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hplc-qtof-ms分析六味地黄丸不同部位的化学成分

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中药新药与临床药理 2018年第4期29卷 489-496页

作者：赵婷秀曹迪茆文莉李嘉燕罗惠赵钟祥杜标炎广州中医药大学基础医学院广东广州510006 广州中医药大学中药学院广东广州510006

目的采用高效液相色谱—四级杆—飞行时间串联质谱(hplc-qtof-ms)法对六味地黄丸不同极性溶剂提取部位中的化学成分进行鉴定,并比较不同极性提取部位之间的成分差异。方法色谱分离采用WatersXBridge BEH C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5... 详细信息

目的采用高效液相色谱—四级杆—飞行时间串联质谱(hplc-qtof-ms)法对六味地黄丸不同极性溶剂提取部位中的化学成分进行鉴定,并比较不同极性提取部位之间的成分差异。方法色谱分离采用WatersXBridge BEH C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈(A)和0.1%甲酸溶液(B)为流动相梯度洗脱,流速为0.6 m L·min^(-1);质谱采用电喷雾离子源(ESI),在正负离子模式下扫描采集数据,根据准分子离子及二级碎片离子,并结合对照品及文献报道的质谱数据对六味地黄丸不同极性溶剂提取部位中的化学成分进行鉴定。结果从六味地黄丸的水、50%乙醇、75%乙醇、乙醇、石油醚和混合溶剂提取部位中分别鉴定出41、41、41、40、7和39个化合物。结论本研究首次对六味地黄丸的不同极性提取部位中的化学成分进行了鉴定和对比分析,丰富了六味地黄丸化学成分的结构信息,可为六味地黄丸的药效物质研究提供了科学参考。

关键词：六味地黄丸 hplc-qtof-ms 不同极性部位化学成分

Anti-asthmatic mechanism of the Huashanshen dripping pill via suppressing contraction of the airway smooth muscle

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Traditional Medicine Research 2022年第3期7卷 19-27页

作者： Yu Liu Ni-Na Cui Xuan-Shuo Liu Peng-Cheng Lin Lorenzo Pecoraro Giuseppe Venturella Shu-Li Man Wen-Yuan Gao The Innovation Platform for the Development and Construction of Special Project of Key Laboratory for Tibet Plateau Phytochemistry of Qinghai Province(2017-ZJ-Y19) College of pharmacyQinghai Nationalities UniversityXining 810007China State Key Laboratory of Food Nutrition and Safety Key Laboratory of Industrial MicrobiologyMinistry of EducationTianjin Key Laboratory of Industry MicrobiologyNational and Local United Engineering Lab of Metabolic Control Fermentation TechnologyChina International Science and Technology Cooperation Base of Food Nutrition/Safety and Medicinal ChemistryCollege of BiotechnologyTianjin University of Science&TechnologyTianjin 300457China Tianjin Key Laboratory for Modern Drug Delivery and High Efficiency School of Pharmaceutical Science and TechnologyTianjin UniversityTianjin 300072China Department of Agricultural Food and Forest SciencesUniversity of PalermoPalermoItaly

Background:The Huashanshen(HSS)dripping pill has been widely used in asthma for a long time in ***,the relaxant mechanism of HSS is not well ***:In this report,high performance liquid chromatography coupled with quadrupole time-of-flight mass spectrometry was used to identify the constituents in rat plasma after oral administration of ***-sensitized allergic asthma and isolated trachea were studied for the anti-asthmatic mechanism of ***:D-anisodamine,L-anisodamine,scopolamine and atropine were detected in the rat plasma containing *** was clear that the HSS inhibited the release of inflammatory mediators,regulated the balance of T-helper 1 and T-helper 2 to reduce the airway inflammation,and relaxed the tracheal smooth muscle by controlling the KCa channel,Ca^(2+)influx and release to reduce the airway ***:Atropine,anisodamine and scopolamine might be active compounds of HSS which inhibited the release of inflammatory mediators,regulated the balance of Th1/Th2,and relaxed the tracheal smooth muscle to reduce airway hyperresponsiveness.

