检索结果-南通市图书馆

hmgb1蛋白在日本七鳃鳗中组织定位及免疫学功能研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

HMGB1蛋白在日本七鳃鳗中组织定位及免疫学功能研究

作者：刘爽辽宁师范大学

学位级别：硕士

高迁移率族蛋白B1(hmgb1)存在于真核细胞核内,是与非组蛋白染色体结合的蛋白,hmgb1具有高度保守性,在固有免疫应答中起到了关键性作用,被释放到细胞外的hmgb1,能引起炎症反应,七鳃鳗是现存的最古老的无颌类脊椎动物,目前七鳃鳗hmgb1在... 详细信息

高迁移率族蛋白B1(hmgb1)存在于真核细胞核内,是与非组蛋白染色体结合的蛋白,hmgb1具有高度保守性,在固有免疫应答中起到了关键性作用,被释放到细胞外的hmgb1,能引起炎症反应,七鳃鳗是现存的最古老的无颌类脊椎动物,目前七鳃鳗hmgb1在固有免疫中发挥着怎样的功能尚未报道。本研究通过流式细胞术(FACS)检测了39.36%白细胞上标记了hmgb1分子和46.58%神经轴体细胞上标记了hmgb1分子,激光共聚焦显微镜技术定位hmgb1蛋白存在于七鳃鳗细胞胞浆中,不存在于细胞核中,以及免疫组织化学技术检测hmgb1在七鳃鳗神经轴体、鳃、肠和肾组织中都有表达和分布。通过Western Blotting检测了hmgb1在日本七鳃鳗神经轴体中的高表达以及体外细胞实验检测七鳃鳗hmgb1属于分泌型蛋白,并且能够主动分泌到培养基中,以及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测在大肠杆菌刺激后,hmgb1基因表达量与正常组相比有显著上调。诱导表达重组日本七鳃鳗hmgb1(rLj-hmgb1)蛋白,超高分辨率显微镜检测神经轴体中Lj-hmgb1蛋白与LIP蛋白共存在于一种细胞上,之后分别从免疫共沉淀在神经轴体细胞中检测天然hmgb1和天然LIP蛋白之间有一定的相互作用,等温滴定量热法实验(ITC)检测了rLj-hmgb1蛋白与重组Lamprey immune protein(LIP)蛋白有一定的相互作用,以上免疫共沉淀和等温滴定量热法实验证明了日本七鳃鳗hmgb1蛋白与LIP蛋白有一定的相互作用。通过半定量和实时荧光定量PCR检测在体内以rLj-hmgb1蛋白免疫七鳃鳗后以及体外以rLj-hmgb1蛋白刺激神经轴体细胞后炎症因子MIF、IL-8和IL-17基因表达量比正常组有下调趋势,并且IL-8和IL-17基因表达量有显著下调,说明在rLj-hmgb1刺激后,并没有发生促炎反应,本论文从免疫功能方面对日本七鳃鳗hmgb1蛋白进行了研究,这些结果为探究七鳃鳗固有免疫系统起源和进化奠定了一定基础。

关键词：日本七鳃鳗固有免疫 hmgb1蛋白炎症因子

基于框架核酸平台对Pt-DNA和hmgb1蛋白相互作用的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

基于框架核酸平台对Pt-DNA和HMGB1蛋白相互作用的研究

作者：李浩中国科学院大学(中国科学院上海应用物理研究所)

学位级别：硕士

顺铂通常作为一种抗癌药物,有研究表明,在对睾丸生殖细胞肿瘤（TGCTs）进行联合化疗的过程中,顺铂的引入有助于将治愈率从5%提高到目前的90%。其抗癌机理在于,铂类药物被细胞摄取后,铂原子与DNA共价结合形成链内交联和链间交联,形成Pt-... 详细信息

