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姜黄素逆转人结肠癌耐奥沙利铂细胞株hct-116/L-OHP的耐药性

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中国实验方剂学杂志 2019年第20期25卷 63-69页

作者：马好孔德松倪敏蒋泽砚陈正鑫顾莅冰樊志敏南京中医药大学南京210029 南京中医药大学第三附属医院南京210001

目的:构建人结肠癌奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)耐药细胞株hct-116/L-OHP,观察姜黄素(curcumin,Cur)对其耐药的逆转作用,并探讨其可能的耐药机制。方法:采用浓度梯度递增法,逐步提高作用于亲代人结肠癌细胞hct-116的L-OHP浓度,建立耐L-... 详细信息

目的:构建人结肠癌奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)耐药细胞株hct-116/L-OHP,观察姜黄素(curcumin,Cur)对其耐药的逆转作用,并探讨其可能的耐药机制。方法:采用浓度梯度递增法,逐步提高作用于亲代人结肠癌细胞hct-116的L-OHP浓度,建立耐L-OHP的细胞株hct-116/L-OHP;通过cell counting kit-8(CCK-8)法检测L-OHP和Cur对hct-116以及hct-116/L-OHP细胞的细胞毒性,观察Cur能否逆转耐药;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测耐药相关蛋白的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测相关mRNA的改变。结果:成功建立了耐L-OHP的人结肠癌耐药细胞株并命名为hct-116/L-OHP,其耐药指数为12. 6。与hct-116细胞株比较,hct-116/L-OHP细胞株中切除修复交叉互补基因1(ERCC1)蛋白及mRNA表达水平显著上升(P hct-116/L-OHP细胞株具有稳定的耐药性,其耐药机制可能为ERCC1的表达上调,而导致Bcl-2,GST-π,MRP,P-gp,Survivin等相关蛋白表达上调,使肿瘤细胞获得耐药性。姜黄素对hct-116/L-OHP的耐药性具有逆转作用,其作用机制可能是通过降低ERCC1的表达,从而下调Bcl-2,GST-π,MRP,P-gp,Survivin等耐药相关mRNA及蛋白的表达,增加肿瘤对L-OHP的敏感性,从而逆转肿瘤细胞的耐药。

关键词：结直肠肿瘤耐药性奥沙利铂姜黄素细胞 hct-116

新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂FK228对人结肠癌细胞hct-116的体内外抑制作用

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中华肿瘤杂志 2013年第11期35卷 814-818页

作者：徐东波望运玲岳源武双婵丁虹武汉大学药学院药理实验室 430072 湖北省宜昌市第二人民医院药剂科

目的探讨新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂FK228对人结肠癌细胞hct-116的体内外抑制作用。方法采用不同浓度的FK228和氟尿嘧啶（5-Fu）处理hct-116细胞24、48、72h，采用CCK．8法观察比较FK228对结肠癌hct-116细胞的生长抑制作用。体内实验构... 详细信息

目的探讨新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂FK228对人结肠癌细胞hct-116的体内外抑制作用。方法采用不同浓度的FK228和氟尿嘧啶（5-Fu）处理hct-116细胞24、48、72h，采用CCK．8法观察比较FK228对结肠癌hct-116细胞的生长抑制作用。体内实验构建BALB／c裸鼠皮下移植瘤模型，腹腔注射FK228（5mg／kg）和5-Fu（50mg／kg），比较FK228对hct-116裸鼠移植瘤的生长抑制作用及血液、肝、。肾毒性。结果FK228对结肠癌细胞hct-116具有明显的生长抑制作用，且具有时间和剂量依赖性，其48h的IC50为12．05ng／ml，而5-Fu的IC50仅为18．92μg/ml。给药20d后，FK228组裸鼠肿瘤体积为（139．71±44．54）mm^3，显著低于5-Fu组[（282．28±58．81）mm^3，P〈0．01]和模型组[（520．65±39．73）mm^3，P〈0．01]；FK228组裸鼠肿瘤重量为（0．07±0．02）g，显著低于5-Fu组[（0．20±0．08）g，P〈0．01]。5-Fu组和FK228组的肿瘤抑制率分别为45．8％和73．2％（P〈0．01）。5-Fu组和FK228组的丙氨酸转氨酶（ALT）水平显著高于模型组和空白组（均P〈0．01），而FK228组的血尿素氮（BUN）水平与空白组、模型组的差异无统计学意义（均P〉0．05），5-Fu组的BUN水平明显高于模型组和空白组（均P〈0．01）。5-Fu组裸鼠的白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血红蛋白（Hb）和血小板（PLT）水平显著低于模型组（均P〈0．05），而FK228组裸鼠仅WBC水平与模型组差异有统计学意义（P〈0．05）。HE染色结果显示，FK228组肝细胞局部出现纤维变性，并伴有血细胞和炎性细胞浸润；肾脏出现了轻微肾小管水肿，其他形态正常。5-Fu组肝细胞出现了局部大量坏死、变形，一部分肝细胞水肿变形；肾脏出现了明显的肾小球和肾小管变形、坏死，管壁变薄。结论与5-Fu比较，FK228可在体内外明显抑制hct-116细胞的生长，对肾和血液系统的毒性不明显，具有较大的研究意义和临床价值。