关键词： Huashanshen dripping pill hplc-qtof-ms allergic asthma airway remodeling inflammation airway smooth muscle

A strategy for rapid discovery of traceable chemical markers in herbal products using MZmine 2 data processing toolbox:A case of Jing Liqueur

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Chinese Herbal Medicines 2021年第3期13卷 430-438页

作者： Jing Zhou Feng-jie Liu Xin-xin Li Ping Li Hua Yang Yuan-cai Liu Yan-he Chen Chao-dan Wei Hui-jun Li State Key Laboratory of Natural Medicines China Pharmaceutical UniversityNanjing 210009China Hubei Provincial Key Laboratory for Quality and Safety of Traditional Chinese Medicine Health Food Jing Brand Co.Ltd.Daye 435100China Jing Brand Research Institute Jing Brand Co.Ltd.Daye 435100China

Objective:The quality evaluation of herbal products remains a big *** markers are the core concept of the authentication of herbal ***,the discovery of traceable markers is labor-intensive and *** aim of this study is to develop a convenient approach to rapidly screen the traceable markers for herbal product ***:Commercial Jing Liqueur and its 22 species of herbal ingredients were analyzed using hplcqtof-ms and GC–ms to characterize nonvolatile and volatile *** acquired data were imported into MZmine 2 software for mass detection,chromatogram building,deconvolution and *** aligned data were exported into a csv file and then traceable markers were selected using the built-in filter function in ***,the traceable markers were identified by searching against online databases or publications,some of which were confirmed by reference ***:A total of 288 chemical features transferred from herbal materials to Jing Liqueur product were rapidly screened *** them,52 markers detected by hplc-qtof-ms were annotated,while nine volatile markers detected by GC–ms were ***,30 of these markers were confirmed by comparing with reference standards.A chemical fingerprint consisting of traceable markers was finally generated to ensure the authentication and quality consistency of Jing ***:A strategy for rapid discovery of traceable markers in herbal products using MZmine 2 software was developed.

关键词： GC–ms herbal products hplc-qtof-ms Jing Liqueur MZmine 2 traceable markers

毛蕊花糖苷在常氧、缺氧大鼠体内药动学的比较

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中成药 2022年第4期44卷 1041-1047页

作者：王维刚李晓琳燕娜刘天龙王芃郭姿良吴迪李茂星联勤保障部队第九四○医院临床药学科甘肃兰州730050 甘肃中医药大学药学院甘肃兰州730000 甘肃省高原药学行业技术中心甘肃兰州730050 兰州大学药学院甘肃兰州730030 宁夏医科大学药学院宁夏银川750004

目的比较毛蕊花糖苷在常氧、缺氧大鼠体内药动学。方法采用低压低氧动物实验舱模拟高原环境制备急性缺氧大鼠模型,常氧、缺氧大鼠灌胃给予毛蕊花糖苷(300 mg/kg),于5、10、15、30、45 min及1、1.5、2、4、6、8、12、24 h采血,hplc-qtof... 详细信息

目的比较毛蕊花糖苷在常氧、缺氧大鼠体内药动学。方法采用低压低氧动物实验舱模拟高原环境制备急性缺氧大鼠模型,常氧、缺氧大鼠灌胃给予毛蕊花糖苷(300 mg/kg),于5、10、15、30、45 min及1、1.5、2、4、6、8、12、24 h采血,hplc-qtof-ms法检测毛蕊花糖苷、羟基酪醇、咖啡酸血药浓度,计算主要药动学参数。结果常氧、缺氧大鼠血浆中均未检测到羟基酪醇。与常氧大鼠血浆比较,缺氧大鼠血浆中毛蕊花糖苷AUC_(0~)_(t)、AUC_(0~∞)、C_(max)降低(P<0.05),T_(max)、V_(z)/F升高(P<0.05);咖啡酸AUC_(0~)_(t)、AUC_(0~∞)、C_(max)降低(P<0.05),MRT_(0~∞)、T_(max)、V_(z)/F升高(P<0.05)。结论在缺氧条件下,毛蕊花糖苷及其活性代谢产物咖啡酸的药动学参数发生明显变化。

关键词：毛蕊花糖苷常氧缺氧体内药动学 hplc-qtof-ms

基于液质联用技术的右兰索拉唑生物等效性评价和QO-58lysine在大鼠体内代谢、排泄研究

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基于液质联用技术的右兰索拉唑生物等效性评价和QO-58lysine在大...

