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疏肝健脾方对糖尿病大鼠甲状腺功能减退的影响

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实用医学杂志 2012年第24期28卷 4053-4055页

作者：雷永华李红徐蓉娟郑州市第一人民医院中西医结合科 450000 上海中医药大学附属龙华医院内分泌科 200032

目的:观察STZ诱导的糖尿病大鼠甲状腺功能及组织学改变并观察疏肝健脾方的调节作用,初步探讨其作用机制。方法:雄性SD大鼠45只,随机分为正常(N)组、糖尿病模型(M)组、疏肝健脾方(C)组,每组各15只。治疗12周后,测定各组大鼠T3、T4、FT3、... 详细信息

目的:观察STZ诱导的糖尿病大鼠甲状腺功能及组织学改变并观察疏肝健脾方的调节作用,初步探讨其作用机制。方法:雄性SD大鼠45只,随机分为正常(N)组、糖尿病模型(M)组、疏肝健脾方(C)组,每组各15只。治疗12周后,测定各组大鼠T3、T4、FT3、FT4、TSH水平,并观察甲状腺组织病理改变。结果:M组、C组的T3、T4、FT3、FT4均显著低于N组(P0.05);甲状腺组织显示M组、C组均符合甲减的病理特点,C组介于N组与M组之间。结论:STZ诱导的糖尿病大鼠并发甲状腺功能减退,疏肝健脾方能提高糖尿病大鼠的甲状腺功能,可能对hpt轴有一定调节作用。

关键词：糖尿病甲状腺功能减退疏肝健脾 hpt轴

四溴双酚A和四氯双酚A对非洲爪蛙甲状腺激素信号及下丘脑—垂体—甲状腺轴的干扰作用

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四溴双酚A和四氯双酚A对非洲爪蛙甲状腺激素信号及下丘脑—垂体—...

作者：周佳奇云南大学

学位级别：硕士

四溴双酚A(TBBPA)和四氯双酚A(TCBPA)是双酚A(BPA)的卤代衍生物,作为阻燃剂已经被广泛应用于电子产品,家具,塑料,合成纤维等材料中。目前,已经在大量的生物样品和非生物样品中被检出。由于TBBPA和TCBPA与甲状腺激素(TH)的结构相似,许多... 详细信息

四溴双酚A(TBBPA)和四氯双酚A(TCBPA)是双酚A(BPA)的卤代衍生物,作为阻燃剂已经被广泛应用于电子产品,家具,塑料,合成纤维等材料中。目前,已经在大量的生物样品和非生物样品中被检出。由于TBBPA和TCBPA与甲状腺激素(TH)的结构相似,许多研究关注了其在较高剂量下对TH信号干扰作用。然而,目前的研究缺乏对低剂量特别是环境相关剂量的TBBPA和TCBPA的毒性评价,也少有研究运用模式动物下丘脑-垂体-甲状腺轴(hpt轴)及TH靶器官整体评价TBBPA的内分泌干扰作用。在该项研究工作中,我们检测了TBBPA和TCBPA对大鼠垂体瘤细胞(GH3)增殖,TH响应基因及蛋白表达的影响。结果表明:TBBPA和TCBPA单独作用轻微地促进细胞增殖;两种化学品与三碘甲状腺原氨酸(T3)共暴露时,较低剂量(10或100 nmol/L)可促进TH响应基因表达,而高剂量(1000 nmol/L)呈现抑制作用,总体表现为双向剂量效应关系。体内实验中,我们暴露非洲爪蛙幼蛙不同剂量包括环境相关剂量在内的TBBPA14天后,记录了体重变化,检测了hpt轴相关的基因表达以及肝和脑中的TH响应基因表达及组织病理情况。我们发现:1-100 nmol/L的TBBPA处理14天时,对爪蛙的生长产生了一定的抑制作用;下丘脑中两个关键基因(trh和xtrhr3)表达下调;垂体中与发育(pit1,prop1和lhx3)和激素分泌相关的基因(pomc)表达紊乱,切片显示垂体远侧部着色加深(1 nmol/L TBBPA),整体变小(100 nmol/L TBBPA);幼蛙的甲状腺组织胶质减少及滤泡细胞长度变短;另外,幼蛙肝组织中的细胞肿大,血窦增多,2天暴露10 nmol/L或100 nmol/L TBBPA后,肝中trb,tgm2被上调,14天暴露1-100 nmol/L的TBBPA使得trb,tgm2,klf9或dio2基因被抑制,这表明了TBBPA暴露使得肝组织受到一定程度的损伤;脑中TH响应基因(trb,th/bzip,tgm2,klf9,mmp13和dio2)的表达变化说明了脑中的TH信号可能受到了干扰。综合以上结果,TBBPA干扰了GH3细胞的TH信号,还引起了非洲爪蛙幼蛙体内hpt轴及TH靶器官基因表达的紊乱和组织病变。鉴于非洲爪蛙对污染物较高的敏感性,这些发现提示:TBBPA对动物甚至对人尤其是婴儿都存在潜在的环境暴露风险,需要更加严格地管理TBBPA的生产及使用,防止过度污染对生物体内分泌系统产生干扰作用。

