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来氟米特调控hif-1α信号通路对类风湿关节炎滑膜细胞自噬的影响

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安徽医科大学学报 2024年第10期59卷 1823-1828页

作者：兰维娅马武开姚血明蒋总熊浪杨淑芬唐芳贵州中医药大学第二临床医学院贵阳550025 贵州中医药大学第二附属医院风湿免疫科贵阳550001

目的探讨来氟米特(LEF)调控低氧诱导因子-1α(hif-1α)信号通路,对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞相关自噬基因表达的影响。方法取3代RA滑膜细胞,分为空白对照组、LEF组、雷公藤多苷组,空白对照组加入等体积DMEM培养液,药物组分别加入LEF(浓... 详细信息

目的探讨来氟米特(LEF)调控低氧诱导因子-1α(hif-1α)信号通路,对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞相关自噬基因表达的影响。方法取3代RA滑膜细胞,分为空白对照组、LEF组、雷公藤多苷组,空白对照组加入等体积DMEM培养液,药物组分别加入LEF(浓度0.2 mg/ml)、雷公藤多苷(浓度0.03 mg/ml),干预48 h后,采用流式细胞术检测滑膜细胞增殖及凋亡;酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管生成素样蛋白(ANGPTL-4)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达,qRT-PCR检测hif-1αmRNA表达;Western blot检测hif-1α、Beclin-1、BCL2相互作用蛋白3样(BNIP3)蛋白表达。结果与雷公藤多苷组比较,LEF组滑膜细胞上清液IL-1α、TNF-α、ANGPTL-4、VEGF的表达降低;与空白对照组比较,LEF组、雷公藤多苷组的滑膜细胞hif-1αmRNA表达均降低,LEF组作用最明显;与空白对照组比较,LEF组、雷公藤多苷组的滑膜细胞hif-1α、Beclin-1、BNIP3蛋白表达均降低,LEF组作用最明显。结论LEF能抑制RA滑膜细胞炎症因子表达,抑制hif-1α信号通路,并抑制自噬相关基因Beclin-1、BNIP3的表达,改善滑膜炎症的病理状态。

关键词：类风湿关节炎来氟米特 hif-1α信号通路自噬滑膜炎

诱导膜蛋白联合丹参提取物通过hif-1α信号通路促进骨髓间充质干细胞成骨分化研究

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诱导膜蛋白联合丹参提取物通过HIF-1α信号通路促进骨髓间充质干...

作者：李发东西南医科大学

学位级别：硕士

目的:研究诱导膜蛋白联合丹参提取物促进大鼠BMSCs成骨分化的作用,探讨诱导膜蛋白、丹参提取物促进BMSCs成骨分化作用与hif-1α信号通路的关系。方法:将实验分为空白组、丹参提取物组(实验组1)、诱导膜蛋白组(实验组2)、诱导膜蛋白联合... 详细信息

