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5-氮杂胞苷对黑素瘤A375细胞hoxa9基因表达及细胞增殖、侵袭、迁移的影响

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5-氮杂胞苷对黑素瘤A375细胞HOXA9基因表达及细胞增殖、侵袭、迁...

作者：刘冬梅新疆医科大学

学位级别：硕士

目的:研究甲基转移酶抑制剂5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-azac)对黑素瘤A375细胞中hoxa9(Homeobox A9)基因表达的影响,及其对黑素瘤A375细胞增殖,侵袭和迁移能力的影响。方法:使用不同浓度5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-azac)作用于体外培... 详细信息

目的:研究甲基转移酶抑制剂5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-azac)对黑素瘤A375细胞中hoxa9(Homeobox A9)基因表达的影响,及其对黑素瘤A375细胞增殖,侵袭和迁移能力的影响。方法:使用不同浓度5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-azac)作用于体外培养的A375细胞,甲基化特异性PCR(MSP)法检测不同浓度5-azac处理前后hoxa9基因启动子区甲基化状态,筛选最佳浓度及作用时间进行后续实验。CCK-8测定5-azac处理对A375细胞增殖能力的影响,Transwell及细胞划痕实验分析5-azac处理对A375细胞侵袭及迁移能力的影响,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)及western blot测定5-azac作用后A375细胞中hoxa9转录水平及蛋白表达水平。采用Image J、ipwin32、Graph Pad Prism 7.0软件包进行分析及制图,两组间比较采用独立样本t检验。结果:A375细胞中,hoxa9基因启动子区表现为甲基化状态,经5-azac处理后,甲基化和非甲基化状态并存。与对照组相比,5-azac处理后A375细胞增殖力显著降低(t=28.090,P93,P=0.019),hoxa9 m RNA表达量升高(t=3.931,P=0.017),hoxa9蛋白表达量增多(t=3.823,P=0.019)。结论:5-azac能够降低黑素瘤细胞株A375的增殖、侵袭、迁移能力,且该过程可能机制之一是5-azac反转hoxa9基因启动子区甲基化状态,激活基因表达,从而参与调控。

关键词：黑素瘤 A375细胞 hoxa9 DNA甲基化去甲基化 5-氮杂胞苷

Overexpression of hoxa9 upregulates NF-κB signaling to promote human hematopoiesis and alter the hematopoietic differentiation potentials

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Cell Regeneration 2021年第1期10卷 95-106页

作者： Jiahui Zeng Danying Yi Wencui Sun Yuanlin Liu Jing Chang Lijiao Zhu Yonggang Zhang Xu Pan Yong Dong Ya Zhou Mowen Lai Guohui Bian Qiongxiu Zhou Jiaxin Liu Bo Chen Feng Ma Chinese Academy of Medical Sciences&Peking Union Medical College(CAMS&PUMC) Institute of Blood TransfusionNo.26Huacai RoadLongtan Industry ParkChenghua DistrictChengdu 610052China State Key Laboratory of Biotherapy Sichuan UniversityChengdu 610065China State Key Laboratory of Experimental Hematology CAMS&PUMCTianjin 300020China

Background: The HOX genes are master regulators of embryogenesis that are also involved inhematopoiesis. hoxa9 belongs to a cluster of HOX genes that play extensively studied roles inhematopoiesis and ***: We established hoxa9-inducible human embryonic stem cells (hoxa9/hESCs) with normalpluripotency and potential for hematopoiesis, which could be used to analyze gene function with highaccuracy. hoxa9/hESCs co-cultured with aorta–gonad–mesonephros-derived stromal cells (AGM-S3) wereinduced to overexpress hoxa9 with doxycycline (DOX) at various times after hematopoiesis started andthen subjected to flow ***: Induction of hoxa9 from Day 4 (D4) or later notably promoted hematopoiesis and also increasedthe production of CD34+ cells and derived populations. The potential for myelogenesis was significantlyelevated while the potential for erythrogenesis was significantly reduced. At D14, a significant promotion ofS phase was observed in green fluorescent protein positive (GFP+) cells overexpressing hoxa9. NF-κBsignaling was also up-regulated at D14 following induction of hoxa9 on D4. All of these effects could becounteracted by addition of an NF-κB inhibitor or siRNA against NFKB1 along with ***: Overexpression of hoxa9 starting at D4 or later during hematopoiesis significantly promotedhematopoiesis and the production of myeloid progenitors while reduced the production of erythroidprogenitors, indicating that hoxa9 plays a key role in hematopoiesis and differentiation of hematopoieticlineages.

