检索结果-南通市图书馆

作者：吴承高南昌大学

学位级别：硕士

研究目的输血相关急性肺损伤(TRALI)是较为常见的严重输血不良反应,是导致输血相关性死亡的首要原因。约85～90%TRALI的发生与人白细胞抗原(hla)抗体、人粒细胞抗原(HNA)抗体等免疫因素有关。已证实血液制剂中hla-a2抗体可诱发TRALI,但... 详细信息

研究目的输血相关急性肺损伤(TRALI)是较为常见的严重输血不良反应,是导致输血相关性死亡的首要原因。约85～90%TRALI的发生与人白细胞抗原(hla)抗体、人粒细胞抗原(HNA)抗体等免疫因素有关。已证实血液制剂中hla-a2抗体可诱发TRALI,但其作用机制仍不清楚。中国人群hla-a2抗原频率总体大于30%,hla-a2抗体阳性率在中国献血人群中大约为3.4%,因此,揭示hla-a2抗体诱发TRALI的发病机制对疾病的基础防治具有重要的意义。本研究通过筛选hla-a2抗体阳性血浆,体外处理表达hla-a2抗原的中性粒细胞(PMN),检测PMN粘附特性和细胞因子分泌情况:1)验证hla-a2抗体直接活化PMN并促进PMN粘附特性增强和细胞因子分泌;2)探讨酪氨酸激酶Src磷酸化(p-Src)在hla-a2抗体活化PMN过程中的作用及其下游信号通路;3)细胞水平验证抑制酪氨酸激酶Src磷酸化可有效预防hla-a2抗体介导人肺微血管内皮细胞(HPMECs)损伤。研究方法(1)采用酚抽提法提取PMN供者基因组DNA,PCR-SSP检测hla分型;选择经产妇献血者的血浆,使用群抗体筛选试剂盒和hla特异性抗体检测试剂盒检测献血者hla抗体。补体依赖微量淋巴细胞毒试验(CDC)验证上述血浆与PMN是否具有反应性。(2)体外将PMN与hla-a2抗体阳性及hla-a2抗体阴性血浆分别孵育处理,显微镜下观察两组PMN贴壁差异;流式细胞术检测PMN表面P-选择素糖蛋白配体1(PSGL-1)和淋巴细胞功能相关抗原1(LFA-1)的表达;化学发光法测定PMN释放的NADPH氧化酶活性;酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测PMN分泌的细胞因子CXCL8、CCL4和IL-1ra表达水平。(3)在上述实验基础上,设置hla-a2抗体阳性血浆+Dasatinib(p-Src抑制剂)组,与hla-a2抗体阳性血浆、hla-a2抗体阴性血浆分别处理PMN,Western blot检测不同组PMN中Src和p-Src表达水平。(4)Western blot检测hla-a2抗体阳性血浆组、hla-a2抗体阴性血浆组和hla-a2抗体阳性血浆+Dasatinib组PMN中核因子κB(NF-κB)信号通路IκBα、p-IκBα、p65、p-p65 和 NLRP3 信号通路 Pro-caspase-1、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、pro-IL-1β、IL-1β蛋白表达水平。(5)脂多糖(LPS)预处理HPMECs,并将其与hla-a2抗体阳性血浆、hla-a2抗体阴性血浆、hla-a2抗体阳性血浆+Dasatinib分别处理的PMN共培养,建立PMNs介导的细胞毒性模型。流式细胞术检测HPMECs凋亡,Transwell小室单层细胞法检测HPMECs通透性。研究结果(1)PCR-SSP检测PMN供者hla分型,显示PMN供者纯合表达hla-a2抗原;hla特异性抗体检测经产妇血浆,结果提示血浆中含有hla-a2抗体,且不含其他hla抗体。补体依赖微量淋巴细胞毒试验结果显示,阳性细胞数占比64%,确认上述血浆和PMN供者hla-a2抗原具有良好反应性。(2)与hla-a2抗体阴性血浆组对比,hla-a2抗体阳性血浆组PMN贴壁更明显,表面PSGL-1和LFA-1表达显著增多,NADPH氧化酶活性增强,细胞因子CXCL8、CCL4和IL-1ra的表达显著增加。(3)检测hla-a2抗体阳性组和hla-a2抗体阴性组PMN中Src和p-Src的表达,结果显示,hla-a2抗体阳性血浆处理的PMN中Src无显著变化,p-Src显著增加。在加入Dasatinib时,Src无显著变化,p-Src则显著降低。(4)与hla-a2抗体阴性组相比,hla-a2抗体阳性组PMN中IκBα表达显著降低,p65表达无显著变化,p-IκBα和p-p65表达显著增加;同时,NLRP3、Pro-caspase-1、ASC、pro-IL-1β 和 IL-1β 的表达显著增加;加入 Dasatinib 处理后,p-IκBα 和 p-p65 表达则显著减少,同时,NLRP3、Pro-caspase-1、ASC、pro-IL-1β和IL-1β的表达显著减少。(5)PMN与HPMECs共培养结果显示,与hla-a2抗体阴性组相比,hla-a2抗体阳性组HPMECs的凋亡率和细胞通透性均显著增加;加入Dasatinib处理后,HPMECs的凋亡率和通透性则显著降低。研究结论(1)hla-a2抗体可直接活化PMN并促进PMN粘附特性增强和细胞因子分泌。(2)p-Src是hla-a2抗体促进PMN粘附特性增强和细胞因子分泌的关键信号。(3)hla-a2抗体通过上调p-Src调控NF-κB和NLRP3炎