关键词： TBBPA TCBPA GH3细胞 TH信号非洲爪蛙 hpt轴

10.6μm激光灸对肾阳虚大鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴的调节作用

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10.6μm激光灸对肾阳虚大鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴的调节作用

作者：潘文上海中医药大学

学位级别：硕士

目的:观察10.6μm激光灸对氢化可的松所致肾阳虚模型大鼠生长性能的改善作用及其对下丘脑-垂体-甲状腺轴的调节作用,为临床广泛存在的肾阳虚证提供有效的治疗方法和实验依据。方法:选取雄性SD大鼠50只随机抽取10只作为空白对照组,剩余4... 详细信息

目的:观察10.6μm激光灸对氢化可的松所致肾阳虚模型大鼠生长性能的改善作用及其对下丘脑-垂体-甲状腺轴的调节作用,为临床广泛存在的肾阳虚证提供有效的治疗方法和实验依据。方法:选取雄性SD大鼠50只随机抽取10只作为空白对照组,剩余40只作为氢化可的松模型组,实验开始即对40只模型大鼠进行氢化可的松注射液内侧股二头肌肌注,剂量25 mg/kg,左右交替连续注射15天。空白对照组采取相同的方法注射等体积的生理盐水。造模成功后将氢化可的松模型大鼠分为模型对照组、模型+假激光组、模型+激光灸组和模型+艾灸组,每组各10只,分别进行假激光、激光灸和艾灸命门、关元穴的治疗,激光灸疗仪功率设为80m W,每穴治疗10min,隔日1次,共治疗10次。在实验期间观察记录大鼠一般情况,并在首末次干预时,分别记录命门和关元两穴干预前后温度。在造模后和治疗后留取尿液样本检测大鼠尿17-OHCS含量,于末次治疗后,各组大鼠腹主动脉采血观察血浆c AMP、c GMP,血清TSH、T3、T4含量的变化,计算相关脏器指数,并测定下丘脑TRHR1蛋白表达情况。结果:（1）与空白对照组相比,模型对照组大鼠体质量、肛温、24h饮水量、尿量和尿17-OHCS含量均减少,存在显著差异（P＜0.01）;模型+激光灸组和模型+艾灸组与模型对照组相比上述指标均得到明显改善,差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。（2）末次治疗前穴位温度与首次治疗时相比,模型+激光灸组命门穴温度升高,模型+艾灸组命门和关元两穴温度均升高,存在统计学差异（P＜0.05）;利用红外摄像技术发现,模型+激光灸组和模型+艾灸组大鼠整体体表温度均较模型+假激光组高,存在显著统计学差异（P＜0.01）。（3）模型对照组大鼠5min总路程、中央活动时间和中央活动距离均少于空白对照组;经激光灸治疗后5min活动总路程能显著提高,经艾灸治疗后提高了中央活动距离,差异有统计学意义（P＜0.01）。（4）模型对照组与空白对照组相比血浆c AMP含量下降、c GMP含量升高、c AMP/c GMP比值减小,有显著差异（P＜0.01）;模型+激光灸组和模型+艾灸组与模型对照组相比c AMP含量增多、c AMP/c GMP比值增大,有统计学差异（P＜0.05或P＜0.01）,与空白对照组相比c GMP含量变化,无统计学差异（P＞0.05）。模型对照组大鼠血清TSH、T3及T4浓度与空白对照组相比均降低,有显著差异（P＜0.01）;模型+艾灸组与模型对照组相比TSH、T3及T4浓度均有显著提高（P＜0.01）;模型+激光灸组与模型对照组相比TSH及T3浓度提高有差异（P＜0.05）。（5）与空白对照组相比,模型对照组和模型+假激光组大鼠下丘脑TRH-R1蛋白表达量减少,经激光灸和艾灸治疗后,TRHR1蛋白表达显著增加,差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。（6）与空白对照组相比,模型对照组大鼠胸腺、脾脏、肾上腺、睾丸和附睾指数均减少,肝脏、肾脏指数均增大,差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。与模型对照组相比,模型+激光灸组大鼠胸腺、脾脏、肾上腺、睾丸和附睾指数均增大,肾脏指数减小,差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）;模型+艾灸组大鼠胸腺、脾脏、肾上腺和睾丸指数均增大,肝脏指数减小,差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。结论:10.6μm激光灸和艾灸均可以提高肾阳虚大鼠的生长性能,保护机体胸腺、脾脏、肾上腺、睾丸、附睾等相关脏器。可能通过增加尿17-OHCS含量和外周血中c AMP、TSH、T3和T4的含量,保护下丘脑TRH-R1蛋白来缓解肾阳虚对hpt轴的抑制作用。