顺铂通常作为一种抗癌药物,有研究表明,在对睾丸生殖细胞肿瘤（TGCTs）进行联合化疗的过程中,顺铂的引入有助于将治愈率从5%提高到目前的90%。其抗癌机理在于,铂类药物被细胞摄取后,铂原子与DNA共价结合形成链内交联和链间交联,形成Pt-DNA加合物,造成DNA损伤,从而引起多种细胞反应,如复制阻滞、转录抑制、阻滞细胞分裂周期,最终引起癌细胞死亡。在DNA损伤的过程中,会产生一系列的响应蛋白,其中包括hmgb1蛋白,它是一种高迁移率族染色体蛋白,被认为是Pt-DNA加合物的主要结合蛋白,对Pt-DNA交联有非常高的亲和力。它可以识别并结合损伤或弯曲的DNA,对损伤位点进行屏蔽,从而可以抑制细胞内的修复蛋白对损伤的DNA进行修复,进一步促进癌细胞的死亡,达到癌症治疗的目的。因此研究hmgb1蛋白与Pt-DNA间的相互作用对了解铂类药物的药理作用、DNA损伤修复和癌细胞的耐药性具有重要意义。目前,研究人员已经提出了不同的方法研究二者之间的相互作用,如利用X射线衍射解析晶体结构、分子动力学模拟、构建DNA探针捕获蛋白进行质谱分析等,但是这些方法仍然存在弊端:一方面无法对二者之间的识别与结合进行动态的可视化研究,另一方面实验的结果是整体效应,得到的“平均化”的结果,一些分子信息可能被隐藏在群体中。所以目前为止,仍然缺乏一种在单分子水平上可视化研究Pt-DNA和hmgb1蛋白的动态相互作用的方法。由于DNA纳米结构具有可寻址性,而且可以自行定制尺寸和形状,在这里,我们构建了矩形DNA折纸,并将其作为Pt-DNA和hmgb1蛋白相互作用的研究平台,利用单分子观测技术,对单个分子间的相互作用实现可视化的动态观察。具体内容如下:（1）通过凝胶迁移实验（EMSA）和荧光共振能量转移（FRET）对hmgb1蛋白和Pt-DNA的相互作用进行宏观表征。通过EMSA可以观察到二者结合与未结合时条带的不同,当二者结合时,复合物迁移缓慢,所以条带位置高,而且产生拖尾的现象。FRET实验可以进一步表明hmgb1蛋白是与损伤位点的结合,而非DNA的其他位点。（2）首先构建了DNA矩形折纸结构,并将Pt-ssDNA锚定在折纸平台上,将其作为hmgb1蛋白和Pt-dsDNA相互作用的研究平台。利用原子力显微镜（AFM）对反应后的产物进行单分子形貌观察,发现当hmgb1蛋白识别并结合到损伤位点后,其相对于折纸平台的高度为1nm左右。（3）利用全内反射显微镜（TIRF）对hmgb1蛋白和Pt-DNA的相互作用进行单分子动态观察。首先构建了带有biotin修饰的DNA矩形折纸结构,并将其固定在成像皿上,加入hmgb1蛋白后,500s后可以看到荧光信号强度明显上升,表明hmgb1蛋白与Pt-DNA发生结合,同步观察到FRET信号提升,进一步表明hmgb1蛋白与损伤位点的结合。接下来我们对没有加入折纸的体系进行单分子成像,发现hmgb1蛋白和Pt-DNA的共定位效果和FRET效率更低。经过统计发现,将DNA折纸作为研究平台,结合效率达到40%,相比于未加入折纸的体系结合效率提升了30%,而且在100s左右达到二者相互作用的平衡状态,而传统平台需要500s。这些结果表明将DNA折纸作为研究平台,可以hmgb1蛋白快速识别损伤位点,而且结合效率更高。这种方法将DNA折纸作为研究平台,并利用单分子观测技术,在单分子水平上实现了对hmgb1蛋白和Pt-DNA相互作用的可视化研究,避免了先前方法的整体效应,为研究二者相互作用提供了新思路,而且有助于人们进一步了解hmgb1蛋白对损伤DNA的作用机制。

关键词：顺铂 hmgb1蛋白 DNA折纸单分子荧光技术

宿主hmgb1蛋白影响乙型脑炎病毒在Huh7细胞上增殖的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