关键词：结肠肿瘤 hct-116 FK228 药理作用药物毒性

鸦胆子苦醇通过RhoA/ROCK1信号通路抑制人结直肠癌细胞hct-116的侵袭和迁移

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中国药理学通报 2021年第10期37卷 1360-1365页

作者：卢睿瑾杜玉梅黄世莹唐加峰张滔何爽徐航陈地龙冉建华李静重庆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室重庆400016 重庆医科大学公共卫生与管理学院重庆400016 重庆三峡医药高等专科学校重庆404120 重庆医科大学基础医学院解剖学教研室重庆400016

目的探讨鸦胆子苦醇(brusatol,BRU)对结直肠癌细胞hct-116侵袭和迁移的影响和可能的作用机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度的BRU对hct-116细胞增殖能力的影响;划痕和Transwell实验检测BRU对hct-116细胞迁移能力和侵袭能力的影响;Wester... 详细信息

目的探讨鸦胆子苦醇(brusatol,BRU)对结直肠癌细胞hct-116侵袭和迁移的影响和可能的作用机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度的BRU对hct-116细胞增殖能力的影响;划痕和Transwell实验检测BRU对hct-116细胞迁移能力和侵袭能力的影响;Western blot检测BRU和ROCK抑制剂(Y27632)对hct-116细胞中迁移侵袭相关蛋白MMP2、MMP9和RhoA、ROCK1表达的影响。结果CCK-8结果显示,经过BRU(0、2.5、5、10、20、40、80、160、320 nmol·L^(-1))处理hct-116细胞24、48、72 h后,BRU对hct-116细胞的抑制率明显升高,并且呈浓度和时间依赖性;划痕和Transwell实验结果显示,BRU能明显抑制hct-116细胞的迁移和侵袭能力;Western blot结果表明,BRU和Y27632都能够明显减少hct-116细胞中的MMP2、MMP9、RhoA和ROCK1蛋白的表达。结论BRU可能通过RhoA/ROCK1通路抑制结直肠癌细胞hct-116的迁移和侵袭。

关键词：鸦胆子苦醇结肠癌 hct-116 迁移侵袭 RhoA/ROCK1

c-Fos对结直肠癌细胞hct-116影响

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中国公共卫生 2014年第9期30卷 1171-1172页

作者：刘玉辉张海波马楠陈晓夏徐龙刘兆喆谢晓冬沈阳军区总医院肿瘤科辽宁沈阳110001

目的探讨AP-1转录因子组成成分之一c-Fos对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响。方法将合成的siRNA转染入hct-116细胞中,实时定量PCR法检测其中c-Fos的含量;利用四甲基偶氮唑盐(MTT)显色法检测cFos被敲低后对细胞生长增殖的影响;Etoposide诱... 详细信息

