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hnf1α和hnf1β在卵黄囊瘤中的表达研究

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HNF1α和HNF1β在卵黄囊瘤中的表达研究

作者：贺新月重庆医科大学

学位级别：硕士

目的探讨hnf1α和hnf1β在卵黄囊瘤的表达及其与其它生殖细胞肿瘤鉴别的价值,为卵黄囊瘤诊断提供新的免疫标记。方法收集2000年1月～2020年12月经重庆医科大学病理诊断中心和附属儿童医院病理科确诊,且未进行新辅助化疗的手术切除卵黄... 详细信息

目的探讨hnf1α和hnf1β在卵黄囊瘤的表达及其与其它生殖细胞肿瘤鉴别的价值,为卵黄囊瘤诊断提供新的免疫标记。方法收集2000年1月～2020年12月经重庆医科大学病理诊断中心和附属儿童医院病理科确诊,且未进行新辅助化疗的手术切除卵黄囊瘤病例63例以及其它类型生殖细胞肿瘤51例(包括11例胚胎性癌、18例精原细胞瘤/无性细胞瘤、7例绒毛膜癌、6例成熟型畸胎瘤和9例未成熟型畸胎瘤),采用免疫组化法检测hnf1α和hnf1β在卵黄囊瘤和其它生殖细胞肿瘤中的表达;并对照AFP和GPC-3比较hnf1α和hnf1β在卵黄囊瘤表达的特异度和敏感度。结果(1)63例卵黄囊瘤病例中有60例hnf1α表达呈弥漫阳性,阳性率为95.24%(60/63),其中18例为强阳性,33例为中等阳性,9例为弱阳性。(2)63例卵黄囊瘤病例中有59例hnf1β表达呈弥漫阳性,阳性率为93.65%(59/63),其中8例为强阳性,38例为中等阳性,13例为弱阳性。(3)hnf1α和hnf1β在卵黄囊瘤各种组织结构中,如实性、囊状/网状、粘液瘤样、内胚窦样(SD小体)、肝样和子宫内膜样等均呈不同程度阳性表达,各组织结构阳性表达率无明显差异(P>0.05)。(4)hnf1α和hnf1β在性腺内、外卵黄囊瘤中阳性表达率无明显差异(P>0.05,P>0.05)。(5)63例卵黄囊瘤病例中,54例AFP胞质阳性,阳性率为85.71%(54/63),其中37例弱阳性,14例中等阳性,3例强阳性。63例卵黄囊瘤中,53例GPC-3胞膜胞质阳性,阳性率为84.13%(53/63),其中24例弱阳性,24例中等阳性,5例强阳性。hnf1α、hnf1β在卵黄囊瘤中的表达程度明显高于AFP和GPC-3(Phnf1α在胚胎性癌(0/11)、精原细胞瘤/无性细胞瘤(0/18)和绒毛膜癌(0/7)中均阴性;仅在畸胎瘤(肠型腺体4/15)中小灶阳性表达。hnf1β在精原细胞瘤/无性细胞瘤(0/18)、绒毛膜癌(0/7)中均阴性;在2例胚胎性癌(2/11)、4例畸胎瘤(肠型腺体3/15,未成熟神经元1/15)中小灶阳性表达。(7)卵黄囊瘤hnf1α的敏感度为95.24%,特异度为92.16%;hnf1β的敏感度为93.65%,特异度为88.24%;AFP的敏感度为85.71%,特异度为94.12%;GPC-3的敏感度为84.13%,特异度为90.20%。结论(1)hnf1α和hnf1β在卵黄囊瘤的瘤细胞核广泛表达,可作为卵黄囊瘤较为敏感的肿瘤标志物。(2)在卵黄囊瘤诊断中,hnf1α和hnf1β较AFP、GPC-3阳性表达强度更强、阳性表达范围更广。(3)hnf1α和hnf1β在卵黄囊瘤诊断中具有较高特异度,在鉴别卵黄囊瘤与其它生殖细胞肿瘤中具有重要意义。

