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ERK 1/2-PKM2/P53信号通路在喉癌hep-2细胞株增殖中的作用

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武汉大学学报（医学版） 2019年第1期40卷 42-46页

作者：何延泽邓鸣黄昆李典张春霞彭涛湖北省大悟县人民医院耳鼻咽喉-头颈外科湖北大悟432800 湖北省孝感市妇幼保健院湖北孝感432100 武汉大学中南医院耳鼻咽喉-头颈外科湖北武汉430071

目的:探究ERK1/2通过PKM2/P53信号通路调节喉癌hep-2细胞株增殖的潜在机制。方法:采用细胞计数的方法统计经ERK1/2抑制剂U0126、P53抑制剂PFTα处理后0,24,48h时hep-2细胞的细胞密度,实验随机分为空白对照组(Control)、对照组(Vehicle)... 详细信息

目的:探究ERK1/2通过PKM2/P53信号通路调节喉癌hep-2细胞株增殖的潜在机制。方法:采用细胞计数的方法统计经ERK1/2抑制剂U0126、P53抑制剂PFTα处理后0,24,48h时hep-2细胞的细胞密度,实验随机分为空白对照组(Control)、对照组(Vehicle)、处理组(U0126或PFTα)。采用转染PKM2-siRNA或PKM2-cDNA的方法在hep-2细胞株上抑制或过表达PKM2。采用免疫印迹(WesternBlot)的方法检测不同处理情况下ERK1/2、p-ERK1/2、P53、PKM2的蛋白水平。结果:抑制ERK1/2的磷酸化可抑制hep-2细胞生长,抑制P53可阻断抑制ERK1/2导致的hep-2细胞生长变缓。同时,抑制ERK1/2可下调PKM2水平,抑制或过表达PKM2可分别上调或下调P53。过表达PKM2可阻断抑制ERK1/2引起的hep-2细胞生长变缓。结论:抑制ERK1/2的磷酸化可通过下调PKM2水平促进P53表达进而抑制hep-2细胞生长。

关键词： hep-2细胞株细胞增殖 ERK1/2 P53 PKM2

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紫杉醇对hep-2细胞株的细胞毒性

中国耳鼻咽喉头颈外科 2005年第9期12卷 596-597页

作者：谢明周梁田洁复旦大学附属眼耳鼻喉科医院耳鼻咽喉科上海200031 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院中心实验室上海200031

紫杉醇作为一种抗微管新药,在头颈部肿瘤的临床治疗中已取得初步疗效.本实验观察紫杉醇对人喉癌hep-2细胞株的细胞毒性作用,对其诱导的细胞周期阻滞和细胞凋亡进行探讨,旨在为该药的临床开发提供理论依据.

关键词：喉肿瘤(Laryngeal Neoplasms) 紫杉酚(Paclitaxel) 细胞凋亡(Apoptosis) hep-2细胞株细胞毒性作用紫杉醇细胞周期阻滞头颈部肿瘤临床治疗

RNAi沉默FAK表达对hep-2细胞株增殖及侵袭能力影响的实验研究

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RNAi沉默FAK表达对Hep-2细胞株增殖及侵袭能力影响的实验研究

作者：张潜英重庆医科大学

学位级别：硕士

头颈部鳞形细胞癌(Head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)是人类常见的恶性肿瘤之一,其中喉癌占7.9%-35%。过去几十年里,尽管诊疗技术不断提高,喉癌的生存率仍然没有明显提高,这与肿瘤细胞的远处转移密切相关。区域淋巴结转移... 详细信息