目的:研究诱导膜蛋白联合丹参提取物促进大鼠BMSCs成骨分化的作用,探讨诱导膜蛋白、丹参提取物促进BMSCs成骨分化作用与hif-1α信号通路的关系。方法:将实验分为空白组、丹参提取物组(实验组1)、诱导膜蛋白组(实验组2)、诱导膜蛋白联合丹参提取物组(实验组3),采用不同的培养基培养大鼠骨髓间充质干细胞。空白组:用完全培养基(含10%胎牛血清、1%青链霉素溶液)培养细胞。实验组1:用含有浓度为0.8mg/ml丹参提取物的完全培养基培养细胞。实验组2:用含有浓度为100μg/ml诱导膜蛋白的完全培养基培养细胞。实验组3:用含有浓度为100μg/ml诱导膜蛋白和浓度为0.8mg/ml丹参提取物的完全培养基培养细胞。采用以上不同培养方法培养BMSCs 1周后,用CCK-8检测各组细胞增殖情况;倒置显微镜观察各组细胞形态变化;茜素红染色检测各组细胞矿化结节形成并选取3个视野进行计数,实时定量RT-PCR检测各组细胞成骨标志物(Runx-2、Col1、OCN)基因的表达水平,Western blot检测各组细胞成骨标志物(Runx-2、Col1、OCN)蛋白的表达水平,Western blot检测各组细胞hif-1α及下游因子(iN-OS、TGF-β、VEGF)蛋白的表达水平。结果:①通过CCK-8实验检测发现,与空白组相比,丹参提取物组、诱导膜蛋白组、诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞在培养24h、48h、72h后,细胞的增殖无明显影响(P>0.05);②细胞形态变化,在倒置显微镜下可以看出:空白组的细胞呈长梭形,丹参提取物组、诱导膜蛋白组、诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞则变成梭形或短梭形,其中一些呈现鳞片状或多边形,可以看出经丹参提取物、诱导膜蛋白处理的细胞在形态上发生了变化,初步说明BMSCs已向成骨方向分化。③根据茜素红染色图片及计数可以看出,与空白组相比,丹参提取物组、诱导膜蛋白组、诱导膜蛋白联合丹参提取物组的矿化结节数量明显增多;与丹参提取物组相比,诱导膜蛋白组、诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞矿化结节明显增多,矿化结节着色加深;与诱导膜蛋白组相比,诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞的矿化结节明显增多。④实时定量RT-PCR检测发现,与空白组相比,丹参提取物组、诱导膜蛋白组、诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞成骨标志物(Runx-2、Col1、OCN)基因表达水平升高,差异有统计学意义(Phif-1α及下游因子(iN-OS、TGF-β、VEGF)蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(Phif-1α及下游因子(iN-OS、TGF-β、VEGF)蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(Phif-1α及下游因子(iN-OS、TGF-β、VEGF)蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(Phif-1α信号通路有关。

关键词：诱导膜蛋白丹参提取物 hif-1α信号通路骨髓间充质干细胞

当归红芪超滤膜提取物调控肾脏缺氧介导的hif-1α信号通路改善DKD大鼠肾脏纤维化的机制

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当归红芪超滤膜提取物调控肾脏缺氧介导的HIF-1α信号通路改善DKD...

作者：张小琳甘肃中医药大学

学位级别：硕士

目的通过网络药理学方法,预测当归红芪超滤膜提取物治疗DKD的作用靶点及机制,观察当归红芪超滤膜提取物治疗DKD的作用机制。通过当归红芪超滤膜提取物干预DKD模型大鼠,观察当归红芪超滤膜提取物是否能通过调控DKD大鼠肾脏hif-1α/VEGF和... 详细信息

