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L-选择蛋白可能介导小鼠肝癌hca-f细胞经淋巴道转移的研究

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解剖学报 2004年第5期35卷 502-508页

作者：刘敏王莉芬朱杰杨佩满张嘉宁大连医科大学生物化学教研室大连116027 大连医科大学附属第二临床医院病理科大连医科大学附属第二临床医院检验科大连医科大学组织学胚胎学教研室大连116027

目的　观察L 选择蛋白是否介导小鼠肝癌hca f细胞与淋巴结黏附 ,探讨hca f细胞特异性向周围淋巴结转移的分子机制。　方法　应用免疫细胞化学方法验证小鼠肝癌hca f细胞为非淋巴细胞来源 ;用免疫印迹分析、RT PCR及流式细胞术检测L 选... 详细信息

目的　观察L 选择蛋白是否介导小鼠肝癌hca f细胞与淋巴结黏附 ,探讨hca f细胞特异性向周围淋巴结转移的分子机制。　方法　应用免疫细胞化学方法验证小鼠肝癌hca f细胞为非淋巴细胞来源 ;用免疫印迹分析、RT PCR及流式细胞术检测L 选择蛋白在hca f细胞的表达 ;并用L 选择蛋白的抗体抑制hca f细胞与冰冻淋巴结切片间的黏附实验 (Stamper Woodruffmethod)检测L 选择蛋白的功能。　结果　hca f细胞为非淋巴细胞来源的肝癌细胞 ,在其表面有L 选择蛋白的表达 ,且hca f细胞与淋巴结之间的黏附可被L 选择蛋白的抗体抑制。结论　非淋巴细胞来源的hca f细胞表面表达功能性L 选择蛋白分子 ,并可协助其与淋巴结黏附 ,从而可能介导hca f细胞向淋巴道转移。

关键词： L-选择蛋白肿瘤转移 hca-f细胞 615小鼠

青藤碱PLGA-TPGS纳米粒对hca-f细胞在小鼠淋巴管内增殖及异位移植瘤的抑制作用研究

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中国药房 2016年第16期27卷 2229-2232页

作者：王洪刚高萌张成鸿徐静孙艺平徐红大连医科大学附属第一医院药剂科辽宁大连116011 大连医科大学药学院辽宁大连116044 大连医科大学基础医学院辽宁大连116044

目的:研究青藤碱乳酸羟基乙酸共聚物-水溶性维生素E(PLGA-TPGS)纳米粒(SPTN)对小鼠腹水型肝癌高淋巴管转移细胞hca-f在小鼠淋巴管内增殖及异位移植瘤的抑制作用。方法:将hca-f细胞悬液分别加入生理盐水、5-氟尿嘧啶溶液(fS)、青藤碱溶液... 详细信息

目的:研究青藤碱乳酸羟基乙酸共聚物-水溶性维生素E(PLGA-TPGS)纳米粒(SPTN)对小鼠腹水型肝癌高淋巴管转移细胞hca-f在小鼠淋巴管内增殖及异位移植瘤的抑制作用。方法:将hca-f细胞悬液分别加入生理盐水、5-氟尿嘧啶溶液(fS)、青藤碱溶液(SS)、青藤碱PLGA纳米粒(SPN)和SPTN,使终质量浓度均为80μg/ml,采用羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(CfSE)标记;经小鼠一侧足垫注射各细胞悬液50μl,每组15只,分别于3、6、9、12、24 h用荧光倒置显微镜观察上述悬液对hca-f细胞在小鼠体内淋巴管内增殖的抑制作用。取小鼠分为正常对照组、空白PLGA-TPGS纳米粒(EPTN)组、生理盐水组、SPTN组、SPN组、SS组和fS组,每组10只,后6组小鼠建立荷hca-f细胞的肝癌异位移植瘤模型,尾iv相应药物15 mg/kg,每日1次,连续给药10 d;检测血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、白蛋白(ALB)和总胆红素(TBIL)的含量;取出实体瘤,称量瘤质量和瘤体积,计算抑瘤率。结果:对hca-f细胞增殖的抑制作用强弱依次为SPTN>SPN>fS>SS>生理盐水。与生理盐水组比较,SPTN组、SPN组、SS组和fS组小鼠血清中ALT、AST、γ-GT、TBIL水平降低,ALB水平升高(PfS组小鼠的瘤体积增长量和瘤质量明显降低(Phca-f细胞在小鼠淋巴管内的增殖,能改善荷hca-f细胞小鼠肝癌异位移植瘤,且效果优于SPN和fS。