目的探讨AP-1转录因子组成成分之一c-Fos对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响。方法将合成的siRNA转染入hct-116细胞中,实时定量PCR法检测其中c-Fos的含量;利用四甲基偶氮唑盐(MTT)显色法检测cFos被敲低后对细胞生长增殖的影响;Etoposide诱导细胞凋亡,溴化丙啶(PI)染色、流式细胞仪检测细胞凋亡的改变。结果 siRNA转染结直肠癌细胞hct-116 48 h后,与对照组相比,c-Fos的含量降低约50%;MTT实验中RNAi组细胞增殖速度时间增加,加入etoposide(100μmol/L)12 h后,对照组细胞凋亡率为(27.6±2.07)%,RNAi组细胞的凋亡率为(39.1±4.84)%,凋亡率降低。结论 c-Fos在hct-116细胞中发挥着促进细胞生长和抑制凋亡的作用。

关键词： c-Fos RNAi hct-116 细胞增殖细胞凋亡

吴茱萸碱对人结肠癌hct-116细胞体外增殖和迁移的影响及其作用机制的研究

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吴茱萸碱对人结肠癌HCT-116细胞体外增殖和迁移的影响及其作用机...

作者：赵绿翠重庆医科大学

学位级别：硕士

结肠癌作为一种常见的胃肠道恶性肿瘤,其发病率居全球常见恶性肿瘤的第三位。目前临床上治疗人结肠癌的首选方法为化疗,尽管化疗对癌细胞有直接的杀灭作用,但也会对正常细胞造成一定的损伤作用且易于复发,导致部分病人因承受不了化疗的... 详细信息

结肠癌作为一种常见的胃肠道恶性肿瘤,其发病率居全球常见恶性肿瘤的第三位。目前临床上治疗人结肠癌的首选方法为化疗,尽管化疗对癌细胞有直接的杀灭作用,但也会对正常细胞造成一定的损伤作用且易于复发,导致部分病人因承受不了化疗的痛苦而放弃治疗甚至因化疗致死。因而寻找新的低毒高效的抗结肠癌药物迫在眉睫。吴茱萸碱(Evodiamine, EVO)是从吴茱萸干燥果实中提取的生物碱,近年来的研究表明其对多种肿瘤细胞具有明显的抗肿瘤药物活性,但缺乏对人结肠癌hct-116细胞的作用及相关机制的报道。磷酸葡萄糖异构酶(Glucose Phospho Isomerase, PGI)广泛分布于人体各组织,催化6-磷酸葡萄糖与6-磷酸果糖之间的异构化,是糖酵解和糖生成途径的关键酶。PGI主要在细胞内发挥作用,其在细胞外作为一种白行分泌的细胞因子被称作自分泌运动因子(Autocrine Motility Factor, AMF)。 AMF与其自身表面的受体(Autocrine Motility Factor Receptor, AMFR)在多种肿瘤组织中表达上调,尤其在侵袭性或转移性肿瘤(如胃肠道肿瘤和乳腺癌)中更为明显。AMF以自分泌的形式与AMFR结合,通过细胞信号转导引起肿瘤细胞增殖和血管生成,PGI/AMF的下调可以减少肿瘤的生长和转移[5]aMMPs家族蛋白也参与肿瘤的迁移过程。Wen等报道[6],PGI可诱导MMPs家族中MMP-3基因的转录和翻译。另外也有报道称,磷酸化STAT3可以直接与MMP-3启动子结合从而调节核内MMP-3的合成。由此推断：既然PGI和STAT3都与MMP-3有着密切关系,且MMP-3作为PGI和STAT3共同的下游蛋白存在,因此,我们提出假设：PGI在STAT3和MMP-3所致的肿瘤迁移中起到至关重要的作用?目的本文以人结肠癌hct-116细胞株为研究对象,观察吴茱萸碱对细胞增殖和迁移的影响。初次尝试探索EVO对hct-116细胞中PGI、STAT3和MMP-3的作用,并探讨其可能的作用机制,为临床应用吴茱萸碱治疗结肠癌提供实验依据和线索。方法体外培养人结肠癌hct-116细胞株分别加入吴茱萸碱1.5,3.0,6.0,12 μmol·L-1继续培养24,48和72 h, CCK-8法检测吴茱萸碱对hct-116细胞生存活性的影响;采用FCM (Flow cytometry)法检测EVO对hct-116细胞株的凋亡和周期的影响;倒置显微镜镜下观察细胞形态变化;荧光显微镜观察Hochest染色后细胞凋亡的形态学改变;Western Blot检测细胞周期蛋白CyclinAl的表达及凋亡相关蛋白P53, Bax, Bcl-2, Cleved caspae-3的表达;用ELISA法检测不同浓度EVO诱导hct-116细胞6h后,分泌到胞外上清液中AMF的含量变化;用Transwell法检测EVO和PGI对hct-116细胞体外迁移的影响;用Western Blot检测6 μmol·L-1 EVO诱导hct-116细胞不同时间后,对细胞中PGI/AMF,JAK2/STAT3信号通路和MMP-3蛋白的影响,并通过设置JAK的特异性抑制剂AG490处理组和EVO处理siPGI(hct-116)组来探讨PGI/AMF, JAK2/STAT3, MMP-3三者之间的上下游关系。结果1.CCK-8法结果显示：EVO浓度分别为1.5,3.0,6.0 μmol·L-1作用hct-116细胞24,48和72 h后,hct-116细胞的增殖受到明显抑制(Phct-116细胞48 h后使细胞周期阻滞在S期和G2/M期,S期的周期比例由对照组的(13.91±6.95)%增加至(39.70±11.74)%;G2/M期的周期比例由对照组的(10.01±1.28)%增加至(41.85±19.76)%(Phct-116细胞6h后,培养上清液中的AMF含量随着EVO浓度的增加而减少,但无统计学意义。8. Trans well结果显示：与对照组比较,PGI诱导组使得hct-116细胞穿