目的通过网络药理学方法,预测当归红芪超滤膜提取物治疗DKD的作用靶点及机制,观察当归红芪超滤膜提取物治疗DKD的作用机制。通过当归红芪超滤膜提取物干预DKD模型大鼠,观察当归红芪超滤膜提取物是否能通过调控DKD大鼠肾脏hif-1α/VEGF和hif-1α/PDGF/PDGFR信号通路的表达,来改善DKD大鼠肾脏纤维化的作用机制。方法先采用网络药理学的方法,获得当归、红芪与DKD的交集靶点,筛选节点核心度大于90的基因靶点,并进行GO分析和KEGG信号通路分析,对前20条结果进行可视化处理。在动物实验中,将50只SPF级雄性wistar大鼠适应性喂养1周后,随机分为空白组7只及造模组,造模组禁食24 h后一次性腹腔注射STZ联合高糖高脂饲料喂养制备DKD模型,造模成功后,将造模组随机分为模型组、当归红芪超滤膜提取物低、中剂量组,各7只,厄贝沙坦组和当归红芪超滤膜提取物高剂量组各8只。给予药物干预12周,观察大鼠一般情况,每周检测大鼠的体质量及血糖,于灌胃第6周第12周检测大鼠24 h UP;末次给药后,检测大鼠血清中肾功能相关指标GSP、Scr、BUN含量;Masson染色观察肾组织病理变化;IHC法检测肾组织PHD2、hif-1α蛋白表达;RT-PCR法检测肾组织PHD2、VEGF、PDGF、PDGFR m RNA表达;Western blot法检测肾组织hif-1α、VEGF、PDGF、PDGFR蛋白的表达。结果1.网络药理学分析预测100个当归红芪超滤膜提取物与DKD共同靶点,GO富集分析结果主要涉及,通过细胞运动的正向调节、氧化应激反应、对激素的反应、对脂多糖的反应、对氧气水平的反应等相关生物过程;KEGG富集分析得到,癌症通路、AGERAGE信号通路、流体剪切应力与动脉粥样硬化、hif-1信号通路等潜在作用通路。2.动物实验研究结果2.1大鼠一般情况:实验期间,模型组出现多饮多食多尿、体质量减轻、皮毛枯槁、蜷缩懒动等现象,部分模型组大鼠出现视网膜病变等并发症。各给药组大鼠症状和体征较模型组有明显改善。2.2 24h UP检测:给药0周,与空白组相比,其余各组大鼠24h UP均有统计学意义(P1),且24h UP≥30 mg。给药6周,与空白组相比,模型组大鼠24h UP明显升高(P1);与模型组相比,厄贝沙坦和当归红芪超滤膜提取物高剂量组大鼠24h UP有统计学意义(P1)。给药12周,与模型组相比,厄贝沙坦组与当归红芪超滤膜提取物中、高剂量组大鼠24h UP有统计学意义(P1)。2.3大鼠随机血糖检测:给药0周,与空白组相比,其余各组大鼠血糖上升明显(P1)。给药3周后,与模型组相比,各给药组大鼠血糖无统计学意义(P>0.05)。给药6周,与模型组相比,厄贝沙坦组大鼠血糖降低(P1)。给药9周,与模型组相比,厄贝沙坦组与当归红芪超滤膜提取物中、高剂量组大鼠血糖显著下降(P1,P12周,与模型组相比,厄贝沙坦组与当归红芪超滤膜提取物高剂量组大鼠血糖明显下降(P1);与厄贝沙坦组比较,当归红芪超滤膜提取物低、中剂量组大鼠血糖有统计学意义(P1)。2.4大鼠体质量情况:给药0周,与空白组相比,其余各组大鼠体质量下降明显(P1)。给药3周,与模型组相比,厄贝沙坦组与当归红芪超滤膜提取物高剂量组大鼠体质量升高且有统计学意义(P1)。给药6周和给药9周,与模型组相比,厄贝沙坦组与当归红芪超滤膜提取物高剂量组大鼠体质量明显下降(P1);与厄贝沙坦组比较,当归红芪超滤膜提取物低、中剂量组大鼠体质量有统计学意义(P1)。给药12周后,与模型组相比,厄贝沙坦组与当归红芪超滤膜提取物高剂量组大鼠体质量数据有统计学意义(P1)。2.5 BUN、GSP、Scr结果:与空白组相比,模型组血清中BUN、GSP、Scr均显著升高(P1)。与模型组相比,厄贝沙坦组与当归红芪超滤膜提取物高剂量组BUN、GSP、Scr均降低显著(P1);当归红芪超滤膜提取物中剂量组GSP降低显著(P1)。与厄贝沙坦组比较,当归红芪超滤膜提取物低剂量组BUN、GSP、Scr有统计学意义(P1,P1)。2.6肾脏组织病理形态学结果:Masson结果显示各组间胶原纤维面积比,与模型组相比,厄贝沙坦组、当归红芪超滤膜提取物中、高剂量组存在统计学差异(P1);低剂量组无统计学差异(P>0.05);

关键词：当归红芪超滤膜提取物糖尿病肾病肾脏缺氧 hif-1α信号通路

丙泊酚经hif-1α信号通路对头颈鳞状细胞癌SCC-74细胞增殖、凋亡与侵袭的影响

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实用肿瘤学杂志 2020年第2期34卷 120-125页

作者：王飞朱贲贲内蒙古医科大学附属人民医院药剂科呼和浩特010020

目的探讨丙泊酚经hif-1α信号通路对头颈鳞状细胞癌SCC-74细胞增殖、凋亡与侵袭的影响。方法体外培养SCC-74细胞,丙泊酚低剂量组、丙泊酚中剂量组和丙泊酚高剂量组分别给予终浓度为2.5、10、20μg/mL的丙泊酚,对照组给予等量DMEM培养液... 详细信息

