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吴茱萸次碱对肝肾毒性的初步研究

中国实验方剂学杂志 2011年第8期17卷 221-225页

作者：张茜周绮金若敏姚广涛陈小淼上海中医药大学药物安全评价研究中心上海201203

目的:探讨吴茱萸次碱Rutecarpine(Rut)在体外对人正常肝细胞(hl7702)、人胚胎肾细胞(HEK293)的影响,采用共培养体系初步比较Rut对肝肾细胞活力的影响,并选用小鼠进行整体验证。方法:①采用MTT法检测Rut在肝肾细胞单独培养或共培养体系... 详细信息

目的:探讨吴茱萸次碱Rutecarpine(Rut)在体外对人正常肝细胞(hl7702)、人胚胎肾细胞(HEK293)的影响,采用共培养体系初步比较Rut对肝肾细胞活力的影响,并选用小鼠进行整体验证。方法:①采用MTT法检测Rut在肝肾细胞单独培养或共培养体系中对细胞活力的影响并采用倒置显微镜对细胞形态进行观察;②给予Rut后,检测肝肾细胞培养上清液中丙氨酸转氨酶(ALT),天冬氨酸转氨酶(AST),碱性磷酸酶(ALP),尿素氮(BUN),肌酐(Cr),乳酸脱氢酶(LDH)的变化;③整体实验观察静脉给予Rut对小鼠肝肾功能和组织病理学的影响。结果:①MTT法显示,2,4μg·mL-1的Rut使肝肾细胞活力均下降,且相同浓度下的Rut对肝细胞的抑制作用大于肾细胞;②4μg·mL-1的Rut使肝细胞上清液中的AST,ALP,LDH水平均升高(P细胞核分裂象增多,仅有1只小鼠肾脏出现嗜碱性病变。结论:大剂量Rut可能对肝肾具有一定的毒性作用,肝肾细胞共培养体系与细胞单独培养体系均可用于药物对细胞的毒性研究。

关键词：吴茱萸次碱肝肾细胞毒性 hl7702细胞 HEK293细胞

15d-PGJ2促进HBx阳性肝细胞的凋亡

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15d-PGJ2促进HBx阳性肝细胞的凋亡

作者：陈思妍福建医科大学

学位级别：硕士

目的：构建转基因细胞模型hl7702-HBx，观察HBx基因对hl7702细胞增殖、周期和凋亡的影响，应用药物15d-PGJ2作用hl7702-HBx细胞及转染空质粒组hl7702-NC细胞，观察细胞增殖、周期和凋亡的改变，探讨15d-PGJ2在诱导细胞凋亡的作用机制和... 详细信息

目的：构建转基因细胞模型hl7702-HBx，观察HBx基因对hl7702细胞增殖、周期和凋亡的影响，应用药物15d-PGJ2作用hl7702-HBx细胞及转染空质粒组hl7702-NC细胞，观察细胞增殖、周期和凋亡的改变，探讨15d-PGJ2在诱导细胞凋亡的作用机制和意义。方法：应用脂质体转染和G418筛选构建稳定表达HBx的转基因细胞hl7702-HBx细胞，RT-PCR和Western blot鉴定HBx mRNA与蛋白的表达。分别以四唑蓝（MTT）比色法、流式细胞术检测hl7702-HBx细胞及对照组hl7702-NC细胞及应用药物15d-PGJ2作用后的hl7702-HBx细胞、hl7702-NC细胞的增殖、周期和凋亡。Western blot检测各组细胞中凋亡信号通路Akt、NF-κB、Caspase-3、Bax、Bcl2等蛋白的表达。结果：hl7702-HBx细胞中有HBx mRNA和蛋白的表达，细胞增殖快与对照组hl7702-NC细胞有显著差别（P细胞仪检测发现hl7702-HBx细胞凋亡率显著降低，细胞周期分布显示其G0/G1期细胞比例减少，S期细胞比例明显增加。应用药物15d-PGJ2作用后，两株细胞的增长均受到抑制，抑制率随药物浓度增大而升高;进行流式检测后发现，两株细胞的凋亡率均显著增加，周期分布均表现为G0/G1期细胞比例显著增加，S期细胞比例显著降低。这些变化均以hl7702-HBx细胞改变的更显著。细胞中凋亡信号通路Akt、NF-κB、Caspase-3、Bax、Bcl2等蛋白的表达存在显著变化。结论：HBx基因通过可促进细胞膜受体凋亡相关蛋白Akt、NF-κB的表达，从而抑制细胞凋亡。在线粒体凋亡通路中，HBx基因促进Bax表达而抑制Bcl2表达，可促进细胞凋亡。这表现了HBx基因对凋亡的双向调节作用。应用药物15d-PGJ2作用后，hl7702-HBx细胞和hl7702细胞均表现出了促凋亡蛋白的表达增加，抑制凋亡蛋白的表达减少，这种改变，在hl7702-HBx细胞中变化更显著。表明药物15d-PGJ2可以促进细胞凋亡，而HBx基因可能导致细胞对药物的凋亡作用更为敏感。

