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基于hplc-q-tof/MS的代谢组学方法用于解毒祛瘀滋阴方对系统性红斑狼疮干预作用的研究

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中国中药杂志 2013年第21期38卷 3747-3752页

作者：胡金波谷恒存丁志山姚立范永升丁兴红浙江中医药大学浙江杭州310053

该文建立了基于高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用(hplc-q-tof/MS)的代谢组学方法,研究系统性红斑狼疮(SLE)小鼠经解毒祛瘀滋阴方治疗后血清代谢物的变化,探讨SLE发病及药物作用机制。利用正交偏最小二乘法(orthogonal partial leas... 详细信息

该文建立了基于高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用(hplc-q-tof/MS)的代谢组学方法,研究系统性红斑狼疮(SLE)小鼠经解毒祛瘀滋阴方治疗后血清代谢物的变化,探讨SLE发病及药物作用机制。利用正交偏最小二乘法(orthogonal partial least squares,OPLS)对实验数据进行模式识别,发现对照组、SLE模型组、解毒祛瘀滋阴方治疗组和醋酸泼尼松治疗组的代谢图谱存在较明显的差异。根据OPLS载荷图,利用精确质量数结合二级质谱鉴定出traumatic acid,PAF,12(S)-HETE,15(S)-HETrE,Hepoxilin B3等12种差异代谢物。SLE小鼠经解毒祛瘀滋阴方治疗后,有效调节PAF,12(S)-HETE等差异代谢物的相对含量接近于对照组水平。代谢通路分析表明,SLE发病会导致体内不饱和脂肪酸和氨基酸代谢通路显著变化,而解毒祛瘀滋阴方对SLE紊乱的不饱和脂肪酸代谢通路具有一定修复调节作用。

关键词：代谢组学系统性红斑狼疮解毒祛瘀滋阴方 hplc-q-tof MS OPLS

hplc-q-tof法测定降糖类中成药及保健食品中14种非法添加药物

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解放军药学学报 2016年第6期32卷 514-517页

作者：姜春来邢俊波靳守东总后勤部卫生部药品仪器检验所北京100166

目的建立快速、准确的hplc-q-tof法测定降糖类中成药及保健食品中14种非法添加药物。方法样品采用50%乙腈提取,色谱柱为Thermo syncronis C18(150mm×4.6mm,5μm),流动相:0.1%甲酸-乙腈梯度洗脱,流速:0.3ml·min^(-1),柱温:30℃。采用ES... 详细信息

目的建立快速、准确的hplc-q-tof法测定降糖类中成药及保健食品中14种非法添加药物。方法样品采用50%乙腈提取,色谱柱为Thermo syncronis C18(150mm×4.6mm,5μm),流动相:0.1%甲酸-乙腈梯度洗脱,流速:0.3ml·min^(-1),柱温:30℃。采用ESI源,正离子扫描模式。结果 14种非法添加化合物在0.01~1μg·ml^(-1)范围内峰面积与浓度均呈良好的线性关系,r>0.998,回收率在78.0%~98.6%,RSD在2.3%~8.3%,检出限均在0.03~0.10μg·g^(-1)范围内。结论本方法快速准确,灵敏度高,能够同时满足对降糖类中成药及保健食品中14种非法添加药物的定性定量分析。

关键词： hplc-q-tof 非法添加中成药保健食品

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初产瘤牛下丘脑多肽组分的鉴定

畜牧与兽医 2019年第8期51卷 56-66页

作者：席丽秦新喜商丘师范学院生物与食品学院

建立高效液相色谱-四级杆串联飞行时间质谱(high performance liquid chromatography-time of flight mass spectrometry, hplc-q-tof MS)方法进行初产瘤牛下丘脑多肽组学研究。试验分2组,即热稳定处理组及对照组,分别取经过热稳定仪处... 详细信息

建立高效液相色谱-四级杆串联飞行时间质谱(high performance liquid chromatography-time of flight mass spectrometry, hplc-q-tof MS)方法进行初产瘤牛下丘脑多肽组学研究。试验分2组,即热稳定处理组及对照组,分别取经过热稳定仪处理和未经处理的冻存脑组织分离下丘脑,进行组织匀浆、重悬、超滤,获得分子量小于10 kDa的多肽组分。多肽混合物经Nanohplc进一步分离后进行q-tof MS/MS分析,获得的MS/MS质谱图经ProteinPilotTM数据库搜索软件对Precursor、Peptide、Uniprot及ibiss 4种数据库进行搜索比对。结果:通过搜索Uniprot数据库,样品稳定处理组34个蛋白质中有14个鉴定为神经肽编码前体蛋白,而在对照组56个蛋白质中仅有8个被鉴定为神经肽编码前体蛋白。对上述4种数据库进行搜索比对,共鉴定得到121种多肽。结论:经热稳定处理后的样品可有效减少蛋白质降解,从而提高低丰度内源性多肽的鉴定率;结合nanohplc-q-tof-MS/MS分析技术及ProteinPliotTM搜索软件,可批量鉴定下丘脑多肽组份,从而为乏情期初产瘤牛下丘脑多肽组学的研究奠定理论基础。