关键词： Hematopoiesis Differentiation of hematopoietic lineages hoxa9 Mesoderm Human embryonic stem cells(hESCs) Tet-on Inducible expression system

hoxa9、hoxa11、LIF在输卵管中的表达及与输卵管妊娠的关系

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生殖与避孕 2010年第5期30卷 315-320页

作者：刁海丹唐颖吕丽王莉芬大连市中心医院妇产科大连116033 大连医科大学附属第二医院病理科大连116027

目的:探讨同源框基因hoxa9、hoxa11以及白血病抑制因子(1eukemia inhibitory factor,LIF)在输卵管异位着床中的作用。方法:用免疫组织化学染色方法分别检测36例异位妊娠输卵管和34例正常输卵管hoxa9、hoxa11和LIF蛋白的表达。结果:①HO... 详细信息

目的:探讨同源框基因hoxa9、hoxa11以及白血病抑制因子(1eukemia inhibitory factor,LIF)在输卵管异位着床中的作用。方法:用免疫组织化学染色方法分别检测36例异位妊娠输卵管和34例正常输卵管hoxa9、hoxa11和LIF蛋白的表达。结果:①hoxa9、hoxa11强阳性(+++)表达率在异位妊娠输卵管中最高,且输卵管着床部位和非着床部位表达率无明显差异;增生期输卵管hoxa9、hoxa11强阳性表达率明显较低,在分泌期输卵管中表达率为0。②LIF强阳性表达仅见于妊娠输卵管,着床部位的表达率高于非着床部位;增生期和分泌期输卵管呈中低水平表达。结论:hoxa9、hoxa11及LIF蛋白表达增加与输卵管妊娠相关。

关键词：异位妊娠 hoxa9 hoxa11 白血病抑制因子(LIF) 输卵管

孕激素通过hoxa9对人卵巢癌细胞增殖和迁移的机制研究

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昆明医科大学学报 2022年第10期43卷 35-42页

作者：杨霄彦郝春光张志坚内蒙古包钢集团第三职工医院病理科内蒙古包钢医院麻醉科内蒙古包头014016 内蒙古包钢医院病理科内蒙古包头014016

目的探讨hoxa9在孕激素抑制卵巢癌发展过程中的作用机制。方法(1)按照孕激素醋酸甲羟孕酮(MPA)药物浓度梯度(0.1、1、10、50、100μmol/L)培养人卵巢癌细胞HO-8910,作用24 h、48 h、72 h后,光学显微镜观察细胞形态;CCK-8检测细胞存活率... 详细信息

目的探讨hoxa9在孕激素抑制卵巢癌发展过程中的作用机制。方法(1)按照孕激素醋酸甲羟孕酮(MPA)药物浓度梯度(0.1、1、10、50、100μmol/L)培养人卵巢癌细胞HO-8910,作用24 h、48 h、72 h后,光学显微镜观察细胞形态;CCK-8检测细胞存活率,确定IC_(50);Annexin V-FITC双染法检测细胞凋亡率。(2)将细胞分为H0-8910细胞4组:(1)NC组;(2)孕激素组;(3)孕激素+si-hoxa9组;(4)孕激素+ov-hoxa9组。H0-8910细胞分别转染hoxa9敲降或过表达质粒后使用MPA处理或不转染质粒单独使用使用MPA处理72 h,qPCR和Western blot分别用于检测hoxa9 mRNA和蛋白表达水平以及上皮间质转化(EMT)相关蛋白(Vimentin,N-cadherin,E-cadherin)的表达变化;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验用于检测细胞侵袭能力。结果(1)孕激素刺激后,HO-8910细胞株生长状态变差,排列稀疏,细胞增殖,迁移以及侵袭能力受到抑制(P910细胞72 h的IC_(50)值为2.680μmol/L;(3)相较于人卵巢上皮细胞CP-H055,hoxa9在人卵巢癌细胞株HO-8910,SKOV3,A2780和OVCAR3中mRNA均高表达(Phoxa9蛋白在HO-8910中同样高表达(Phoxa9的表达(Phoxa9后,孕激素对HO-8910侵袭和迁移能力的抑制更为明显(Phoxa9后,孕激素对HO-8910侵袭和迁移能力的抑制稍有减弱(Phoxa9后,孕激素对HO-891中EMT相关蛋白表达影响更为明显(Phoxa9后,孕激素对HO-891中EMT相关蛋白表达影响减弱(Phoxa9基因的表达,抑制细胞增殖,迁移,侵袭以及EMT进程等恶性生物学表型,从而抑制卵巢癌发展进程。