关键词： HBx基因 hl7702细胞 15d-PGJ2 凋亡

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微丝相关的微囊藻毒素毒性机理研究

微丝相关的微囊藻毒素毒性机理研究

作者：曾晶宁波大学

学位级别：硕士

目的：水体富营养化导致蓝藻水华频繁发生。蓝藻水华不仅严重降低水体利用价值，而且很多蓝藻（主要是铜绿微囊藻）还能产生毒素——微囊藻毒素（Microcystin, MC），对人类健康构成威胁，其中存在较多、毒性较大的是微囊藻毒素LR（Micr... 详细信息

目的：水体富营养化导致蓝藻水华频繁发生。蓝藻水华不仅严重降低水体利用价值，而且很多蓝藻（主要是铜绿微囊藻）还能产生毒素——微囊藻毒素（Microcystin, MC），对人类健康构成威胁，其中存在较多、毒性较大的是微囊藻毒素LR（Microcystin-LR, MC-LR）和RR。同位素示踪发现MC进入动物体内后主要分布在肝脏，提示肝脏可能是它的主要靶器官，可引起肝细胞损伤、原发性肝癌、肝细胞肿胀和坏死。MC肝脏毒性的分子机制到目前为止已有了比较广泛的研究，也取得了一定的研究成果，但其具体机制仍存在很多疑问，尤其是细胞骨架在MC毒性效应中的作用。因此，我们选择正常人来源的肝细胞系hl7702作为研究对象来研究细胞骨架中微丝参与MC-LR的具体毒性机理。方法：1、用MTT法检测MC-LR对hl7702细胞增殖的影响，不同浓度的MC-LR（0-10μM）染毒处理hl7702细胞。然后，根据MTT结果确定后续实验的染毒浓度。 2、用微丝特异染色剂荧光标记的鬼笔环肽对细胞进行染色，在激光共聚焦显微镜下观察其形态的变化。 3、再用荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法分析微丝相关基因转录、翻译和磷酸化水平的变化，以及MAPK信号通路在此过程中的作用。结果：1、不同浓度MC-LR（0、0.001、0.01、0.1、1、10μM）暴露24h后，hl7702细胞的数量随着MC-LR染毒浓度的升高而逐渐减少，在染毒浓度达到1μM时开始有统计学意义。 2、MC-LR处理后，hl7702细胞的大小及形态仍保持完整，但微丝的正常纤维状结构逐渐消失，可见明显的致密束形成，微丝结构破坏、重组。 3、MC-LR处理后，微丝相关基因的转录和翻译水平没有发生明显改变，也不具有统计学意义。 4、MC-LR处理细胞后，微丝相关蛋白的磷酸化水平发生明显改变，p-VASP（Ser239）、p-VASP（Ser157）和p-Ezrin（Thr567）在染毒浓度达到10μM时显著升高并具有统计学意义，p-Cofilin（Ser3）无明显改变。 5、MC-LR处理后，MAPK信号通路中P38、ERK1/2和JNK的蛋白表达没有明显改变，但其磷酸化水平与MC-LR有剂量依赖关系，在高浓度时显著升高并具有统计学意义。 6、P38和ERK1/2抑制剂组的蛋白磷酸化水平向对照组恢复，与不加抑制剂的MC-LR处理组相比显著降低并具有统计学意义，说明P38和ERK1/2抑制剂能显著抑制MC-LR诱导的微丝相关蛋白过磷酸化，而JNK抑制剂无明显效果。结论：1、MC-LR能抑制hl7702细胞增殖，并引起微丝结构的紊乱和重组。 2、MC-LR可引起微丝相关蛋白VASP和Ezrin过磷酸化。 3、MC-LR可激活MAPK信号通路，且该信号通路中的P38和ERK1/2参与了MC-LR诱导的微丝相关蛋白过磷酸化。 4、MC-LR的肝细胞毒性可能是通过PP2A抑制、MAPK信号通路（尤其是P38和ERK1/2）的激活，引起微丝相关蛋白的过磷酸化，最终导致微丝结构的破坏和重组、肝细胞损伤。