作者：张佳琪河北医科大学

学位级别：硕士

右兰索拉唑属于质子泵抑制剂,是由日本武田公司研发的治疗食管炎的新药,本药在剂型上采用双延迟释放（DDR）系统,延长了药物的作用时间,增强了患者的依从性,临床疗效明显,因专利保护于2020年即将到期,因此该药成为仿制热点。QO-58是经... 详细信息

右兰索拉唑属于质子泵抑制剂,是由日本武田公司研发的治疗食管炎的新药,本药在剂型上采用双延迟释放（DDR）系统,延长了药物的作用时间,增强了患者的依从性,临床疗效明显,因专利保护于2020年即将到期,因此该药成为仿制热点。QO-58是经过高通量筛选得到的一种全新KCNQ型钾离子通道开放剂,药效学初步研究提示其具有抗惊厥、抗癫痫以及镇痛等作用,其赖氨酸盐（QO-58 lysine）改善了吸收,提高了疗效,在完成了前期药理、毒理及部分药代、毒代研究的基础上,开展本次体内代谢、排泄研究,为新药的研发提供实验依据。LC-ms/ms技术是将液相色谱分离与质谱检测手段相结合的技术,具有分离能力强、监测灵敏度高和专属性强等特点,成为新药研发和体内外药物分析的重要手段。本课题运用此技术研究了国内高仿的武田Dexilant产品（右兰索拉唑缓释胶囊）在Beagle犬体内的生物等效性,为一致性评价提供实验参考;同时还研究了QO-58 lysine在大鼠体内的排泄动力学,分析了QO-58 lysine在大鼠体内的多种代谢产物,该研究结果为进一步的开发利用QO-58 lysine提供了重要的实验依据。第一部分右兰索拉唑缓释胶囊在Beagle犬体内的生物等效性评价目的:研究右兰索拉唑的受试药物和参比药物（Dexilant）在Beagle犬体内是否具有生物等效特征。方法:1样品收集:本实验采用双周期随机交叉设计,每一个周期,饲喂30mg右兰索拉唑缓释胶囊。从Beagle犬腿部静脉处采集血液至真空肝素管,分别收集给药前和给药后0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0、10.0、12.0 h时间点的血液样本。2样品预处理:采用液液萃取法（乙酸乙酯）进行处理。3检测条件:采用Phenomenex C18分析柱,流动相为甲醇（A）:2 m M乙酸铵水溶液（B）,采用梯度洗脱程序。检测方式为正离子、多离子反应监测（MRM）,用于定量分析的离子反应分别为m/z 369.8→252.0（右兰索拉唑）,m/z 345.9→198.0（内标,IS,奥美拉唑）。4生物等效性:计算药代动力学参数,对AUC0-t、AUC0-∞、Cmax经过对数转换后,采用双单侧t检验法进行检验,判断两种制剂是否生物等效。结果:1右兰索拉唑在Beagle犬血浆中的线性关系良好（r≥0.9960）,日内精密度和日间精密度符合要求,无明显基质效应,稳定性良好。2单剂量给予试验药物和参比药物,血浆中右兰索拉唑的主要药代动力学参数（AUC0-t、AUC0-∞和Cmax）经对数转换后进行双单侧t检验,其结果说明两种制剂间没有显著性差异。结论:本实验建立的LC-ms/ms方法,具有简单可靠等特点,能够满足生物样品的分析要求。两种右兰索拉唑缓释胶囊在Beagle犬体内具有相似的体内过程以及药代动力学特征,两者具有生物等效性。第二部分液质联用法测定大鼠尿液、粪便和胆汁中QO-58 lysine的含量及排泄动力学研究目的:建立QO-58 lysine在大鼠尿液、粪便和胆汁中的液质联用方法（LC-ms/ms）,并对其进行排泄动力学研究。方法:1样品收集:以50 mg/kg的剂量灌胃给予QO-58 lysine后,采用代谢笼收集其0～4、4～8、8～12、12～24、24～36、36～48、48～60以及60～72 h的尿液与粪便样品。麻醉后对大鼠进行胆管插管,缝合后在清醒状态下收集0～4、4～8、8～12、12～16、16～20、20～24、24～28、28～32、32～36、36～40、40～48、48～52、52～56、56～60、60～64、64～68和68～72 h的胆汁样品。2样品的预处理:尿液和胆汁采用液液萃取法;粪便采用乙腈沉淀法。3检测条件:采用Phenomenex C18分析柱,乙腈（A）和2 mmol/L乙酸铵和0.2%（v/v）甲酸的水溶液（B）为流动相,流速为0.5 ml/min。采用电喷雾离子源、正离子模式、多反应监测进行检测,内标物（IS）为尼莫地平。被测成分的离子对分别为QO-58 lysine m/z 443.1→361.1,尼莫地平m/z 419.2→343.2。结果:1 QO-58 lysine在尿液、粪便和胆汁中的线性关系良好（r≥0.9943）,日内精密度和日间精密度均符合要求,基质效应69.48%9.57%,稳定性良好;2 72 h尿液的累计排泄率为（0.0245±0.0324）%,粪便的累计排泄率为（92.94±4.71）%,胆汁的累计排泄率为（2.05±0.68）%。结论:1本实验采用LC-ms/ms方法对大鼠的尿液、粪便和胆汁中QO-58lysine的含量进行测定,该方法简便快捷、特异性强、稳定性好、准确度高。经方法学研究表明,LC-