目的探讨丙泊酚经hif-1α信号通路对头颈鳞状细胞癌SCC-74细胞增殖、凋亡与侵袭的影响。方法体外培养SCC-74细胞,丙泊酚低剂量组、丙泊酚中剂量组和丙泊酚高剂量组分别给予终浓度为2.5、10、20μg/mL的丙泊酚,对照组给予等量DMEM培养液,继续培养48 h后收获细胞,检测SCC-74细胞增殖、凋亡与侵袭情况,同时检测SCC-74细胞中Akt、p-Akt、hif-1α、Fas、FasL、Bcl-2、Bax蛋白和mRNA水平。结果与对照组比较,各丙泊酚剂量组SCC-74细胞增殖率和侵袭数降低,细胞凋亡率增加(Phif-1α、Fas、FasL和Bax蛋白和mRNA水平增高,呈剂量依赖性(P0.05)。结论丙泊酚通过激活hif-1α信号通路,抑制SCC-74细胞增殖和侵袭,促进SCC-74细胞凋亡。

关键词：丙泊酚 hif-1α信号通路头颈鳞状细胞癌细胞增殖细胞凋亡细胞侵袭

低氧三维培养微环境通过hif-1α信号通路促进骨髓间充质干细胞增殖机制的研究

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中国胸心血管外科临床杂志 2019年第4期26卷 385-389页

作者：田琨穆军升伯平首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所心脏外科北京100029

目的探究低氧三维培养微环境对骨髓间充质干细胞增殖的影响及影响机制。方法 P5代小鼠骨髓间充质干细胞和聚-3羟基丁酸酯-co-4羟基丁酸酯[P(3HB-co-4HB)]分别在三维常氧(20%)和三维低氧(4%)条件下共同培养,24 h后CCK-8法测定两组细胞的... 详细信息

目的探究低氧三维培养微环境对骨髓间充质干细胞增殖的影响及影响机制。方法 P5代小鼠骨髓间充质干细胞和聚-3羟基丁酸酯-co-4羟基丁酸酯[P(3HB-co-4HB)]分别在三维常氧(20%)和三维低氧(4%)条件下共同培养,24 h后CCK-8法测定两组细胞的增殖情况;12 h后实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)检测hif-1α基因表达水平;24 h后Western blotting检测两组hif-1α蛋白的表达情况。结果共同培养24 h后,CCK-8法检测显示低氧组OD值显著大于常氧组(0.455±0.027 vs. 0.352±0.090,n=12,P12 h后,低氧组的hif-1αmRNA表达水平显著高于常氧组(Phif-1α蛋白相对表达水平显著增高(n=3,Phif-1α信号通路的激活有关。

关键词：低氧微环境三维培养聚-3羟基丁酸酯-co-4羟基丁酸酯心肌梗死 hif-1α信号通路

hif-1α通路介导MNNG诱发新生大鼠胃癌前病变的分子机制及益气活血方的干预作用

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HIF-1α通路介导MNNG诱发新生大鼠胃癌前病变的分子机制及益气活...

作者：钱素婷浙江中医药大学

学位级别：硕士

目的探究hif-1α信号通路在MNNG诱发的PLGC大鼠胃黏膜中的表达及益气活血方对其的影响,探讨益气活血方干预PLGC的作用机制,为中医药治疗PLGC提供新方法。方法健康成年SD大鼠自由交配后取出生3天乳鼠进行造模。正常组、模型组各取36只... 详细信息