关键词：卵巢癌 hoxa9 孕激素醋酸甲羟孕酮

靶向hoxa9基因RNAi慢病毒载体增加人急性单核细胞白血病U937细胞的药物敏感性

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肿瘤 2013年第1期33卷 21-27页

作者：朱立平贾秀红李建厂滨州医学院附属医院儿科山东滨州256603

目的:探讨慢病毒载体介导的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)沉默同源盒A9(homeobox A9,hoxa9)基因对人急性单核细胞白血病U937细胞药物敏感性的影响。方法:应用蛋白质印迹法从4条针对hoxa9基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢... 详细信息

目的:探讨慢病毒载体介导的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)沉默同源盒A9(homeobox A9,hoxa9)基因对人急性单核细胞白血病U937细胞药物敏感性的影响。方法:应用蛋白质印迹法从4条针对hoxa9基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体中筛选出1条敲减效率最高的包装成慢病毒hoxa9/GV118RNAi-LV#2。实验分成未感染对照组(control,CON)、阴性对照组(negative control,NC)及敲减组(knock down,KD)。hoxa9/GV118RNAi-LV#2感染U937细胞后,应用实时荧光定量PCR法检测hoxa9 mRNA的沉默效率,蛋白质印迹法检测hoxa9蛋白的表达,MTT法和FCM检测病毒感染前后U937细胞对长春新碱(vincristine,VCR)和柔红霉素(daunorubicin,DNR)的敏感性及细胞凋亡率变化,RT-PCR法检测DNR作用后各组细胞中MDR-1mRNA的表达。结果:KD组细胞中hoxa9mRNA的沉默效率在55%以上,hoxa9蛋白的表达量明显减少。VCR及DNR作用KD组细胞的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)值明显降低(P937细胞中MDR-1mRNA的表达水平明显下调(Phoxa9基因的RNAi慢病毒可稳定沉默hoxa9基因的表达,在一定程度上提高U937细胞对化疗药物的敏感性。

关键词：白血病慢病毒 RNA干扰抗药性肿瘤基因 hoxa9 细胞 U937

沉默hoxa9基因可促进胫骨骨折后的成骨分化及骨折愈合

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中国组织工程研究 2020年第35期24卷 5600-5606页

作者：张超李兴勇马贵福普星宇骆文远甘肃省人民医院骨三科甘肃省兰州市730000

背景:研究表明,hoxa10基因受到miRNA的调节后与成骨分化存在一定的关联性,但有关hoxa9在成骨分化和胫骨骨折愈合中的表达和功能尚未见报道。目的:初步探讨hoxa9对体外骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及其体内模型的骨折损伤的治疗作用... 详细信息

背景:研究表明,hoxa10基因受到miRNA的调节后与成骨分化存在一定的关联性,但有关hoxa9在成骨分化和胫骨骨折愈合中的表达和功能尚未见报道。目的:初步探讨hoxa9对体外骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及其体内模型的骨折损伤的治疗作用。方法:①体外实验:在成骨诱导培养基中培养小鼠骨髓间充质干细胞,分别进行hoxa9基因被shhoxa9沉默或被MSCV-hoxa9过表达处理;②体内实验:构建胫骨骨折模型大鼠,分别用hoxa9和shhoxa9干预。结果与结论:①体外实验qRT-PCR及Western blot检测显示,hoxa9的过表达能够明显抑制骨髓间充质干细胞的成骨分化(Phoxa9的表达可逆转上述现象;②体内实验组织学染色结果表明,经hoxa9干预的大鼠组织中骨性损伤明显增加,未发现组织间胶原纤维和愈合损伤组织内的软骨,shhoxa9干预大鼠显示骨的大小和数量明显增加,检测到组织间胶原纤维和愈合损伤组织内的软骨;③体内实验qRT-PCR及Western blot检测发现,hoxa9干预的大鼠骨折损伤组织中成骨相关基因标记骨钙素、骨桥蛋白、Runx2和胶原蛋白Ⅰ的mRNA及蛋白均下调(Phoxa9组大鼠骨折损伤组织中成骨相关基因标记骨钙素、骨桥蛋白、Runx2和胶原蛋白Ⅰ的mRNA及蛋白均上调(Phoxa9基因可促进骨髓间充质干细胞的成骨分化,进而促进骨折愈合。

