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hla-g调控血小板对ER阳性乳腺癌细胞增殖凋亡的影响

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HLA-G调控血小板对ER阳性乳腺癌细胞增殖凋亡的影响

作者：宋镜南新乡医学院

学位级别：硕士

背景乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤疾病之一。近年来,中国女性乳腺癌死亡率逐年攀升,其中大部分乳腺癌患者为雌激素受体（Estrogen receptor,ER）阳性,严重影响我国女性生命健康。越来越多的研究表明,肿瘤细胞上表达人类白细胞抗原g（hu... 详细信息

背景乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤疾病之一。近年来,中国女性乳腺癌死亡率逐年攀升,其中大部分乳腺癌患者为雌激素受体（Estrogen receptor,ER）阳性,严重影响我国女性生命健康。越来越多的研究表明,肿瘤细胞上表达人类白细胞抗原g（human leukocyte antigen-g,hla-g）分子,hla-g作为免疫抑制分子可阻碍免疫反应发生,促进肿瘤细胞逃避免疫监视。研究发现,血小板作为外周血液中最小的无核细胞,除了具有被公认的止凝血功能之外,活化后的血小板保护乳腺癌细胞免受免疫系统清除,不断诱导肿瘤免疫微环境的建立,对乳腺癌细胞生物学功能产生重要影响。以上研究说明,hla-g与血小板对乳腺癌疾病的发生发展有关键作用,但是在hla-g调控下血小板对乳腺癌细胞增殖、凋亡等常见生物学行为方面的影响目前研究甚少。因此,进一步探讨hla-g是否协同血小板影响ER阳性乳腺癌细胞的发生发展,将为临床寻找ER阳性乳腺癌免疫治疗靶点提供理论依据。目的观察血小板对ER阳性乳腺癌细胞MCF-7、T47D上hla-g表达的影响,然后采用si RNA技术敲低细胞上的hla-g,进而探讨hla-g是否协同血小板影响乳腺癌细胞的增殖凋亡。方法1.建立PRP/PPP与乳腺癌细胞共培养模型:采集健康人EDTA-K抗凝血液,通过不同离心力分离出血小板,制备富血小板血浆（PRP）和乏血小板血浆（PPP）,然后制备成10%PPP、10%PRP1（低浓度血小板）及10%PRP2（高浓度血小板）培养基,从而替代10%胎牛血清培养基培养乳腺癌细胞MCF-7和T47D。2.检测血小板对乳腺癌细胞表达hla-g的影响:使用10%PPP、10%PRP1及10%PRP2培养基分别培养MCF-7和T47D细胞,通过实时荧光定量PCR、免疫印迹试验检测乳腺癌细胞的hla-g m RNA和hla-g蛋白,分析血小板对乳腺癌细胞表达hla-g的影响。3.沉默hla-g调控血小板影响乳腺癌细胞的生物学行为:利用si RNA技术合成4组si RNA-hla-g,通过实时荧光定量PCR技术筛选出一个沉默效果最好的si RNA-hla-g。实验分为4组,分别采用10%PPP和10%PRP培养基培养MCF-7和T47D细胞,即PPP对照组（PPP NC）、PRP对照组（PRP NC）、PPP沉默hla-g组（PPP si RNA）及PRP沉默hla-g组（PRP si RNA）。通过流式细胞术检测hla-g沉默后血小板对MCF-7、T47D细胞凋亡的影响;通过实时荧光定量PCR检测hla-g沉默后血小板对MCF-7、T47D细胞表达上皮-间质转化（EMT）标志物（E-cadherin、Fibranecti-n、N-cadherin、Snail、Vimentin、ZEB-1和β-catenin）的影响。4.沉默hla-g调控血小板影响乳腺癌细胞的肿瘤微环境:针对上述4组细胞,通过实时荧光定量PCR检测hla-g沉默后血小板对MCF-7、T47D细胞表达炎性细胞因子（TNF-α、i NOS）、趋化因子（CCL2、CCL5）的影响。结果1.血小板促进乳腺癌细胞表达hla-g使用含有不同浓度血小板的培养基培养MCF-7和T47D细胞,发现随着血小板浓度的增高,MCF-7和T47D细胞均呈现hla-g m RNA和hla-g蛋白表达增强。2.沉默hla-g调控血小板影响乳腺癌细胞的生物学行为筛选出沉默效果最佳的si RNA,即si（595）-hla-g,并与si RNA-control（对照）分别转染至MCF-7和T47D细胞,分析hla-g及血小板对ER阳性乳腺癌细胞的增殖、凋亡及EMT转化能力的影响,发现MCF-7和T47D细胞均表现出血小板促进ER阳性乳腺癌细胞增殖、抑制凋亡和促进EMT转化,在MCF-7和T47D细胞中继续转染si（595）-hla-g后,乳腺癌细胞的增殖能力明显减弱、凋亡能力明显增强和EMT转化能力显著减弱（E-cadherin表达升高,Fibranectin、N-cadherin、Snail、Vimentin、ZEB-1、β-catenin表达降低）。3.沉默hla-g减弱血小板对肿瘤微环境形成的影响分别使用10%PPP、10%PRP培养基培养ER阳性乳腺癌细胞（MCF-7、T47D）,进而将si（595）-hla-g（si RNA-control为对照）转染MCF-7、T47D细胞中,对比分析PPP NC、PRP NC、PPP si RNA及PRP si RNA共4组细胞中炎性细胞因子、趋化因子的m RNA表达差异,结果显示,血小板促进炎性细胞因子（TNF-α、i NOS）、趋化因子（CCL2、CCL5）表达,沉默hla-g后可以有效减弱炎性细胞因子和趋化因子的表