关键词：青藤碱乳酸羟基乙酸共聚物-水溶性维生素E 纳米粒 hca-f细胞淋巴管异位移植瘤

Anxa5通过ERK1/2通路调控小鼠肝癌hca-f细胞恶性行为

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Anxa5通过ERK1/2通路调控小鼠肝癌Hca-F细胞恶性行为

作者：魏斌大连医科大学

学位级别：硕士

背景:恶性肿瘤的早期淋巴道转移致患者死亡率高、预后差,其发生机制一直是肿瘤学的研究难题。膜联蛋白A5（Annexin a5,Anxa5）是膜联蛋白家族（Annexins）成员,为Ca2+依赖性磷脂结合蛋白。多项研究表明,Anxa5异常表达与肿瘤发生发展、... 详细信息

背景:恶性肿瘤的早期淋巴道转移致患者死亡率高、预后差,其发生机制一直是肿瘤学的研究难题。膜联蛋白A5（Annexin a5,Anxa5）是膜联蛋白家族（Annexins）成员,为Ca2+依赖性磷脂结合蛋白。多项研究表明,Anxa5异常表达与肿瘤发生发展、转移、耐药性等密切相关。本课题组前期采用蛋白质组学和基因芯片发现Anxa5在小鼠肝癌高淋巴道转移力hca-f细胞中高表达,并通过siRNA干扰技术下调Anxa5在hca-f细胞中的表达,获得两株下调率不同的单克隆细胞株,且Anxa5下调抑制hca-f细胞的增殖能力。以上结果提示Anxa5可能是潜在的促进肝癌淋巴道转移的分子。目的:1、探究Anxa5稳定下调对hca-f细胞侵袭、迁移、粘附能力的影响;2、探讨Anxa5调控hca-f细胞侵袭、迁移、增殖、粘附的分子机制,为肿瘤转移治疗提供理论基础和作用靶点。方法:1、实时定量PCR（qRT-PCR）和Western blot检测单克隆细胞株hca-f-shRNA1和hca-f-shRNA2的Anxa5下调效率;2、Transwell小室和淋巴结原位杂交法检测Anxa5下调对hca-f细胞体外迁移、侵袭、粘附能力的影响;3、qRT-PCR和Western blot检测Anxa5下调对增殖及侵袭、迁移相关分子c-jun、JNK、ERK、p38MAPK、AKT、MEK、E-cadherin表达变化的影响;4、Western blot检测Anxa5下调对hca-f细胞在ERK1/2抑制剂PD98059作用后p-c-jun（Ser73）及E-cadherin表达的影响。结果:1、与hca-f-shControl相比,两株单克隆细胞hca-f-shRNA1和hca-f-shRNA2的mRNA水平下调率分别为72.3%和97.1%,蛋白水平下调率分别为43.9%和99.7%;2、与hca-f-shControl相比,hca-f-shRNA2细胞的迁移和侵袭分别降低了50.71%和49.84%（p＜0.05）,而hca-f-shRNA1细胞的迁移和侵袭能力无明显变化（p＞0.05）;3、与hca-f-shControl相比,hca-f-shRNA2细胞的淋巴结粘附能力显著降低了61.71%（p＜0.01）;4、Anxa5下调使p-ERK2的表达降低了92.7%（p＜0.01）,而对p-ERK1、JNK、p38MAPK、AKT、MEK无影响（p＞0.05）。5、Anxa5下调使p-c-jun（Ser73）表达降低了68.3%（p＜0.05）;6、Anxa5下调使E-cadherin在mRNA和蛋白水平分别升高了253.4%（p＜0.05）和808.0%（p＜0.001）;6、PD98059明显抑制hca-f-shControl和hca-f-shRNA2细胞p-ERK和p-c-jun（Ser73）的表达,同时显著促进hca-f-shControl细胞E-cadherin的表达,但对hca-f-sh RNA2细胞中E-cadherin表达无明显影响。结论:1、Anxa5下调到一定程度才可以抑制hca-f细胞的体外侵袭和迁移能力;2、Anxa5下调抑制hca-f细胞的体外淋巴结黏附能力,以此提示Anxa5下调可能会抑制hca-f细胞的体内淋巴结转移能力;3、Anxa5下调通过抑制ERK而不是JNK,抑制p-c-jun（Ser73）的表达,以此来抑制hca-f细胞的体外增殖能力;4、Anxa5下调通过抑制ERK促进E-cadherin的表达,以此来抑制hca-f细胞的迁移和侵袭能力;5、Anxa5通过ERK通路调控小鼠肝癌hca-f细胞恶性行为。