宿主HMGB1蛋白影响乙型脑炎病毒在Huh7细胞上增殖的研究

作者：梁佳琪华南农业大学

学位级别：硕士

日本乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE),简称乙脑,其病原体是黄病毒科(Flaviviridae)黄病毒属(Flavivirus)的乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV),该病主要盛行于亚洲及西太平洋的部分国家和地区。JEV的感染周期、致病机制至今仍不清晰,但乙型脑炎是不容忽视的人兽共患病,病毒主要通过三带喙库蚊等传播,不仅可造成妊娠母猪流产、产死胎或弱仔,还造成公猪睾丸炎等。全世界有三十多亿人居住在易受JEV感染的地区,每年上报病例约67000例,死亡人数约20000人,其中30%0%的乙脑病毒感染幸存者会出现永久性神经系统后遗症,因此,弄清JEV的致病机制十分必要。在JEV生命周期中会和许多宿主蛋白发生相互作用,挖掘这两者之间的关系对探索乙脑病毒的生命周期、致病机制、研制更好的抗病毒药物以及控制它的传播至关重要。本研究以乙型脑炎BJB毒株为研究对象进行实验研究时,发现Huh7细胞感染了BJB病毒之后,其宿主蛋白高速迁移率蛋白1(High mobility group box 1,hmgb1)的表达量会显著下降。hmgb1蛋白是一种DNA结合蛋白,进化保守,广泛存在于真核细胞,在细胞生长、增殖、死亡、免疫、炎症中均发挥着重要作用,并且细胞质中的hmgb1还可以和多种蛋白结合,参与细胞自噬、癌演进等过程。因此,本研究构建了pRE-hmgb1-Strep真核表达载体,在Huh7细胞上过表达hmgb1蛋白,发现BJB病毒的增殖受到了抑制;然后通过RNA干扰实验发现在Huh7细胞上沉默hmgb1蛋白后,BJB病毒的RNA水平和病毒滴度均显著上升;随后通过CRISPR/Cas9技术对Huh7细胞进行改造,筛选得到敲除hmgb1基因的细胞株KO-hmgb1-I,发现BJB病毒在敲除细胞株上的增殖明显增强,与Huh7沉默了hmgb1的结果相吻合。由此可以确定,hmgb1蛋白在Huh7细胞上的过量表达可以抑制BJB病毒的复制及增殖,而hmgb1蛋白的表达降低则会促进病毒的复制、增殖。而hmgb1在细胞质的表达上升会诱导自噬,而自噬程度的升高会抑制JEV的复制。本研究通过qPCR检测发现,BJB感染Huh7会抑制晚期糖基化终末产物受体(Receptor for advanced glycation end products,RAGE)的mRNA水平,而hmgb1的表达量上升会恢复RAGE的表达,hmgb1的表达量下降会相应的降低RAGE的表达。而RAGE作为Huh7细胞的模式受体,可以和配体结合刺激活性氧的产生从而诱导自噬。因此,本研究推测hmgb1可能通过影响RAGE的表达从而影响自噬,最终影响BJB在Huh7上的复制、增殖。

关键词：乙型脑炎病毒 hmgb1蛋白病毒复制 CRISPR/Cas9 自噬

卵巢癌中hmgb1、BRCA1和p62蛋白的表达与其化疗敏感性的相关性

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

基因组学与应用生物学 2019年第6期38卷 2889-2894页

作者：刘晓霞孟宪华王晓红济南市人民医院

为了探讨卵巢癌中hmgb1、BRCA1和p62蛋白的表达与化疗敏感性的相关性,培养卵巢癌顺铂化疗耐药细胞ES-2和敏感细胞SKVO3,顺铂100 mg/m2环境培养5 d,分别采用Western blotting法和RT-PCR方法检测两种细胞中的hmgb1、BRCA1和p62蛋白表达情... 详细信息

为了探讨卵巢癌中hmgb1、BRCA1和p62蛋白的表达与化疗敏感性的相关性,培养卵巢癌顺铂化疗耐药细胞ES-2和敏感细胞SKVO3,顺铂100 mg/m2环境培养5 d,分别采用Western blotting法和RT-PCR方法检测两种细胞中的hmgb1、BRCA1和p62蛋白表达情况,采用流式细胞术测算细胞凋亡率。敏感组细胞SKOV3和耐药组细胞ES-2中,BRCA1蛋白表达率分别为(38.08±22.56)%和(45.65±22.42)%,hmgb1蛋白表达率分别为(75.13±16.45)%和(83.08±24.22)%,p62蛋白表达率分别为(52.31±25.13)%和(37.26±21.09)%;顺铂处理后,敏感组SKOV3细胞中BRCA1蛋白表达量显著提高(p蛋白相对表达量高于敏感组SKOV3细胞(phmgb1下调与BRCA1、p62上调共存;卵巢癌中BRCA1蛋白的不同表达与化疗敏感性相关,其水平变化有可能作为一种新的肿瘤标志物,动态观察卵巢癌病情进展,为临床治疗提供客观指标。