头颈部鳞形细胞癌(Head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)是人类常见的恶性肿瘤之一,其中喉癌占7.9%-35%。过去几十年里,尽管诊疗技术不断提高,喉癌的生存率仍然没有明显提高,这与肿瘤细胞的远处转移密切相关。区域淋巴结转移是致死性进程的主要原因之一,也是肿瘤预后主要指标和指导治疗的重要依据。许多学者致力于研究肿瘤侵袭、转移的分子学依据,期待能发现更精确更可靠的生物学标志。癌细胞对细胞外基质的黏附性降低是肿瘤细胞迁移、侵袭、转移的重要原因之一。粘着斑激酶(focal adhesion kinase ,FAK)是一个多功能的非受体酪氨酸激酶,它在细胞间及细胞与细胞外基质粘附中起关键作用。有学者研究证明,FAK与乳腺癌、直肠癌、甲状腺癌、肝癌、前列腺癌的侵袭及转移密切相关,而在头颈部肿瘤的研究甚少。本课题以头颈部常见恶性肿瘤喉癌为研究对象,利用免疫组化研究喉癌组织及细胞株中FAK的表达,再进一步研究利用RAN干扰(RNA interference)沉默FAK表达对喉癌hep-2细胞株生物学行为的影响。实验共分两部分:第一部分FAK在喉癌组织及细胞株中的表达目的:本部分以喉癌组织及hep-2细胞株为研究对象,采用免疫组化SP法及细胞免疫方法分别检测FAK在喉癌组织及细胞株中的表达,并研究其表达与患者临床病理特征之间的关系。方法:(1)随机抽取42例喉癌患者组织病理标本,以同期声带息肉组织标本作为对照。采用免疫组织化学法检测喉癌组织中FAK的表达,并结合患者的临床病理资料对结果进行统计分析。(2)常规培养喉癌hep-2细胞株,采用免疫细胞化学法检测hep-2细胞株中的FAK表达。结果:(1)喉癌组织中FAK的表达:喉癌组织中FAK的阳性表达率78.57%(33/42),对照组(声带息肉)中阳性率12.50%(5/40)( P0.05);(2)喉癌hep-2细胞株中FAK的表达为阳性。结论:喉癌组织中FAK表达与肿瘤侵袭及转移能力相关;喉癌hep-2细胞株中FAK表达为阳性。第二部分RNAi沉默FAK表达对hep-2细胞株增殖及侵袭能力的影响目的:构建在哺乳动物细胞中表达FAK的重组质粒FAK-pGenesil,并作用于hep-2细胞株。探讨重组质粒对hep-2细胞株FAK mRNA及蛋白的抑制作用,以及对hep-2细胞株的增殖、侵袭能力的影响。方法:根据GenBank数据库提供的FAK基因核苷酸序列(基因号GI: 439874;ACCES2SION: L13616)设计的两条多聚核苷酸序列,构建两条干扰重组质粒FAK-pGenesil-CH1和FAK-pGenesil-CH2,并设计一条阴性对照重组质粒FAK-pGenesil-HK;在脂质体的介导下转染喉癌hep-2细胞株,优化转染条件提高转染效率;用RT-PCR和Western Blot分析FAK mRNA及蛋白的表达;MTT法、流式细胞仪及体外侵袭实验,测定干扰重组质粒对hep-2细胞株的的增殖、侵袭能力的影响。结果:(1)细胞转染条件的优化及细胞转染率的观察:当所构建重组质粒与脂质体的质量体积比为1:2.5转染时,转染效率最高达55%。(2)RT-PCR及Western blot的结果:干扰重组质粒FAKpGenesil-CH1、FAK-pGenesil-CH2能使hep-2细胞株中FAK mRNA及FAK蛋白的表达下调。FAK mRNA抑制率分别为71.54%、67.89%,与对照组比较差异有统计学意义(P细胞仪及体外侵袭实验结果: MTT显示干扰重组质粒FAK-pGenesil-CH1、FAK-pGenesil-CH2作用于hep-2细胞株48小时后,细胞增殖抑制率分别为58.34%、52.78%,对照组为8.34%(P细胞仪测定细胞周期显示,干扰重组质粒FAK-pGenesil-CH1、FAK-pGenesil-CH2作用于hep-2细胞株48小时后细胞增殖率为25.28%、25.67% ,与对照组和正常组比较,差别有统计学意义(P2作用hep-2细胞株48小时后,hep-2细胞穿过Matrigel膜的个数分别为56.0±6.7、51.0±5.1与对照

关键词：喉肿瘤免疫组织化学免疫细胞化学 hep-2细胞株 FAK mRNA 短发夹状RNA RNA干扰 hep-2细胞株喉肿瘤侵袭增殖

中药土贝母对hep-2细胞株诱导分化的研究

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耳鼻咽喉（头颈外科） 2000年第6期7卷 351-354页

作者：冯青杰孙立群孙冬长春白求恩医科大学第二附属医院耳鼻咽喉科 130041 长春中医学院98级

目的：为了观察土贝母对Ｈｅｐ－２细胞株诱导调亡的机制。方法：应用ＭＴＴ比色法和流式细胞仪测定细胞周期的变化，并应用电子显微镜技术观察诱导分化后亚细胞结构。结果：土贝母制剂对Ｈｅｐ－２细胞株有明显的抑制作用，且呈剂量... 详细信息