目的探究hif-1α信号通路在MNNG诱发的PLGC大鼠胃黏膜中的表达及益气活血方对其的影响,探讨益气活血方干预PLGC的作用机制,为中医药治疗PLGC提供新方法。方法健康成年SD大鼠自由交配后取出生3天乳鼠进行造模。正常组、模型组各取36只,模型组予800mg/L的MNNG0.1ml/只灌胃,正常组予0.1ml/只生理盐水,灌胃10天进行造模。第11天作为实验观察首日,第4、10、16、22、28、34周末每组各取6只处死并进行实验观察。第22周末随机抽取前期造模成功大鼠32只组成模型组、高剂量组、中剂量组、低剂量组,各8只,正常组、模型组大鼠予生理盐水0.01ml/g,高、中、低剂量组每天分别予0.0384g/g、0.0192g/g、0.0096g/g的益气活血方流浸膏,饲养至34周时处死。观察HE染色后大鼠胃黏膜病理组织学变化;IHC法检测大鼠胃黏膜PCNA的表达及IOD值（Integral optical density,IOD）;qRT-PCR法检测造模后及益气活血方干预后大鼠胃黏膜hif-1α、VEGF、iNOS mRNA的表达;WB法检测造模后及益气活血方干预后hif-1α、VEGF、iNOS蛋白的表达,并应用统计学方法解释和分析数据及结果。结果 1.病理组织学:大体下观察,正常组大多数大鼠胃黏膜表面光滑润泽,色泽淡红,无明显充血水肿和糜烂,个别大鼠有充血水肿表现;模型组大鼠胃黏膜表面逐渐苍白灰暗,可见局部充血水肿及糜烂,皱襞变形紊乱,偶可见颗粒状结节。光镜下HE染色后可见模型组大鼠胃黏膜较正常组胞内炎性细胞增多,出现萎缩、肠化、异型增生。中药治疗组随剂量增加可见胃黏膜萎缩、肠化及异型增生均有不同程度的好转,其中中药高剂量组治疗效果最优。***结果:模型组大鼠胃黏膜PCNA阳性细胞表达高,着色深,分布紊乱,组间IOD有统计学差异（P＜0.05）,益气活血方治疗后高中低剂量组较模型组胃黏膜PCNA表达及IOD均有统计学差异P＜0.05),其中高剂量组差异显著（P＜0.01,P＜0.05）。***-PCR结果:模型组大鼠胃黏膜hif-1α信号通路关键基因hif-1α、VEGF、iNOS mRNA表达较正常组增加,34周时差异显著（P＜0.01,P＜0.05）。益气活血方治疗后,大鼠胃黏膜hif-1α、VEGF、iNOS mRNA的表达随剂量增加表达下降。hif-1α、VEGF的mRNA的表达组间差异均有统计学意义（P＜0.05）,VEGFmRNA表达高剂量组与模型组间差异显著（P＜0.01）。iNOS mRNA表达低剂量与模型组间差异无统计学意义（P＞0.05）。***结果:模型组大鼠胃黏膜hif-1α信号通路关键基因hif-1α、VEGF、iNOS蛋白的表达16周后高于正常组,34周时差异显著（P＜0.01,P＜0.05）。VEGF蛋白的表达10周时组间差异有统计学意义（P＜0.05）,hif-1α、iNOS蛋白表达16周时组间差异有统计学意义（P＜0.05）。益气活血方治疗后,中高剂量组大鼠胃黏膜hif-1α、VEGF及iNOS蛋白表达均较模型组在不同程度上有所降低（P＜0.05）,其中高剂量组hif-1α、iNOS组间差异显著（P＜0.01,P＜0.05）,低剂量组hif-1α、VEGF的蛋白表达组间无统计学差异（P＞0.05）。结论 1.随着PLGC的逐步进展,hif-1α信号通路被激活,其表达随时间进展逐渐增加。2.益气活血方可以通过调控hif-1α信号通路中关键基因的表达来抑制PLGC的进程。3.益气活血方高、中、低剂量均可达到抑制或延缓PLGC的目的,其中高剂量组效果最佳。

关键词： hif-1α信号通路胃癌前病变益气活血方中医药

COX-2/PGs-hif-1α作用子宫内膜崩解剥脱及利用大鼠假孕月经样模型对子宫内膜生理修复的初探

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COX-2/PGs-HIF-1α作用子宫内膜崩解剥脱及利用大鼠假孕月经样模...