关键词： LC-ms/ms hplc-qtof-ms 生物等效性代谢排泄右兰索拉唑 QO-58 lysine

柠檬皮多酚体外降血糖活性研究及多酚酸奶的开发

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柠檬皮多酚体外降血糖活性研究及多酚酸奶的开发

作者：王瑞雪黑龙江东方学院

学位级别：硕士

柑橘属植物的果皮中富含多酚类物质,多酚具有抗氧化、抑菌、降血糖和降血脂等功效。香水柠檬(Citrus limon(L.)Burm.f.)作为柑橘属果实,具有特殊的芳香气味,且果皮较厚,利于多酚类物质的提取。本文以海南省的香水柠檬果皮多酚提取物作... 详细信息

柑橘属植物的果皮中富含多酚类物质,多酚具有抗氧化、抑菌、降血糖和降血脂等功效。香水柠檬(Citrus limon(L.)Burm.f.)作为柑橘属果实,具有特殊的芳香气味,且果皮较厚,利于多酚类物质的提取。本文以海南省的香水柠檬果皮多酚提取物作为主要研究对象,探究其体外降血糖活性,并对其进行成分分析,最终开发出一款无蔗糖的柠檬多酚酸奶,以此开发柠檬加工副产物的剩余价值,提高柠檬整体经济效益。(1)柠檬皮多酚成分分析通过紫外可见分光光度计在200-700 nm对柠檬皮多酚进行全扫描,结果发现在320nm处存在最大吸收峰,符合多酚类物质的特征吸收带;通过hplc-qtof-ms分析出12种多酚类物质,分别为:4-甲基-7-乙酰氧基香豆素-β-D-葡萄糖醛酸苷、香草酸、新绿原酸、荭草素、山奈黄苷、圣草次苷、野漆树苷、金雀花素、地奥司明、橙皮苷、Chrysoeriol-7-O-(2’-O-mannopyranosyl)allopyranoside和诺米林;通过选择12种物质中响应值较高的成分定性、定量分析发现,橙皮苷是柠檬皮多酚的主要成分,含量为71.93±0.29μg/mg;其次是地奥司明和圣草次苷含量分别为35.19±0.45μg/mg和23.88±0.23μg/mg。(2)柠檬皮多酚体外降血糖活性研究通过建立胰岛素抵抗Hep G2细胞模型探究柠檬皮多酚(Lemon Peel Polyphenols,LPP)的降血糖活性,研究发现柠檬皮多酚最多能够提高IR-Hep G2细胞15.1%的葡萄糖消耗,通过测定IR-Hep G2细胞内糖原的含量和糖代谢相关酶的活性发现,与模型组相比,0.5 mg/m L的LPP作用于IR-Hep G2细胞后糖原含量提高了0.09 mg prot/m L,己糖激酶、丙酮酸激酶的活性分别提高了12.36 nmol/min/mg prot和16.11 U/g prot,葡萄糖-6-磷酸酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶的活性分别降低了8.15 IU/g prot和4.07 IU/g prot。(3)柠檬多酚酸奶的研制通过单因素和响应面试验优化柠檬多酚酸奶配方及工艺,最佳条件为:木糖醇添加量6.9%,柠檬粗多酚添加量0.19%,发酵温度41.9℃,发酵时间4.9 h,成品柠檬多酚酸奶质地细腻,适口性强,符合大众口味,其酸度为84.8±0.96°T,脂肪含量为3.5±0.05 g/100 g,非脂乳固体含量为12.5±0.09 g/100 g,蛋白质含量为3.2±0.03 g/100 g,乳酸菌总数≥3×10 CFU/m L,均符合国家标准,且酸奶中的活性成分LPP在发酵后能够保留76.2%。研究发现柠檬皮多酚的主要成分为类黄酮物质,其主要通过促进糖原合成、提高己糖激酶和丙酮酸激酶活性、降低葡萄糖-6-磷酸酶及磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶活性来提高葡萄糖的吸收和利用,从而缓解胰岛素抵抗状态,进而发挥降血糖活性,本文通过将酸奶和柠檬皮多酚的有益作用相结合制作柠檬多酚酸奶,为柠檬皮多酚的应用开辟了新的途径。

关键词：柠檬皮多酚降血糖活性 HepG2细胞 hplc-qtof-ms 酸奶

龙胆Gentiana scabra Bunge不同生长时期化学成分积累变化及其关键酶基因表达量对生态因子的响应

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龙胆Gentiana scabra Bunge不同生长时期化学成分积累变化及其关...

作者：贾丁丁辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的:本研究拟通过对龙胆不同生长时期的无机元素、活性成分、关键酶基因表达量进行分析测定,结合获取的生态因子(温度、降雨量、年均日照时数、水势、相对湿度等),探索龙胆生长过程中药材与土壤中无机元素的变化规律及其相关性,鉴定分... 详细信息