关键词： ER阳性乳腺癌细胞 hla-g 血小板增殖凋亡

hla-g和Fas配体在肾透明细胞癌中的表达及其意义

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HLA-G和Fas配体在肾透明细胞癌中的表达及其意义

作者：施浩强安徽医科大学

学位级别：硕士

目的:肾透明细胞癌除了对化疗、放疗及激素治疗不敏感,免疫治疗的临床效果也不令人乐观,可能某些因子在肿瘤细胞免疫逃避中起到重要作用。本研究探讨两种免疫抑制分子即人类白细胞抗原hla-g和Fas配体(FasL)在经典型(透明细胞)肾癌中的... 详细信息

目的:肾透明细胞癌除了对化疗、放疗及激素治疗不敏感,免疫治疗的临床效果也不令人乐观,可能某些因子在肿瘤细胞免疫逃避中起到重要作用。本研究探讨两种免疫抑制分子即人类白细胞抗原hla-g和Fas配体(FasL)在经典型(透明细胞)肾癌中的表达状况及与肿瘤分期、分级、转移的相关性。方法:选取从2000年到2003年在我院行根治性肾切除或保留肾单位肿瘤切除、病理证实为透明细胞癌的60例标本石蜡切片进行免疫组化法检测,数据经SPSS软件进行统计分析。结果:肿瘤旁正常肾组织中无hla-g表达,肾癌组织中40例(66.7%)表达hla-g,36例(60%)表达FasL,两者均表达为31例(51.7%),两者均未表达为15例(15%)。切片中观察到在同一病例中,肿瘤侵犯脉管或淋巴结后其hla-g或FasL表达较原位肿瘤明显增强。统计分析显示hla-g表达阳性率和表达强度与肿瘤的分期、分级均呈正相关(Phla-g和FasL的表达与肿瘤的分期、分级均呈正相关,和淋巴结转移有一定关系,晚期。肾透明细胞癌高表达免疫抑制分子的机制需进一步研究。

关键词：肾透明细胞癌免疫治疗 hla-g FasL

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慢病毒介导hla-g转基因小鼠的建立

第三军医大学学报 2012年第14期34卷 1392-1396页

作者：王露露刘勤周晓杨刘昌峨王勇魏泓第三军医大学基础医学部实验动物学教研室重庆400038

目的以慢病毒作为载体建立hla-g转基因小鼠,为研究hla-g与移植免疫提供模型动物。方法利用FUW载体,构建含有hla-g编码序列的慢病毒表达载体FUW-hla-g。用磷酸钙沉淀法将包装质粒psPAX2、PMD2.g与重组慢病毒载体质粒FUW-hla-g共转染293F... 详细信息