关键词： Anxa5 hca-f细胞淋巴道转移 ERK c-Jun E-cadherin

奥曲肽温敏凝胶对hca-f细胞增殖及凋亡的影响及其在实体瘤内滞留时间的研究

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奥曲肽温敏凝胶对Hca-F细胞增殖及凋亡的影响及其在实体瘤内滞留...

作者：于愫大连医科大学

学位级别：硕士

目的:目前奥曲肽治疗肿瘤的作用明确,奥曲肽毒副作用小,但是其半衰期短。本实验将奥曲肽加入一种新型的药物载体泊洛沙姆407温敏凝胶（Poloxamer 407 thermosensitive gel,P407）中,制备出奥曲肽泊洛沙姆407温敏凝胶（OCT-poloxamer 407... 详细信息

目的:目前奥曲肽治疗肿瘤的作用明确,奥曲肽毒副作用小,但是其半衰期短。本实验将奥曲肽加入一种新型的药物载体泊洛沙姆407温敏凝胶（Poloxamer 407 thermosensitive gel,P407）中,制备出奥曲肽泊洛沙姆407温敏凝胶（OCT-poloxamer 407 thermosensitive gel,OCT-P407）缓释制剂,体外实验研究奥曲肽温敏凝胶对小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移细胞株（hca-f）增殖、凋亡的影响,体内实验观察奥曲肽温敏凝胶在小鼠hca-f细胞实体瘤腔内的滞留时间,旨在为肝癌晚期患者寻求一种瘤内注射的奥曲肽缓释制剂。方法:1、采用动力搅拌法将奥曲肽与泊洛沙姆407温敏凝胶制成奥曲肽温敏凝胶;2、采用四甲基偶氮唑盐还原法（MTT）观察分别含奥曲肽浓度0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml的奥曲肽温敏凝胶作用24小时后对肝癌hca-f细胞株增殖的影响,同时观察含奥曲肽浓度为20μg/ml的奥曲肽温敏凝胶组与相同浓度的奥曲肽溶液组在作用12小时、24小时、48小时后对肝癌hca-f细胞株增殖的影响;3、采用AnnexinV-fITC/PI双染色结合流式细胞术（flowcytometry,fCM）检测含奥曲肽浓度为20μg/ml的奥曲肽温敏凝胶组与相同浓度的奥曲肽溶液组分别在作用上述时间后对肝癌hca-f细胞株凋亡的影响;4、采用倒置显微镜观察肝癌hca-f细胞形态学的变化;5、建立小鼠移植瘤模型,（1）亚甲蓝溶液分别与温敏凝胶和生理盐水混合并分别在彩超介导下注入小鼠移植瘤腔内,观察注药3分钟及24小时后局部皮肤染色及24小时后瘤内染色情况;（2）向小鼠瘤腔内分别注射奥曲肽温敏凝胶和奥曲肽溶液,通过高效液相色谱法检测注药12小时、24小时、48小时后各组瘤腔内奥曲肽的含量,从而考察各组奥曲肽在实体瘤腔内的滞留时间。