关键词：卵巢癌 hmgb1蛋白 BRCA1蛋白 p62蛋白化疗敏感性

AMP-活化蛋白激酶对氧葡萄糖剥夺复氧PC12细胞hmgb1释放及其介导的BV2细胞炎性反应的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

国际脑血管病杂志 2016年第6期24卷 529-534页

作者：党辉陆明佳李红燕朱沂新疆维吾尔自治区人民医院神经内科乌鲁木齐830001

目的探讨调节AMP-活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase, AMPK）对PC12细胞氧葡萄糖剥夺复氧（oxygen glucose deprivation and reoxygenation, OGD/R）后高迁移率族蛋白1（high mobility group box 1, hmgb1）释放及其介导的BV2细胞炎性反应的影响。方法分别培养PC12和BV2细胞，应用PC12细胞建立氧葡萄糖剥夺12 h复氧24 h模型，分别给予5-氨基-4-甲酰胺咪唑核糖核苷酸（5-aminoimidazole-4-carboxamide, AICAR）5、50和100 μmol/L以及Compound C 0.1、1和10 μmol/L激活或抑制AMPK磷酸化后，应用四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium, MTT）法检测PC12细胞活性，酶联免疫吸附法检测PC12细胞培养基中hmgb1释放水平。将各组OGD/R后PC12培养基分别作用于BV2细胞正常培养24 h。分别采用免疫印迹法和酶联免疫吸附法检测BV2细胞中NF-κB抑制蛋白（inhibitor of NF-κB, IκB）磷酸化水平和TNF-α释放水平。结果OGD/R后，PC12细胞活性显著降低[（68.84±6.60）%对（100.04±8.82）%；P〈0.01]，AMPK磷酸化水平显著增高（1.95±0.39对1.00±0.20；P〈0.05），细胞外hmgb1释放显著增多[（287.66±26.42）pg/μl对（53.05±9.11）pg/μl；P〈0.01]。与OGD/R组比较，AICAR 100 μmol/L能显著增高OGD/R后PC12细胞存活率[（78.60±3.75）%对（68.84±6.60）%；P〈0.05]、促进AMPK磷酸化（3.32±0.66对1.95±0.39；P〈0.01）和减少细胞外hmgb1的释放[（164.06±12.77）pg/μl对（287.66±26.42）pg/μl；P〈0.01]。相比之下，Compound C 10 μmol/L则会显著降低PC12细胞存活率[（40.44±3.79）%对（68.84±6.60）%；P〈0.01]、抑制AMPK磷酸化（1.07±0.21对1.95±0.39；P〈0.05）和增加hmgb1的释放[（337.97±18.90）pg/μl对（287.66±26.42）pg/μl；P〈0.01]。AICAR 100 μmol/L组条件培养基能显著抑制BV2细胞的IκB磷酸化（1.68±0.51对3.09±0.10；P〈0.05）和减少TNF-α释放[（669.53±38.58）pg/μl对（841.76±45.82）pg/μl；P〈0.05]；Compound C 10 μmol/L组条件培养基则能显著促进BV2细胞IκB磷酸化（4.98±1.24对3.09±0.10；P〈0.01）和增加TNF-α释放[（1 035.32±128.06）pg/μl对（841.76±45.82）pg/μl；P〈0.05]。结论促进AMPK磷酸化激活能减少PC12细胞OGD/R后hmgb1的释放、抑制其介导的BV2细胞NF-κB炎症通路激活并且减少TNF-α释放，从而减轻神经炎性损伤；相反，抑制AMPK磷酸化则会促进PC12细胞OGD/R后hmgb1释放和加重其介导的BV2细胞炎性反应。

关键词： AMP-活化蛋白激酶 hmgb1蛋白细胞培养的神经元小胶质细胞氧葡萄糖炎症 .

