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Pseudogene HMGN2P46 as a microRNA sponge to regulate HMGN2 expression via competing for miR-590-3p in severe acute pancreatitis

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BIOCELL 2022年第5期46卷 1299-1308页

作者： HONGQIANG ZHAO QI LIU HAORUN LIU WEIMIN LI JIANGYANG LU Department of Pathology Fourth Medical Center of the Chinese PLA General HospitalBeijing100048China Translational Medicine Research Center Fourth Medical Center and Medical Innovation Research Division of the Chinese PLA General HospitalBeijing100048China Faculty of Hepato-Pancreato-Biliary Surgery Chinese PLA General HospitalBeijing100853China

HMGN2 have functions in inflammatory response.However,the role of HMGN2 in severe acute pancreatitis(SAP)remains unclear.Here,our study was to discuss the role and regulatory mechanism ofHMGN2 in SAP.In this study,the SAP cell model of AR42J was used to study the function and mechanism of HMGN2 in SAP.The protein expression in cells and serums were examined by western blot and ELISA assay.qPCR was used to test the transcriptional RNA level.Cell viability were examined by MTT assay.Luciferase assay was used to evaluate the interaction between gene and gene.Our results showed that HMGN2 was significantly upregulated in SAP patients.The database predicted and luciferase assay data indicated the HMGN2 was directly binding with miR-590-3p.ELISA,MTT and western blot experiments showed that the HMGN2 were promoted the cell proliferation,reduced the inflammation,and repressed the cell autophagy.Mechanism studies showed that the pseudogene HMGN2P46 level was positively correlated with HMGN2 and upregulated HMGN2 expression by competing for miR-590-3p in SAP.Taken together,all over these results showed upregulation of HMGN2 alleviates SAP,this process was regulated by HMGN2P46 competitively binding with miR-590-3p,which may provide a new insight for the treatment and intervention in SAP.Pseudogene HMGN2P46 was a miRNA sponge to regulate HMGN2 level by competing for miR-590-3p to alleviate the process of SAP.It provided a novel strategy for the diagnosis and treatment of severe acute pancreatitis.

关键词： HMGN2 Pseudogene Severe acute pancreatitis Inflammation miR-590-3p

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HMGN2对中性粒细胞免疫功能的影响及其机制研究

HMGN2对中性粒细胞免疫功能的影响及其机制研究

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作者：易靳电子科技大学

学位级别：硕士

背景:中性粒细胞是人体血液循环中最丰富的白细胞,是机体抵御细菌、真菌等病原体感染的第一道防线。在机体遭遇感染时,中性粒细胞快速迁移聚集到感染部位,通过吞噬、脱颗粒、释放活性氧和炎症因子等手段清除病原微生物,中性粒细胞的功... 详细信息