关键词：氢化可的松肾阳虚 hpt轴 10.6μm激光灸艾灸

女性抑郁症中医体质特征与神经内分泌相关研究

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女性抑郁症中医体质特征与神经内分泌相关研究

作者：薛茜尹天津中医药大学

学位级别：硕士

目的:研究女性抑郁症患者的中医体质特征、神经内分泌指标特点及中医体质的神经内分泌特点。方法:收集2019年7月开始至2020年12月天津中医药研究院附属医院心身疾病科就诊的女性抑郁症患者136人,年龄范围在26-65岁。136例研究对象均于... 详细信息

目的:研究女性抑郁症患者的中医体质特征、神经内分泌指标特点及中医体质的神经内分泌特点。方法:收集2019年7月开始至2020年12月天津中医药研究院附属医院心身疾病科就诊的女性抑郁症患者136人,年龄范围在26-65岁。136例研究对象均于就诊当日完成《中医体质分类与判定量表》及PHQ-9量表。根据月经情况分时段进行神经内分泌指标检测。检测指标:HPA轴:促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(CORT);hpt轴:游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)和促甲状腺激素(TSH);HPG轴:促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)和雌二醇(E2)。检测时间:月经周期规律的患者于月经周期第2-5天清晨8点,空腹抽取静脉血;围绝经期或已绝经患者于就诊次日清晨8点,空腹抽取静脉血。按照月经情况及抑郁严重程度两种分组方式进行分析讨论:1.按照月经情况分为三组:(1)月经规律组:月经周期规律;(2)围绝经期组:年龄≥40岁,既往月经规律,近3个月月经不规律,或绝经≤12个月;(3)绝经组:既往月经规律,已绝经>12个月。2.按照抑郁严重程度(PHQ-9得分)分为四组:(1)轻度抑郁组:5-9分;(2)中度抑郁组:10-14分;(3)中重度抑郁组:15-19分;(4)重度抑郁组:20-27分。将收集数据用Excel软件建立数据库,采用SPSS 22.0进行数据统计分析。结果:1.研究对象总体情况分布收集到的136例女性抑郁症患者月经情况分布:绝经期组人数最多(50%),其次依次为月经规律组(26%)和围绝经期组(24%);抑郁严重程度分布:中度抑郁人数最多(33.1%),其次依次是轻度抑郁(30.1%)、中重度抑郁(29.4%)和重度抑郁(7.3%)。中医体质分布:气虚质人数最多(21.3%),其次依次是平和质(17.6%)、气郁质(16.9%)、阳虚质(14%)、痰湿质(12.5%)、血瘀质(8.8%)和阴虚质(8.8%),未出现湿热质和特禀质;其中有兼夹体质的78人中,气郁质被兼夹频率最高(55%),其次依次是气虚质(23.1%)、痰湿质(10.3%)、阳虚质(5.1%)、阴虚质(2.6%)、血瘀质(2.6%)和湿热质(1.3%),未出现兼夹体质为特禀质的患者。2.女性抑郁症患者中医体质特征2.1女性抑郁症患者月经规律组体质分布前三为平和质(25%)、气虚质(22.2%)和气郁质(16.7%),围绝经期组体质分布前三为气虚质(28.1%)、平和质(25%)和阳虚质(18.8%),绝经组体质分布前三为气郁质(23.5%)、气虚质(17.6%)和痰湿质(14.7%);女性抑郁症患者主体质特征与月经情况无显著性差异(X=18.138,p>0.05)。对于月经规律和围绝经期抑郁症患者,主体质和兼夹体质不具有相关性;对于绝经后抑郁症患者,主体质和兼夹体质具有相关性(X=64.935,p轴和hpt轴指标与月经情况没有相关性,p值均>0.05;HPG轴三个指标均与月经情况相关:E2浓度与月经情况呈负相关关系(r=-0.72,phpt轴和HPG轴指标与抑郁程度没有相关性,p值均>0.05;HPA轴两个指标均与月经情况相关:ACTH浓度与月经情况呈正相关(r=0.526,p<0.01),CORT浓度与抑郁程度呈正相关(r=

