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第四届全国人畜共患病学术研讨会 2014年中国狂犬病年会中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第四次学术研讨会

作者：赵静刘菁孙尧王艳凤丁静孙召金王楠王学林吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病研究教育部重点实验室

目的旋毛虫是寄生在人或动物肠道及肌细胞内的人兽共患线虫。在旋毛虫包囊形成过程中,它所产生的寄生蛋白通过模拟宿主肌细胞凋亡,调控肌细胞修复机制形成保姆细胞,这种调控机制同肿瘤细胞的凋亡信号调控机制极其相似。本文研究了旋毛虫... 详细信息

目的旋毛虫是寄生在人或动物肠道及肌细胞内的人兽共患线虫。在旋毛虫包囊形成过程中,它所产生的寄生蛋白通过模拟宿主肌细胞凋亡,调控肌细胞修复机制形成保姆细胞,这种调控机制同肿瘤细胞的凋亡信号调控机制极其相似。本文研究了旋毛虫A200711蛋白对人肝癌HepG2细胞、SMMC-7721细胞及hhcc细胞的增殖抑制作用。方法运用本实验室前期原核表达的旋毛虫A200711蛋白分别作用人肝癌HepG2细胞、SMMC-7721细胞及hhcc细胞;采用MTT法检测A200711蛋白对人肝癌HepG2细胞、SMMC-7721细胞及hhcc细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测A200711蛋白对细胞周期的影响;采用Annexin V-PI双染色法标记,流细胞仪检测细胞凋亡情况并经Western blot方法分析凋亡相关基因的蛋白表达情况。结果 MTT实验结果显示旋毛虫A200711蛋白对人肝癌HepG2细胞、SMMC-7721细胞及hhcc细胞均有明显增殖抑制作用,呈剂量-时间依赖性;流式细胞术结果表明A200711蛋白诱导细胞周期阻滞于S期并且诱导细胞发生凋亡;Western blot结果显示A200711蛋白作用肝癌细胞后Caspase 3蛋白表达明显上调。结论旋毛虫A200711蛋白可抑制人肝癌HepG2细胞、SMMC-7721细胞及hhcc细胞增殖,诱导肝癌细胞发生凋亡。

关键词：旋毛虫A200711蛋白肝癌 HepG2细胞 SMMC-7721细胞 hhcc细胞抑制作用

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凋亡蛋白对Bcl-2家族几个基因表达影响

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哈尔滨工业大学学报 2005年第9期37卷 1180-1182页

作者：国泰杨谦高洪雷孙璟晗王笑梅哈尔滨工业大学理学院黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江哈尔滨150001

凋亡蛋白(Apoptin)只诱导肿瘤细胞或转化的细胞凋亡,但其作用机制还不十分清楚.从鸡贫血病毒总DNA中克隆出凋亡蛋白基因,构建pcDNA3.1/CT-Apoptin-GFP-TOPO融合表达的载体.用该载体转染hhcc单层传代细胞24 h后,观察到绿色荧光蛋白表达,... 详细信息

凋亡蛋白(Apoptin)只诱导肿瘤细胞或转化的细胞凋亡,但其作用机制还不十分清楚.从鸡贫血病毒总DNA中克隆出凋亡蛋白基因,构建pcDNA3.1/CT-Apoptin-GFP-TOPO融合表达的载体.用该载体转染hhcc单层传代细胞24 h后,观察到绿色荧光蛋白表达,同时观察到细胞形态呈凋亡特征变化.提取细胞总RNA,按SuperArray芯片操作方法检测到实验组Bcl-2家族中的BimL,Bcl-2,Bax和Bak基因上调表达.Bcl-2家族在细胞凋亡的过程中作用重要.凋亡蛋白诱导hhcc细胞凋亡过程中,促凋亡的BimL,Bax 和Bak基因上调,抗凋亡的Bcl-2基因也上调.可能BimL与Bcl-2竞争性结合导致Bax或Bak释放,最终诱导细胞凋亡.揭示Bcl-2家族的基因参与凋亡蛋白诱导的hhcc细胞凋亡过程.

