD(B)鄄hpv11L1原核表达系统能够高效表达hpv11L1蛋白。

关键词：人乳头瘤病毒11型 L1基因原核表达系统 hpv11 基因表达疫苗