关键词： hoxa9 成骨分化胫骨骨折骨折愈合细胞增殖骨髓间充质干细胞成骨细胞成骨分化动物模型

hoxa9在正常造血和急性髓系白血病中的调控作用

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生命科学 2020年第9期32卷 922-928页

作者：常灵乐吴丽颖周钢桥贵州大学贵阳550025 军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所北京100850 国家蛋白质科学中心北京102206

hoxa9(homeobox A9)是一种含有同源盒结构域的转录因子,在正常造血发育和急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)的发生发展中发挥重要作用。hoxa9在造血发育的早期有助于造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)的扩增,但在造血... 详细信息

hoxa9(homeobox A9)是一种含有同源盒结构域的转录因子,在正常造血发育和急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)的发生发展中发挥重要作用。hoxa9在造血发育的早期有助于造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)的扩增,但在造血发育进程中hoxa9表达降低而逐渐失去对HSC的调控作用。hoxa9如何调控HSC的扩增仍有待阐明。在急性髓系白血病中,多种因素可导致hoxa9基因的过表达,而这正是维持白血病转化所必需的,但是hoxa9促进白血病发生发展的分子机制至今仍未完全阐明。该文将对hoxa9在正常造血和急性髓系白血病发生发展中的作用进行综述。

关键词： hoxa9 造血造血干细胞急性髓系白血病

靶向hoxa9基因shRNA慢病毒载体对U937细胞增殖与凋亡影响观察

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中华肿瘤防治杂志 2014年第3期21卷 187-192页

作者：贾秀红朱立平李建厂滨州医学院附属医院儿科山东滨州256603

目的:观察慢病毒介导的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)沉默同源盒A9(homeobox A9,hoxa9)基因对U937细胞增殖和凋亡的影响。方法:前期从4条针对hoxa9基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体中筛选出了1条敲减效率最高的包... 详细信息

目的:观察慢病毒介导的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)沉默同源盒A9(homeobox A9,hoxa9)基因对U937细胞增殖和凋亡的影响。方法:前期从4条针对hoxa9基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体中筛选出了1条敲减效率最高的包装成慢病毒hoxa9/GV118RNAi-LV#2。实验分为对照组(control,CON)、阴性对照组(negative control,NC)及敲减组(knock down,KD)。hoxa9/GV118RNAi-LV#2感染U937细胞5d后,FCM检测U937细胞感染效率,应用实时荧光定量PCR法检测hoxa9 mRNA的沉默效率,蛋白质印迹法检测hoxa9蛋白的表达;MTT法和绘制细胞生长曲线检测细胞增殖抑制情况;FCM检测细胞凋亡及细胞周期;RT-PCR法检测细胞c-myc mRNA及p27mRNA表达情况。结果:慢病毒感染效率>90%,KD组细胞中hoxa9mRNA的沉默效率>55%,hoxa9蛋白的表达量明显减少,其中KD组相对表达水平达(0.223±0.024),显著低于NC组(0.884±0.009)及CON组(0.891±0.013),差异有统计学意义,F=1 566.202,P9±1.756)%,明显高于NC组及CON组(F=1 311.928,P9±0.547)%和(6.113±0.349)%,KD组与NC组(q=25.501,P9,P=0.001;RT-PCR结果表明,U937细胞KD组较CON组及NC组c-myc mRNA表达水平下降,p27mRNA表达水平上升。结论:靶向hoxa9基因shRNA慢病毒载体能稳定沉默hoxa9表达,可显著抑制U937细胞增殖并促进其凋亡,同时可下调c-myc表达,上调p27表达,使细胞周期阻滞于G0/G1期。

关键词： hoxa9 白血病慢病毒 RNA干扰 U937 细胞凋亡

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hoxa9在癌症中的研究进展

中国慢性病预防与控制 2020年第3期28卷 239-240,F0003页

作者：赖明芬梅家转南方医科大学第二临床医学院广东省广州510280 南方医科大学附属郑州人民医院肿瘤内科

癌症是严重威胁人类健康的重要疾病,在人口老龄化、紧张的生活节奏、不良生活习惯以及大气污染等因素的共同作用下,癌症的发病率越来越高,发病年龄越来越年轻化。先前一直认为癌症的发生是各种因素的作用导致遗传物质改变的结果,然而目... 详细信息

癌症是严重威胁人类健康的重要疾病,在人口老龄化、紧张的生活节奏、不良生活习惯以及大气污染等因素的共同作用下,癌症的发病率越来越高,发病年龄越来越年轻化。先前一直认为癌症的发生是各种因素的作用导致遗传物质改变的结果,然而目前越来越多研究发现转录因子对遗传物质的转录调节作用在癌症的发生发展中具有越来越重要的作用。hoxa9作为重要的转录调节因子,参与肿瘤的发生发展[1-4],在恶性肿瘤中异常表达的hoxa9不仅能够调控细胞增殖凋亡、细胞分化、侵袭转移以及细胞耐药,还能够调控肿瘤干细胞增殖、自我更新的能力[2-3],有望成为肿瘤诊断、治疗及预后评估指标[4-5]。然而关于hoxa9在恶性肿瘤中所发挥的具体作用及其机制尚不清晰,因此,本文就近年来hoxa9在癌症中的研究进展进行综述。

关键词： hoxa9 癌症转录调节因子