关键词： hplc-q-tof MS/MS 瘤牛下丘脑多肽组学热稳定处理 ProteinpilotTM

不同动物胆汁的成分差异分析及对非酒精性脂肪肝的作用研究

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不同动物胆汁的成分差异分析及对非酒精性脂肪肝的作用研究

作者：陈达鑫福建中医药大学

学位级别：硕士

目的:本文采用非酒精性脂肪肝大鼠模型,以熊胆粉、猪胆粉、牛胆粉和鸡胆粉为干预手段,比较不同动物胆汁粉对非酒精性脂肪性肝病的疗效,并对四种动物胆汁的生物活性成分进行质谱分析对比,以期对临床用药提供理论依据。方法:1:构建动物模... 详细信息

目的:本文采用非酒精性脂肪肝大鼠模型,以熊胆粉、猪胆粉、牛胆粉和鸡胆粉为干预手段,比较不同动物胆汁粉对非酒精性脂肪性肝病的疗效,并对四种动物胆汁的生物活性成分进行质谱分析对比,以期对临床用药提供理论依据。方法:1:构建动物模型及给药干预:60只SPF级雄性SD大鼠,平均体重为200± 10g,经过一周的适应性喂养,依据体重无差异原则(P>0.05)随机分组:正常对照组大鼠10只、高脂饮食造模组大鼠50只。高脂饮食组又分为模型组10只、熊胆粉干预组10只、猪胆粉干预组10只、牛胆粉干预组10只和鸡胆粉干预组10只。自高脂饲料喂养第七周开始,每天除正常组及模型组使用等体积的生理盐水灌胃外,分别给不同组大鼠进行相对应的动物胆汁粉末干预,持续治疗4周。2:实验动物取材:末次给药24小时,禁食8小时候,腹腔注射3%戊巴比妥钠60 mg/kg麻醉,腹主动脉采血,处死,取肝脏,称重。3000转离心,使血清分离,-20℃保存,备用于血液生物化学指标;迅速分离整个肝脏,称重,取右叶肝组织1×1×1cm3,用4%多聚甲醛(以pH7.4的PBS配制)固定,用于形态学观察。3:指标检测:跟踪并记载大鼠的一般情况,其中包括大鼠的日常活动度、每周称量大鼠体重、查看毛色、饮食量、尿液颜色等。使用全自动生化仪对大鼠血清中谷草转氨酶(glutamic oxalacetic transaminase,AST)、谷丙转氨酶(glutamate pyruvate transaminase,ALT)、甘油三酯(triglyceride,TG)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDLC)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDLC)、直接胆红素(direct bilirubin,DBIL)和总胆固醇(total cholesterol,CHOL)8 个生化指标进行检测。取材时记录最终体重、肝脏状态和肝脏重量。HE染色观察肝脏的病理组织学变化。4:hplc-q-tofMS法成分分析:对熊胆粉、猪胆粉、牛胆粉和鸡胆粉进行成分分析,结果用保留时间、精确分子量和标准品比对,并用文献查找的方式,鉴定不同胆汁中的差异成分,结合四种胆汁粉末对非酒精性脂肪肝的功能差异,分析药效物质基础。结果:高脂饮食制备非酒精性脂肪肝模型会引起大鼠体重的明显增加(P0.05);与空白对照组比较,模型组大鼠的肝脏重量有明显的升高(P0.05)。此外,牛、熊胆汁可有效缓解高脂饮食诱导的肝脏组织病理学损伤,如肝肿大、变色、肝细胞肿胀、脂滴空泡形成等,而猪胆汁和鸡胆汁未显示明显的治疗效果。另外,与正常组比较,模型组大鼠血液的肝功能指标均有显著的升高,包括AST、ALT、TG、DBIL、ALP、LDLC和CHOL,不同动物胆汁干预能不同程度抑制其生化指标的升高。特别是熊胆汁对非酒精性脂肪肝引起的生化指标异常改变的疗效尤为突出。本研究通过hplc-q-tof MS技术对不同胆汁的生物活性成分分析发现,在不同类型的动物胆汁中,以胆酸、牛磺去氧胆酸和去氧胆酸三个成分为例,其相对含量存在显著差异。同时,我们在熊胆粉中检测到一种独特的成分,其分子量为496.2738 Da,其功能尚未见报道。结论:本研究结果表明熊、猪、牛、鸡四种动物的胆汁粉末对高脂饮食引起的非酒精性脂肪肝均有不同的治疗效果,熊胆粉的综合疗效最为显著;同时,不同类型动物胆汁的生物活性成分不同,这可能是熊、牛、猪或鸡胆汁对非酒精性脂肪肝治疗效果不同的原因。而仅在熊胆粉中发现的一种496.2738Da的化合物,可能为其未知的有效成分,为熊胆粉治疗非酒精性脂肪肝未来的研究提供了新的思路。