作者：张博男北京协和医学院

学位级别：硕士

月经周期是高等灵长类动物的生理特征,是子宫内膜在精密的雌孕激素调节下发生增殖、分化,在分泌晚期孕酮撤退时发生崩解脱落的周期性变化。子宫内膜这种周期性的崩解脱落以及其后的再生修复的更新过程,为妊娠做好了充足的母体准备。本... 详细信息

月经周期是高等灵长类动物的生理特征,是子宫内膜在精密的雌孕激素调节下发生增殖、分化,在分泌晚期孕酮撤退时发生崩解脱落的周期性变化。子宫内膜这种周期性的崩解脱落以及其后的再生修复的更新过程,为妊娠做好了充足的母体准备。本论文以小/大鼠月经样模型为立足点,探讨子宫内膜崩解剥脱以及其后的再生修复过程,包括两个方面:COX-2/PGs调控hif-1α作用子宫内膜崩解剥脱以及利用大鼠假孕月经样模型对子宫内膜生理修复初探。1、COX-2/PGs调控hif-1α作用子宫内膜崩解剥脱。经典的月经发生假说认为,在月经分泌期晚期孕酮的撤退导致子宫中前列腺素(Prostaglandin,PG)水平的升高,进而促进了子宫螺旋小动脉的收缩,造成缺血缺氧,最终导致子宫内膜的崩解出血。环氧合酶(Cyclooxygenase,COX)作为PGs的限速合成酶,其亚型COX-2在妇科生殖中具有重要作用。课题研究小组前期结果显示,COX-2 mRNA和蛋白质在小鼠月经样模型子宫内膜崩解期高表达。本论文利用小鼠生理性孕酮撤退月经样模型,利用COX-2抑制剂Dup-697干预小鼠为实验组,溶剂组为对照组。孕酮撤退后0 h～24 h处死小鼠,获取子宫,H&E染色观察小鼠子宫内膜的崩解程度,表达谱芯片方法检测孕酮撤退后16 h时差异基因的表达情况。荧光实时定量PCR验证表达谱芯片hif-1信号通路1l-6、PHD3、VGEFA、hif-1α、NOS-2、Eno1和Filt-1mRNA的表达。通过免疫组化方法检测hif-1αmRNA在孕酮撤退后16 h～24h的表达定位,通过western blot方法检测hif-1 α蛋白在孕酮撤退后0 h～24 h的表达水平。且利用hif-1α抑制剂2ME干预小鼠,H&E染色观察小鼠子宫内膜的崩解程度。结果显示,Dup-697处理的实验组,与对照组相比,小鼠子宫内膜崩解面积百分比显著降低(Phif-1信号通路成员的差异基因变化活跃;验证发现在孕酮撤退0 h～24 h时Il-6、PHD3 和 VGEFA mRNA 均出现显著性下降(Phif-1αmRNA 在 0 h～16h出现显著性下降(Phif-1α信号通路成员Il-6、PHD3、VGEFA和hif-1α参与子宫内膜崩解剥脱;进一步,与对照组相比,COX-2抑制剂能够抑制hif-1α的激活,且2ME能够显著抑制子宫内膜的崩解剥脱(Phif-1α参与子宫内膜的崩解剥脱;且在这过程中,缺氧环境下hif-1α的PHD3泛素化途径可能受到抑制,使hif-1α在细胞质内不易被降解以及作用于血管内皮细胞Il-6激活hif-1α。2、利用大鼠假孕月经样模型对子宫内膜生理修复进行初探。子宫内膜功能层在崩解和脱落之后,会出现迅速的生理性修复过程,然而其中涉及的具体分子机制尚不明晰。由于相关临床标本难获得,个体差异大,取材部位不同等原因具有一定的局限性。小鼠子宫由于较小,不利于对子宫进行实验操作。本论文探讨建立大鼠假孕月经样模型,并初探子宫内膜的生理性修复过程。利用性成熟的雌鼠大鼠与去势后的雄鼠进行交配,见阴栓记为假孕第0天,分别在第4和5天开始人工诱导蜕膜化,在第6～8天切除卵巢,探讨蜕膜化诱导的起始和持续时间。进一步,在探讨合适的蜕膜化诱导的起始和持续时间之后,在卵巢切除32h、40 h、48 h、56h和64h颈椎脱臼处死大鼠,取出双侧子宫,利用石蜡切片和H&E染色方法观察子宫内膜的生理修复过程。并且与小鼠月经样模型修复进行比较。结果显示,在大鼠假孕第4天进行大鼠子宫蜕膜化操作、在假孕第7天进行雌性大鼠去势操作可以成功诱导蜕膜化且出现子宫内膜崩解出血现象;并发现大鼠的月经生理修复期从卵巢切除后32 h开始启动,在卵巢切除后64 h修复完全,修复过程共经历32h,期间大鼠子宫功能层基质细胞以及子宫腔上皮、腺上皮细胞逐渐增殖和分化;大鼠月经修复过程比小鼠修复起始晚8 h,修复时程长8 h。