目的以慢病毒作为载体建立hla-g转基因小鼠,为研究hla-g与移植免疫提供模型动物。方法利用FUW载体,构建含有hla-g编码序列的慢病毒表达载体FUW-hla-g。用磷酸钙沉淀法将包装质粒psPAX2、PMD2.g与重组慢病毒载体质粒FUW-hla-g共转染293FT细胞,包装成慢病毒。通过同步转染含有绿色荧光标记基因的慢病毒质粒FUgW为参照,测定FUW-hla-g病毒液的滴度。用显微注射法将浓缩后的病毒液注射至FVB/N小鼠1-细胞期胚胎透明带下,建立hla-g转基因小鼠。PCR鉴定转基因小鼠的基因整合,用RT-PCR检测转基因在转录水平的表达,用Western blot检测hla-g蛋白的表达。结果载体BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切结果和测序结果显示重组的慢病毒质粒与所设计的序列一致。浓缩和纯化后的病毒液滴度达到109TU/ml以上,符合用慢病毒制备转基因小鼠的要求。PCR筛选出阳性鼠6只,RT-PCR与Western blot检测结果表明hla-g基因在F0和F1代转基因小鼠中均有表达。结论通过慢病毒介导的基因转移,成功建立了表达人hla-g蛋白的转基因小鼠,为研究hla-g的功能及其在器官或组织移植中的效应提供了动物模型。

关键词： hla-g 慢病毒转基因小鼠

RNA干扰技术抑制JEg-3细胞中hla-g的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第2期22卷 255-257页

作者：侯开波姚元庆雷迎峰王晓红赵宏喜尹文朱晓明第四军医大学唐都医院妇产科陕西西安710038 第四军医大学基础部微生物学教研室陕西西安710032

目的:以人类白细胞抗原g基因(hla-g)为靶基因,采用RNA干扰(RNAi)技术特异性地抑制JEg-3细胞中hla-g的表达。方法:针对hla-g基因设计一段小干扰RNA(siRNA),由Ambion公司化学合成,用脂质体lipofectamine2000将该siRNA转染JEg-3细胞,采用RT-PCR、流式细胞术和Westernblot分别从mRNA和蛋白质水平检测该siRNA对hla-g表达的影响。结果:针对hla-g的siRNA能够明显下调JEg-3细胞中hla-g的表达水平,并具有良好的特异性。结论:在JEg-3细胞系中采用RNAi技术特异性下调了hla-g基因的表达,为进一步研究hla-g在人类的母胎免疫耐受、正常妊娠的维持及助孕技术应用等方面的作用奠定了实验基础。

关键词： hla-g RNA干扰 JEg-3细胞

hla-g14bp多态性在早/晚发型重度子痫前期发病机制中的作用研究

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HLA-G14bp多态性在早/晚发型重度子痫前期发病机制中的作用研究

作者：李红郑州大学

学位级别：硕士

子痫前期是妊娠期特有的疾病,其中以重度子痫前期病情最重,是严重危害母儿健康的产科并发症。20世纪80年代,美国学者注意到发生在妊娠中期的重度子痫前期对孕产妇有致命危险,围产儿病死率极高,提出早发型重度子痫前期（early onset seve... 详细信息