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

肿瘤 2017年第5期37卷 448-456页

作者：郭林英余腾骅张光君尹恒柳满然涂刚重庆医科大学附属第一医院内分泌乳腺外科重庆400016 江西省肿瘤医院乳腺外科江西南昌330029 重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

目的:探讨小分子化合物G1活化微环境肿瘤相关成纤维细胞(cancerassociated fibroblast,CAF)中G蛋白偶联雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)对外分泌细胞因子高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1 protein,hmgb1)的影响,以及对乳腺癌MCF-7细胞自噬和增殖能力的影响。方法:构建靶向干扰GPER基因的GPER-shRNA慢病毒,稳定转染至CAF中;分别采用实时荧光定量PCR法及蛋白质印迹法检测阴性对照慢病毒感染组(CAF-shNC组)与GPER-shRNA慢病毒感染组(CAFshGPER组)中GPER mRNA和蛋白的表达情况。利用GPER特异性激动剂G1(1μmol/L)处理以上2组细胞后,分别得到G1+CAF-shNC组与G1+CAF-shGPER组细胞;应用实时荧光定量PCR法、蛋白质印迹法及ELISA法检测上述4组细胞中细胞因子hmgb1 mRNA和蛋白的表达水平,以及条件培养液中hmgb1的分泌量。收集以上各组细胞的条件培养液处理MCF-7细胞后,应用蛋白质印迹法检测肿瘤细胞自噬蛋白标志物Beclin1、p62及LC3的表达情况,CCK-8法检测对MCF-7细胞增殖能力的影响。结果:携带有GPER-shRNA的慢病毒稳定转入CAF后,GPER mRNA及蛋白的表达水平被明显抑制(P值均hmgb mRNA及蛋白的表达水平,进一步上调条件培养液中hmgb1蛋白的分泌量(P值均hmgb1可通过上调Beclin1和LC3蛋白以及降低p62蛋白的表达水平增强乳腺癌MCF-7细胞的自噬水平及其增殖能力(P值均hmgb1的分泌量,进而诱导乳腺癌MCF-7细胞发生自噬,保护MCF-7细胞并促进其生长。

关键词：乳腺肿瘤 G蛋白偶联雌激素受体 hmgb1蛋白细胞自噬细胞增殖

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

氢气对重度烧伤小鼠早期肺损伤的影响

中华烧伤杂志 2017年第11期33卷 682-687页

作者：秦超边映雪冯甜甜张金辉于泳浩天津医科大学总医院麻醉科天津市麻醉学研究所300052 南开大学附属医院(天津市第四医院)麻醉科

目的探讨氢气对重度烧伤小鼠早期肺损伤的影响。方法取160只ICR小鼠，按随机数字表法分为假伤组、氢气组、单纯烧伤组、烧伤＋氢气组，每组40只。单纯烧伤组和烧伤＋氢气组小鼠背部制作40%TBSA Ⅲ度烫伤（以下称烧伤）模型，假伤组和氢... 详细信息