关键词：小鼠月经样模型 COX-2 hif-1α信号通路大鼠假孕月经样模型子宫内膜修复

miR-424对糖尿病心脏微血管内皮细胞血管新生的调控研究

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miR-424对糖尿病心脏微血管内皮细胞血管新生的调控研究

作者：江琼福建医科大学

学位级别：硕士

目的:糖尿病引起的血管新生障碍是糖尿病合并心肌梗死患者血管病变严重、临床预后差的关键环节。在组织缺血修复过程中,mi R-424被认为可促进血管新生及组织修复。目前尚不清楚mi R-424在糖尿病合并心肌缺血时是否发挥相似的生理作用。... 详细信息

目的:糖尿病引起的血管新生障碍是糖尿病合并心肌梗死患者血管病变严重、临床预后差的关键环节。在组织缺血修复过程中,mi R-424被认为可促进血管新生及组织修复。目前尚不清楚mi R-424在糖尿病合并心肌缺血时是否发挥相似的生理作用。本研究旨在探讨mi R-424在糖尿病合并心肌缺血时,对心脏微血管内皮细胞血管新生的调控作用。方法:1.建立人心脏微血管内皮细胞的缺氧复氧模型,分为4组,除NG组和HG组外,其余各组均缺氧6h,复氧2h:⑴NG组:人心脏微血管内皮细胞在正常条件下培养;⑵HG组:予以高糖培养基培养;⑶NG+H/R(缺氧/复氧)组;⑷HG+H/R组。q PCR检测mi R-424和CUL2、hif-1α基因表达水平,Western blot检测CUL2、hif-1α蛋白的表达。2.将mi R-424模拟物(mimic)及抑制物(inhibitor)转染人心脏微血管内皮细胞,分为4组,除NG组外,其余各组均缺氧6h,复氧2h:⑴NG组;⑵HG+H/R组;⑶HG+H/R+mi R-424 mimic组:缺氧前转染mi R-424模拟物。⑷HG+H/R+mi R-424 inhibitor组:缺氧前转染mi R-424抑制物。q PCR检测转染模拟物及抑制物后mi R-424表达水平,Western blot检测CUL2、hif-1α和p-Akt蛋白的表达,CCK-8检测心脏微血管内皮细胞体外增殖能力,ECMatrix gel检测心脏微血管内皮细胞在体外形成毛细血管样网状结构的能力。结果:1.与NG组相比,高糖缺氧条件下,mi R-424表达水平升高(Phif-1α转录活性升高(Phif-1α无表达,与HG组比较,NG+H/R组和HG+H/R组hif-1α表达有显著差异(Phif-1α、p-Akt蛋白的表达:与HG+H/R组比较,加入mi R-424模拟物后CUL2表达进一步下调,hif-1α表达可增高(Phif-1α表达降低(Phif-1α编码基因的转录。mi R-424过表达可增强糖尿病缺氧心脏微血管内皮细胞的增殖能力,且Akt磷酸化可能参与了促进体外血管新生的过程。mi R-424可能通过增强hif-1α转录活性及上调Akt磷酸化水平在促进糖尿病心肌缺血血管新生中发挥重要作用。

关键词： miR-424 糖尿病心肌缺血 hif-1α信号通路血管新生

基于高通量测序早发型重度子痫前期合并胎儿生长受限胎盘miRNA表达谱的生物信息分析

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基于高通量测序早发型重度子痫前期合并胎儿生长受限胎盘miRNA表...

