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云南省2007-2009年流行性腮腺炎病毒SH和hn基因的遗传特征分析

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中华流行病学杂志 2011年第4期32卷 370-375页

作者：马绍辉施海晶何春艳陈俊英杨卉娟孙强明中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

目的分析2007—2009年云南省腮腺炎病毒（MuV）分离株的SH和hn遗传特征。方法采用反转录一聚合酶链反应从Vero细胞分离的病毒株基因组中扩增出SH基因和hn基因，测序后用Mega4．1软件分析其遗传特征。结果云南省分离14株MuV的SH基凶其核... 详细信息

目的分析2007—2009年云南省腮腺炎病毒（MuV）分离株的SH和hn遗传特征。方法采用反转录一聚合酶链反应从Vero细胞分离的病毒株基因组中扩增出SH基因和hn基因，测序后用Mega4．1软件分析其遗传特征。结果云南省分离14株MuV的SH基凶其核苷酸和氨基酸同源性为98．3％～100．0％和96．5％～100．0％，与其他省份比较其同源性为92．6％～99．4％和87．7％～100．0％，其巾Wsh1和Wsh2与其他F基因型差异较大；与疫苗株同源性为84．5％～85．1％和77．2％；与其他基因型同源性为83．4％～90．9％和70．1％～86．0％。6株MuV分离株的hn基因与核苷酸和氨基酸同源性分别为99．3％～99．5％和99．1％～99．7％；与中国分离株SP株的核苷酸和氨基酸同源性均为99．8％；与其他基因型同源性为94．7％～96．8％和95．5％～99．1％；与疫苗株的同源性为92．4％～93．2％和95．5％～96．4％。结论2007-2009年云南省流行的MuV均为F基因型；其hn基凶比SH基因保守。

关键词：腮腺炎病毒 F基因型 SH基因 hn基因

新城疫分离毒hn基因的分子特性和片段同源相关性

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病毒学报 2007年第1期23卷 39-45页

作者：秦卓明马保臣袁小远徐怀英何叶峰崔治中山东农业科学院家禽研究所山东济南250023 山东农业大学动物科技学院山东泰安271018

选取国内1997-2005年分离的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)24株,经蚀斑纯化克隆其血凝素-神经氨酸酶(hn)基因,与在GenBank发表的36株国内外不同时期的NDV毒株,进行氨基酸遗传变异分析,并利用SPSS8.0软件对其不同片段的氨基酸... 详细信息

选取国内1997-2005年分离的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)24株,经蚀斑纯化克隆其血凝素-神经氨酸酶(hn)基因,与在GenBank发表的36株国内外不同时期的NDV毒株,进行氨基酸遗传变异分析,并利用SPSS8.0软件对其不同片段的氨基酸进行同源相关比较。结果显示:国内所有NDV分离毒株氨基酸高度同源,同源性为94.4%-99.4%;与LaSota、Clone30疫苗株等的氨基酸同源性为86.9%-89%;与强毒株F48E9的氨基酸同源性为87.9%-89.9%;与国外NDV的氨基酸同源性为87.2%-96.2%。系统发育分析表明:国内NDV分离毒hn遗传距离较近,而与LaSota、Clone30和F48E9遗传距离较远。国内NDV分离毒均缺乏538-540位糖基化位点。不同片段与全长的氨基酸同源性高度相关,且与前80个氨基酸相关最密切。

关键词：新城疫病毒 hn基因氨基酸遗传变异相关性

联合应用凋亡素基因、新城疫病毒hn基因及IL-18基因对黑色素瘤的抑制效应研究

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高技术通讯 2004年第12期14卷 33-36页

作者：李霄金宁一米志强连海孙迎春李杰管国芳中国人民解放军军事医学科学院基因工程重点实验室，长春130062 吉林大学第一医院血液肿瘤科，长春130021 吉林大学第二医院耳鼻喉科，长春130041

以前的研究结果表明，来自于鸡贫血病毒的凋亡素基因、来自于鸡新城疫病毒的hn基因和IL-18基因具有不同的抗肿瘤效应，但上述基因抗肿瘤的机制不同，本研究在双启动子真核表达质粒pIRES中的CMV启动子下游插入凋亡素基因，IRES启动子下... 详细信息