背景:中性粒细胞是人体血液循环中最丰富的白细胞,是机体抵御细菌、真菌等病原体感染的第一道防线。在机体遭遇感染时,中性粒细胞快速迁移聚集到感染部位,通过吞噬、脱颗粒、释放活性氧和炎症因子等手段清除病原微生物,中性粒细胞的功能异常将导致机体面临严重感染的风险。HMGN2分子是真核细胞内一类重要的染色质构架调控蛋白,也是机体重要的免疫调节分子,被证明可通过调控包括细胞粘附、骨架重排、氧化应激在内的多个机制影响天然免疫细胞的功能,以抗击病原体感染。通过数据库分析发现,与其他免疫细胞相比,HMGN2分子在中性粒细胞中显著高表达,而且,团队前期实验数据证明HMGN2敲除可影响中性粒细胞的免疫功能,提示HMGN2可能参与调控中性粒细胞的抗微生物感染免疫反应。目的:研究HMGN2对中性粒细胞抗细菌免疫功能的影响,并探索其调控机制。方法:在这项研究中,我们利用Cre/Loxp技术构建中性粒细胞HMGN2条件性敲除小鼠,通过构建小鼠细菌感染模型,研究HMGN2条件性敲除对中性粒细胞募集以及小鼠清除细菌能力的影响;在体外,通过Transwell、流式细胞术和RT-q PCR等技术检测HMGN2敲除对中性粒细胞吞噬能力、LPS诱导的炎症因子和趋化因子表达等免疫功能的影响;利用Cut&Tag和转录组测序,以及染色质免疫共沉淀等分子生物学技术分析和研究HMGN2调控中性粒细胞抗细菌免疫功能的潜在下游机制。结果:与对照小鼠相比,中性粒细胞HMGN2条件性敲除小鼠清除细菌的能力下降,感染局部募集的中性粒细胞减少;体外实验中,与对照组相比,HMGN2敲除减弱中性粒细胞的吞噬能力,减少LPS诱导的炎症因子和趋化因子表达;转录组测序分析发现HMGN2敲除引起LPS诱导下中性粒细胞中的转录谱改变,通过差异基因分析、基因表达层次聚类以及通路富集分析,发现差异基因主要富集在免疫相关通路,主要包括NF-κB、MAPK以及细胞因子表达调节等,同时Cut&Tag测序与转录组测序联合分析发现LPS活化的中性粒细胞HMGN2直接靶向影响了47个基因的表达调控,其中Ezh2在HMGN2敲除后表达明显升高。结论:HMGN2参与调控中性粒细胞抗细菌感染过程,其可能通过减少Ezh2促进免疫相关基因的表达,最终促进和维持中性粒细胞介导的抗细菌免疫能力。

关键词：中性粒细胞 HMGN2 转录调控感染免疫

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HMGN2、CyclinD1在宫颈癌中的表达及临床意义

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四川大学学报（医学版） 2019年第4期50卷 580-582页

作者：张倩雯龚云辉何跃东四川大学华西第二医院妇产科成都600041 出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室(四川大学) 成都600041

目的探讨高迁移率核小体蛋白N2(HMGN2)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)在宫颈癌中的表达及意义。方法选取四川大学华西第二医院病理科2014年7月~2015年9月临床病理资料完整的石蜡标本。采用免疫组化染色,联合检测HMGN2、CyclinD1在正常宫颈... 详细信息

目的探讨高迁移率核小体蛋白N2(HMGN2)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)在宫颈癌中的表达及意义。方法选取四川大学华西第二医院病理科2014年7月~2015年9月临床病理资料完整的石蜡标本。采用免疫组化染色,联合检测HMGN2、CyclinD1在正常宫颈(20例)、宫颈上皮内瘤变(CIN)(30例)、宫颈癌(50例)中的表达,分析两者与宫颈癌临床病理特征的关系。结果 HMGN2在正常宫颈组、CIN组、宫颈癌组的阳性表达率分别为90.00%、70.00%、44.00%,差异有统计学意义(PHMGN2阳性表达与宫颈癌的分化程度有关,但HMGN2、CyclinD1的表达与宫颈癌的临床分期、病理类型、宫颈间质浸润深度、脉管浸润及淋巴结转移无关;宫颈癌中HMGN2与CyclinD1的表达呈低度相关(Pearson列联系数为0.26)。结论 HMGN2低表达及CyclinD1过表达可能与宫颈癌发生发展有关。

关键词： HMGN2 CyclinD1 宫颈癌免疫组化

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人淋巴结中HMGN2蛋白的分离纯化及其亚细胞分布研究

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生物医学工程学杂志 2010年第4期27卷 842-846页

作者：李薇张平孔祥丽李燕陈思秀冯云吴琦王伯瑶四川大学华西医院皮肤性病科成都610041 四川大学口腔疾病研究国家重点实验室成都610041 四川大学华西医学中心基础医学与法医学院感染免疫研究室成都610041