关键词：女性抑郁症中医体质 HPA轴 hpt轴 HPG轴

PFDoA和PFHxA对斑马鱼幼鱼甲状腺干扰效应的研究

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PFDoA和PFHxA对斑马鱼幼鱼甲状腺干扰效应的研究

作者：张胜男山西大学

学位级别：硕士

本文以两种广泛使用的全氟化合物——全氟己酸(Undecafluorohexanoic Acid,PFHxA)和全氟十二酸(Perfluorododecanoic acid,PFDoA)为研究物质,选择模式生物斑马鱼为研究对象,从内分泌干扰角度,探讨了它们的毒性效应和具体的作用机制。首... 详细信息

本文以两种广泛使用的全氟化合物——全氟己酸(Undecafluorohexanoic Acid,PFHxA)和全氟十二酸(Perfluorododecanoic acid,PFDoA)为研究物质,选择模式生物斑马鱼为研究对象,从内分泌干扰角度,探讨了它们的毒性效应和具体的作用机制。首先,本研究从内分泌干扰的角度,揭示了两种全氟化何物PFDoA和PFHxA暴露96 h之后对斑马鱼幼鱼的甲状腺激素水平以及下丘脑-垂体-甲状腺(hypothalamic-pituitary-thyroid,hpt)轴相关基因和蛋白表达的影响,进而明确了PFDoA和PFHxA对甲状腺系统的毒性作用及其机理。此外,从生长发育表观指标、基因和蛋白的表达以及激素水平的变化进一步比较了长链PFDoA和短链PFHxA对斑马鱼胚胎发育毒性及内分泌干扰效应的的异同之处。主要研究结果如下:(1)暴露不同浓度的PFDoA(0、0.24、1.2和6 mg/L)96 h后,斑马鱼生长发育受阻,孵化率、心率和体长显著降低,畸形率和死亡率明显升高。同时斑马鱼幼鱼还出现脊柱弯曲、心包囊水肿等致畸现象。6 mg/L的暴露组显著抑制了斑马鱼体内四碘甲状腺原氨酸(tetraiodothyronine,T4)和甲状腺激素三碘甲状腺原氨酸(triiodothyronine,T3)的分泌。与此同时hpt轴的相关基因的表达模式也发生了明显的变化。因此,PFDoA可能是通过调节hpt轴上的重要基因的表达进而干扰甲状腺激素的分泌,从而影响斑马鱼胚胎和幼鱼的早期发育。且对于不同暴露浓度,具有显著的剂量-效应关系。(2)暴露不同浓度的PFHxA(0、0.48、2.4和12 mg/L)96 h后斑马鱼生长发育同样受阻,孵化率、心率和体长明显降低,畸形率和死亡率显著升高。同时幼鱼出现尾部变形、脊柱弯曲和心包囊水肿等致畸现象。暴露组显著抑制了幼鱼体内T4的分泌,却诱导了T3含量的升高。同时hpt轴的相关基因的表达模式也发生了明显的变化。因此,PFHxA也可能通过调节hpt轴上的重要基因的表达进而干扰甲状腺激素的分泌,从而影响斑马鱼胚胎和幼鱼的早期发育。且对于不同的暴露浓度,具有显著的剂量-效应关系。(3)结果显示,PFDoA对斑马鱼幼鱼的畸形率和体长的影响尤其显著,其急性毒性强于PFHxA。此外,在斑马鱼早期发育过程中,crh,trh和tshβ的分泌与甲状腺激素的分泌途径密切相关,被视为hpt轴上重要的调节因子。虽然PFDoA和PFHxA对这三种重要调节因子的作用是一致的,却引起了不同的甲状腺激素水平变化,进而产生不同的内分泌干扰效应。

