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改良型人NK细胞体外扩增技术建立及car-NK细胞治疗技术初步研究

改良型人NK细胞体外扩增技术建立及CAR-NK细胞治疗技术初步研究

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作者：李亚芬苏州大学

学位级别：硕士

NK细胞过继疗法是肿瘤免疫疗法的一种具有前景的治疗策略,然而,大量扩增具有功能的NK细胞方法的缺乏限制了它的发展。由于IL21分子是NK细胞功能的重要调节分子,因此本文的主要目的之一是建立一种改良型的基于IL21分子的NK细胞体外扩增... 详细信息

NK细胞过继疗法是肿瘤免疫疗法的一种具有前景的治疗策略,然而,大量扩增具有功能的NK细胞方法的缺乏限制了它的发展。由于IL21分子是NK细胞功能的重要调节分子,因此本文的主要目的之一是建立一种改良型的基于IL21分子的NK细胞体外扩增技术。在本文中,我们在稳定表达IL15和CD137L分子的p APC细胞上再进一步表达IL21分子,然后用构建的该工程细胞株(命名为p APCNK)来扩增NK细胞。具体方法为:分离4名健康人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC),采用工程细胞p APCNK并补充细胞因子IL2对NK细胞进行体外扩增,应用细胞计数法和流式细胞术分别比较NK细胞的扩增倍数和NK细胞纯度,并采用CFSE/7-AAD法对肿瘤细胞K562和RPMI-8226进行细胞毒性试验检测杀伤效率。经过三周的刺激培养,NK细胞平均扩增至409.4倍,细胞纯度由最初的低于20%提高到90%以上。杀伤实验结果显示,扩增的NK细胞对K562细胞杀伤率高达85.2%。但由于NK细胞非抗原特异性的杀伤特征,会限制其临床上的治疗效果。近年来过继性细胞治疗技术中,嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,car)修饰的t细胞技术异军突起,在体外和临床试验中表现出良好的靶向性、杀伤性和持久性,展示了巨大的应用潜力和发展前景。因此本研究在NK细胞扩增技术体系建立的基础上,尝试开发car-NK细胞治疗技术,从而提高NK细胞活性并且让NK细胞具备肿瘤抗原特异性杀伤能力。本研究选用her2作为靶点来探索开发car-NK细胞治疗技术的可能性,并积累了初步的实验数据,为进一步建立完善的car-NK细胞治疗技术提供了依据。

关键词： NK细胞体外扩增 pAPCNK car-NK her2-car-t 癌症免疫治疗

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