目的：为了观察土贝母对Ｈｅｐ－２细胞株诱导调亡的机制。方法：应用ＭＴＴ比色法和流式细胞仪测定细胞周期的变化，并应用电子显微镜技术观察诱导分化后亚细胞结构。结果：土贝母制剂对Ｈｅｐ－２细胞株有明显的抑制作用，且呈剂量依赖性，流式细胞仪分析，不同的药物浓度和不同的作用时间凋亡的发生差异均有显著意义，Ｇ１期细胞堆积，Ｓ期细胞减少，Ｇ２／Ｍ期细胞相对增多，亚细胞结构，细胞线粒体肿胀变性，核固缩。结论：土贝母制剂能阻上Ｇ０／Ｇ１期细胞向Ｓ期转化进程，抑制Ｈｅｐ－２增殖，促进Ｈｅｐ－２细胞凋亡。

关键词：草药细胞分化土贝母 hep-2细胞株癌中药

TRAIL联合化疗药物诱导喉癌hep-2细胞株凋亡的研究

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重庆医科大学学报 2008年第8期33卷 951-953,958页

作者：余晓燕陈鸿雁重庆医科大学附属第一医院耳鼻咽喉科重庆400016

目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Tumor necrosis factor related apoptosis-inducingligand,TRAIL)与化疗药物氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP)联合使用诱导喉癌hep-2细胞株凋亡。方法:不同浓度的TRAIL、5-FU、DDP单独及TRAIL与5-FU、DDP联合处理hep-2细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测其细胞毒作用,荧光显微镜下观察并计算凋亡率,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率。结果:hep-2细胞对低毒性的TRAIL不敏感,对化疗药物相对敏感,TRAIL与低毒性的化疗药物联合作用于细胞后可增强杀伤效应。结论:TRAIL与低毒性的5-Fu、DDP联用表现出高效的杀灭肿瘤细胞作用。

关键词： TRAIL 化疗 hep-2细胞株

抗肿瘤药物与TRAIL联用对喉癌hep-2细胞株增殖、凋亡的影响

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重庆医学 2008年第20期37卷 2268-2269页

作者：余晓燕叶琳沈娜张潜英陈鸿雁重庆医科大学附属第一医院耳鼻咽喉-头颈外科 400016

目的探讨化疗药物顺铂(DDP)、5氟尿嘧啶(5-Fu)单独及与TRAIL联合对hep-2细胞株增殖、凋亡的影响。方法MTT法检测其增殖抑制作用,FCM法检测细胞凋亡率。结果TRAIL与5-Fu、DDP联合作用于hep-2细胞株时,其抑制率、凋亡率高于单独作用时的... 详细信息

目的探讨化疗药物顺铂(DDP)、5氟尿嘧啶(5-Fu)单独及与TRAIL联合对hep-2细胞株增殖、凋亡的影响。方法MTT法检测其增殖抑制作用,FCM法检测细胞凋亡率。结果TRAIL与5-Fu、DDP联合作用于hep-2细胞株时,其抑制率、凋亡率高于单独作用时的抑制率和凋亡率。结论TRAIL与5-Fu、DDP联合作用有协同抑制hep-2细胞株增殖、诱导hep-2细胞株凋亡的作用。

关键词： TRAIL DDP 5-Fu hep-2细胞株喉癌

脂质体阿霉素对人喉癌hep-2细胞株的影响

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肿瘤学杂志 2009年第7期15卷 629-631页

作者：邓碧叶琳王驰陈鸿雁重庆医科大学附属第一医院重庆400016 重庆医科大学药学院重庆400016

[目的]研究脂质体阿霉素对人喉癌hep-2细胞株的作用特点。[方法]以MTT法分别测定脂质体阿霉素组与游离阿霉素组分别作用于hep-2细胞株72h后的细胞增殖抑制率并比较两组的半数抑制浓度(IC50);通过流式细胞仪(FCM)检测两组药物分别作用于H... 详细信息

[目的]研究脂质体阿霉素对人喉癌hep-2细胞株的作用特点。[方法]以MTT法分别测定脂质体阿霉素组与游离阿霉素组分别作用于hep-2细胞株72h后的细胞增殖抑制率并比较两组的半数抑制浓度(IC50);通过流式细胞仪(FCM)检测两组药物分别作用于hep-2细胞株72h后对其细胞周期的影响;采用荧光分光光度法分别测定脂质体阿霉素和游离阿霉素分别作用于hep-2细胞株1、3、6h后实验细胞内的药物浓度。[结果]脂质体阿霉素对hep-2细胞株的IC50是游离阿霉素的1/4倍。脂质体阿霉素组与游离阿霉素组分别采用0.016μg/ml、0.06μg/ml的浓度作用于hep-2细胞株72h后,均使hep-2细胞株停滞于G2/M期,且脂质体阿霉素G2/M期百分率高于游离阿霉素。荧光分光光度法结果显示:脂质体阿霉素组内药物浓度在1、3、6h后均分别大于游离阿霉素组,且6h后脂质体阿霉素作用于hep-2细胞株内的阿霉素浓度是游离阿霉素的4倍。[结论]与游离阿霉素相比,脂质体阿霉素对人喉癌hep-2细胞株具有较好的增殖抑制作用,并且阻滞hep-2细胞株于G2/M,其可能机制是与脂质体阿霉素增加细胞内阿霉素浓度有关。