目的:本研究拟通过对龙胆不同生长时期的无机元素、活性成分、关键酶基因表达量进行分析测定,结合获取的生态因子(温度、降雨量、年均日照时数、水势、相对湿度等),探索龙胆生长过程中药材与土壤中无机元素的变化规律及其相关性,鉴定分析龙胆中化学成分种类及9种代表性成分含量积累变化规律并确定最佳采收期,测定分析关键酶基因相对表达量,在此基础上整合各因素数据,分析龙胆药用器官生长过程中无机元素、化学成分及关键酶基因对生态因子的响应关系,明确生态因子对关键酶基因表达量的影响,进而调控龙胆无机元素的吸收和活性成分的合成,推测彼此间的关联,对于阐明不同生长时期龙胆对环境的适应意义重大,利于明确龙胆采收时间,缩短栽培龙胆采收时限,实现龙胆质量可控及药材资源的快速发展。材料与方法:1.材料本研究的实验样品龙胆采自辽宁省清原县英额门镇村八组,种子直播,于2021年5月10号开始,每隔15天左右采收一次,龙胆样品采用五点取样,并运用“抖根法”收集根际土壤样品,四分法取样,得龙胆及根际土壤样品各22批,按生长期分为六个时期,包括幼苗期(5月10日、5月25日)、生长初期(6月10日、6月25日)、生长旺盛期(7月10日、7月25日)、生长末期(8月10日、8月25日)、花初期(9月10日、9月25日)、花末期(10月10日),按照采收日期顺序,2年生样品编号为2Y5.10～2Y10.10,3年生样品为3Y5.10～3Y10.10。样品经简单处理洗净之后,自然晾干,对龙胆根部药材按不同生长期进行分类处理,保存备用。部分鲜品叶片经冷冻研磨仪打粉后,放入-86℃超低温冰箱中冷冻保存备用。样品经辽宁中医药大学尹海波教授鉴定为龙胆科龙胆属植物龙胆(*** Bunge)。样品照片如附图1-31。2.方法2.1药材及土壤化学元素测定方法龙胆和根际土壤各矿质元素离子测定方法如表1所示,检测样品生物学重复为3。2.2龙胆活性成分含量测定:运用hplc-qtof-msms法对龙胆整个生长期中各类化合物进行定性鉴别,并对9种代表性成分进行含量测定,包括龙胆黄酮类的山奈酚、生物碱类的龙胆碱、三萜类的熊果酸、糖类的龙胆二糖、木脂素类中的Syringa resinol4’-O-β-D-glucopyranoside、及环烯醚萜类成分中的龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、獐芽菜苷和马钱苷酸。2.3龙胆关键酶基因表达量测定:运用RT-qPCR方法对龙胆MEP合成途径中6种关键酶基因进行相对表达量测定,包括GPPS、GES、G10H、10-HGO、DXS、DXR。