关键词：微囊藻毒素LR hl7702细胞微丝重组 MAPK信号通路 ARP2/3 Cofilin VASP Ezrin

右美托咪定通过抑制TLR-4/NF-κB信号通路减轻肝细胞缺氧复氧损伤的研究

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右美托咪定通过抑制TLR-4/NF-κB信号通路减轻肝细胞缺氧复氧损伤...

作者：周壮重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨右美托咪定(Dexmedetomidine,Dex)对肝细胞株hl7702缺氧复氧损伤(hypoxia/reoxygenation,H/R)下凋亡的影响及潜在的分子机制。方法:建立肝细胞系hl7702缺氧复氧模型,CCK8法和流逝Edu检测细胞增殖情况,流式细胞术和hoechst染色... 详细信息

目的:探讨右美托咪定(Dexmedetomidine,Dex)对肝细胞株hl7702缺氧复氧损伤(hypoxia/reoxygenation,H/R)下凋亡的影响及潜在的分子机制。方法:建立肝细胞系hl7702缺氧复氧模型,CCK8法和流逝Edu检测细胞增殖情况,流式细胞术和hoechst染色检测细胞凋亡,western blot技术检测凋亡相关蛋白Bcl、Bax、Caspase3及TLR-4、IκB及NF-κB信号通路表达。结果:hl7702在缺氧4 h,复氧6 h后增殖受到明显抑制;经Dex处理后,肝细胞增殖能力增强,细胞凋亡率降低;Dex处理组的抗凋亡蛋白Bcl 2显著升高,促凋亡蛋白Bax及Caspase3显著降低,TLR-4及NF-κB表达显著抑制,IκB表达升高。结论:Dex能够有效减轻hl7702细胞H/R损伤,其可能与抑制TLR-4/NF-κB通路有关。

关键词：右美托咪定(Dexmedetomidine,Dex) hl7702细胞缺氧复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R) 凋亡 TLR-4/NF-κB

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微丝相关的三丁基锡毒性机理研究

微丝相关的三丁基锡毒性机理研究

作者：涂巍巍宁波大学

学位级别：硕士

三丁基锡(tributyltin,TBT)是一种重要的有机锡化合物,凭借其特有的理化性质可用作木材防腐剂,船体涂料的防污剂,纺织业、工业水系统、木浆和造纸系统以及啤酒厂的抑菌剂等。随着其长期而广泛的大量使用,TBT及其降解副产物对人类及环境... 详细信息