关键词： EVO hct-116 增殖迁移

CDX2、COX-2在结直肠癌及SW480和hct-116细胞株中的表达及相互关系

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CDX2、COX-2在结直肠癌及SW480和HCT-116细胞株中的表达及相互关系

作者：方三高兰州大学

学位级别：硕士

目的:探讨结直肠癌组织中CDX2和COX-2的表达与临床病理因素之间的关系,评价二者在判断结直肠癌预后中的价值;体外实验研究CDX2对人结肠癌细胞株SW480和hct-116细胞增殖、凋亡、自噬和COX-2蛋白表达的影响和作用机制。方法:采用免疫组... 详细信息

目的:探讨结直肠癌组织中CDX2和COX-2的表达与临床病理因素之间的关系,评价二者在判断结直肠癌预后中的价值;体外实验研究CDX2对人结肠癌细胞株SW480和hct-116细胞增殖、凋亡、自噬和COX-2蛋白表达的影响和作用机制。方法:采用免疫组织化学(SP)法检测52例2张共208个位点的结直肠癌组织芯片中CDX2和COX-2蛋白的表达,分析其与临床病理资料之间的关系;应用MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪(FCM)分析细胞周期和凋亡;光镜下HE和PAS染色观察CDX2处理48小时后细胞形态学改变;透射电镜(TEM)观察细胞凋亡和自噬的超微结构变化;免疫组化(IHC)检测CDX2处理后细胞中COX-2蛋白的表达。结果:1、与相对应的正常粘膜相比,结直肠癌组织中CDX2阳性表达率显著降低,其表达与结直肠癌组织学类型、分化程度、TNM分期、浸润深度、淋巴结转移及远处转移密切相关(P＜0.05),而与患者年龄、性别、肿瘤大小、生长部位无关;COX-2的表达与肿瘤分化程度、TNM分期、浸润深度、淋巴转移有关(P＜0.05),而与其它因素无关;CDX2蛋白与COX-2蛋白在结直肠癌组织中的表达呈负相关(r=-0.832,P＜0.001);2、在5 mg/L-40 mg/L的剂量范围内,CDX2可抑制SW480和hct-116细胞的生长,其抑制作用呈时间和剂量依赖性;3、FCM结果表明不同剂量(2.5,5,10,20和40 mg/L)的CDX2作用48 h后,SW480和hct-116细胞周期发生改变,细胞G/G期相对延长,S期和G期缩短,凋亡率增高,与对照组相比具有统计学意义(P＜0.05);4、在HE和PAS染色的细胞爬片上光镜发现CDX2能够诱导肿瘤细胞向成熟方向分化,特别是对分化程度低的hct-116细胞株。TEM检测到细胞凋亡和自噬的变化,两种形态学改变可交叉重叠出现;5、IHC显示COX-2在SW480和hct-116细胞中均有表达,经10 mg/L CDX2作用48 h,细胞内COX-2蛋白表达率较对照组下降,具有统计学意义(P＜0.05)。结论:CDX2和COX-2的表达与结直肠癌生物学特性和预后密切相关,联合检测CDX2和COX-2有助于临床评估患者病情、判断预后。CDX2能够降低细胞增殖率,改变其生长周期,诱导细胞分化成熟,可能通过下调COX-2的表达而抑制SW480和hct-116细胞增殖并促进其凋亡,诱导凋亡和/或自噬可能是其抗肿瘤的主要机制之一。