子痫前期是妊娠期特有的疾病,其中以重度子痫前期病情最重,是严重危害母儿健康的产科并发症。20世纪80年代,美国学者注意到发生在妊娠中期的重度子痫前期对孕产妇有致命危险,围产儿病死率极高,提出早发型重度子痫前期（early onset severe pre-eclampsia, EOSP）的概念。目前,对于早发型重度子痫前期的发病孕周尚无统一的限定范围,有学者将起病在孕32周前的重度子痫前期列为早发,更多的学者考虑到早产儿的存活率在孕周达34周时才得到明显改善,将起病于孕34周前的重度子痫前期称为早发型,孕34周后的称为晚发型。子痫前期的发病被认为与绒毛外滋养细胞的侵袭性降低和子宫胎盘螺旋小动脉免疫失调导致的胎盘“浅着床”有关,形成病理性胎盘是子痫前期发病的始动因素。但重度子痫前期为何呈现早发型和晚发型两种表现?发病机理是否一致?尚不清楚。随着众多研究的深入,显示早发型重度子痫前期可能主要通过胎盘病变影响母胎双方而起病,晚发型重度子痫前期则可能和母亲因素有关。妊娠被认为是半同种异体物移植,妊娠初期,由胎儿细胞来源的胎盘绒毛外滋养细胞是胎儿表达双亲同种异型抗原的部位,直接面对母体细胞,却不被母体免疫细胞识别,被认为是滋养层本身因素和母体微环境通过分子和细胞间独特的免疫耐受形成的,而此免疫耐受异常则可能引起病理妊娠,如：子痫前期的发生。可见,妊娠是一种特殊的生理状态,无论正常或异常,均是母儿双方共同作用的结果。与遗传免疫高度相关的重要基因——人类白细胞抗原（humanleukocyte antigen, hla）基因,定位于人第6号染色体短臂,其编码的hla—g抗原属于非经典的hla-I类抗原,hla-g特异性表达于胎盘绒毛外滋养细胞上,在胎盘形成过程中滋养细胞侵袭时,hla-g通过抑制子宫蜕膜自然杀伤细胞活性等作用,调节母胎之间的免疫平衡。研究发现hla-g基因具有有限的多态性,认为其多态性的存在可能会引起胎盘hla-g分子表达量的不同,这和病理性妊娠有关,其中位于hla-g 3’非翻译区（3’-UTR）的14 bp插入/缺失（+14bp/-14bp）多态性非常独特,成为研究hla-g多态性与子痫前期关联性的热点,但大多研究结论不一甚至是矛盾的。深入分析发现,大多数研究并没有将重度子痫前期分为早发型与晚发型进行分析,而是归为一类进行统计,这可能会混淆hla-g14bp多态性对早发型和晚发型重度子痫子痫前期易感性的不同影响。目的通过研究hla-g14bp多态性在早发型和晚发型重度子痫前期中的分布差异,探讨hla-g14bp多态性对早发型和晚发型重度子痫前期易感性的不同影响。材料和方法 1研究对象收集2008年10月-2010年3月在郑州大学第三附属医院产科住院分娩单胎的重度子痫前期83例,诊断标准按人民卫生出版社第七版《妇产科学》并参照美国妇产科协会（ACOg）标准,排除原发性高血压病、内分泌疾病、糖尿病、肾脏疾病、肿瘤、炎症等,且所有患者均随访至产后12周。按重度子痫前期发病孕周不同分成早发型组48例（孕＜34周）和晚发型组35例（孕≥34周）。并随机抽取正常妊娠组40例（孕≥37周）做为对照组,早发型、晚发型和正常组孕妇均为中国地区汉族居民,无血缘关系,无异族通婚史,并且比较三组孕妇年龄及孕产次,均无明显差异（P＞0.05）。 2研究方法采用聚合酶链式反应（PCR）技术,PCR产物采用8%非变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳,根据14bp多态性的不同,电泳结果有三种：（1）若扩增产物电泳为两条带,长度分别为210bp和224bp,则认为该个体为插入/缺失杂合子（+14bp/-14bp）;（2）若扩增产物电泳为一条带,长度为210 bp,则认为该个体为缺失纯合子（-14bp/-14bp）;（3）若扩增产物电泳为一条带,长度224bp,则认为该个体为插入纯合子（+14bp/+14bp）。并选取选取缺失纯合子（-14 bp/-14 bp）和插入纯合子（+14 bp/+14 bp）的PCR产物原液,纯化并测序。测序结果在genBank Blast上比对,与目的片段段相符,224bp产物比210bp产物多了一段基因序列：ATTTgTTCATgCCT,长度为14bp。 3统计学处理所有实验数据均采用SPSS16.0软件系统进行统计学分析,计数资料采用χ2检验,计量资料采用t检验。基因型的分布采用拟合优度χ2检验判断是否符合Hardy-Weinberg平衡,三组母儿等位基因频率、基因型频率及母儿基因型配伍频率均采用直接计算法计算。对不适合χ2检验条件的数据采用Fisher精确概率法计算P值。以上检验均以α=0.05为检验水准。结果 1三组孕