2.4环境因子获取:采用小型气象站置于本实验用龙胆采收地点,获取龙胆栽培基地生态因子数据(温度、降雨量、年均日照时数、水势、相对湿度等)。2.5相关性分析:对龙胆无机元素含量、萜类成分含量、关键酶基因相对表达量、生态因子进行Spearman相关性分析,明确各因素之间的相关关系。结果:1.药材中13种无机元素,以龙胆生长末期含量积累变化较明显,除P、Ca、Mg外,其他10种元素均为2年生药材含量高于3年生。根际土壤20种化学元素,含量积累变化以幼苗期和生长旺盛期为主,其中有机质、腐殖质、胡敏酸、胡敏素、N、P、K、Cd、Pb含量3年生高于2年生。以均值对比,龙胆对无机元素富集能力强弱顺序为:Fe>Cd>Mn>Ca>Mg>Zn>Cu>N>Pb>K>P>Hg>Na,不同生长期龙胆微量元素中,对Fe富集能力强;重金属元素中,对Cd的富集能力强;龙胆中无机元素含量等级分析表明,P、K、Fe 3种元素等级最高,Mg、Mn、Zn、Cd 4种元素等级居中,Ca、Na、Cu、Hg 4种元素等级最低,龙胆栽培宜选择P、K、Mg、Zn含量高的土壤,并严格控制Cd含量。不同生长期龙胆化学元素中,Pb-Zn/Fe呈显著正相关;土壤中有机质-腐殖质/胡敏素、腐殖质-胡敏素、Na-Mn均具有显著正相关性,而N-Mg为显著负相关性。2.定性鉴别得到60种化合物,包括环烯醚萜类25种(化合物5、8、10、12、14、15、16、17、18、19、23、24、25、26、32、34、35、36、37、38、39、42、46、47、48)、黄酮类11种(化合物1、3、6、9、21、22、29、33、43、45、49)、生物碱类1种(化合物31)、木脂素类9种(化合物7、11、20、28、30、40、41、44、51)、三萜类6种(化合物27、54、55、56、57、60)、糖类2种(化合物2、4)及其他类6种(化合物13、50、52、53、58、59)。但2、3年生龙胆中分别有24、19种化合物在不同生长期中存在断续现象,该类化合物的合成可能与龙胆生长时期的转变有关。3.对龙胆不同生长期药材种9种特征成分进行定量分析,结果表明其含量高低顺序为:龙胆苦苷>Syringar

关键词：龙胆不同生长期 hplc-qtof-ms RT-qPCR 气候因子相关性分析

基于代谢组学的灯盏花素对阿尔茨海默病模型小鼠的神经保护机制研究

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基于代谢组学的灯盏花素对阿尔茨海默病模型小鼠的神经保护机制研...