结果 1、体外抑制肝癌hca-f细胞增殖实验:奥曲肽温敏凝胶对肝癌hca-f细胞有明显的抑制作用,药物作用24小时后,随着所含奥曲肽浓度的增加,奥曲肽温敏凝胶对肝癌hca-f细胞的抑制作用增强（P＜0.05）;含奥曲肽浓度为20μg/ml的奥曲肽温敏凝胶与同浓度奥曲肽溶液,均随着与肝癌hca-f细胞作用时间的延长,对肝癌hca-f细胞的抑制作用增强,前者的抑制作用更强（P＜0.05）。 2、体外诱导肝癌hca-f细胞凋亡实验:奥曲肽温敏凝胶与奥曲肽溶液有诱导肝癌hca-f细胞凋亡的作用,且作用随着与hca-f细胞接触时间的延长而增强;前者的作用更强。 3、肝癌细胞形态学的观察:奥曲肽温敏凝胶作用hca-f细胞48小时后,可见细胞形态发生改变,由圆形变成不规则形状,细胞聚集成团,折光性变弱,染色质边集。 4、瘤腔内药物滞留时间的考察:与亚甲蓝溶液组比较,亚甲蓝温敏凝胶组局部皮肤染色明显减轻,24小时后瘤内染色仍然明显。与奥曲肽溶液组相比较,奥曲肽温敏凝胶组12小时检测出的奥曲肽含量明显增加（P＜0.05）;随着时间的延长,两组检测的奥曲肽含量逐渐减少,奥曲肽溶液组于24小时已检测不出奥曲肽的含量,而奥曲肽温敏凝胶组48小时仍可检测出其含量。结论 1、奥曲肽温敏凝胶有抑制肝癌hca-f细胞增殖的作用,该作用随着奥曲肽温敏凝胶中所含奥曲肽浓度的增加及其与肝癌细胞接触时间的延长而增强;且与奥曲肽溶液相比较,奥曲肽温敏凝胶的作用更强。 2、奥曲肽温敏凝胶有诱导肝癌hca-f细胞凋亡的作用,该作用随着奥曲肽温敏凝胶与肝癌细胞接触时间的延长而增强;且与奥曲肽溶液相比较,奥曲肽温敏凝胶的作用更强。 3、奥曲肽温敏凝胶较奥曲肽溶液在小鼠实体瘤腔内的滞留时间延长,具有缓释作用。

关键词：奥曲肽温敏凝胶泊洛沙姆407 小鼠肝癌 hca-f细胞

体外培养条件下小鼠肝癌细胞株hca-f L-选择蛋白表达与淋巴道转移能力的变化

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体外培养条件下小鼠肝癌细胞株Hca-F L-选择蛋白表达与淋巴道转移...

作者：宫剑大连医科大学

学位级别：硕士

肿瘤性疾病是威胁人类健康的三大杀手之一,其中,恶性肿瘤的病人治愈最低,平均生存时间最短。而恶性肿瘤与良性肿瘤的区别在于,前者通常发生转移,而后者不发生转移。因此,研究肿瘤的转移机制具有重要意义。选择蛋白作为细胞粘附分子中的... 详细信息