关键词：凋亡蛋白 hhcc细胞 Bcl-2 family genes

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采用RNA干扰对NDRG2在肿瘤细胞中功能的初步研究

采用RNA干扰对NDRG2在肿瘤细胞中功能的初步研究

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作者：裴德宁中国药品生物制品检定所

学位级别：硕士

人NDRG2(human n-myc downstream regulated gene2，hNDRG2)基因属于NDRG家族(包括NDRG1、NDRG2、NDRG3、NDRG4)为第四军医大学首次发现，已被Genbank收录，登陆号为AFI59092，经原位杂交实验证实，NDRG2 mRNA在正常组织内广泛表达，并在部分肿瘤组织中存在差异表达，推测其与细胞的增殖分化有关，可能抑制多种细胞的增殖，但是对这个基因的准确的作用机理和方式还有待于研究。 RNA干扰(RNAi，RNA interference)是近年来发现的一种序列特异的转录后基因沉默现象，是指双链RNA(dsRNA)进入细胞后被加工成双链的小干扰RNA(siRNA)，siRNA通过特异的降解mRNA来抑制特异基因的表达。在植物，昆虫，原生动物体内都发现了自然存在的RNA干扰，对于生物体有重要作用。RNA干扰具有特异、高效、持久的特点，是抑制细胞中某个基因表达，研究未知基因功能的有力工具。本实验的研究目的是初步探讨NDRG2在人肿瘤细胞hhcc和SGC-7901中的作用。实验的总体思路是：通过质粒转染的方法在细胞内引起NDRG2表达的升高和降低，然后分别检测NDRG2表达升高和降低对细胞的影响，并以此为基础，研究NDRG2在hhcc和SGC-7901细胞中的作用。本实验共分为三部分，第一部分是构建NDRG2表达质粒和NDRG2干扰质粒：NDRG2表达质粒是通过把NDRG2 cDNA连接到pSNAV质粒上得到的;NDRG2干扰质粒是通过把shRNA(short harpin RNA)表达框架连接到pSNAV质粒上得到的，shRNA表达框架是针对NDRG2 mRNA设计的，它转录形成的shRNA能够引起针对NDRG2的特异的RNA干扰，抑制NDRG2的表达。第二部分是转染构建的质粒，检测肿瘤细胞NDRG2表达水平的变化。将第一部分构建的质粒转染hhcc和SGC-7901细胞，用RT-PCR、荧光定量PCR和免疫印迹等方法检测细胞中NDRG2表达水平的变化。结果证明NDRG2表

关键词： NDRG2 hhcc细胞 SGC-7901细胞肿瘤 RNA干扰 NDRG2表达质粒 NDRG2干扰质粒细胞周期凋亡

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双位点核酶细胞内抑制乙型肝炎病毒基因的表达(英文)

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第四军医大学学报 1999年第8期20卷 645-649页

作者：李谨革周永兴连建奇贾战生冯志华李光玉王平忠第四军医大学唐都医院传染科陕西西安710038

目的：构建针对乙型肝炎病毒（HBV）C区基因（2029-31及2063-65位点）的双位点核酶的真核表达载体．观察其在细胞内对HBV基因表达的抑制作用．方法：利用亚克隆技术．从质粒pGEMRzl23切下EcoRI-BamHI片段，双粘端克隆于真核质粒pBBS212... 详细信息

目的：构建针对乙型肝炎病毒（HBV）C区基因（2029-31及2063-65位点）的双位点核酶的真核表达载体．观察其在细胞内对HBV基因表达的抑制作用．方法：利用亚克隆技术．从质粒pGEMRzl23切下EcoRI-BamHI片段，双粘端克隆于真核质粒pBBS212中，将该质粒与P1．2Ⅱ（含HBV全序列）共转染hhcc细胞（人肝癌细胞株）．观察该核酶对HBV基因表达的抑制作用．结果：在hhcc细胞中p1．2Ⅱ可表达出HBsAg及HBeAg该核酶对HBeAg的合成抑制率达65％．结论：该双位点核酶可能通过针对HBVC区mRNA的剪切作用，阻断C区mRNA的表达．抑制了HBeAg的合成。

关键词：乙型肝炎病毒核酶 hhcc细胞

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重组人NDRG2蛋白对肿瘤细胞抑制作用研究

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中国肿瘤生物治疗杂志 2004年第3期11卷 204-207页

作者：张翊陈杰裴德宁饶春明药立波王军志中国药品生物制品检定所北京100050 中国人民解放军第四军医大学西安710038

目的:考察原核表达的重组人NDRG2蛋白对肿瘤细胞的作用。方法:通过设置不同浓度的蛋白剂量并设置对照组,采用细胞MTT比色法和细胞计数检测NDRG2蛋白对7901、hhcc细胞的抑制效果,流式细胞仪检测细胞周期的变化,体内实验采用裸鼠抑瘤试... 详细信息

目的:考察原核表达的重组人NDRG2蛋白对肿瘤细胞的作用。方法:通过设置不同浓度的蛋白剂量并设置对照组,采用细胞MTT比色法和细胞计数检测NDRG2蛋白对7901、hhcc细胞的抑制效果,流式细胞仪检测细胞周期的变化,体内实验采用裸鼠抑瘤试验。结果:重组人NDRG2对肿瘤细胞生长有较强的抑制作用,约50μg/ml浓度时对肿瘤细胞生长的抑制作用明显,流式细胞术结果显示肿瘤细胞G1期变化,体外能抑制裸鼠肿瘤的生成。结论:重组人NDRG2蛋白在体内体外具有一定的抑制肿瘤细胞生长作用,在肿瘤治疗方面将具有一定的意义。

关键词： NDRG2 hhcc细胞 7901细胞肿瘤抑制

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