三丁基锡(tributyltin,TBT)是一种重要的有机锡化合物,凭借其特有的理化性质可用作木材防腐剂,船体涂料的防污剂,纺织业、工业水系统、木浆和造纸系统以及啤酒厂的抑菌剂等。随着其长期而广泛的大量使用,TBT及其降解副产物对人类及环境所造成的危害已越来越受到人们的重视。已有大量实验研究表明TBT可对人体及动物造成严重危害,主要包括神经毒性、免疫毒性、生殖毒性以及肝毒性等。肝脏是TBT进入人体后主要的代谢器官,TBT在肝脏内可降解成DBT(二丁基锡)和MDT(一丁基锡),并可产生明显的肝毒性。本研究选用人来源的正常肝细胞系hl7702细胞作为研究对象,探讨TBT损伤肝细胞的分子机制。细胞骨架在细胞的生命活动中发挥着十分重要的作用,例如推动细胞运动、物质运输、建立和维持细胞形态、参与细胞分裂和信号转导等功能。作为细胞骨架的重要组成成分,微丝在此过程中起着举足轻重的作用。本研究首先明确TBT对微丝网络以及微丝相关蛋白表达和/或磷酸化的影响,进而探索TBT破坏细胞骨架的信号通路,以期最终明确微丝相关的信号通路在TBT诱导肝细胞损伤中的分子机制。主要研究方法:***法检测细胞增殖活力,以0、2、4、6、8、10μM TBT处理细胞1、2、4h后,对细胞增殖情况进行检测,根据结果选取后续染毒时间为2h,浓度从上;2.免疫荧光法检测细胞微丝结构,用荧光燃料标记的鬼笔环肽对细胞进行染色后,在共聚焦显微镜下观察细胞微丝结构并拍照;***-Blot法检测细胞微丝相关蛋白表达和/或磷酸化水平,以及MAPK信号通路的激活状态。***抑制试验,以JNK、ERK1/2、P38特异性抑制剂对细胞进行预处理,再以10μM TBT处理细胞后,检测其相关蛋白表达水平。主要研究结果:***暴露可影响hl7702细胞的增殖。随着TBT染毒浓度的增加,细胞增殖呈先上升后下降的趋势。***可造成hl7702细胞微丝解聚,形成点状聚集物和致密束。***暴露可导致hl7702细胞中VASP的表达水平下降,而不改变其他微丝相关蛋白(Arp2/3、Ezrin、Cofilin)的表达水平。并且p-VASP(239)、p-VASP(157)在高浓度组表达量上调,而p-Cofilin则在2、8、10μM组表达量均下降。***暴露可激活hl7702细胞中MAPK信号通路。JNK、ERK1/2及P38的表达水平并没有改变,但P-JNK和P-ERK1/2在高浓度时表达水平明显上升。***抑制剂和ERK1/2抑制剂可改善TBT对hl7702细胞形态及微丝相关蛋白磷酸化水平的影响,而P38抑制剂则无此作用。主要结论:***在低浓度(≤4μM)时促进hl7702细胞增殖,在高浓度(≥8μM)时则抑制其增殖。***可破坏hl7702细胞微丝的结构。***可引起hl7702细胞中微丝相关蛋白VASP的过磷酸化。***可激活hl7702细胞MAPK信号通路中JNK和ERK1/2途径,并参与诱导了微丝相关蛋白VASP的过磷酸化,而P38未参与此过程。

关键词：三丁基锡 hl7702细胞细胞骨架微丝丝裂原活化蛋白激酶

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用肝肾共培养体系研究细胞毒性的方法学考察

中国中医药信息杂志 2011年第11期18卷 36-38,58页

作者：张茜金若敏祝晓雯张海归上海中医药大学药物安全评价研究中心上海201203

目的建立肝肾共培养体系,并证明此体系的合理性与可行性方法采用MTT法比较川楝素(20、40、80、160μg/mL)、葛根素(200、100、50、25μg/mL)、苦参碱(5、2.5、1.25、0.625 mg/mL)、汉防己乙素(50、25、12.5、6.25 mg/mL)在肝肾单独培养... 详细信息

目的建立肝肾共培养体系,并证明此体系的合理性与可行性方法采用MTT法比较川楝素(20、40、80、160μg/mL)、葛根素(200、100、50、25μg/mL)、苦参碱(5、2.5、1.25、0.625 mg/mL)、汉防己乙素(50、25、12.5、6.25 mg/mL)在肝肾单独培养和共培养体系中对肝、肾细胞活力的影响。结果 2种体系中:川楝素仅对肝细胞的活力有抑制作用,葛根素对肝肾细胞均无抑制作用,苦参碱对肝细胞活力的抑制程度大于肾细胞,汉防己乙素对肾细胞活力的抑制程度大于肝细胞。结论用肝肾细胞共培养体系与单独培养体系进行实验得出的结果一致,这2种体系均可用于药物对细胞的毒性研究,其中共培养体系能更好地反映药物对靶器官的选择性。