以前的研究结果表明，来自于鸡贫血病毒的凋亡素基因、来自于鸡新城疫病毒的hn基因和IL-18基因具有不同的抗肿瘤效应，但上述基因抗肿瘤的机制不同，本研究在双启动子真核表达质粒pIRES中的CMV启动子下游插入凋亡素基因，IRES启动子下游插入IL-18hn嵌合基因，构建能同时表达三种基因的真核表达质粒pIRVP3IL-18hn。复制C57BL／6小鼠荷黑色素瘤模型，并将质脂体包裹的重组质粒进行瘤内注射，共注射3次，每次100μg质粒，拟观察凋亡素、新城疫病毒hn基因和IL-18基因以核酸疫苗的形式联合应用对小鼠黑色素瘤的抑制效应。结果显示pVIL-18hn、pVlL-18和pVVP3IL-18均有抑制肿瘤作用，但pIRVP3IL-18hn组抑瘤率高于pVIL-18hn组、pVIL-18VP3组、pVIL-18组和Hanks液对照组。研究结果提示，上述3种基因联合应用具有协同抑瘤效应。

关键词： IL-18 hn基因联合应用凋亡素黑色素瘤基因 IRES 鸡新城疫病毒下游鸡贫血病毒

新城疫不同毒株交叉鸡胚中和指数及其与F和hn基因变异的相关性

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微生物学报 2008年第2期48卷 226-233页

作者：秦卓明徐怀英欧阳文军王友令王莉莉袁小远谭雷涛山东农业科学院家禽研究所济南250100

选取13株国内2001～2004年分离的新城疫流行病毒(Newcastle disease virus,NDV),经蚀斑纯化,克隆其融合蛋白(F)和血凝素.神经氨酸酶(hn)基因,结合疫苗株La Sota、Clone30和国内标准强毒株F_(48)E_9等的基因序列,进行遗传变异分析。利用... 详细信息

选取13株国内2001～2004年分离的新城疫流行病毒(Newcastle disease virus,NDV),经蚀斑纯化,克隆其融合蛋白(F)和血凝素.神经氨酸酶(hn)基因,结合疫苗株La Sota、Clone30和国内标准强毒株F_(48)E_9等的基因序列,进行遗传变异分析。利用纯化的病毒制备特异阳性血清,进行鸡胚交叉中和试验,确定不同NDV毒株之间的抗原相关性,并与NDV不同毒株之间的hn和F基因核苷酸(氨基酸)同源性进行相关比较。结果表明:病毒中和指数与hn基因的核苷酸(氨基酸)同源性显著相关(P基因呈弱相关(P基因前374bp的核甘酸同源性不相关。这表明,NDV的分子变异已经对NDV的抗原性变异产生了影响,研制新型的疫苗成为必然。

关键词：新城疫病毒 F基因 hn基因抗原性相关性

新城疫病毒hn基因诱导肝癌细胞SMMC7721凋亡的作用机制

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中华肿瘤杂志 2005年第5期27卷 279-282页

作者：孙迎春金宁一米志强李霄连海李萍解放军军事医学科学院军事兽医研究所长春130062

目的探索含新城疫病毒(NDV)hn基因的质粒pVhn诱导人肝癌细胞SMMC7721凋亡的作用及其机制。方法以脂质体介导方法在体外转染pVhn于SMMC7721细胞24h后,通过MTT方法检测细胞活性状态;采用流式细胞仪(FCM)检测法,通过碘化丙啶(PI)染色测定... 详细信息

目的探索含新城疫病毒(NDV)hn基因的质粒pVhn诱导人肝癌细胞SMMC7721凋亡的作用及其机制。方法以脂质体介导方法在体外转染pVhn于SMMC7721细胞24h后,通过MTT方法检测细胞活性状态;采用流式细胞仪(FCM)检测法,通过碘化丙啶(PI)染色测定细胞死亡率;以罗丹明123染色测定线粒体跨膜电位(△Ψ)的改变;提取细胞基因组DNA进行电泳,检测DNA有无断裂;用底物颜色反应检测Caspase3活性。结果细胞SMMC7721在体外转染pVhn后,死亡率达50.0%(转染空载体质粒对照组为5.2%);细胞基因组DNA呈梯状谱带;线粒体△Ψ下降,Caspase3活性明显升高。结论新城疫病毒hn基因在体外转染细胞SMMC7721,能明显诱导细胞SMMC7721凋亡,其发生机制可能是由于hn基因的导入引起线粒体△Ψ下降,进而激活Caspase3使细胞凋亡。