关键词： PFDoA PFHxA 斑马鱼胚胎 hpt轴甲状腺紊乱

电针“水沟-尾尖”组穴对全麻兔的催醒作用研究

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电针“水沟-尾尖”组穴对全麻兔的催醒作用研究

作者：陶春旭西南大学

学位级别：硕士

当前临床麻醉上动物的品种繁多,不同动物品种及同一品种的不同个体间对于麻醉的敏感差异巨大,且老年动物手术对麻醉的要求更高。此种情况下,降低麻醉过深和苏醒延迟等临床手术麻醉常见的并发症具有显著临床意义和经济价值。与临床麻醉... 详细信息

当前临床麻醉上动物的品种繁多,不同动物品种及同一品种的不同个体间对于麻醉的敏感差异巨大,且老年动物手术对麻醉的要求更高。此种情况下,降低麻醉过深和苏醒延迟等临床手术麻醉常见的并发症具有显著临床意义和经济价值。与临床麻醉的催醒药物易产生毒副性和耐药性且用药条件谨慎相比,动物的水沟穴和尾尖穴有明显的催醒效果且电针具有价格低廉、操作简单的优点。本研究选取水沟穴和尾尖穴做为组合来探索电针对全麻新西南大白兔的催醒作用,在对最佳电针促醒参数组合筛选的基础上,从hpt轴、HPA轴、Orexin觉醒蛋白及其受体入手,使用最佳参数处理组对全麻兔“水沟-尾尖”组穴进行电针催醒处理,运用荧光定量PCR和酶联吸附反应相关分子生物学技术,分析兔hpt轴、HPA轴以及脑各区域Orexin前体及其受体的变化,来探讨电针穴位组合对麻醉催醒的机制。1.“水沟-尾尖”组穴电针最佳促醒参数的筛选本试验选使用速眠新对162只新西兰大白兔进行最佳参数筛选,随机分为27组,根据波形(连续波、断续波、疏密波)、频率(20Hz、40Hz、60Hz、80Hz、100Hz)、电流强度(4mA、8mA、12mA、16mA、20mA)做正交实验设计,设置25(n=6)组作为电针催醒组处理,设置一组自然苏醒组(n=6)和一组假针刺组(n=6)(只针刺不电刺激)作为对照组。以总苏醒时间为评分标准进行筛选。试验结果表明:电针处理参数为断续波/40Hz/4mA时,催醒效果最好。2.电针催醒对全麻兔的hpt轴、HPA轴作用本试验选取12只新西兰大白兔随机分为最佳电针参数处理组和自然苏醒组,分别于麻醉30min(施加电针处理时间点)、第一次翻正反射、完全苏醒3个时刻点采血并迅速分离血清,用酶联免疫吸附法测定血清中下丘脑-垂体-甲状腺轴(hpt轴)的促甲状激素释放激素(TRH)、促甲状腺激素(TSH)、甲状腺素(T4)含量和下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)的促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)和肾上腺素(EPI)的含量变化,观测电针处理对全麻兔应激作用。试验结果表明:电针最佳参数处理组在麻醉30min、第一次翻正反射、完全苏醒三个时刻血清中hpt轴的TRH、TSH各时刻点差异不显著(P>0.05),T4在第一次翻正反射时下降,然后在完全苏醒时显著上升(P0.05);HPA轴的CRH、ACTH、EPI含量变化差异不显著(P>0.05)。电针“水沟-尾尖”组穴对全麻兔可能通过抑制hpt轴实现全麻催醒;HPA轴可能不参与电针催醒。3.电针催醒对兔脑Orexin前体和受体基因表达的影响本试验选取12只新西兰大白兔随机分为最佳电针参数处理组和自然苏醒组。在全麻兔电针催醒第一次翻正反射时同时处死两组兔,立即采集兔大脑皮层、小脑、海马、丘脑、脑干组织进行液氮冻存。采用qPCR技术对比两组兔各脑组织Prepro-orexin、OX1R、OX2R的相对表达量。试验结果表明:与自然苏醒组相比,电针处理组电针处理组Prepro-orexin mRNA相对表达量在大脑皮层、小脑、海马、丘脑、脑干均显著上升,上调表达为大脑皮层2.51倍,小脑2.77倍,海马2.44倍、丘脑1.44倍和脑干4.27倍;电针处理组OX1R相对表达水平在大脑皮层、海马、丘脑显著上升,上调表达为大脑皮层3.26倍,海马2.75倍,丘脑3.17倍;电针处理组OX2R相对表达水平在大脑皮层、海马、丘脑和脑干显著上升,上调表达为大脑皮层4.18倍,海马6.14倍,丘脑1.5倍和脑干2.34倍。电针“水沟-尾尖”组穴可能通过激活orexin觉醒系统实现催醒。全文结果表明,电针处理参数设置为断续波/40Hz/4mA时,催醒效果最佳;在此参数下,电针刺激通过抑制hpt轴产生相关激素的分泌及可能促进Orexin系统相关蛋白基因的合成,从而促进全麻兔的觉醒。