关键词：共培养川楝素葛根素苦参碱汉防己乙素肝肾细胞毒性 hl7702细胞 HEK293细胞

表没食子儿茶素没食子酸酯对黄曲霉毒素B1致肝细胞氧化损伤的保护作用

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广西医科大学学报 2019年第5期36卷 696-700页

作者：黄丰肖德强高伟崔秀邓志杰赵静芳鲁力广西医科大学公共卫生学院南宁530021 广西高校高发疾病预防与控制研究重点实验室南宁530021 桂林市妇幼保健院桂林541000 广西医科大学第三附属医院南宁530031 广西国际壮医医院南宁530200

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对黄曲霉毒素B1(AFB1)致人正常肝细胞(hl7702细胞)氧化损伤的影响。方法:将hl7702细胞分为正常对照组、溶剂对照组(0.3%DMSO)、AFB1染毒组和低、中、高剂量EGCG组(5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL)... 详细信息

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对黄曲霉毒素B1(AFB1)致人正常肝细胞(hl7702细胞)氧化损伤的影响。方法:将hl7702细胞分为正常对照组、溶剂对照组(0.3%DMSO)、AFB1染毒组和低、中、高剂量EGCG组(5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL)。AFB1染毒组用60μg/mLAFB1作用细胞24h,建立肝hl7702细胞氧化应激模型。低、中、高剂量EGCG组预先用相应浓度EGCG处理细胞1h,再加入60μg/mLAFB1作用24h。用CCK-8法检测细胞存活率,DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS),并检测细胞培养上清液中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)以及受损细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量。结果:与对照组相比,AFB1染毒组ALT、AST、MDA及ROS水平明显升高,肝细胞存活率、SOD酶活性明显降低,差异均有统计学意义(均P细胞存活率、SOD活性明显升高(均P细胞损伤,其作用机制可能与抗氧化损伤有关。

关键词：表没食子儿茶素没食子酸酯黄曲霉毒素B1 hl7702细胞氧化应激

乙型肝炎病毒全x蛋白体外诱导肝星状细胞炎症反应并促进肝细胞凋亡

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实用肝脏病杂志 2022年第3期25卷 323-326页

作者：何亚娟王飞姚耐娟吴宇超田臻西安交通大学第一附属医院超声医学科西安市710061 西安交通大学第一附属医院感染性疾病科西安市710061

目的探究乙型肝炎病毒(HBV)全x蛋白(HBwx)诱导肝星状细胞(HSCs)炎症反应和促进肝细胞凋亡的作用及其机制。方法取LX2细胞,分为对照组、脂多糖(LPS)处理组、转染HBwx处理组和LPS联合转染HBwx处理组。采用Western blot法检测自噬相关蛋白... 详细信息

目的探究乙型肝炎病毒(HBV)全x蛋白(HBwx)诱导肝星状细胞(HSCs)炎症反应和促进肝细胞凋亡的作用及其机制。方法取LX2细胞,分为对照组、脂多糖(LPS)处理组、转染HBwx处理组和LPS联合转染HBwx处理组。采用Western blot法检测自噬相关蛋白p62和LC3及炎症相关蛋白NLRP3和pro-IL表达,采用ELISA法检测培养上清IL-1β水平;收集上述各组LX2细胞培养上清刺激hl7702细胞培养,使用流式细胞仪检测hl7702细胞凋亡。结果经HBwx质粒转染的LX2细胞在细胞质表达HBwx蛋白;与正常组比,LPS组、HBwx组和LPS联合HBwx组LC3表达显著减低,而p62表达显著增强(Phl-7702细胞凋亡水平显著增强(Phl-7702细胞凋亡水平进一步增强(P细胞炎症反应,HSCs分泌IL-1β,诱导肝细胞凋亡。

关键词： LX2细胞 hl7702细胞乙型肝炎病毒全x基因自噬凋亡体外

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