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The Effects of HBx Gene on the Expression of DNA Repair Enzymes hogg1 and hMYHα mRNA in HepG2 Cells

Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences) 2009年第2期29卷 187-192页

作者：程斌郭晓榕郑要初王颖刘春黎培员 Department of Gastroenterology and Hepatology Tongji HospitalTongji Medical CollegeHuazhong University of Science and Technology

To observe the alteration in the expression of DNA repair enzymes hogg1 and hMYHa and the change in 8-OHdG levels in the HBx gene-transfected cells HepG2/HBx and to explore the mechanisms of the HBV-associated hepatocellular carcinoma, the gene-transfected cells HepG2/HBx which stably expressed HBx was established, and the effect of HBx on the cell cycle and proliferation of HepG2 was examined. By using the β-actin as the interior control, real-time polymerase chain reaction （Real-time qPCR） was employed to quantitatively detect the expression of DNA repair enzymes hogg1 and hMYHα in the HepG2/HBx, the control cells HepG2 and HepG2 transfected with pcDNA3.1 vector （HepG2/pDNA3.1）. The 8-OHdG levels were determined by HPLC/ECD in the established gene-transfected cells HepG2/HBx and the control cells HepG2 and HepG2/pcDNA3.1. Our results showed that the expression of DNA repair enzyme hMYHα in the HepG2/HBx （0.021±0.007） was significantly lower than that of HepG2 （0.099±0.041）（P〈0.05） and HepG2/pDNA3.1 （0.121±0.005）（P〈0.05）. However, the no significant differences existed in the expression of DNA repair enzyme hogg1 among the three cell strains （P〉0.05）. The 8-OHdG level in the HepG2/HBx was significantly higher than that in HepG2 and HepG2/pcDNA3.1 （P〈0.05）. It is concluded that HBx gene may inhibit the expression of DNA repair enzyme hMYHα mRNA to impair the ability to repair the intracellular DNA oxidative damage, to increase the oxidative DNA-adduct 8-OHdG and to affect the nucleotide excision repair function, thus participate in the occurrence and development of hepatocellular carcinoma.

关键词： HBx hogg1 hMYHα 8-OHdG HepG2 cells

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hogg1和XPD基因多态性与消化系统肿瘤遗传易感性的关系

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中国肿瘤临床 2012年第18期29卷 1358-1362页

作者：蒋燕殷明伟于兆亚康玉华邓锦波刘彬河南大学护理学院神经生物学研究所河南省开封市475004

目的:研究DNA损伤修复基因hogg1和XPD单核苷酸多态性与胃癌、肝癌和结直肠癌易感性的关系。方法:用DNA抽提试剂盒从肿瘤患者外周血标本中抽提基因组DNA,其中胃癌患者98例,肝癌患者76例,结直肠癌患者95例,非肿瘤对照组80例。采用聚合酶... 详细信息

目的:研究DNA损伤修复基因hogg1和XPD单核苷酸多态性与胃癌、肝癌和结直肠癌易感性的关系。方法:用DNA抽提试剂盒从肿瘤患者外周血标本中抽提基因组DNA,其中胃癌患者98例,肝癌患者76例,结直肠癌患者95例,非肿瘤对照组80例。采用聚合酶链式反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)方法测定hogg1 Ser326Cys和XPD Lys751Gln的基因型分布,采用SPSS 16.0软件进行分析。结果:携带hogg1Cys 326Cys基因型使患胃癌、肝癌和结直肠癌的风险分别增加1.485倍(P=0.036)、1.114倍(P=0.011)和1.940倍(P=0.001)。携带hogg1 326Cys等位基因同时饮酒者,可增加胃癌发病风险38%(P=0.008),肝癌发病风险增加30%(P=0.036);携带XPDLys751Gln基因型胃癌、肝癌和结直肠癌的风险分别增加2.150倍(P=0.003)、2.340倍(P=0.002)和1.292倍(P=0.008)。携带XPD751Gln等位基因并饮酒可使胃癌发病风险增加26%(P=0.027),肝癌发病风险增加40%(P=0.005)。同时携带hogg1 326Cys和XPD 751Gln等位基因,患胃癌的危险性降低24%(P=0.010),患肝癌和结直肠癌的危险性分别增加40%(P=0.003)和23%(P=0.016)。结论:hogg1基因的Cys 326Cys基因型和XPD基因的Lys751Gln基因型可能是胃癌、肝癌和结直肠癌发生的遗传易感因素,携带hogg1326Cys等位基因或XPD 751Gln等位基因且饮酒,可能增加胃癌和肝癌的易感性。