关键词：催醒电针参数 hpt轴 HPA轴 orexin觉醒系统

饲料硒添加对草鱼生长调控及镉毒性的拮抗作用研究

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饲料硒添加对草鱼生长调控及镉毒性的拮抗作用研究

作者：马聘华中农业大学

学位级别：硕士

硒(Selenium,Se)是水产动物生长所必需的矿物质元素,补硒可以促进动物生长,增强抗氧化能力,以及拮抗重金属毒性等。硒主要通过合成硒蛋白来发挥其生物学活性。脱碘酶(DIO)是一类重要的硒蛋白,它的主要功能是催化甲状腺素(T4)脱碘形成三... 详细信息

硒(Selenium,Se)是水产动物生长所必需的矿物质元素,补硒可以促进动物生长,增强抗氧化能力,以及拮抗重金属毒性等。硒主要通过合成硒蛋白来发挥其生物学活性。脱碘酶(DIO)是一类重要的硒蛋白,它的主要功能是催化甲状腺素(T4)脱碘形成三碘甲状腺原氨酸(T3)。已有研究表明,补硒会增强DIO的活性,调节机体甲状腺激素(TH)的水平。镉(Cadmium,Cd)是一种危害性极强的重金属污染物,有研究表明,硒可以通过清除动物体内的自由基,修复抗氧化系统,并且硒蛋白可以与重金属镉结合形成惰性复合物来减轻其毒性。为了进一步探究补硒对鱼类生长以及甲状腺激素代谢的影响和补充饲料硒对鱼类拮抗镉毒性的作用,本研究以草鱼为试验对象,将180尾健康草鱼分为3组,分别饲喂含硒0.141、0.562和1.044 mg/kg的饲料60天,研究补硒对草鱼生长、下丘脑-垂体-甲状腺(hpt)轴、生长激素-胰岛素样生长因子(GH-IGF)轴的影响。同时在饲料硒投喂试验结束后对草鱼进行了急性镉胁迫试验,通过测量分析草鱼肝脏中丙二醛(MDA)含量,抗氧化酶活性,重金属清除基因以及细胞凋亡相关基因的相对转录水平来评估膳食硒对重金属毒性的拮抗作用。研究结果如下:1.饲料中添加硒可以提高草鱼的增重和特定生长率,补硒组草鱼肝脏中三种DIO的活性显著高于对照缺硒组。两个补硒组草鱼血清中促甲状腺激素(TSH)、T3和游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)的水平均显著提高,同时T4和游离甲状腺素(FT4)的含量显著降低。甲状腺组织学观察表明缺硒会导致甲状腺滤泡上皮细胞肥大,胶质空泡化。此外,随着日粮硒浓度的增加,dio1、dio2和dio3的相对转录水平呈上升趋势。hpt轴相关基因(crh、tsh-β、ttr、tr-s、tpo、nis)和GH/IGF1相关基因(gh、ghr、igf1、igf1r)的相对转录水平在补硒组显著上调。除了T3含量和dio1的相对转录水平外,上述指标在0.562 mg Se/kg组与1.044 mg Se/kg组之间均无显著差异。结果提示,补充日粮硒促进了草鱼肝脏中DIO活性和甲状腺激素代谢,调节了hpt轴和GH/IGF-1轴相关基因的转录水平,这些可能是促进草鱼生长的重要因素。2.经水体镉急性暴露后,补硒组草鱼肝脏中MDA含量与对照缺硒组相比显著减少。GSH-Px、CAT和SOD的活性随着镉胁迫时间增长呈现出先上升后减弱的趋势,此外,补硒组GSH-Px的活性显著高于对照缺硒组。1.044 mg Se/kg组草鱼肝脏中重金属清除基因abcc2的相对转录水平显著低于0.562 mg Se/kg组和对照组。0.562 mg Se/kg与1.044 mg Se/kg组草鱼肝脏中重金属消除基因mt2的相对转录水平显著低于对照组。镉诱导草鱼肝脏中凋亡相关因子jnk和bax的表达,凋亡信号基因caspase3、caspase8、caspase9的相对转录水平在镉暴露后显著升高。组间比较发现,补硒可以通过下调jnk、bax、caspase3、caspase8、caspase9基因的相对表达水平,上调抗凋亡基因bcl-2来抑制重金属镉诱导的细胞凋亡。TUNEL检测结果发现,补硒组草鱼肝脏细胞的凋亡指数显著低于对照组。综合分析,补充饲料硒可以通过提升GSH-Px的活性有效减轻重金属镉引起的过氧化损伤,并且可以抑制JNK-Caspase途径来减轻镉引起的肝脏细胞凋亡。