关键词： CDX2 COX-2 结直肠癌组织芯片 SW480 hct-116 细胞凋亡细胞自噬

超级增强子驱动EphA2影响hct-116细胞生物学特性的研究

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超级增强子驱动EphA2影响HCT-116细胞生物学特性的研究

作者：刘铭哈尔滨工业大学

学位级别：硕士

超级增强子(Super Enhancers,SEs)是基因组上一段具有高度活性和细胞类型特异性的DNA序列,通过调节细胞类型特异性基因的时空表达从而决定细胞的命运。研究表明,超级增强子不仅可以驱动非编码RNA(non-coding RNAs,nc RNAs)的转录表达,... 详细信息

超级增强子(Super Enhancers,SEs)是基因组上一段具有高度活性和细胞类型特异性的DNA序列,通过调节细胞类型特异性基因的时空表达从而决定细胞的命运。研究表明,超级增强子不仅可以驱动非编码RNA(non-coding RNAs,nc RNAs)的转录表达,间接调节生物功能,而且在肿瘤的发生和发展过程中起关键作用。在前期研究中识别并鉴定了一个在多种肿瘤中具有活性的新型超级增强子EphA2-SE,但其组分增强子在结肠癌中的具体作用机制还未知。因此,本课题通过建立EphA2-SE组分增强子的敲除细胞系进一步探究其在结肠癌发生发展的功能。首先本课题利用CRISPR/Cas9基因编辑技术在hct-116细胞中构建EphA2-SE组分增强子缺失的敲除细胞系,并通过检测发现没有发生脱靶效应。实时定量PCR、Western Blot以及免疫荧光实验的结果显示EphA2-SE及其组分增强子的缺失能够降低靶基因EphA2在hct-116细胞中的表达。而MTT比色法、细胞平板克隆实验以及Transwell实验的结果表明EphA2-SE及其组分增强子的缺失能够抑制hct-116细胞的增殖、迁移和侵袭能力。综上所述,EphA2-SE及其组分增强子通过影响靶基因EphA2的表达从而介导结肠癌hct-116细胞的生物学特性,为进一步阐明超级增强子在肿瘤发生发展中的功能奠定良好的基础。

关键词： hct-116 超级增强子 EphA2 CRISPR/Cas9

白术内酯Ⅲ对人结肠癌hct-116细胞凋亡的诱导作用研究

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白术内酯Ⅲ对人结肠癌HCT-116细胞凋亡的诱导作用研究

作者：李小芳西南医科大学

学位级别：硕士

目的:白术(Atractylodes)来源于菊科植物白术干燥根,主产于浙江、安徽、湖北、湖南等地,其性味甘、苦、温,具有健脾益气、燥湿利水、止汗、安胎等功效。白术内酯Ⅲ(AtractylenolideⅢ)是白术的主要成分之一,许多研究发现,白术内酯Ⅲ具... 详细信息