从人淋巴结中分离与纯化HMGN2蛋白,探讨HMGN2分子抗菌作用及其在淋巴结中的亚细胞分布。我们采用高效液相色谱分离纯化,琼脂糖弥散法筛选纯化组分的抗菌活性,对活性组分进行质谱分析测定精确分子量,进行Western-blot检测同源性。结果成... 详细信息

从人淋巴结中分离与纯化HMGN2蛋白,探讨HMGN2分子抗菌作用及其在淋巴结中的亚细胞分布。我们采用高效液相色谱分离纯化,琼脂糖弥散法筛选纯化组分的抗菌活性,对活性组分进行质谱分析测定精确分子量,进行Western-blot检测同源性。结果成功从人淋巴结中分离纯化出的活性蛋白,对致病性大肠杆菌54080有抗菌活性,质谱精确分子质量测定、Western-blot分析证明此活性蛋白即为HMGN2分子,免疫组化实验结果显示在淋巴结组织细胞细胞浆和细胞核均有HMGN2蛋白分布。从人淋巴结组织成功分离纯化出纯度较高、具有生物活性的HMGN2蛋白,可能参与了体内的天然免疫防御作用。

关键词：人淋巴结 HMGN2 分离纯化亚细胞定位

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人宫颈黏液HMGN2鉴定及在宫颈组织的表达

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生物化学与生物物理进展 2008年第5期35卷 577-583页

作者：王莉莉何跃东黄宁李明熊文碧冯云吴琦王伯瑶潘小玲四川大学华西医学中心基础医学与法医学院感染免疫研究室成都610041 四川大学华西第二医院成都610041

为探讨人子宫颈黏液的抗菌机制,采用酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳和反相高压液相色谱技术,从人子宫颈黏液酸溶性提取物鉴定出对大肠杆菌氨苄青霉素耐药株ML-35p有较强的抗菌活性的多肽HCP-21和HCP-26.蛋白质N端氨基酸序列测定和精确质谱... 详细信息

为探讨人子宫颈黏液的抗菌机制,采用酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳和反相高压液相色谱技术,从人子宫颈黏液酸溶性提取物鉴定出对大肠杆菌氨苄青霉素耐药株ML-35p有较强的抗菌活性的多肽HCP-21和HCP-26.蛋白质N端氨基酸序列测定和精确质谱分子质量测定证明,HCP-21为HMGN2,HCP-26为SLPI片段.提取原代培养宫颈上皮细胞的总RNA,采用RT-PCR技术扩增出一条与HMGN2 cDNA大小相同(270bp)目的基因片段,表明在生理状况下,宫颈上皮细胞即可表达其mRNA.制备HMGN2多克隆抗体,对生理状态下宫颈组织切片和宫颈黏液涂片进行HMGN2分子免疫组化分析表明,该分子主要分布于子宫颈黏膜层,并存在于子宫颈黏液.HMGN2分子在宫颈黏膜上皮组织和黏液中固有表达,可能在子宫颈天然免疫防御中起重要作用.

关键词：女性生殖道子宫颈抗菌肽 HMGN2

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人单核细胞株THP-1中HMGN2的分离纯化及其抗乙型肝炎病毒活性

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中国医院药学杂志 2014年第17期34卷 1445-1449页

作者：张敏张远童荣生四川省医学科学院.四川省人民医院药剂科四川成都610072

目的：从人单核细胞株THP-1中分离与纯化HMGN2抗菌肽，应用HepG2．2．15细胞株作为体外抗乙型肝炎病毒的实验模型，以探讨HMGN2分子的抗HBV作用。方法：采用HPLC分离纯化，Tricine-SDSPAGE电泳、质谱精确分子量测定、Westernblotting对... 详细信息