关键词：草鱼酵母硒镉 hpt轴 GH/IGF轴细胞凋亡

三唑类杀菌剂对热带爪蟾胚胎及蝌蚪致畸效应与内分泌干扰机制研究

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三唑类杀菌剂对热带爪蟾胚胎及蝌蚪致畸效应与内分泌干扰机制研究

作者：李星翰浙江农林大学

学位级别：硕士

三唑类杀菌剂是中国使用量最大的一类杀菌剂,以其高效广谱等优点广泛使用于水稻、水果和蔬菜等作物。本论文选用使用量较大的四种三唑类杀菌剂戊唑醇、三唑酮、三环唑和己唑醇为代表农药,以热带爪蟾为试验生物,研究了四种杀菌剂对热带... 详细信息

三唑类杀菌剂是中国使用量最大的一类杀菌剂,以其高效广谱等优点广泛使用于水稻、水果和蔬菜等作物。本论文选用使用量较大的四种三唑类杀菌剂戊唑醇、三唑酮、三环唑和己唑醇为代表农药,以热带爪蟾为试验生物,研究了四种杀菌剂对热带爪蟾的急性毒性、胚胎致畸效应,变态发育毒性,甲状腺内分泌干扰效应的影响。研究结果主要包括以下三个方面:首先,通过急性毒性试验以及胚胎致畸实验(FETAX),确定了在环境浓度下,热带爪蟾对戊唑醇相较其余三种农药更为敏感,在环境浓度0.02mg/L作用下,戊唑醇处理组的死亡率达到15%,显著高于三唑酮和己唑醇;畸形率达到7.5%,显著高于三唑酮和己唑醇;会造成热带爪蟾胚胎腹部水肿,脊索弯曲,尾巴弯曲和尾巴短小等畸形。因此,在同等浓度下,四种三唑类杀菌剂中,戊唑醇对热带爪蟾胚胎的存活、致畸影响最大。其次,对51期热带爪蟾蝌蚪暴露21d结果表明,戊唑醇三个作用浓度7d暴露均使爪蟾蝌蚪后肢长度相较于7d空白对照组显著变短,而对体重、吻泄距无显著差异;21d暴露后,在2mg/L处理组体重、吻泄距和后肢长均显著低于21d空白对照组。由此可以得出环境浓度作用下,戊唑醇对热带爪蟾蝌蚪的生长发育有抑制作用。最后,通过ELISA试剂盒检测热带爪蟾蝌蚪7d,21d甲状腺激素水平,实时荧光定量检测hpt轴相关基因(nis,trα,trβ,ttr,tshr,dio2,dio3)表达。结果表明2mg/L戊唑醇处理21d暴露会导致热带爪蟾蝌蚪T3, T4激素水平上升。7d暴露后nis,ttr,tshr和dio2基因表达量在2mg/L时相较于对照组有显著上升,tra和trβ则与对照组无显著差异。21d暴露后除dio3外,其余6个基因在2mg/L浓度表达量均有显著上升。甲状腺激素水平变化和hpt轴相关基因的转录水平差异说明戊唑醇对热带爪蟾存在明显的甲状腺内分泌干扰作用。

关键词：三唑类杀菌剂热带爪蟾致畸效应甲状腺 hpt轴

饲喂高精料日粮引起SARA对奶牛中枢信号通路及肝脏糖脂代谢的影响及机制研究

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饲喂高精料日粮引起SARA对奶牛中枢信号通路及肝脏糖脂代谢的影响...