肿瘤性疾病是威胁人类健康的三大杀手之一,其中,恶性肿瘤的病人治愈最低,平均生存时间最短。而恶性肿瘤与良性肿瘤的区别在于,前者通常发生转移,而后者不发生转移。因此,研究肿瘤的转移机制具有重要意义。选择蛋白作为细胞粘附分子中的一个家族,包括L-选择蛋白、P-选择蛋白和E-选择蛋白,它们分别是存在于激活的血管内皮细胞、血小板和白细胞表面的黏附分子。近年来已有大量的证据表明,选择蛋白在肿瘤转移的过程中,可以介导经血液转移的肿瘤细胞与血小板及血管内皮的粘附,促进肿瘤细胞的血道转移与扩散。L-选择蛋白在大部分白细胞表面持续表达,如嗜中性粒细胞、单核细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞,以及大部分的T和B淋巴细胞,其正常功能是作为淋巴细胞到达外周淋巴结的归巢受体。在T细胞杂交瘤中,转移到周围淋巴结的肿瘤细胞通常都有强的L-选择蛋白的表达。在非何杰金淋巴瘤中,肿瘤细胞向周围淋巴结扩散被认为是肿瘤细胞扩散的重要环节,转移到淋巴结中定植地非何杰金淋巴瘤细胞表面有L-选择蛋白的表达,转移到周围组织中定植的淋巴瘤细胞表面则几乎没有L-选择蛋白的表达。Qian等使用了致癌的转基因鼠模型,通过注射肿瘤细胞,发现表达L-选择蛋白的肿瘤细胞才可以转移到周围淋巴结。Borsig等研究发现,内源性表达于白细胞的L-选择蛋白能

关键词： L-选择蛋白肿瘤转移 hca-f细胞

小鼠肝癌细胞hca-f对顺铂和吡柔比星的反应性及机制研究

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中国处方药 2016年第8期14卷 24-25页

作者：尹立施广霞攀枝花市中心医院骨科四川攀枝花617000 大连医科大学病理生理教研室辽宁大连116044

目的探讨小鼠肝癌细胞hca-f对顺铂(CDDP)和吡柔比星(THP)的反应性及机制研究。方法小鼠肝癌细胞hca-f细胞解冻后于小鼠腹腔内接种并传代,MTT法测定细胞的生长抑制,流式细胞数检测细胞凋亡率,Western blot法测定蛋白表达,用SPSS13.0统计... 详细信息

目的探讨小鼠肝癌细胞hca-f对顺铂(CDDP)和吡柔比星(THP)的反应性及机制研究。方法小鼠肝癌细胞hca-f细胞解冻后于小鼠腹腔内接种并传代,MTT法测定细胞的生长抑制,流式细胞数检测细胞凋亡率,Western blot法测定蛋白表达,用SPSS13.0统计学软件进行处理。结果不同浓度的CDDP和THP对小鼠肝癌细胞hca-f生长均有抑制作用,CDDP(3μg/m L)和THP(1.25μmol/L)处理hca-f细胞后,细胞坏死率增加,而细胞凋亡率不大,经THP处理后Nf-κB表达明显上调,而CDDP处理后表达不明显。结论 CDDP和THP对hca-f细胞生长均有明显抑制作用,二者均可导致hca-f细胞坏死,但细胞凋亡与对照组相比并无较大差别。hca-f是否对CDDP和THP诱导的细胞凋亡抵抗有待深入研究。

关键词： hca-f细胞顺铂吡柔比星机制研究

姜黄素PLGA-TPGS纳米粒在小鼠体内的药效学研究

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大连医科大学学报 2015年第2期37卷 124-128页

作者：孙晓红李德壮高萌郭佳毅赵丹凤巩童童迟焙元刘航田燕中国人民解放军第210医院药剂科辽宁大连116021 大连医科大学七年制2010级辽宁大连116044 大连医科大学药学院辽宁大连116044

目的考察姜黄素PLGA-TPGS纳米粒(curcumin-loaded PLGA-TPGS nanoparticles,CPTN)体内对荷小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移细胞hca-f实体瘤的抑制作用。方法建立荷hca-f细胞的小鼠实体瘤模型,尾静脉分别注射生理盐水、空白纳米粒、姜黄素溶... 详细信息