关键词： hla-a2抗体中性粒细胞酪氨酸激酶Src磷酸化人肺微血管内皮细胞细胞损伤

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

北方汉族人群hla-a2亚型分布及p53的合成肽体外诱导CTL反应

引用

中华微生物学和免疫学杂志 1999年第1期19卷 47-50页

作者：侯亚非孙宗棠曲春枫吴志远中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤研究所分子免疫室

目的研究北方汉族人群中ＨＬＡ－Ａ２亚型的分布及树突状细胞提呈基于ｐ５３基因合成肽体外诱导特异性Ｔ杀伤细胞（ＣＴＬ）反应的影响。方法利用ＰＣＲ－ＳＳＰ技术分析北方汉族人群中ＨＬＡ－Ａ２基因型及其亚型的分布，并在适当Ａ２... 详细信息

目的研究北方汉族人群中ＨＬＡ－Ａ２亚型的分布及树突状细胞提呈基于ｐ５３基因合成肽体外诱导特异性Ｔ杀伤细胞（ＣＴＬ）反应的影响。方法利用ＰＣＲ－ＳＳＰ技术分析北方汉族人群中ＨＬＡ－Ａ２基因型及其亚型的分布，并在适当Ａ２亚型背景下，选择与ＨＬＡ－Ａ２０１分子具有高亲和性的２个来自ｐ５３蛋白及１个来自ＨＢＶ核心抗原的蛋白合成多肽，将其分别负载到经体外ＧＭ－ＣＳＦ＋ＩＬ－４刺激增殖的人脐带血树突状细胞（ＤＣ）上，诱导自身外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）多肽特异性ＣＴＬ反应。结果２００例北京正常个体中共有５３例ＨＬＡ－Ａ２型，其中以Ａ２０１及Ａ２０７亚型分布最多，亚型分布较分散；在ＧＭ－ＣＳＦ＋ＩＬ－４刺激下获得的典型ＤＣ培养后期加入ＴＮＦ－α，可增加其ＨＬＡ－Ⅰ类及Ⅱ类分子的表达；多肽ｐ５３１４９～１５７，ｐ５３２６４～２７２，ＨＢＶｃ１８～２７均可诱导出ＨＬＡ－Ａ２０１分子限制的自身ＰＢＭＣ肽特异性的ＣＴＬ，然而，只有ｐ５３２６４～２７２经多次刺激才诱导出ＨＬＡ－Ａ２０７分子限制的肽特异性ＣＴＬ。结论北京人群ＨＬＡ－Ａ２基因型分布具有独特性；从人脐带血获得的ＤＣ肽疫苗可以使自身ｐ５３蛋白多肽抗原打破机体的外周耐受状态?

关键词： hla-a2抗体合成肽抗原蛋白质p53 树突细胞

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：