作者：郑晶福建医科大学

学位级别：硕士

目的通过高通量测序技术(high-throughput sequencing)检测早发型重度子痫前期(severe preeclampsia,s PE)合并胎儿生长受限(fetal growth restriction,FGR)患者和正常孕妇胎盘组织中的miRNAs的表达,运用生物信息学的分析方法比较miRNA差异表达谱,采用Targetscan和mi DRB这两个基因数据库,对差异表达显著的miRNAs进行筛查,并对其靶基因进行预测,对靶基因进行GO富集分析和KEGG Pathway富集分析,探究其参与的信号通路及生物学意义,确定差异表达的miRNA在s PE发病机制中的生物学功能,并对潜在的新miRNA进行预测。用RT-PCR技术对筛选的部分目标miRNA进行验证,并对富集分数(enrichment score,ES)最高的hif-1α信号通路及涉及靶基因数量最多的PI3K-Akt信号通路进行深入分析,探讨其影响s PE合并FGR发生发展及胎儿预后的可能机制。方法1.胎盘标本取自2018年4月-2019年6月期间于福建某医院妇产科的单胎剖宫产分娩孕妇共10例,其中早发型s PE合并FGR患者、正常孕产妇各5例。2.利用高通量测序技术从收集的胎盘组织提取总的RNA,进行RT-PCR扩增,从中分离出15-35nt的小RNA,将文库变性为c DNA文库。然后用Illumina方法进行测序,对数据进行质控(quality control,QC)、预处理等处理数据,获得修正后的数据(trimmed data)。3.将所得的trimmed data与miRBase数据库进行比对,从而获取数据库中已知的miRNA的信息,包括:miRNA的长度、结构、表达水平等。4.比较组间miRNA的表达差异,使用edge R软件进行组间miRNAs差异表达分析,计算P1.5来筛选显著差异表达的miRNA。5.利用生物信息学分析(Bioinformatics),采用Targetscan和mi DRB靶基因数据库联合对差异表达显著的miRNAs进行靶基因的预测,并对其进行GO功能富集分析和KEGG通路分析,并利用miRDeep软件对潜在的新miRNA进行预测。6.对目标miRNA实时荧光定量聚合酶链反应(Real time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR),选取6个上调目标miRNA(miR-105-5p、miR-196a-5p、miR-31-5p、miR-210-5p、miR-498-5p、miR-10b-5p)和1个下调(miR-200a-3p)进行RT-PCR验证,采用2法分析目标miRNA在组间miRNA的相对表达水平的差异。7.深入分析富集分数最高的hif-1α信号及涉及靶基因数量最多的PI3K-Akt信号通路,聚焦该通路所涉及的关键miRNA及相关蛋白,探讨其与早发型s PE合并FGR的关联。结果1.共检测到841个已知的、成熟的人类miRNA,PE孕产妇胎盘组织中表达显著上调的miRNA共52个(P通路可能包括:hif-1α信号通路、RNA转运、细胞连接结构、胰岛素信号途径、MAPK信号通路等相互作用。下调miRNA所涉及的靶基因通路包括:抗坏血酸及醛糖酸盐代谢、细菌侵袭上皮细胞(Bacterial invasion of epithelial cells)、PI3K-AKt信号通路、卟啉和叶绿素代谢(Porphyrin and chlorophyll metabolism)等相关调节通路。3.利用miRDeep2对潜在的新miRNA进行预测,通过Dicer对miRNA前体的简单处理,找到新miRNA前体在基因组上的位置,以及对应核苷酸序列,以高度可信度预测新的miRNA。4.利用RT-PCR技术验证miRNA(miR-105-5p、miR-196a-5p、miR-31-5p、miR-210-5p、miR-498-5p、miR-10b-5p、miR-200a-3p),提示其表达的上下调趋势与高通量测序结果基本一致,并且7个选取的miRNA相对表达量的组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论1.早发型s PE合并FGR患者与正常孕妇相比,胎盘组织中的miRNA表达有显著差异,RT-PCR也验证了部分目标mi

关键词：早发型重度子痫前期胎儿生长受限 microRNA hif-1α信号通路 PI3K-AKt信号通路生物学过程细胞组成分子功能生物信息学