目的考察姜黄素PLGA-TPGS纳米粒(curcumin-loaded PLGA-TPGS nanoparticles,CPTN)体内对荷小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移细胞hca-f实体瘤的抑制作用。方法建立荷hca-f细胞的小鼠实体瘤模型,尾静脉分别注射生理盐水、空白纳米粒、姜黄素溶液、5-氟尿嘧啶溶液和CPTN,7 d后取出实体瘤,测量瘤径、瘤重、测定瘤内药量并进行HE染色,全面评价CPTN对肝癌实体瘤的治疗效果。结果体内药效学实验中CPTN组和5-氟尿嘧啶溶液组的瘤体体积增长量和瘤重明显低于生理盐水(空白对照)组,差异具有显著性意义(P细胞丢失细胞核,破碎成碎片,边缘不完整,表明其治疗肿瘤效果最佳。结论 CPTN在体内对荷hca-f细胞的小鼠实体瘤有一定的抑制作用,且治疗效果好于5-氟尿嘧啶注射液。

关键词：姜黄素纳米粒 hca-f细胞实体瘤

脂蟾毒配基PLGA-TPGS纳米粒对小鼠肝癌异位移植瘤抑制作用的研究

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中国医院药学杂志 2017年第14期37卷 1388-1392页

作者：徐红张成鸿褚秋辰贾续东印紫夷严迪高萌田燕大连医科大学基础医学院辽宁大连116044 大连医科大学药学院辽宁大连116044 大连医科大学

目的:考察脂蟾毒配基乙交酯丙交酯共聚物-维生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯(PLGA-TPGS)纳米粒(RPTN)在体内对荷腹水型肝癌高淋巴道转移细胞hca-f小鼠异位移植实体瘤的抑制作用。方法:为保证体内给药的安全性和确定给药剂量,考察RPTN和脂蟾... 详细信息

目的:考察脂蟾毒配基乙交酯丙交酯共聚物-维生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯(PLGA-TPGS)纳米粒(RPTN)在体内对荷腹水型肝癌高淋巴道转移细胞hca-f小鼠异位移植实体瘤的抑制作用。方法:为保证体内给药的安全性和确定给药剂量,考察RPTN和脂蟾毒配基溶液(RS)在小鼠体内静脉给药途径的半数致死量(LD50)。建立荷hca-f细胞小鼠肝癌异位移植实体瘤模型后分为6组,分别为空白对照组、空白纳米粒组、5-氟尿嘧啶溶液(fS)组、RS组、脂蟾毒配基乙交酯丙交酯共聚物(PLGA)纳米粒(RPN)组、RPTN组,尾静脉给药,每天1次,连续给药7 d;在停药次日,处死小鼠后剥离实体瘤,称重并测量实体瘤体积,根据公式计算实体瘤体积增长量和抑瘤率;将实体瘤固定后进行常规石蜡切片包埋,苏木素&曙红(H&E)染色观察,全面评价RPTN在小鼠体内的抑瘤效果。结果:RPTN和RS小鼠静脉给药LD50分别为38.2 mg·kg-1和18.9 mg·kg-1,表明RPTN在一定程度上可减轻RBG在小鼠体内的毒性作用,相比RS更安全。小鼠体内抗肿瘤试验中给药7 d后,fS组、RPN组、RPTN组的实体瘤体积增长量与空白对照组相比明显减小(PfS组(37.19%)、RS组(31.60%)的抑瘤率。H&E染色后镜下观察的结果也表明RPTN组对荷hca-f细胞小鼠肝癌异位实体瘤抑制作用效果最好。结论:与RPN、RS和fS相比,在抑制荷hca-f细胞小鼠肝癌异位移植实体瘤试验中RPTN具有良好的抗肿瘤作用。

关键词：脂蟾毒配基纳米粒小鼠 hca-f细胞肝癌异位移植实体瘤

基于小鼠LEC/hca-f模型的fucoidan抗淋巴道转移机制研究

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基于小鼠LEC/Hca-F模型的Fucoidan抗淋巴道转移机制研究