关键词：早发型重度子痫前期晚发型重度子痫前期 hla-g 14bp 多态性

hla-g分子异常表达导致胚胎停育的相关性研究

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HLA-G分子异常表达导致胚胎停育的相关性研究

作者：马媛第四军医大学

学位级别：硕士

胚胎停育是妊娠期常见的并发症之一，近年来随着辅助生殖技术（ART）在临床上的广泛应用，越来越多的不孕不育患者通过ART技术得到了健康的小孩，但同时也出现了一定比例（显著高于正常妊娠妇女）的胚胎停育现象，故越来越多的研究开始... 详细信息

胚胎停育是妊娠期常见的并发症之一，近年来随着辅助生殖技术（ART）在临床上的广泛应用，越来越多的不孕不育患者通过ART技术得到了健康的小孩，但同时也出现了一定比例（显著高于正常妊娠妇女）的胚胎停育现象，故越来越多的研究开始聚焦于胚胎停育的致病机理。本研究以母胎界面起主要调控作用的免疫耐受蛋白hla-g分子为切入点，从组织、细胞和分子水平，系统研究了hla-g分子在胚胎停育发生过程中的重要作用，以期为阐明胚胎停育的发病机制提供实验依据，并为该病的临床治疗提供新的思路。目的 1.在mRNA水平与蛋白水平，系统研究hla-g分子异常表达与胚胎停育的相关性;2.进一步深入研究hla-g分子异构体mRNA与蛋白在胚胎停育绒毛中特异性表达;方法 1.针对50例人工流产妇女的绒毛组织和50例胚胎停育患者的绒毛组织，采用半定量RT-PCR的方法，检测hla-g在mRNA水平的表达变化，进一步通过S-P免疫组织化学染色法，检测hla-g在蛋白水平的表达差异。 2.针对上述人工流产和胚胎停育患者的绒毛组织，采用巢式RT-PCR的方法，检测hla-g6个异构体在mRNA水平的表达变化，进一步通过Western-blot法，检测其异构体在蛋白水平的表达差异。结果 1．在人工流产绒毛组织中，hla-g mRNA100%阳性表达（50/50）;胚胎停育患者绒毛组织中，39例hla-g阳性，占总数78%（39/50），11例hla-g阴性，占总数22%（11/50），差异具有统计学意义（Phla-g蛋白的表达显著低于其在人工流产绒毛组织中的表达，差异具有统计学意义（Phla-g1，g2，g3，g4，g5，g6（50/50）;在胚胎停育患者绒毛组织中，100%表达hla-g1，g2，g3，g4，g6（50/50），差异均不具有统计学意义（P>0.05）;35例hla-g5阳性，占总数70%（35/50），15例hla-g5阴性，占总数30%（15/50），经统计学分析， hla-g5mRNA水平差异具有统计学意义（Phla-g1，hla-g5异构体的抗体对这两种异构体进行蛋白水平的检测，结果显示：与人工流产绒毛组织相比，胚胎停育绒毛组织中hla-g1，hla-g5蛋白的表达显著降低，差异具有统计学意义（Phla-g蛋白水平的调控与胚胎停育密切相关，并推测hla-g异常表达可能存在转录后调控机制。 2.可溶性hla-g（hla-g5）分子异常表达与胚胎停育的发生特异性负相关。