关键词： hogg1 XPD 基因多态性消化系统肿瘤遗传易感性

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碱基切除修复基因hogg1特异性锤头状核酶表达载体的构建及其功能的初步研究(英文)

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四川大学学报（医学版） 2006年第2期37卷 165-170页

作者：张遵真张勤吴媚四川大学华西公共卫生学院环境卫生学教研室成都610041

目的阿霉素是一种临床上广泛使用的抗肿瘤药物,但其治疗作用的发挥受到耐药性的限制。目前研究显示阿霉素主要通过诱导活性氧自由基的产生而杀死肿瘤细胞。人8-羟基鸟嘌呤-DNA糖苷酶(hogg1)是一种DNA氧化损伤的修复酶,可特异性的切除由... 详细信息

目的阿霉素是一种临床上广泛使用的抗肿瘤药物,但其治疗作用的发挥受到耐药性的限制。目前研究显示阿霉素主要通过诱导活性氧自由基的产生而杀死肿瘤细胞。人8-羟基鸟嘌呤-DNA糖苷酶(hogg1)是一种DNA氧化损伤的修复酶,可特异性的切除由活性氧产生的8-羟基鸟嘌呤。针对这一机制,设计并合成hogg1特异性的锤头状核酶基因,构建其真核表达载体并初步探讨在该基因作用下,人肺腺癌A549细胞株对阿霉素的药物敏感性的影响。方法人工设计并合成核酶基因(RZ),将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,阳性重组子由BamH和EcoR酶切,琼脂糖凝胶电泳鉴定及DNA测序证实。大量抽提阳性重组子并在非脂质体转染试剂FuGENE6的介导下引入A549细胞株,RT-PCR(逆转录多聚酶链反应)法鉴定转染,并半定量检测转染细胞中hogg1mRNA表达的改变。MTT法检测细胞转染前后对阿霉素敏感性的变化;彗星试验检测细胞转染前后DNA氧化损伤修复能力的改变。结果经酶切电泳及DNA测序证实合成的核酶基因序列成功克隆入pcDNA3.1(+)中,命名为pcDNA3.1(+)-RZ。经RT-PCR法鉴定质粒成功导入靶细胞中,并检测到转染核酶的靶细胞中hogg1mRNA表达下降36%,与空白细胞组比较差异具有统计学意义(P1.0μg/mL阿霉素作用下,转染细胞组较未转染细胞组DNA损伤程度增加(Phogg1特异性锤头状核酶真核表达载体。核酶在A549细胞内有效抑制靶基因hogg1的表达,增加了该细胞对抗肿瘤药物阿霉素的敏感性。为进一步研究hogg1基因的功能奠定了基础。

关键词： hogg1 锤头状核酶药物敏感性

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DNA氧化损伤修复基因hogg1低表达细胞株的建立及其生物学特性鉴定

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卫生研究 2005年第6期34卷 661-664页

作者：张遵真张勤李娜衡正昌四川大学华西公共卫生学院环境卫生教研室成都610041

目的为研究肺癌发生机制中DNA氧化损伤修复基因hogg1的可能作用,利用携带有hogg1特异性锤头状核酶基因的载体与肺腺癌A549细胞株,建立hogg1低表达细胞株并观察其生物学效应。方法hogg1特异性锤头状核酶真核表达载体[pcDNA3.1(+)RZ]经脂... 详细信息