关键词：动物胆粉非酒精性脂肪肝 hplc-q-tof 活性成分

芍药苷和芍药内酯苷的含量测定及芍药苷和赤芍总苷在大鼠体内的代谢研究

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芍药苷和芍药内酯苷的含量测定及芍药苷和赤芍总苷在大鼠体内的代...

作者：朱美霞辽宁大学

学位级别：硕士

测定赤芍中芍药苷和芍药内酯苷的含量。采用高效液相色谱二极管阵列检测器串联蒸发光散射检测器(hplc-DAD-ELSD)同时测定9种不同产地的赤芍中芍药苷和芍药内酯苷的含量。色谱条件：Diamonsil C18 (4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为... 详细信息

测定赤芍中芍药苷和芍药内酯苷的含量。采用高效液相色谱二极管阵列检测器串联蒸发光散射检测器(hplc-DAD-ELSD)同时测定9种不同产地的赤芍中芍药苷和芍药内酯苷的含量。色谱条件：Diamonsil C18 (4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈和甲酸水(0.05%v/v),流速为1.0mL/min,检测波长为230nm, ELSD漂移管的温度为110℃,氮气气体流速为3L/min。柱温为30℃。芍药苷和芍药内酯苷分别在0.050～1.510 mg/mL和1.007～5.035 mg/mL范围内线性关系良好,芍药苷和芍药内酯苷的加样回收率范围分别为96.2%102.9%和95.0%-102.4%,加样回收率的RSD范围0.20%～2.5%。该方法快捷,简单,精确度高,专属性强,能够用于赤芍的质量控制。采用液质联用技术探究芍药苷在大鼠体内的代谢。将赤芍总苷和芍药苷分别大鼠灌胃给药后,分别采集血、尿、粪样品,采用高效液相色谱串联傅立叶离子回旋共振质谱(LC-FT-ICR)对赤芍总苷和芍药苷的血、尿、粪样品和空白给药组及赤芍总苷和芍药苷对照品进行一级质谱检测,得到可能的代谢物的一级质谱的精确分子量和保留时间;再采用高效液相色谱串联Waters LCT Premier XE q-tof质谱(LC-q-tof)进行代谢物的二级质谱检测,并比对赤芍总苷及芍药苷的代谢差异。从芍药苷代谢物中检测到45个代谢物,其中确定的代谢物9个,新的代谢物有2个,未确定的代谢物有34个;分别从血样中检测出11个代谢物,其中确定的有1个代谢物;尿样中17个代谢物,其中确定的有5个代谢物,新的代谢物1个;粪样中18个代谢物,其中确定的有4个代谢物,新的代谢物1个。确定的化合物主要包括苯甲酰葡萄糖醛酸苷、芍药苷代谢素Ⅰ葡萄糖醛酸异构体Ⅰ、芍药苷代谢素Ⅰ葡萄糖醛酸异构体Ⅱ、O-芍药苷代谢素Ⅱ葡萄糖苷、C10H14O3硫酸结合物、C10H14O3葡萄糖醛酸、C8H803葡萄糖醛酸、C10H18O4葡萄糖醛酸、芍药内酯苷和4-O-甲基去苯甲酰芍药苷。赤芍总苷中芍药苷的代谢产物与单体给药相比有38个代谢物相同,有7个代谢产物在总苷给药的样品中没有找到。芍药苷在体内的代谢反应主要是氧化、还原、水解、开环和结合等反应,在尿液和粪便的代谢物中主要是硫酸和葡萄糖醛酸的结合物。赤芍总苷中芍药苷的代谢产物与单体给药相比有所差异,可能是赤芍总苷中的各单体在代谢中会有相互的影响。此研究中获得的结果可能对赤芍的临床用药及安全性和代谢机制提供一定的参考。

关键词：赤芍总苷芍药苷芍药内酯苷 hplc-DAD-ELSD 体内代谢 hplc-FT-ICR hplc-q-tof