目的：从人单核细胞株THP-1中分离与纯化HMGN2抗菌肽，应用HepG2．2．15细胞株作为体外抗乙型肝炎病毒的实验模型，以探讨HMGN2分子的抗HBV作用。方法：采用HPLC分离纯化，Tricine-SDSPAGE电泳、质谱精确分子量测定、Westernblotting对分离纯化得到的HMGN2分子进行分子鉴定。以HBVDNA转染的细胞株HepG2．2．15细胞为模型，用不同浓度HMGN2分子作用于HepG2．2．15细胞，分别在第4天和第8天收集细胞培养上清液，ELISA检测上清中HBV表面抗原（HBsAg）及e抗原（HBeAg），采用实时荧光定量PCR法检测上清液HBVDNA的含量。结果：从人单核细胞株THp-1中分离纯化获得纯度较高的HMGN2蛋白；其在1-100mg·L-1范围内，对HepG2．2．15细胞无细胞毒性；HMGN2蛋白分子在1-5mg·L-1水平即可显著抑制HBeAg和HBsAg的表达，可显著降低HBVDNA拷贝数，继续增加剂量抗病毒效果不再明显增加。结论：HMGN2在体外细胞培养中具有直接抗HBV活性。

关键词：人THP-1细胞 HMGN2 分离纯化抗HBV

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人单核细胞系THP-1中HMGN2的分离纯化及其抗菌活性

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基础医学与临床 2013年第2期33卷 156-160页

作者：张敏冯云四川省医学科学院四川省人民医院药剂科四川成都610072 四川大学口腔疾病研究国家重点实验室四川成都610041

目的从人单核细胞系THP-1中分离与纯化HMGN2抗菌肽,应用微量琼脂糖弥散法检测抗菌活性,以探讨HMGN2分子的抗菌作用。方法采用HPLC分离纯化,琼脂糖弥散法筛选纯化有抗菌活性的组分,用Tricine-SDS-PAGE电泳初步测定其分子质量,以质谱法进... 详细信息

目的从人单核细胞系THP-1中分离与纯化HMGN2抗菌肽,应用微量琼脂糖弥散法检测抗菌活性,以探讨HMGN2分子的抗菌作用。方法采用HPLC分离纯化,琼脂糖弥散法筛选纯化有抗菌活性的组分,用Tricine-SDS-PAGE电泳初步测定其分子质量,以质谱法进行分子质量的精确分析。结果从人THP-1细胞中分离纯化出HMGN2抗菌肽,琼脂糖弥散法检测显示其对大肠杆菌氨苄青霉素耐药株ML-35p有较强的抑菌活性,对大肠杆菌标准株ATCC25922和临床分离株54080亦有较强的抗菌活性,而对金黄色葡萄球菌ATCC25923未检测出抗菌活性。结论 HMGN2是一种抗菌分子,可能参与了体内的天然免疫防御作用。

关键词：人THP-1细胞 HMGN2 抗菌肽分离纯化

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外源性HMGN2入胞并抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭

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医学研究杂志 2020年第3期49卷 19-24,29页

作者：尹佳徐恩杰马骁周许辉上海长征医院脊柱四科 200003

目的研究外源性HMGN2转运入胞后抗肿瘤转移的能力并初步探索相关机制.方法通过在293FT细胞中过表达具有flag标签的HMGN2,并纯化HMGN2蛋白以处理骨肉瘤细胞系.应用免疫细胞化学检测外源性HMGN2转运入骨肉瘤细胞后的细胞定位,并用划痕... 详细信息

目的研究外源性HMGN2转运入胞后抗肿瘤转移的能力并初步探索相关机制.方法通过在293FT细胞中过表达具有flag标签的HMGN2,并纯化HMGN2蛋白以处理骨肉瘤细胞系.应用免疫细胞化学检测外源性HMGN2转运入骨肉瘤细胞后的细胞定位,并用划痕试验和Transwell侵袭试验检测各处理组之间肿瘤细胞迁移和侵袭的差异,以Western blot法检测各组间转移相关因子的表达差异.结果外源性HMGN2能转运入骨肉瘤细胞,主要定位于细胞核,并抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭.此外,外源性HMGN2调控骨肉瘤细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9的表达,这可能是外源性HMGN2抗肿瘤转移的机制.结论外源性HMGN2在抑制骨肉瘤转移中发挥作用,为抗肿瘤转移的治疗研究提供了新的思路.