目的为研究肺癌发生机制中DNA氧化损伤修复基因hogg1的可能作用,利用携带有hogg1特异性锤头状核酶基因的载体与肺腺癌A549细胞株,建立hogg1低表达细胞株并观察其生物学效应。方法hogg1特异性锤头状核酶真核表达载体[pcDNA3.1(+)RZ]经脂质体介导转染A549细胞;G418筛选;Neo基因的RTPCR法鉴定阳性克隆细胞;RTPCR半定量检测核酶对hogg1基因的抑制效应。同时比较转染细胞与正常A549细胞的生长情况、细胞周期、软琼脂克隆形成率以及超氧化物歧化酶(SOD)的活力。结果转染后G418成功筛选出了阳性转化克隆,经传代形成稳定细胞株。核酶可持续抑制A549细胞hogg1基因的表达,RTPCR结果显示转染细胞hogg1mRNA的表达比正常A549细胞低61.5%(P17d);细胞周期各时相及细胞凋亡率以及细胞增殖指数没有明显改变(P>0.05);软琼脂克隆形成抑制率接近50%(Phogg1低表达细胞株,所观察的生物学效应多数指标与正常A549细胞无显著差异。

关键词： hogg1 核酶低表达细胞株 DNA修复酶

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hogg1 Ser326Cys基因多态与原发性肝癌关系的Meta分析

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卫生研究 2011年第3期40卷 393-396页

作者：孙元设胡志坚福建医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学教研室福州350004

目的探讨hogg1 Ser326Cys基因多态与原发性肝癌的关系。方法采用Meta分析对1994年1月至2009年11月国内外关于hogg1 Ser326Cys基因多态与原发性肝癌关系的病例对照研究进行综合定量分析。结果共收集相关文献4篇,累计病例970例,对照991例... 详细信息

目的探讨hogg1 Ser326Cys基因多态与原发性肝癌的关系。方法采用Meta分析对1994年1月至2009年11月国内外关于hogg1 Ser326Cys基因多态与原发性肝癌关系的病例对照研究进行综合定量分析。结果共收集相关文献4篇,累计病例970例,对照991例。剔除日本人群数据后,hogg1突变基因型(Cys/Cys+Ser/Cys)及突变纯合子基因型(Cys/Cys)与野生纯合子(Ser/Ser)比较,罹患肝癌的危险性均增高,合并的OR值分别为OR=1.89(1.47,2.41)和OR=2.32(1.06,5.06)。结论 hogg1 Ser326Cys基因多态性与原发性肝癌易感性可能有关。

关键词： hogg1 基因多态性原发性肝癌 Meta分析

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碱基切除修复通路基因XRCC1、hogg1多态性与吸烟对肺癌患者生存的影响

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中国肿瘤临床 2012年第8期29卷 447-451,457页

作者：张寰周晓颖张丽娜钱碧云天津医科大学附属肿瘤医院流行病室天津市肿瘤防治重点实验室天津市300060

目的:DNA损伤修复作为维持体内基因稳定性和修复DNA损伤的重要机制,在肿瘤的发生、发展、转归及预后中发挥重要作用,DNA损伤修复基因多态性通过影响DNA损伤修复能力进而影响肿瘤患者生存。本研究旨在探讨DNA损伤修复基因XRCC1、hogg1多... 详细信息

目的:DNA损伤修复作为维持体内基因稳定性和修复DNA损伤的重要机制,在肿瘤的发生、发展、转归及预后中发挥重要作用,DNA损伤修复基因多态性通过影响DNA损伤修复能力进而影响肿瘤患者生存。本研究旨在探讨DNA损伤修复基因XRCC1、hogg1多态性对肺癌患者生存的影响。方法:收集420例原发性非小细胞肺癌病例,采用TaqMan SNP技术检测肺癌患者外周血DNA XRCC1(rs25487)和hogg1(rs1052133)多态性。采用Kaplan-Meier法分析生存情况,Log-rank法进行单因素检验,Cox回归用来计算调整混杂因素的风险比(Hazard Ratio,HR)。结果:患者临床特征和预后风险的分析显示,年龄≥60岁和病理分期晚期(Ⅲ/Ⅳ期)是影响肺癌预后的独立危险因素,P值分别为1.000E-4和3.828E-11。DNA修复基因XRCC1和hogg1多态性与肺癌患者生存情况的分析未见不同基因型的生存曲线的分布具有统计学差异。按照吸烟情况分层后,在轻度吸烟者(吸烟量hogg1突变型G等位基因较携带野生型C基因型生存率低(P=0.0213),经Cox回归分析显示携带G等位基因的患者死亡风险为野生型的8.24倍。而在非吸烟者和重度吸烟者中未见多态性对患者生存的影响。结论:本研究首次发现碱基切除修复通路基因hogg1 rs1052133多态性对肺癌患者生存存在一定影响,尤其是在轻度吸烟者中,携带突变型等位基因增大肺癌患者死亡风险,相关机制有待进一步大规模样本验证。

