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Houttuynia cordata polysaccharide alleviated intestinal injury and modulated intestinal microbiota in H1N1 virus infected mice

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Chinese Journal of Natural Medicines 2019年第3期17卷 187-197页

作者： CHEN Mei-Yu LI Hong LU Xiao-Xiao LING Li-Jun WENG Hong-Bo SUN Wei CHEN Dao-Feng ZHANG Yun-Yi Department of Pharmacology School of Pharmacy Fudan University Department of Pharmacognosy School of Pharmacy Fudan University

Houttuynia cordata polysaccharide(HCP) is extracted from Houttuynia cordata, a key traditional Chinese medicine. The study was to investigate the effects of HCP on intestinal barrier and microbiota in H1N1 virus infected mice. Mice were infected with H1N1 virus and orally administrated HCP at a dosage of 40 mg×kg^(–1)×d^(–1). H1N1 infection caused pulmonary and intestinal injury and gut microbiota imbalance. HCP significantly suppressed the expression of hypoxia inducible factor-1α and decreased mucosubstances in goblet cells, but restored the level of zonula occludens-1 in intestine. HCP also reversed the composition change of intestinal microbiota caused by H1N1 infection, with significantly reduced relative abundances of Vibrio and Bacillus, the pathogenic bacterial genera. Furthermore, HCP rebalanced the gut microbiota and restored the intestinal homeostasis to some degree. The inhibition of inflammation was associated with the reduced level of Toll-like receptors and interleukin-1β in intestine, as well as the increased production of interleukin-10. Oral administration of HCP alleviated lung injury and intestinal dysfunction caused by H1N1 infection. HCP may gain systemic treatment by local acting on intestine and microbiota. This study proved the high-value application of HCP.

关键词： HIN1 influenza virus Houttuynia cordata Inflammation Intestinal Barrier Microbiota Polysaccharide

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大豆疫霉根腐病抗性相关基因HIN1的克隆及功能的初步研究

大豆疫霉根腐病抗性相关基因Hin1的克隆及功能的初步研究

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作者：华彩锋东北农业大学

学位级别：硕士

大豆疫霉根腐病又称大豆疫霉根茎腐病、枯萎病,病害由大豆疫霉菌（Phytophthora sojae Kaufmann＆Gerdemann）引起。 Harpins可以诱导植物的过敏性反应（hypersensitive reaction, HR）, HIN1（harpin-induced1）是Harpi诱导表达的... 详细信息

大豆疫霉根腐病又称大豆疫霉根茎腐病、枯萎病,病害由大豆疫霉菌（Phytophthora sojae Kaufmann＆Gerdemann）引起。 Harpins可以诱导植物的过敏性反应（hypersensitive reaction, HR）, HIN1（harpin-induced1）是Harpi诱导表达的蛋白之一,HIN1在植物中可诱导抗病,但是目前还未见大豆HIN1的报道。本研究首次在课题组以高抗大豆品种“绥农10"为试材构建的受疫霉菌诱导后差异表达的cDNA消减文库的基础上,选取了文库中一条经本地Blast比对后发现与拟南AtNHL3（Gene Accession no.BT000871.1）具有较高同源性的高上调表达的EST序列;本研究用RT-PCR技术从“绥农10”中分离出基因全长序列,是大豆中的新基因,命名为Gmhinl。通过生物信息学工具对DNA序列及其编码的蛋白序列进行分析;利用实时荧光定量PCR分析表达情况,具体研究结果如下： 1. Gmhinl基因的cDNA全序列为871bp,开放阅读框（ORF）为651bp,编码216个氨基酸,并且含有HIN1保守结构域LEA-2。它为疏水性蛋白质,理论等电点（pI）为9.63,估计分子量为24.48KDa。同源序列比较发现,大豆hinl基因编码氨基酸序列与烟草NtHIN1（CAA68848）、烟草Nthin2（BAC15623）、马铃薯StHIN1（AAN52931）编码的推测蛋白氨基酸序列同源性较高,由高到低依次为烟草NtHIN1（57%）＞烟草Mhin2（56%）＞马铃薯StHIN1（55%）. 2. Real time-PCR表明,hinl基因在大豆根、茎、叶中均表达,在根和叶片中表达较强,在茎中表达微弱;hinl基因的表达受疫霉菌、外源激素茉莉酸（JA）、水杨酸（SA）、赤霉素（GA3）和脱落酸（ABA）诱导。Gmhinl在非生物因素胁迫下为上调表达,对机械损伤处理应答最为敏感,其次为干旱处理,最后为低温胁迫。 3.构建了GFP融合表达载体pCAMB1A1302-hinl,利用基因枪法轰击洋葱表皮细胞,结果表明HIN1基因表达蛋白主要分布在细胞膜中。 4.构建了pCAMBIA3301-hinl植物过量表达载体,利用农杆菌介导法转化烟草叶盘,经PCR扩增检测,获得阳性植株19株T0代植株。对转基因烟草阳性植株接种烟草疫霉,结果表明与非转基因烟草相比抗性增强。