关键词：脂质体阿霉素 hep-2细胞株喉肿瘤

睾酮对喉癌hep-2细胞株分裂增殖及端粒酶活性的影响

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山东大学耳鼻喉眼学报 2009年第1期23卷 15-17,25页

作者：王洪波田军李红梅潍坊医学院耳鼻喉教研室潍坊市人民医院耳鼻喉科

目的研究睾酮对人喉癌hep-2细胞株分裂增殖及端粒酶表达活性的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法研究不同浓度睾酮对hep-2细胞株分裂增殖的影响,用免疫细胞化学检测10-8mol/L睾酮作用48 h细胞雄激素受体及端粒酶的表达活性。结果10-8mol/... 详细信息

目的研究睾酮对人喉癌hep-2细胞株分裂增殖及端粒酶表达活性的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法研究不同浓度睾酮对hep-2细胞株分裂增殖的影响,用免疫细胞化学检测10-8mol/L睾酮作用48 h细胞雄激素受体及端粒酶的表达活性。结果10-8mol/L睾酮作用48 h,人喉癌细胞hep-2细胞OD值由作用前的0.150±0.008增至0.281±0.010,其他实验浓度组均不能明显促进hep-2细胞的分裂增殖。睾酮作用前后hep-2细胞均强表达雄激素受体,表达率分别为95.73%和93.84%,差别无统计学意义。端粒酶表达率由睾酮作用前的52.35%增至89.21%,端粒酶强阳性细胞爬片由2张增至8张,差异有统计学意义。结论hep-2细胞株为雄激素敏感型细胞,睾酮可能通过上调端粒酶的表达促进喉癌hep-2细胞的分裂增殖,这对研究喉癌的激素疗法及开发端粒酶抑制剂有重要的意义。

关键词：睾酮 hep-2细胞株端粒酶

RNAi沉默喉鳞癌hep-2细胞株VEGF-C mRNA基因表达的实验研究

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肿瘤基础与临床 2008年第2期21卷 99-102页

作者：路武豪娄卫华赵国强郑州大学第一附属医院耳鼻咽喉科河南郑州450052 郑州大学基础医学院微生物与免疫学教研室河南郑州450052

目的构建针对喉鳞癌细胞株hep-2中血管内皮生长因子C(vascular endothelial growthfactor C,VEGF-C)的siRNA表达载体,研究载体介导的RNAi技术对喉鳞癌细胞株hep-2中VEGF-C mRNA表达的抑制作用。方法依据siRNA靶序列的设计原则,以VEGF-C... 详细信息

目的构建针对喉鳞癌细胞株hep-2中血管内皮生长因子C(vascular endothelial growthfactor C,VEGF-C)的siRNA表达载体,研究载体介导的RNAi技术对喉鳞癌细胞株hep-2中VEGF-C mRNA表达的抑制作用。方法依据siRNA靶序列的设计原则,以VEGF-C为靶基因,同时随机组合出一条对照序列,分别合成2对编码短发卡结构的两条DNA序列,经退火合成互补DNA双链,克隆入siRNA表达载体pSuper-neo中,转化鉴定后进行PCR和DNA序列测定。用脂质体介导转染入喉鳞癌hep-2细胞株,采用RT-PCR方法检测细胞VEGF-C基因mRNA水平的变化。结果成功构建发卡样VEGF-C siRNA真核表达载体;转染VEGF-C靶向siRNA(pSuper-neo-siV1)的hep-2细胞,VEGF-C基因的表达水平较无关对照组pSuper-neo-siV2和转染空载体pSuper-neo的对照组显著下降。结论成功构建载体介导的VEGF-C靶向RNA干扰重组体,并能有效抑制hep-2细胞中VEGF-C mRNA表达。

关键词：喉鳞癌 VEGF—C RNA干扰 hep-2细胞株