关键词：非小细胞肺癌 XRCC1 hogg1 多态性吸烟预后

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镍钢作业工人hogg1表达水平对DNA氧化损伤的影响

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中华劳动卫生职业病杂志 2014年第8期32卷 578-581页

作者：李艳丽孙建娅商惠珍太钢疾病预防控制中心职业卫生科太原030003

目的研究镍钢作业工人hogg1对8-OH-dG的切除修复能力和镍钢作业工人DNA氧化损伤水平.方法选取某不锈钢冶炼企业镍作业工人231人,作为镍接触组,该企业水处理厂水泵工75人作为对照组,对工作场所职业性危害因素进行检测;Elisa双抗夹心法... 详细信息

目的研究镍钢作业工人hogg1对8-OH-dG的切除修复能力和镍钢作业工人DNA氧化损伤水平.方法选取某不锈钢冶炼企业镍作业工人231人,作为镍接触组,该企业水处理厂水泵工75人作为对照组,对工作场所职业性危害因素进行检测;Elisa双抗夹心法测定尿样中8-OH-dG含量,RT-PCR检测修复酶基因hogg1的mRNA的表达,Pearson相关分析分析尿中8-OH-dG含量和修复酶基因hogg1的mRNA表达水平的相关性.结果镍接触组不同工种8-OH-dG含量与对照组比较,轧钢工组差异无统计学意义（P＞0.05）,炼钢工组、钢渣处理工组与对照组比较的差异均有统计学意义（P＜0.05）;镍接触组不同工龄8-OH-dG含量与对照组相比,工龄0～5年组和6～10年组与对照组差异无统计学意义（P＞0.05）,其他各组与对照组的差异均有统计学意义（P＜0.05）.不同工种hogg1 mRNA表达水平与对照组相比,差异均有统计学意义（P＜0.05）;不同工龄组hogg1mRNA表达水平与对照组比较,工龄0～5年组与对照组差异无统计学意义（P＞0.05）,其他各组差异均有统计学意义（P＜0.05）.Pearson分析不同工种工人尿中8-OH-dG含量与hogg1mRNA表达水平之间的相关性,r=0.993,呈正相关,在α=0.01（P＜0.05）水平上显著相关;不同工龄工人尿中8-OH-dG含量与hogg1mRNA表达水平之间的相关性分析,r=0.968,呈正相关,在α=0.01 （P＜0.05）水平上显著相关.结论镍钢作业工人DNA氧化损伤水平增加,hogg1基因对8-OH-dG有主动切除修复能力.

关键词：不锈钢生产 8-OH-dG hogg1 DNA氧化损伤

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hogg1、XRCC1、XRCC3基因单核苷酸多态性与食管癌放疗预后关系的研究

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中华放射医学与防护杂志 2011年第5期31卷 587-589页

作者：张瑾熔张旭升王义海阿合力·那斯肉拉吕茵张国庆新疆医科大学附属肿瘤医院放疗科乌鲁木齐830011

食管癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其发病率高，预后差，死亡率居癌症第6位，其病理类型90％以上为鳞状细胞癌，对射线较敏感，放射治疗在食管癌综合治疗中占重要地位。然而单纯放疗后5年生存率10％-30％，局部复发高达60％～80％。

关键词：单核苷酸多态性 XRCC3基因食管癌预后差放疗后 hogg1 XRCC1 鳞状细胞癌

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DNA修复基因hogg1多态性、HBV感染交互作用与肝细胞癌易感性的关系