作者：吴玲玲扬州大学

学位级别：硕士

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种病因和发病机制尚不明确的神经系统退行性疾病,主要临床表现为进行性记忆力减退、认知功能障碍及人格改变等症状。关于AD的发病机制尚没有统一的说法,普遍接受的观点是β-淀粉样蛋白(Amyloi... 详细信息

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种病因和发病机制尚不明确的神经系统退行性疾病,主要临床表现为进行性记忆力减退、认知功能障碍及人格改变等症状。关于AD的发病机制尚没有统一的说法,普遍接受的观点是β-淀粉样蛋白(Amyloid beta,Aβ)的产生和清除失衡,导致大脑中Aβ过度沉积,促进AD的发病。目前临床使用的药物只能延缓AD病程的发展,缺乏理想的药物预防或治疗AD。因此,AD发病机制研究及其药物筛选成为广大研究者关注的热点。灯盏花素是灯盏细辛的总黄酮有效部位,长期用于治疗中风偏瘫和心绞痛。最新的研究发现其主要成分灯盏乙素可抑制Aβ的体外聚集,而且,对Aβ诱导的神经细胞毒性具有抵抗作用,说明灯盏花素可能有利于AD的治疗。经系统地文献检索,发现有关灯盏花素的神经保护机制的研究较少。本研究采用侧脑室注射Aβ1-42的方法建立AD小鼠模型,于模型建立的第二天给药。假手术组和AD模型组小鼠灌胃生理盐水,灯盏花素给药组小鼠灌胃低(35 mg/kg,Bre-L)、中(70 mg/kg,Bre-M)和高(140 mg/kg,Bre-H)剂量的灯盏花素,阳性药物组小鼠灌胃多奈哌齐溶液(剂量为1 mg/kg)。每天灌胃一次,直至实验结束。通过Morris水迷宫实验验证模型,采用hplc-qtof-ms代谢组学方法研究灯盏花素干预前后AD小鼠血浆中内源性物质的变化情况,鉴定潜在的生物标志物,从分子水平阐明灯盏花素对AD小鼠的神经保护作用机制。在Morris水迷宫实验中,定向航行实验表明,所有组别小鼠的逃避潜伏期随着训练次数的增加均有所减少,与假手术组小鼠比较,AD模型组小鼠找到安全平台需要更长的时间。与假手术组小鼠比较,AD模型组小鼠在第4、6、7和8次训练中的逃避潜伏期显著延长(phplc-qtof-ms对小鼠血浆进行分析,正离子模式下采集的原始数据直接导入Profile analysis 2.0软件,聚类窗口的质量数设定为0.05 Da(m/z 50-1000),保留时间的范围设定为0.3 min(0-30min)。每个图谱中的所有离子进行离子强度的归一化处理,然后根据“80%规则”去除数据中的缺失值。软件自动生成用于多元统计分析的矩阵。该矩阵包含离子的保留时间、质荷比和离子强度信息。采用SIMCA-P 13.0软件对数据先进行主成分分析(PCA),然后经Par预处理后进行正交-偏最小二乘投影判别分析(OPLS-DA),筛选出10个潜在生物标志物。进一步用ms/ms对潜在的生物标志物进行分析,通过碰撞诱导解离(CID),碰撞能量分别为20 eV和40 eV,得到潜在生物标志物的子离子。通过与对照品的保留时间、精确质量和子离子数据比对或者检索在线数据库METLIN和HMDB,坚定了其中8个潜在生物标志物的化学结构。它们分别是3-吲哚丙烯酸、C16二氢神经鞘氨醇、溶血磷脂酰乙醇胺(22:6)、胆石酸3-O-硫酸酯、溶血磷脂酰胆碱(16:0)、磷脂酸(22:1/0:0)、牛磺脱氧胆酸和磷脂酰胆碱(0:0/18:0)。通过对以上8个生物标志物代谢途径的分析,本研究认为灯盏花素可能通过调节脂质代谢、提高机体5-羟色胺水平和降低体内胆固醇含量改善AD小鼠的学习记忆能力,发挥神经保护作用。

关键词：阿尔茨海默病灯盏花素 β-淀粉样蛋白代谢组学 hplc-qtof-ms