作者：吴晨南京农业大学

学位级别：硕士

由于我国优质牧草的严重匮乏,在养殖中通常给泌乳奶牛饲喂高谷物精料日粮以满足其高产乳的能量需求。这在一定程度上可提升奶牛的产乳量,然而因谷物日粮发酵速度快,长期饲喂常导致瘤胃p H降低至非生理水平,超过其缓冲能力,最终诱发亚急... 详细信息

由于我国优质牧草的严重匮乏,在养殖中通常给泌乳奶牛饲喂高谷物精料日粮以满足其高产乳的能量需求。这在一定程度上可提升奶牛的产乳量,然而因谷物日粮发酵速度快,长期饲喂常导致瘤胃p H降低至非生理水平,超过其缓冲能力,最终诱发亚急性瘤胃酸中毒（Subacute rumen acidosis,SARA）。临床上SARA动物表现出抑郁样行为,出现昏睡、神情冷漠、采食下降等现象。下丘脑是哺乳动物的神经内分泌中枢,海马则是学习与记忆的关键中枢,两者均是机体能量代谢调控的中枢部位。然而,迄今有关SARA动物抑郁样行为的中枢功能基因表达及分子通路的变化尚未见报道。SARA动物代谢紊乱可能与激素分泌异常有关,其中下丘脑-垂体-甲状腺轴（Hypothalamus-pituitary-thyroid axis,hpt axis）功能活动是体内物质代谢和能量代谢的关键激素之一。本实验基于RNA-seq转录组技术探究了高精料日粮诱导的SARA泌乳奶牛下丘脑和海马中功能基因转录和相关信号通路的改变。在此研究基础上,以N38细胞为模型,初步探索甲状腺激素对γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）合成关键酶—谷氨酸脱羧酶（Glutamate decarboxylase,GAD）表达的影响。以hpt轴活性变化为切入点,进一步探究了SARA奶牛肝脏糖脂代谢的变化及甲状腺激素的调节作用。1转录组测序分析饲喂高精料日粮对奶牛海马和下丘脑基因转录的影响本研究旨在探讨SARA导致泌乳反刍动物抑郁样行为的中枢分子机制,实验选取12头泌乳中期的荷斯坦奶牛,预饲7天后随机分为2组,分别为低精料组（Low concentrate,LC）和高精料组（High concentrate,HC）,每组6头奶牛。LC组奶牛饲喂精粗比为4:6的日粮,HC组奶牛饲喂精粗比为6:4的日粮。连续饲喂21天后屠宰采样。与LC组相比,HC组奶牛瘤胃液p H极显著降低,且低于5.8,表明HC组奶牛患SARA。分别从LC组和HC组中随机选取3头奶牛的海马和下丘脑组织用于RNA-seq基因转录组测序。以|logFC|≥2及FDRhpt轴及下丘脑GABA合成的影响本研究旨在探究SARA奶牛hpt轴功能活性的变化及对中枢递质GABA合成的影响。实验设计同第一部分,采集奶牛血液和中枢组织,检测血液及组织中激素水平及相关基因和蛋白的表达。此外,以下丘脑N38细胞为实验对象,进一步探究甲状腺激素对GABA合成关键酶—GAD表达的影响。实验结果显示,与LC组相比,HC组奶牛血清中皮质醇和胰岛素水平无显著变化,但甲状腺激素T、T水平极显著升高,游离T（Free T,FT）水平显著升高,而游离T（Free T,FT）水平无显著变化。对脑内甲状腺激素稳态相关蛋白和甲状腺激素受体的表达进行检测,结果显示,与LC组相比,HC组奶牛海马中甲状腺激素受体THRA基因表达显著下调,甲状腺激素转运体OATP1C1和脱碘酶DIO2基因表达显著升高,DIO3基因表达有升高趋势,DIO2和DIO3蛋白表达则无显著变化。与LC组相比,HC组奶牛下丘脑THRA和DIO3基因表达显著升高,THRB和DIO2基因表达极显著下调,MCT8和OATP1C1基因表达有下降趋势,THRB和DIO2蛋白表达显著降低,而DIO3蛋白表达则显著升高,从而导致下丘脑内FT含量显著降低。以上结果提示:SARA奶牛下丘脑对甲状腺激素的敏感性下降,引起负反馈减弱,导致甲状腺激素分泌增加。此外,HC组奶牛下丘脑内GABA合成关键基因GAD2及蛋白GAD65的表达均显著低于LC组,与GABA

关键词： SARA 下丘脑海马 hpt轴肝脏奶牛