目的:白术(Atractylodes)来源于菊科植物白术干燥根,主产于浙江、安徽、湖北、湖南等地,其性味甘、苦、温,具有健脾益气、燥湿利水、止汗、安胎等功效。白术内酯Ⅲ(AtractylenolideⅢ)是白术的主要成分之一,许多研究发现,白术内酯Ⅲ具有明显的抗炎、抗肿瘤作用,但其能否抑制结肠癌细胞的增殖,能否诱导肿瘤细胞凋亡尚不清楚。本研究以人结肠癌hct-116细胞作为研究对象,观察白术内酯Ⅲ对该肿瘤细胞增殖的作用,并探讨其对hct-116细胞凋亡的影响及分子机制,旨在阐明其抗肿瘤作用机制,为白术内酯Ⅲ在肿瘤治疗,特别是临床应用于结肠癌的治疗提供科学的实验依据。方法:(1)白术内酯Ⅲ体外抗肿瘤活性筛选:CCK-8法检测不同浓度的白术内酯Ⅲ对人肺癌细胞A549、人肝癌细胞HePG2、肾上腺嗜铬细胞瘤PC12、人胰腺癌细胞Panc-28、人结肠癌细胞hct-116等肿瘤细胞增殖的抑制作用。(2)白术内酯Ⅲ干预浓度及作用时间的筛选:选择一定浓度梯度白术内酯Ⅲ(6.25、12.5、25、50、100、200μmol/L)分别处理hct-116细胞12 h、24 h、48 h,采用CCK-8法检测其细胞增殖的抑制作用,筛选白术内酯Ⅲ的干预浓度及最佳作用时间。(3)白术内酯Ⅲ对hct-116细胞体外抗肿瘤活性的测定:具体将细胞分为阴性对照组、阳性对照组采用0.5μg/mL 5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)、白术内酯Ⅲ组(50、100、200μmol/L)。常规培养肿瘤细胞后,阴性对照组不做处理,阳性对照组采用0.5μg/mL 5-氟尿嘧啶处理24 h,白术内酯Ⅲ组分别采用50、100、200μmol/L浓度的白术内酯Ⅲ处理肿瘤细胞24 h,利用CCK-8法检测结肠癌hct-116细胞增殖的影响。(4)Hoechst 33258染色检测白术内酯Ⅲ对结肠癌hct-116细胞凋亡的影响:将细胞分为阴性对照组、阳性对照组(5-FU,0.5μg/mL)、白术内酯Ⅲ组(50、100、200μmol/L)。常规培养人结肠癌hct-116细胞于六孔板中,阴性对照组不做处理,阳性对照组采用0.5μg/mL 5-FU处理24 h,白术内酯Ⅲ组分别采用50、100、200μmol/L浓度的白术内酯Ⅲ处理细胞24 h,采用Hoechst33258染色对细胞核着色,根据亮蓝色细胞比例分析结肠癌hct-116细胞凋亡变化;(5)Annexin V-FITC流式细胞术分析白术内酯Ⅲ对人结肠癌hct-116细胞凋亡率的影响:将肿瘤细胞分为阴性对照组,阳性对照组(5-FU,0.5μg/mL)白术内酯Ⅲ组(50、100、200μmol/L)。常规培养结肠癌hct-116细胞于六孔板中,阴性对照组不做处理,阳性对照组采用0.5μg/mL 5-FU处理24 h,白术内酯Ⅲ组分别采用50、100、200μmol/L浓度的白术内酯Ⅲ处理肿瘤细胞24 h,按照试剂盒步骤处理细胞,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率以分析各浓度白术内酯对hct-116细胞凋亡作用;(6)RT-PCR测定白术内酯Ⅲ处理人结肠癌hct-116细胞后凋亡相关基因(Bax,Bcl-2,caspase-3,caspase-9)的表达水平:将肿瘤细胞分为阴性对照组、阳性对照组(5-FU,0.5μg/mL)、白术内酯Ⅲ组(50、100、200μmol/L)。常规培养结肠癌hct-116细胞于六孔板中,阴性对照组不做处理,阳性对照组采用0.5μg/mL 5-FU处理24h,白术内酯Ⅲ组分别采用50、100、200μmol/L浓度的白术内酯Ⅲ处理肿瘤细胞24 h,按照试剂说明书步骤处理细胞,采用Bio-rad实时定量PCR仪检测细胞凋亡相关基因的表达水平;(7)Western blot法检测白术内酯Ⅲ处理人结肠癌hct-116细胞后凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9)表达的变化:将肿瘤细胞分为阴性对照组、阳性对照组(5-FU,0.5μg/mL)、白术内酯Ⅲ组(50、100、200μmol/L)。常规培养结肠癌hct-116细胞于六孔板中,阴性对照组不做处理,阳性对照组采用0.5μg/mL 5-FU处理24 h,白术内酯Ⅲ组分别采用50、100、200μmol/L浓度的白术内酯Ⅲ处理肿瘤细胞24 h,按照试剂说明书步骤提取细胞蛋白,电泳、转膜、孵育一抗二抗,最后采用ECL化学发光仪检测PVDF膜上细胞凋亡相关蛋白表达水平,并用Bio-rad ChemiDoc?XRS+凝胶成像系统获取图像,Image J软件分析灰度值。结果:(1)体外抗肿瘤活性筛选:与对照组比较,不同浓度白术内酯Ⅲ(25、50、100、200μmol/L)对HePG2、Panc-28以及A549等肿瘤细胞活力无明显的抑制作用;白术内酯Ⅲ100、200μmol/L浓度干预PC12肿瘤细胞,可轻度