关键词：卵黄囊瘤生殖细胞肿瘤 hnf1α hnf1β 免疫组织化学

基于四环素诱导型hnf1β和Foxa3表达载体的小鼠胚胎成纤维细胞转分化为肝干细胞的实验体系研究

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癌变．畸变．突变 2021年第3期33卷 163-171页

作者：虞欣璐于兵王辰张红霞朱海英海军军医大学基础医学院细胞生物学教研室上海200433 解放军960医院检验科山东济南250031

目的:建立基于四环素诱导型hnf1β和Foxa3表达载体的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)转分化为肝干细胞(iHepSCs-Dox)的诱导实验体系,为后续转分化过程所涉及的分子机制研究提供有效工具。方法:构建TetO-hnf1β-EGFP和TetO-Foxa3-mCherry四环素... 详细信息

目的:建立基于四环素诱导型hnf1β和Foxa3表达载体的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)转分化为肝干细胞(iHepSCs-Dox)的诱导实验体系,为后续转分化过程所涉及的分子机制研究提供有效工具。方法:构建TetO-hnf1β-EGFP和TetO-Foxa3-mCherry四环素诱导型慢病毒载体,经慢病毒介导将其转染入293FT细胞,利用实时荧光定量PCR(qPCR)检测不同浓度的多西环素(Dox)诱导外源基因表达水平的差异,确定最佳Dox诱导浓度;将两个诱导型表达载体转染到MEF细胞中,参照先前建立的诱导体系,在合适的Dox浓度下启动hnf1β和Foxa3基因的表达,诱导MEF细胞的转分化。对经过20 d诱导出现的上皮样细胞集落进行扩增,获得iHepSCs-Dox细胞系。利用CCK-8法、克隆形成实验、碱性磷酸酶染色、体外诱导分化以及反转录PCR(RT-PCR)等实验,对所获得的iHepSCs-Dox细胞系的生物学特性作鉴定,同时与前期获得的诱导型肝干细胞系(iHepSCs)作对比,以此对基于四环素诱导型表达载体的转分化体系的诱导效果进行评价。结果:qPCR结果显示,在培养基中添加100 ng/mL的Dox作用24 h即可启动外源基因表达,撤去Dox 48 h后,外源基因的表达显著降低甚至关闭;RT-PCR结果显示,iHepSCs-Dox细胞表达胆管细胞的标志(CK19)、肝胆共同标志(CK18)以及肝脏干/前体细胞标志(Dlk1、Sox9、EpCAM),碱性磷酸酶染色结果显示阳性;具有形成克隆的能力;能够在体外诱导分化为肝干细胞,以上干性特征与前期构建的iHepSCs具有较大相似性。当从培养基中撤掉Dox之后,随着双因子表达的停止,iHepSCs-Dox细胞的增殖速率明显下降,CK18、EpCAM的表达下调;失去克隆形成能力,在体外无法诱导其分化为肝细胞。结论:成功建立了基于四环素诱导型双转录因子表达载体的MEF细胞转分化为肝干细胞的诱导体系,该诱导体系可以作为后续研究转分化过程中所涉及的分子机制的有效工具。另外,结果提示外源基因的持续表达是iHepSCs-Dox细胞干性维持的必要条件。

关键词：四环素诱导型表达载体转分化小鼠胚胎成纤维细胞诱导性肝干细胞 hnf1β Foxa3

卵黄囊瘤中肝细胞核因子1β的表达及诊断价值

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临床与实验病理学杂志 2022年第1期38卷 76-79页