关键词：大豆疫霉根腐病抗性相关基因 HIN1 GPF 遗传转化 Harpin

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小麦中与条锈菌互作相关基因的克隆以及表达谱和功能的初步分析

小麦中与条锈菌互作相关基因的克隆以及表达谱和功能的初步分析

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作者：邓麟西北农林科技大学

学位级别：硕士

由小麦条锈菌(Puccinia striiformis f.sp. tritici)引起的小麦条锈病是小麦生产上一种重要的真菌病害,对我国小麦生产造成严重威胁。培育和种植小麦抗病品种是防治条锈病最经济、有效、安全的举措。因此,克隆小麦中参与与条锈菌互作的... 详细信息

由小麦条锈菌(Puccinia striiformis f.sp. tritici)引起的小麦条锈病是小麦生产上一种重要的真菌病害,对我国小麦生产造成严重威胁。培育和种植小麦抗病品种是防治条锈病最经济、有效、安全的举措。因此,克隆小麦中参与与条锈菌互作的相关基因,分析其表达特征和功能,以阐明小麦与条锈菌互作的分子机理,可为小麦抗条锈品种选育和遗传改良提供理论基础。本研究结合同源克隆、RACE、电子克隆、数据库挖掘等基因克隆手段,在小麦品种水源11中克隆出13个可能参与了小麦与条锈互作的基因,并对部分基因进行了生物信息学和表达谱分析以及功能的初步验证,研究的主要内容和结果如下: (1)为研究小麦SNARE蛋白在小麦与条锈菌互作中的功能,利用同源克隆和RACE获得小麦TaNpsn11和TaNpsn13基因全长cDNA,通过检索TIGR小麦数据库克隆得到另外9个SNARE基因,分别为3个R-SNARE:Tav-Snare13、TaVamp725和TaSec22;2个Qa-SNARE:TaSyp132和TaSyp22;2个Qb-SNARE:TaNpsn12和TaBet1;1个Qc-SNARE:TaSyp51,以及一个Qb+c-SNARE:TaSnap28。 (2)对植物特有的NPSN家族基因进行了表达特征分析,发现TaNpsn113各自在小麦的根、茎、叶组织中差异表达,其可能在器官的分化和发育过程中起着一定作用;与条锈菌互作中3个基因在非亲和组合中表达高于亲和组合,表明TaNpsn113参与了小麦对条锈菌的抗性;四种外源植物激素处理后,TaNpsn11均上调表达,TaNpsn12只受水杨酸(SA)和脱落酸(ABA)上调表达,而TaNpsn13被茉莉酸甲酯(MeJA)和ABA上调表达,被乙烯ETH下调表达,表明TaNpsn113可能是通过不同的信号途径参与小麦对条锈菌的抵抗;非生物胁迫下,TaNpsn113均不受到机械伤害胁迫的诱导,而对干旱和低温胁迫上调表达,并且干旱的诱导强度高于低温胁迫,对于高盐胁迫,TaNpsn11表现为抗性,而TaNpsn12、13表现为敏感;最后,成功改造适用于SNARE蛋白亚细胞定位的载体pRTL2-GFP-C1。 (3)运用电子克隆技术并通过RT-PCR验证获得了小麦TaHIN1的全长cDNA;其开放阅读框642 bp,编码213个氨基酸,理论分子量23.24 KDa,等电点8.67,含信号肽和HIN1结构域,可能为分泌蛋白;表达谱分析表明,TaHIN1在小麦根、茎、叶组织中表达差异不显著;与条锈菌互作时,仅在非亲和组合中被诱导表达;外源SA、MeJA诱导TaHIN1上调表达,ABA诱导其下调表达,而ETH不诱导其表达,表明其可能通过SA、JA信号途径参与了小麦对条锈菌的防御反应,ABA在防御反应中起负调控作用;高盐、干旱、机械损伤以及低温等非生物胁迫下,TaHIN1均上调,暗示其在小麦对非生物胁迫的抗逆应答过程中也发挥着一定作用。 (4)通过TIGR小麦数据库检索和RT-PCR验证,获得一条编码小麦肌动蛋白解聚因子(ADF)的全长cDNA,命名为TaAdf;其cDNA全长812 bp,其中ORF 417 bp,编码138个氨基酸,蛋白理论分子量16.10 KDa,等电点5.65;基因组序列含3个外显子,其中第一外显子仅包含起始密码子;利用中国春缺体/四体系将其定位于小麦6D染色体;洋葱表皮亚细胞定位显示其在整个细胞均有分布;原核表达蛋白大小约16 KDa,与理论值相符;表达谱分析发现TaAdf在不同组织差异表达,可能与小麦组织分化和发育相关;在与条锈菌互作中,亲和组合表达高于非亲和组合,暗示其与小麦对条锈菌的感病性相关;外源植物激素处理后,表达量主要被ABA上调,表明其可能通过调节气孔的开闭参与条锈菌对小麦的致病过程;非生物胁迫下,TaAdf对低温和干旱表现出明显抗性,对高盐和机械伤害胁迫无反应;VIGS结果显示TaAdf沉默以后,小麦对条锈菌的抗性加强。