关键词：白术内酯Ⅲ hct-116 凋亡 Bax Bcl-2

姜黄素逆转人结肠癌耐奥沙利铂细胞株hct-116/L-OHP耐药性的研究

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姜黄素逆转人结肠癌耐奥沙利铂细胞株HCT-116/L-OHP耐药性的研究

作者：马好南京中医药大学

学位级别：硕士

目的:体外建立人结肠癌奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)耐药细胞株hct-116/L-OHP,观察姜黄素(curcumin,cur)对其耐药的逆转作用,初探其可能的耐药机制。方法:采取浓度梯度递增法,逐渐缓慢提高L-OHP的浓度,作用于亲代人结肠癌细胞hct-116,... 详细信息

目的:体外建立人结肠癌奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)耐药细胞株hct-116/L-OHP,观察姜黄素(curcumin,cur)对其耐药的逆转作用,初探其可能的耐药机制。方法:采取浓度梯度递增法,逐渐缓慢提高L-OHP的浓度,作用于亲代人结肠癌细胞hct-116,获得了耐L-OHP的细胞株hct-116/L-OHP;通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测L-OHP和cur对hct-116以及hct-1 16/L-OHP细胞的细胞毒性,观察cur能否逆转耐药;流式细胞术检测出细胞的凋亡率和细胞周期分布情况;蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测与耐药相关蛋白的表达,实时荧光定量PCR(Realtime PCR)法检测相关基因的改变。结果:成功建立了耐L-OHP的人结肠癌耐药细胞株并取名为hct-1 16/L-OHP,其耐药指数为12.6。不同浓度的cur(5,10,20,30,40μmol.L-1)作用于hct-116和hct-1 16/L-OHP后,两者抑制率没有明显差异;相较于hct-116,hct-1 16/L-OHP细胞的周期被阻滞于G1期,cur处理后,hct-116/L-OHP细胞被阻滞于S期和G2期;hct-116细胞凋亡率为6.21%,hct-116/L-OHP细胞凋亡率为8.36%,经cur低中高三种浓度处理后的耐药细胞凋亡百分率分别为10.65%、14.55%、18.82%,明显高于未施药组,差别明显(phct-116细胞株比较,hct-116/L-OHP细胞株中切除修复交叉互补基因1(ERCC1)蛋白及基因的表达水平显著上升(Phct-116/L-OHP细胞株具有稳定的耐药特性,耐药细胞较亲本细胞DNA合成受阻,增殖变缓,凋亡增加;其机理可能为ERCC1的表达上调,而导致Bcl-2、GST-π、MRP、P-gp、Survivin等相关蛋白表达上调,使肿瘤细胞获得耐药性。cur对hct-116/L-OHP的耐药特性具有逆转效用,cur作用后的耐药细胞增殖受阻。其作用机制可能是通过降低ERCC1的表达,从而下调Bcl-2、GST-π、MRP、P-gp、Survivin等与耐药有关基因及蛋白的表达量,增加对L-OHP的药敏性,从而逆转癌细胞的耐药特性。

关键词：结直肠肿瘤耐药性奥沙利铂姜黄素细胞 hct-116