关键词：新城疫病毒 hn基因诱导肝癌癌细胞 SMMC7721 细胞凋亡作用机制

山羊源副流感病毒3型JS2013株hn基因的原核表达与抗原性分析

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中国兽医科学 2015年第6期45卷 596-601页

作者：邓加武李文良毛立杨蕾蕾张纹纹魏建忠江杰元安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

参考GenBank中牛副流感病毒3型(BPIV3)内蒙古09株(NM09)全基因组序列(GenBank登录号:JQ063064),设计了1对特异性引物以扩增山羊源副流感病毒3型(PIV3)JS2013株hn基因部分序列;将扩增到的基因测序后进行同源性分析。同源性分析结果表明,... 详细信息

参考GenBank中牛副流感病毒3型(BPIV3)内蒙古09株(NM09)全基因组序列(GenBank登录号:JQ063064),设计了1对特异性引物以扩增山羊源副流感病毒3型(PIV3)JS2013株hn基因部分序列;将扩增到的基因测序后进行同源性分析。同源性分析结果表明,它与已报道的HPIV3、BPIV3 hn基因的序列同源性最高,分别为74.3%、79.8%。进化树分析表明,JS2013株并不属于HPIV3与BPIV3,形成一个独立的分支。将hn基因片段克隆至原核表达载体pET-32a(+),获得原核重组质粒pET-32a(+)-hn。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态菌株中,经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE与Western-blot试验分析表明,重组蛋白诱导表达成功,并以包涵体形式存在,大小为46ku。经Western-blot试验验证,重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备的超免疫血清能够与重组蛋白反应;把病毒接种给MDBK细胞后,间接免疫荧光试验表明重组蛋白的多克隆抗体与病毒产生特异性荧光反应,表明该重组蛋白具有很好的免疫原性和反应原性。本试验结果为山羊源副流感病毒3型感染诊断方法的建立和疫苗的研制奠定了基础。

关键词：山羊副流感病毒3型 hn基因原核表达抗原性分析

携带NDV hn基因疫苗的重组减毒鸡白痢沙门菌口服免疫原性研究

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畜牧兽医学报 2016年第10期47卷 2081-2088页

作者：丁轲余祖华李蒙郁川尚珂程相朝陈桂华廖成水贾艳艳汪洋张春杰河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室洛阳471003

为研究携带新城疫病毒（NDV）血凝素-神经氨酸酶（hn）基因疫苗的重组减毒鸡白痢沙门菌的口服免疫原性,将携带NDV hn基因的重组质粒pcDNA3-hn电转化减毒鸡白痢沙门菌ΔcrpC79-13,构建重组疫苗菌株ΔcrpC79-13（pcDNA3-hn）。将重组菌株... 详细信息

为研究携带新城疫病毒（NDV）血凝素-神经氨酸酶（hn）基因疫苗的重组减毒鸡白痢沙门菌的口服免疫原性,将携带NDV hn基因的重组质粒pcDNA3-hn电转化减毒鸡白痢沙门菌ΔcrpC79-13,构建重组疫苗菌株ΔcrpC79-13（pcDNA3-hn）。将重组菌株ΔcrpC79-13（pcDNA3-hn）以1×10^9 CFU·只-1口服免疫7日龄雏鸡,同时设PBS、ΔcrpC79-13（pcDNA3）和NDVⅣ系疫苗免疫对照,于免疫后7、14、21、28、35d测定免疫雏鸡诱导的抗NDV的HI抗体、鸡白痢沙门菌IgG抗体和肠道黏膜IgA抗体动态水平,同时测定免疫雏鸡的外周血淋巴细胞增殖水平并进行攻毒试验。结果表明,成功获得携带NDV hn基因疫苗的重组菌株Δcrp C79-13（pcDNA3-hn）;在免疫后14～35d,可诱导产生抗NDV的HI抗体,且在免疫后21d时达到最高值;可诱导产生抗鸡白痢沙门菌的IgG抗体,且在免疫后28d达到最高值;Δcrp（C79-13pcDNA3-hn）组肠道黏膜IgA抗体含量最高值略高于Δcrp C79-13（pcDNA3）组,但差异不显著（P〉0.05）。在免疫28d以后,Δcrp（C79-13pcDNA3-hn）组外周血淋巴细胞刺激指数极显著高于PBS对照组（P〈0.01）,显著高于ΔcrpC79-13（pCDNA3）组（P〈0.05）。用103EID50 NDV F48E9株攻毒,保护率达67%（10/15）,用108 CFU鸡白痢沙门菌C79-13攻毒,保护率为100%。本研究结果表明重组减毒鸡白痢沙门菌ΔcrpC79-13（pcDNA3-hn）具有良好的口服免疫原性。