关键词： hla-g hla-g异构体胚胎停有母胎免疫耐受

应用原位杂交法检测胎盘组织hla-g mRNA的表达

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上海免疫学杂志 1999年第3期19卷 159-160,168页

作者：张小滢范丽安易静陈玉英李伟毅杨珏琴刘伯宁上海第二医科大学上海市免疫学研究所上海第二医科大学生物物理教研室上海市第六人民医院

应用地高辛标记的特异性寡聚核苷酸探针原位杂交正常妊娠初期胎盘组织切片，检测母胎界面处各类细胞ＨＬＡＧｍＲＮＡ的表达与分布。结果显示绒毛内、外的细胞滋养层细胞表达强ＨＬＡＧｍＲＮＡ信号；合体滋养层细胞也有ＨＬＡＧ... 详细信息

应用地高辛标记的特异性寡聚核苷酸探针原位杂交正常妊娠初期胎盘组织切片，检测母胎界面处各类细胞ＨＬＡＧｍＲＮＡ的表达与分布。结果显示绒毛内、外的细胞滋养层细胞表达强ＨＬＡＧｍＲＮＡ信号；合体滋养层细胞也有ＨＬＡＧｍＲＮＡ的表达；绒毛内间质细胞、血管内皮细胞以及蜕膜基质细胞不含任何ＨＬＡＧ信号。结果表明地高辛标记的特异性寡聚核苷酸探针原位杂交方法成功显示妊娠期胎盘不同细胞ＨＬＡＧｍＲＮＡ转录情况，证明此方法的可行性、可靠性。

关键词：原位杂交 hla-g 母胎免疫检测

父源性hla-g基因14bp缺失多态性与早发型重度子痫前期的相关性研究

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中国妇幼保健 2012年第11期27卷 1710-1713页

作者：张展李莹张琳琳贾莉婷杨小倩郑州大学第三附属医院检验科河南郑州450042

目的:探讨父源性hla-g基因14bp缺失多态性与早发型重度子痫前期的相关性。方法:采用PCR方法,对中国地区汉族人群中40对早发型重度子痫前期父儿和50对正常晚孕者父儿进行hla-g基因第8外显子14bp缺失多态性的等位基因分型,比较两组父亲之... 详细信息

目的:探讨父源性hla-g基因14bp缺失多态性与早发型重度子痫前期的相关性。方法:采用PCR方法,对中国地区汉族人群中40对早发型重度子痫前期父儿和50对正常晚孕者父儿进行hla-g基因第8外显子14bp缺失多态性的等位基因分型,比较两组父亲之间和两组新生儿之间等位基因及基因型的频率分布,通过父/儿基因型配伍,比较两组间基因型配伍频率分布的差异。结果:①早发型重度子痫前期组新生儿hla-g-14bp频率52.5%和-14bp/-14bp基因型频率显著低于对照组(P=0.024;P=0.010);②早发型重度子痫前期组父(-14bp/-14bp)/儿-14bp/-14bp基因型配伍频率显著低于对照组(P=0.013);③早发型重度子痫前期父亲组hla-g 14bp缺失多态性的等位基因频率分布与正常对照组比较差异虽无统计学意义,但是有差异性趋势(P=0.051)。结论:父源性hla-g基因14bp缺失多态性可能与早发型重度子痫前期的发病相关,父(-14bp/-14bp)/儿-14bp/-14bp基因型配伍可能会降低母亲患重度子痫前期的风险。

关键词：早发型重度子痫前期 hla-g 基因多态性

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hla-g与卵巢癌的相关性研究

HLA-G与卵巢癌的相关性研究

作者：吴淑娟河北医科大学

学位级别：硕士

目的:人类白细胞抗原g(human leukocyte antigen-g,hla-g)属于非经典的hla-Ⅰ类分子,最早在胎盘绒毛外滋养层细胞中发现,其在母胎免疫耐受中的作用已得到证实。在过去的几年里,hla-g的研究已从单纯的生殖领域扩展到了器官移植、自体免... 详细信息