作者：王月娥李恒王伟吴海波中国科学技术大学附属第一医院(安徽省立医院)临床病理中心合肥230036 中国科学技术大学智慧病理学研究所合肥230036

目的探讨肝细胞核因子1β(hnf1β)在卵黄囊瘤中的表达及诊断价值。方法采用免疫组化EnVision两步法检测34例卵黄囊瘤及50例非卵黄囊瘤的生殖细胞肿瘤(15例成熟性畸胎瘤、11例未成熟畸胎瘤、10例精原细胞瘤、6例绒毛膜癌、5例无性细胞瘤... 详细信息

目的探讨肝细胞核因子1β(hnf1β)在卵黄囊瘤中的表达及诊断价值。方法采用免疫组化EnVision两步法检测34例卵黄囊瘤及50例非卵黄囊瘤的生殖细胞肿瘤(15例成熟性畸胎瘤、11例未成熟畸胎瘤、10例精原细胞瘤、6例绒毛膜癌、5例无性细胞瘤、3例胚胎性癌)中hnf1β、甲胎蛋白(AFP)及磷脂酰肌醇蛋白多糖3(GPC-3)的表达,并复习相关文献。结果34例卵黄囊瘤中男性12例,女性22例,年龄1~68岁,发病部位包括性腺及性腺外器官。hnf1β在卵黄囊瘤组织中广泛表达,在混合型生殖细胞肿瘤中仅表达于卵黄囊瘤成分,敏感性及特异性分别为100%及98%,高于AFP(91.2%,84.9%)及GPC-3(82.4%,87.5%)。结论hnf1β广泛表达于卵黄囊瘤成分,具有较高的敏感性及特异性,在与其他生殖细胞肿瘤的鉴别上具有重要的价值。

关键词：卵黄囊瘤生殖细胞肿瘤 hnf1β 免疫组织化学

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三个MODY家系的临床与遗传学特征研究

三个MODY家系的临床与遗传学特征研究

作者：覃恬恬中南大学

学位级别：硕士

目的:青少年起病成人型糖尿病(Maturity-onset Diabetes of the Young,MODY)是常染色体显性遗传并由单基因突变导致的特殊类型糖尿病。临床上MODY起病隐匿,误诊率高。本研究对三个拟诊为MODY家系的临床及遗传学特征进行分析,并对发现的... 详细信息

目的:青少年起病成人型糖尿病(Maturity-onset Diabetes of the Young,MODY)是常染色体显性遗传并由单基因突变导致的特殊类型糖尿病。临床上MODY起病隐匿,误诊率高。本研究对三个拟诊为MODY家系的临床及遗传学特征进行分析,并对发现的新突变进行功能验证,以拓宽MODY致病基因谱,为MODY的精准治疗提供依据。方法:收集2019年-2021年于中南大学湘雅三医院内分泌科就诊的三个高度怀疑为MODY家系的临床资料。留取各家系成员外周静脉血,提取基因组DNA,采用全外显子组测序(whole exon sequencing,WES)筛选出可能与MODY相关的基因突变并进行Sanger测序和家系验证。进一步通过实时PCR、蛋白印记、荧光素酶试验以及葡萄糖刺激胰岛素分泌实验对其中筛选出的一个KLF11新发突变探索其在MODY的致病机制。结果:1、先证者1,22岁男性,糖尿病病程半年,具有连续2代并符合常染色体遗传规律的糖尿病家族史。基因检测及家系验证发现该家系携带与MODY3相关的hnf1αc.874dup A(p.G292Rfs*25)插入移码突变,该突变使hnf1α基因的第874位碱基重复插入腺嘌呤,导致292位氨基酸残基由甘氨酸变精氨酸并发生氨基酸移码,造成编码的蛋白肽链转录提前终止。hnf1αp.G292Rfs*25为已知的致病突变。2、先证者2,24岁女性,初诊糖尿病患者,伴有多囊肾、胰腺发育不良,鞍状子宫等多器官发育畸形。其父亲及姐姐均在25岁之前确诊糖尿病。基因检测及家系验证发现该家系携带与MODY5有关的hnf1βc.826C>T(p.R276*)杂合无义突变,该突变导致276位氨基酸由精氨酸变为终止密码子,使编码的蛋白转录提前终止。hnf1βp.R276*突变既往在日本人群有报道,在中国人群为首次报道。3、先证者3,45岁男性,32岁确诊为糖尿病,具有连续4代并符合常染色体遗传的糖尿病家族史。基因检测及家系验证发现该家系携带与MODY7相关的KLF11 c.577C>A(***193Thr)杂合错义突变,该突变导致193位氨基酸残基由脯氨酸变为苏氨酸,该突变在HGDM数据库未见报道。体外细胞功能试验证实KLF11新发突变不影响KLF11的m RNA及蛋白的表达,但可导致KLF11转录调控胰岛素基因的活性下降,同时在高糖刺激下胰岛素合成和分泌减少,认为该新发突变可导致MODY的发生。结论:我们在三个早发糖尿病家系中发现了与MODY3、MODY5、MODY7相关的基因突变(hnf1αp.G292Rfs*25、hnf1βp.R276*和KLF11 p.P193T)。其中新发突变KLF11 p.P193T抑制了胰岛素基因启动子的表达,导致KLF11转录调控胰岛素基因的活性下降,造成胰岛素分泌减少,本研究拓展了MODY的表型和致病突变谱。图10幅,表6个,参考文献62篇