关键词：新城疫病毒 hn基因减毒沙门菌口服免疫免疫原性

人3型副流感病毒hn基因的克隆、表达及其免疫原性

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中国生物制品学杂志 2008年第12期21卷 1054-1057页

作者：白慕群安静安红包红周旭兰州生物制品研究所第二研究室兰州730046

目的克隆人3型副流感病毒(HPIV-3)hn基因,构建原核表达质粒,并检测表达蛋白的免疫原性。方法从呼吸道感染患儿呼吸道分泌物中提取HPIV-3RNA,用套式RT-PCR扩增hn基因,克隆至pGEM-T载体上,进行核苷酸序列分析,并用生物信息软件分析hn蛋白... 详细信息

目的克隆人3型副流感病毒(HPIV-3)hn基因,构建原核表达质粒,并检测表达蛋白的免疫原性。方法从呼吸道感染患儿呼吸道分泌物中提取HPIV-3RNA,用套式RT-PCR扩增hn基因,克隆至pGEM-T载体上,进行核苷酸序列分析,并用生物信息软件分析hn蛋白的二级结构,构建截短的hn基因原核表达载体pET-28a-hn,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达蛋白经SDS-PAGE和Western blot检测后,进行纯化和复性。并以此蛋白免疫昆明小鼠,检测小鼠血清中hn抗体效价。结果扩增出的HPIV-3的hn基因核苷酸序列与参考序列的同源性为95%,氨基酸序列同源性为97%,有16处发生了突变。截短的hn基因的原核表达载体经酶切鉴定及测序,证明构建正确。重组hn蛋白的表达量占菌体总蛋白的30%以上,且具有良好的反应原性。复性的重组hn蛋白免疫的小鼠可产生高效价的抗hn抗体。结论原核表达的截短的hn蛋白具有良好的免疫原性,能够刺激小鼠产生较高水平的抗体应答。

关键词：人3型副流感病毒 hn基因克隆原核表达免疫原性

秦岭野鸟源新城疫病毒致病性与F、hn基因分子特征分析

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畜牧兽医学报 2013年第1期44卷 152-158页

作者：张渭东王丹阳唐文雅王兴龙姜振国陈胜利幕国辉刘海金贺生芳付向晶郝华芳刘阳坤杜恩岐杨增岐西北农林科技大学动物医学院杨凌712100

为研究新城疫病毒(NDV)在秦岭地区野生鸟群中的流行情况,在秦岭地区采集健康野鸟咽喉、泄殖腔拭子各252份,进行NDV的分离、鉴定,并对NDV分离株进行生物学特性研究和遗传进化分析。结果共分离获得5株野鸟源NDV,其致病指数MDT、ICPI和IVP... 详细信息

为研究新城疫病毒(NDV)在秦岭地区野生鸟群中的流行情况,在秦岭地区采集健康野鸟咽喉、泄殖腔拭子各252份,进行NDV的分离、鉴定,并对NDV分离株进行生物学特性研究和遗传进化分析。结果共分离获得5株野鸟源NDV,其致病指数MDT、ICPI和IVPI分别为60.0～76.8h、0.900～1.261、0.41～0.81;对F基因(47～420bp)进行遗传进化分析,5株分离株均属于基因VIb型,F蛋白裂解位点为112 RRQKRF117;hn基因氨基酸相似性为99.5%～99.8%,与鸽源基因VI型NDV相似性为91.4%～98.0%,与LaSota、F48E9相似性分别为87.1%～87.4%、89.0%～89.3%。上述结果表明,基因VIb型NDV在秦岭地区健康野生鸟类中流行,可能源于鸽源NDV,并具有强毒力的分子特征,但对鸡的表现为中等致病力,说明野鸟NDV具有独特的分子特征和致病性。

关键词：秦岭野鸟新城疫病毒 F基因 hn基因遗传进化分析