目的探讨氢气对重度烧伤小鼠早期肺损伤的影响。方法取160只ICR小鼠，按随机数字表法分为假伤组、氢气组、单纯烧伤组、烧伤＋氢气组，每组40只。单纯烧伤组和烧伤＋氢气组小鼠背部制作40%TBSA Ⅲ度烫伤（以下称烧伤）模型，假伤组和氢气组小鼠模拟致假伤。分别于伤后1、6 h，氢气组和烧伤＋氢气组小鼠吸入体积分数2%氢气1 h，假伤组和单纯烧伤组小鼠吸入空气1 h。伤后24 h，各组取6只小鼠肺组织，行HE染色，观察肺组织病理变化，并计算肺组织损伤病理学评分。各组另取8只小鼠，取下腔静脉血和肺组织，采用ELISA法检测血清和肺组织中高迁移率族蛋白B1（hmgb1）、IL－6的含量，分光光度法检测血清和肺组织中SOD活性。各组另取6只小鼠，取动脉血测定PaO2，取肺组织，称量肺湿干质量，计算肺湿干质量比。计算各组剩余20只小鼠伤后7 d内的存活率。对数据行单因素方差分析、LSD检验和log－rank检验。结果（1）伤后24 h，假伤组和氢气组小鼠肺组织未见异常；单纯烧伤组小鼠肺间质水肿，肺泡毛细血管壁严重破裂，出现大量炎性细胞浸润；烧伤＋氢气组小鼠肺间质轻度水肿，肺泡毛细血管充血伴少量破裂出血，炎性细胞浸润较单纯烧伤组少。假伤组、氢气组、单纯烧伤组和烧伤＋氢气组小鼠肺组织损伤病理学评分分别为（0.7±0.5）、（0.8±0.5）、（6.1±1.0）、（2.8±0.8）分，单纯烧伤组小鼠肺组织损伤病理学评分较假伤组显著升高（P〈0.001），烧伤＋氢气组小鼠肺组织损伤病理学评分较单纯烧伤组显著降低（P〈0.001）。（2）伤后24 h，氢气组小鼠血清和肺组织中hmgb1、IL－6含量与假伤组相近（P值均大于0.05），单纯烧伤组小鼠血清和肺组织中hmgb1、IL－6含量较假伤组显著升高（P值均小于0.001），烧伤＋氢气组小鼠血清和肺组织中hmgb1、IL－6含量较单纯烧伤组显著降低（P值均小于0.001）。（3）伤后24 h，氢气组小鼠血清和肺组织中SOD活性与假伤组相近（P值均大于0.05），单纯烧伤组小鼠血清和肺组织中SOD活性较假伤组显著降低（P值均小于0.001），烧伤＋氢气组小鼠血清和肺组织中SOD活性较单纯烧伤组显著升高（P值均小于0.001）。（4）伤后24 h，4组小鼠PaO2总体比较，差异无统计学意义（F＝0.04，P〉0.05）。（5）伤后24 h，假伤组、氢气组、单纯烧伤组和烧伤＋氢气组小鼠肺湿干质量比分别为3.52±0.22、3.61±0.24、7.24±0.32、5.21±0.41，单纯烧伤组小鼠肺湿干质量比明显高于假伤组（P〈0.001），烧伤＋氢气组小鼠肺湿干质量比明显低于单纯烧伤组（P〈0.001）。（6）假伤组和氢气组小鼠伤后7 d内存活率为100%。与假伤组比较，单纯烧伤组小鼠伤后3～7 d存活率均明显降低（P值均小于0.05）。与单纯烧伤组比较，烧伤＋氢气组小鼠伤后5～7 d存活率明显升高（P值均小于0.05）。结论氢气能够显著减轻重度烧伤小鼠肺组织炎性细胞浸润和改善肺组织病理损伤，具有减轻炎症反应、抑制氧化应激的作用，进而对烧伤小鼠肺起到了保护作用。

关键词：烧伤肺 hmgb1蛋白白细胞介素6 超氧化物歧化酶氢气

高迁移率族蛋白1及其受体晚期糖基化终末产物的表达与子痫前期发病的关系

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华妇产科杂志 2008年第10期43卷 746-750页

作者：高琳刘文辉栾南南冯冲尚涛中国医科大学附属盛京医院妇产科沈阳110004

目的探讨高迁移率族蛋白1（hmgb1）及其受体晚期糖基化终末产物（RAGE）表达与子痫前期发病的关系。方法2006年3月至2007年3月中国医科大学附属盛京医院住院分娩的15例早发型子痫前期孕妇（早发型子痫前期组）、22例重度子痫前期孕妇（... 详细信息