关键词：青少年起病成人型糖尿病 hnf1α hnf1β KLF11 临床特征遗传研究

常染色体显性遗传肾小管间质病中UMOD,REN,hnf1B基因筛查及功能研究

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中国血液净化 2017年第6期16卷 413-419页

作者：宫坤婧王雅琴夏敏刘颖陈育青北京大学第一医院肾内科北京大学肾脏疾病研究所卫生部肾脏疾病重点实验室慢性肾脏病防治教育部重点实验室北京100034

目的在我们收集的中国人常染色体显性遗传小管间质性肾病(autosomal dominant tubulointerstitial kidney disease,ADTKD)的队列中,进行该病致病基因UMOD/REN/hnf1B的突变筛查,同时对新发现的UMOD基因突变进行功能研究,建立ADTKD的遗传... 详细信息

目的在我们收集的中国人常染色体显性遗传小管间质性肾病(autosomal dominant tubulointerstitial kidney disease,ADTKD)的队列中,进行该病致病基因UMOD/REN/hnf1B的突变筛查,同时对新发现的UMOD基因突变进行功能研究,建立ADTKD的遗传诊断基本流程。方法根据KDIGO指南纳入了44例ADTKD疑诊患者及家系,收集临床资料。首先使用一代测序的方法检测UMOD,REN,hnf1B的致病点突变;然后应用多重连接探针扩增技术(multiple ligation-dependent probe amplification,MLPA)进行hnf1B拷贝数变异检测。利用UMOD野生型质定点突变的方法构建突变质粒,转染HEK293细胞,Western Blot方法检测成熟型尿调蛋白表达量的变化。结果 44例先证者中共检出11例突变,10例位于UMOD基因,1例位于hnf1B基因。UMOD基因突变中,3例为国际上尚未报导的新突变(***35Tyr,***38Ile ***287Phe)。在该人群中,REN基因点突变和hnf1B基因的拷贝数变异均未检出。将44例先证者分为UMOD突变和未突变组,对比两组临床资料,但两组没有显著性差异。突变质粒转染HEK293细胞表达的成熟型尿调蛋白明显减少(F=14.241,P1)。结论本研究中有25%的患者检测出基因突变,以UMOD基因为主,且均为点突变,点突变是ADTKD的主要致病原因。一代测序是检测该疾病直接有效的方法。临床表现不能作为疾病诊断的标准,应进行一系列的致病基因的监测,并通过初步的功能检测对突变的致病性进行验证。

关键词：常染色体显性遗传小管间质性肾病尿调蛋白 hnf1β REN 基因检测