关键词：骨肉瘤 HMGN2 外源性抗肿瘤转移

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HMGN2分子体外抗乙型肝炎病毒活性研究

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中国病理生理杂志 2009年第8期25卷 1606-1611页

作者：孔祥丽张平何芳张敏唐红冯云吴琦黄宁王伯瑶四川大学口腔疾病研究国家重点实验室四川大学华西医院感染性疾病中心四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室四川成都610041

目的:我们先前的研究证明HMGN2(high mobility group nucleosomal-binding domain2)是人LAK细胞抗菌的一个新的效应分子,本研究欲检测其体外抗乙型肝炎病毒的活性。方法:应用反向高效液相色谱技术从人淋巴结组织酸溶性提取物中分离纯化... 详细信息

目的:我们先前的研究证明HMGN2(high mobility group nucleosomal-binding domain2)是人LAK细胞抗菌的一个新的效应分子,本研究欲检测其体外抗乙型肝炎病毒的活性。方法:应用反向高效液相色谱技术从人淋巴结组织酸溶性提取物中分离纯化批量HMGN2分子,用质谱精确分子量测定、Western blotting和抗菌试验对分离纯化得到的HMGN2分子进行分子鉴定。采用MTT法检测HMGN2分子对稳定转染复制型HBV重组质粒的肝胚瘤细胞株HepG2.2.15细胞的细胞毒性;用不同浓度HMGN2分子作用于HepG2.2.15细胞,分别在第3d和第6d收集细胞培养上清液,ELISA检测上清中HBV表面抗原(HBsAg)及e抗原(HBeAg),采用实时荧光定量PCR法检测上清液HBVDNA的含量。结果:从人淋巴结组织中分离纯化获得纯度较高的HMGN2蛋白;在检1-100mg/L范围内,HMGN2分子对HepG2.2.15细胞无细胞毒性;HMGN2分子在1-5mg/L水平即可显著抑制HBeAg和HBsAg的表达,可显著降低HBVDNA拷贝数。结论:HMGN2分子在体外具有较强的抗HBV活性。

关键词： HMGN2 抗病毒活性肝炎病毒乙型

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人LAK细胞免疫效应分子HMGN2的鉴定

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生物化学与生物物理进展 2005年第6期32卷 568-575页

作者：冯云熊文碧王国兴黄宁吴琦鲍朗李绚王伯瑶四川大学华西医学中心基础医学与法医学院感染免疫研究室成都610041

为分离纯化人淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)小分子抗菌多肽,应用制备尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和反向高效液相色谱技术分离纯化人LAK细胞酸溶性提取物,纯化出一个具抗菌活性的多肽HLP-3p21.蛋白质N端氨基酸测序、质谱精确分子质量测... 详细信息

为分离纯化人淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)小分子抗菌多肽,应用制备尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和反向高效液相色谱技术分离纯化人LAK细胞酸溶性提取物,纯化出一个具抗菌活性的多肽HLP-3p21.蛋白质N端氨基酸测序、质谱精确分子质量测定、蛋白质印迹分析证明HLP-3p21为HMGN2.最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)试验证明HMGN2有抗大肠杆菌ML-35p氨苄青霉素耐药株、铜绿假单胞菌ATCC27853、白色念珠菌ATCC10231活性,无抗金黄色葡萄球菌ATCC25923活性.制备HMGN2多克隆抗体,应用免疫荧光化学、酶联免疫吸附测定和蛋白质印迹方法对HMGN2进行定位分析,证明单个核细胞经IL-2刺激成为LAK细胞时部分HMGN2由胞核转移至胞浆,进而分泌到胞外.提示HMGN2是LAK细胞一个新的免疫效应分子.

关键词： LAK细胞 HMGN2 抗菌活性免疫活性多肽

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