目的探讨高迁移率族蛋白1（hmgb1）及其受体晚期糖基化终末产物（RAGE）表达与子痫前期发病的关系。方法2006年3月至2007年3月中国医科大学附属盛京医院住院分娩的15例早发型子痫前期孕妇（早发型子痫前期组）、22例重度子痫前期孕妇（晚发型子痫前期组）、12例正常足月孕妇（正常对照组）。采用链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法检测3组孕妇胎盘组织中hmgb1和RAGE的蛋白定位及表达情况。结果（1）hmgb1蛋白定位及分布：正常对照组孕妇胎盘组织中无或仅有极少量hmgb1弱阳性细胞，主要见于滋养细胞层、单核巨噬细胞、蜕膜细胞、血管平滑肌细胞、血管内皮细胞和绒毛间质细胞，hmgb1在胞质内呈弥漫性分布，并呈略高于背景的淡棕黄色；晚发型子痫前期组孕妇胎盘组织中hmgb1阳性细胞分布与正常对照组一致，但hmgb1阳性细胞数量明显增多，染色强度也明显增强；早发型子痫前期孕妇胎盘组织中hmgb1主要分布于细胞滋养细胞，细胞核内可见深棕色染色，核膜皱缩。（2）RAGE蛋白定位及分布：正常对照组孕妇胎盘组织中无或仅有极少量RAGE弱阳性细胞，RAGE主要见于合体滋养细胞、血管内皮细胞，细胞膜和（或）细胞质内呈略高于背景的淡棕黄色染色；晚发型子痫前期组孕妇RAGE阳性细胞分布与正常对照组一致，但RAGE阳性细胞数量明显增多，染色强度也明显增强；早发型子痫前期组孕妇RAGE主要见于滋养细胞层，细胞呈RAGE强阳性表达。（3）hmgb1蛋白阳性表达率：早发型子痫前期组为73％（11／15），晚发型子痫前期组为64％（14／22），两组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；但两组均明显高于正常对照组的17％（2／12），差异有统计学意义（P〈0．05）。（4）RAGE蛋白阳性表达率：早发型子痫前期组为80％（12／15），晚发型子痫前期组为82％（18／22），两组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；但两组均明显高于正常对照组的25％（3／12），差异有统计学意义（P〈0．05）。结论子痫前期孕妇胎盘组织中的hmgb1和RAGE蛋白表达水平升高，可能是子痫前期发病的重要机制之一；hmgb1和RAGE在早发型和晚发型子痫前期孕妇胎盘组织中的表达部位不同，可能与不同临床类型的子痫前期发生有关。

关键词：先兆子痫胎盘 hmgb1蛋白受体细胞表面糖基化终产物高级

小干扰RNA抑制高迁移率族蛋白B1基因表达对肺癌细胞增殖和侵袭的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华医学杂志 2009年第44期89卷 3156-3159页

作者：张鹏刘懿吴志浩陈军陈钢周清华天津医科大学总医院胸部肿瘤中心 300052 天津市肺癌研究所

目的研究小干扰RNA（siRNA）抑制高迁移率族蛋白B1（hmgb1）基因表达对肺癌细胞L9981增殖和侵袭能力的影响。方法L9981细胞分3组，其中2组分别转染靶向hmgb1基因的siRNA（hmgb1-siRNA组）和无关序列siRNA（无关siRNA组），1组为空白对... 详细信息

目的研究小干扰RNA（siRNA）抑制高迁移率族蛋白B1（hmgb1）基因表达对肺癌细胞L9981增殖和侵袭能力的影响。方法L9981细胞分3组，其中2组分别转染靶向hmgb1基因的siRNA（hmgb1-siRNA组）和无关序列siRNA（无关siRNA组），1组为空白对照组。转染后72h，采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞hmgb1mRNA和蛋白表达水平；细胞活力计数仪测定各组细胞活力。分别在转染后24、48、72和96h应用噻唑蓝（MTY）法检测各组细胞生存状态。应用Boyden小室实验检测转染后72h各组细胞的体外侵袭力。结果hmgb1-siRNA组hmgb1mRNA相对表达量（1．0±O．0）明显低于无关siRNA组（12．8±1．3，P〈0．05）和空白对照组（12．1±1．0，P〈0．05），hmgb1蛋白表达水平也明显受到抑制；细胞活力（44．7％±1．7％）明显低于无关siRNA组（73．7％±2．1％，P〈0．01）和空白对照组（77．3％±1．9％，P〈0．01）。MTT测定显示转染后不同时间hmgb1-siRNA组L9981细胞生长均受到明显抑制。Boyden小室实验显示hmgb1-siRNA组穿膜细胞数（个／高倍视野，18．3±2．2）明显少于无关siRNA组（127．7±9．3，P〈0．01）和空白对照组（132．3±10．7，P〈0．01）。结论利用siRNA技术抑制hmgb1基因表达可有效抑制肺癌细胞的体外增殖和侵袭。

关键词：肺肿瘤 hmgb1蛋白细胞增殖肿瘤侵润 RNA 小分子干扰