目的:人类白细胞抗原g(human leukocyte antigen-g,hla-g)属于非经典的hla-Ⅰ类分子,最早在胎盘绒毛外滋养层细胞中发现,其在母胎免疫耐受中的作用已得到证实。在过去的几年里,hla-g的研究已从单纯的生殖领域扩展到了器官移植、自体免疫性疾病和肿瘤研究等领域。hla-g与肿瘤的免疫逃逸已成为肿瘤学领域备受关注的焦点。卵巢癌是常见的妇科恶性肿瘤之一。卵巢癌肿瘤细胞减灭术及以铂类为主的联合化疗是目前卵巢癌的主要治疗手段。由于卵巢癌具有发现晚,手术不易彻底,术后易复发的特点,故其五年生存率仍较低。因此,寻找对卵巢癌有效的治疗药物是提高患者生存期的关键。该研究目的在于探讨hla-g与卵巢癌免疫逃逸的关系,从下调hla-g的表达,抑制其参与肿瘤免疫逃逸的角度寻求治疗药物和方案。方法:1采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术和流式细胞术检测50例卵巢癌组织、30例良性卵巢肿瘤及10例正常卵巢组织中hla-g mRNA和蛋白的表达。2体外培养人卵巢癌细胞OVCAR3,建立裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型。3待肿瘤生长至接种后第二周,肿瘤界限清楚后,将28只裸鼠随机分为4组,每组7只。分别为对照组、顺铂组、米非司酮组和联合用药组。4实验过程中注意观察裸鼠的饮食、活动、反应等情况。记录各组裸鼠皮下移植瘤的生长情况,绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤生长抑制率。5采用RT-PCR技术和流式细胞术检测各组裸鼠移植瘤标本hla-g mRNA和蛋白的表达。结果:1 50例卵巢癌、30例良性卵巢肿瘤及10例正常卵巢组织RT-PCR检测结果:恶性组hla-g mRNA的阳性表达率为92.00%,良性组为66.67%,正常组为60.00%,恶性组阳性表达率高于良性组和正常组(分别为phla-g mRNA在不同类型的卵巢癌组织中阳性表达率无显著性差异(p>0.05);早期和晚期卵巢癌阳性表达率分别为76.92%、97.30%,差异无显著性(p>0.05);hla-g mRNA在高分化组卵巢癌中阳性表达率为62.50%,中分化组和低分化组分别为96.30%、100.00%,高分化组的阳性表达率低于中、低分化组(分别为phla-g蛋白的表达:恶性组阳性表达率为64.00%,良性组和正常卵巢组织分别为16.67%、10.00%,恶性组hla-g蛋白的阳性表达率高于良性组和正常组(分别为phla-g蛋白在不同类型的卵巢癌组织中阳性表达率无显著性差异(p>0.05);早期和晚期卵巢癌阳性表达率分别为30.77%、75.68%,差异有显著性(phla-g蛋白在不同分化程度的卵巢癌中阳性表达率分别为:高分化组37.50%,中分化组55.56%,低分化组93.71%,低分化组的阳性表达率高于高、中分化组(分别为phla-g mRNA的表达:对照组、顺铂组、米非司酮组和联合组hla-g mRNA表达量分别为1.01±0.17、0.89±0.11、0.62±0.10、0.49±0.10。顺铂组和对照组相比,差异无显著性(p>0.05);米非司酮组hla-g mRNA的表达低于对照组(p0.05)。5流式细胞术检测人卵巢癌细胞OVCAR3裸鼠移植瘤组织hla-g蛋白的表达:对照组、顺铂组、米非司酮组和联合组hla-g蛋白表达量分别为2.38±0.43、2.29±0.35、1.26±0.31、1.08±0.25。顺铂组和对照组相比,差异无显著性(p>0.05);米非司酮组hla-g蛋白的表达低于对照组(p0.05)。结论:1恶性组hla-g抗原的阳性表达率高于良性组和正常组,卵巢癌的分化程度越低,期别越晚,hla-g抗原的表达率越高,

关键词： hla-g 卵巢癌免疫逃逸裸鼠 RT-PCR 流式细胞术