关键词：小麦条锈菌 SNARE HIN1 肌动蛋白解聚因子

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猪流感病毒H1N1、H1N2和H3N2亚型多重RT-PCR诊断方法的建立

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中国预防兽医学报 2007年第9期29卷 714-718页

作者：杨焕良乔传玲陈艳辛晓光李一经陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

对我国分离到的猪流感病毒和GenBank数据库中已有的猪流感病毒H1N1、H1N2和H3N2亚型毒株的HA、NA基因核苷酸序列进行分析,分别选出各个病毒亚型HA和NA基因中高度保守且特异的核苷酸区域,设计扩增猪流感病毒H1和H3、N1和N2亚型的2套多重... 详细信息

对我国分离到的猪流感病毒和GenBank数据库中已有的猪流感病毒H1N1、H1N2和H3N2亚型毒株的HA、NA基因核苷酸序列进行分析,分别选出各个病毒亚型HA和NA基因中高度保守且特异的核苷酸区域,设计扩增猪流感病毒H1和H3、N1和N2亚型的2套多重PCR特异性引物,建立了猪流感H1N1、H1N2和H3N2亚型病毒多重RT-PCR诊断方法。采用该方法对H1N1、H1N2、H3N2亚型猪流感病毒标准参考株进行RT-PCR检测,结果均呈阳性,对扩增得到的片段进行序列测定和BLAST比较,表明为目的基因片段。其它几种常见猪病病毒和其它亚型猪流感病毒的RT-PCR扩增结果都呈阴性。对107EID50/0.1mL病毒进行稀释,提取RNA进行敏感性试验,RT-PCR最少可检测到102EID50的病毒量核酸。对40份阳性临床样品的检测结果是H1N1、H1N2和H3N2亚型分别为16份、1份和20份,其它3份样品同时含有H1N1和H3N2亚型猪流感病毒,和鸡胚分离病毒结果100%一致。试验证明建立的猪流感病毒H1N1、H1N2和H3N2亚型多重RT-PCR诊断方法是一种特异敏感的诊断方法,可用于临床样品的早期快速诊断和分型。

关键词：猪流感病毒 HIN1 hin2 H3N2 多重RT-PCR

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西班牙养猪密集地区同时流行A型流感病毒H_IN_2、H_IN_1和H_3N_2亚型的证据

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中国畜牧兽医文摘 2007年第6期23卷 24-24页

作者：罗天海

本文报道了对西班牙养猪密集地区进行的猪流感病毒(SIV)血清学和病毒学调查结果,其目的是检测H1N2亚型猪流感病毒是否和在欧洲其它地区一样也流行于这些地区。在西班牙北部和东部地区100个未接种猪流感疫苗的繁育群采集了600份母猪血清,

关键词：亚型猪流感病毒猪流行性感冒病毒 HIN1 H3N2 西班牙南欧

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