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卫生研究 2011年第6期40卷 705-708页

作者：纪龙曾小云李龙嫚仇小强陈似霞余红平泰山医学院公共卫生学院泰安271000 广西医科大学公共卫生学院桂林医学院广西医科大学第一附属医院肝胆血管外科

目的探讨广西肝癌高发区人群DNA修复基因8-羟基鸟嘌呤糖苷酶1单核苷酸多态性与肝细胞癌易感性的关系,并分析与环境危险因素的交互作用。方法采用以医院为基础的病例-对照研究,对广西壮族自治区500例肝细胞癌和507例正常对照进行流行病... 详细信息

目的探讨广西肝癌高发区人群DNA修复基因8-羟基鸟嘌呤糖苷酶1单核苷酸多态性与肝细胞癌易感性的关系,并分析与环境危险因素的交互作用。方法采用以医院为基础的病例-对照研究,对广西壮族自治区500例肝细胞癌和507例正常对照进行流行病学调查,并应用TaqMan MGB荧光定量PCR方法检测hogg1-Ser326Cys位点基因型。结果病例组和对照组中hogg1-326Cys突变等位基因分布频率为24.60%和10.75%(P1.40%、8.00%、20.60%和84.22%、10.06%、5.72%(Phogg1基因326位点野生纯合子Ser/Ser基因型者比较,携带至少一个hogg1-326Cys突变等位基因的个体患肝癌风险显著增加(OR=2.14,95%CI:1.57～2.91);交互作用分析结果表明hogg1基因326位点多态性与慢性HBV感染之间在肝细胞癌发生中具有交互作用,相乘模型交互作用指数为0.61,相加模型交互作用指数为1.31。结论 hogg1-326Cys突变等位基因是肝细胞癌发生的危险等位基因;携带至少一个hogg1-326Cys突变等位基因的个体若同时暴露于HBV慢性感染,患肝癌的风险显著增加。

关键词： hogg1 单核苷酸多态性环境因素交互作用肝细胞癌

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hogg1特异性锤头状核酶真核表达载体的构建及鉴定

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毒理学杂志 2005年第2期19卷 111-113页

作者：张勤张遵真衡正昌四川大学公共卫生学院环境卫生教研室四川成都610041

目的　设计并合成人8 羟基鸟嘌呤 DNA糖苷酶(hogg1)特异性的锤头状核酶(hammerheadribozyme)基因并构建其真核表达载体。鉴定含有核酶靶基因hogg1cDNA保守序列的真核表达载体。方法　运用计算机软件人工设计并合成核酶基因(RZ) ,将核酶... 详细信息

目的　设计并合成人8 羟基鸟嘌呤 DNA糖苷酶(hogg1)特异性的锤头状核酶(hammerheadribozyme)基因并构建其真核表达载体。鉴定含有核酶靶基因hogg1cDNA保守序列的真核表达载体。方法　运用计算机软件人工设计并合成核酶基因(RZ) ,将核酶基因克隆到真核表达载体pcDNA 3 1中,重组子由BamHI和EcoRI酶切,琼脂糖凝胶电泳鉴定及DNA测序证实。含有hogg1基因cDNA保守序列的真核表达载体经BamHI和EcoRI酶切电泳鉴定。结果　RZ人工合成后与pcDNA 3 1连接,酶切电泳及DNA测序证实合成的核酶基因序列正确并已被准确克隆入pcDNA 3 1的BamHI和EcoRI位点之间,命名为pcDNA 3 1 RZ。1 3kb的hogg1基因cDNA保守序列准确克隆于pcDNA 3 1的BamHI和EcoRI酶切位点之间,命名为pcDNA 3 1 hogg1。结论　成功合成hogg1特异性的锤头状核酶基因并构建了该基因的真核表达载体,以及核酶靶基因的真核表达载体。

关键词： G1特异性真核表达载体pcDNA3.1 鉴定 hogg1 基因cDNA 8-羟基鸟嘌呤琼脂糖凝胶电泳锤头状核酶基因 DNA测序保守序列计算机软件基因克隆人工合成基因序列靶基因酶切糖苷酶重组子克隆人设计准确位点

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