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吉林大学学报（医学版） 2002年第2期28卷 144-146页

作者：侯治富高申卜丽莎郑德明王华王维忠王丽颖吉林大学中日联谊医院中心研究室吉林长春130031 吉林大学基础医学院分子生物学教研室

目的 :探讨外源基因 WAF1的转染、表达活性和生物调控作用。方法 :采用脂质体转染技术将外源基因 WAF1转入 hct/ 8细胞 ;经免疫荧光染色和流式细胞仪分别监测外源基因的表达和对细胞分化增殖、细胞凋亡的调控作用。结果 :外源基因 p2 1 ... 详细信息

目的 :探讨外源基因 WAF1的转染、表达活性和生物调控作用。方法 :采用脂质体转染技术将外源基因 WAF1转入 hct/ 8细胞 ;经免疫荧光染色和流式细胞仪分别监测外源基因的表达和对细胞分化增殖、细胞凋亡的调控作用。结果 :外源基因 p2 1 WAF1/CIP1- pc DNA3在 hct/ 8细胞阳性表达为 89.6% ,显著高于空质粒对照和空白对照组 ( P8h后细胞分裂减慢 ,2 4～48h凋亡指数开始增高 ,72 h达到高峰 ,以后逐渐下降。结论 :克隆的外源基因 WAF1具有表达活性及诱导 hct/ 8细胞凋亡的作用 ,揭示

关键词： WAF1基因瞬时转染 hct/8 生物学效应肠癌细胞株

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稳定高效表达p21^(WAF1/CIP1)的hct/8-WAF1细胞株的建立

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吉林大学学报（医学版） 2003年第3期29卷 283-285页

作者：卜丽莎侯睿智杜珍武王维忠吉林大学中日联谊医院中心实验室吉林长春130031 吉林大学临床医学三系

目的 :建立高效、稳定表达 p2 1 WAF1/ CIP1大肠癌细胞株 hct/8- WAF1。方法 :应用阳离子脂质体分别将带有目的基因 WAF1的 pc DNA3及空白 pc DNA3质粒转染大肠癌细胞株 hct/8,经G41 8进行阳性筛选 ,将筛选的阳性细胞连续传代培养 ,应... 详细信息

目的 :建立高效、稳定表达 p2 1 WAF1/ CIP1大肠癌细胞株 hct/8- WAF1。方法 :应用阳离子脂质体分别将带有目的基因 WAF1的 pc DNA3及空白 pc DNA3质粒转染大肠癌细胞株 hct/8,经G41 8进行阳性筛选 ,将筛选的阳性细胞连续传代培养 ,应用免疫荧光技术监测 p2 1 WAF1/ CIP1的表达。结果 :经 G41 8筛选后 ,空白对照细胞全部死亡 ,转染目的基因及空质粒组的细胞存活 ,可连续传代培养 30代以上 ,并选择 hct/8作对照 ;免疫荧光技术监测 p2 1 WAF1/ CIP1表达结果显示转染目的基因的 hct/8细胞 p2 1 WAF1/ CIP1表达阳性细胞率 ( 89.96% )显著高于转染空质粒组 ( 8.0 2 % )和空白对照组 ( 3.39% ) ( F=1 6 60 8.99,P0 .0 5 )。结论 :hct/8- WAF1是一株高效、稳定表达 p2 1 WAF1/

关键词： p21^WAF1/CIP1 hct/8 质粒脂质体基因表达肿瘤细胞培养的转染

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WAF1基因调控大肠癌细胞c-myc和CDK4表达的实验研究

WAF1基因调控大肠癌细胞c-myc和CDK4表达的实验研究

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作者：王海吉林大学

学位级别：硕士

肿瘤形成机制的研究一直是人们关注的焦点，关键在于细胞周期的调控，如能使细胞停滞于G1期，则可以避免肿瘤的发生或诱导肿瘤细胞的分化。多数肿瘤细胞的G1期调控基因表达异常，p21WAF1、c-myc和CDK4是其中三种主要的作用于G1期的细胞... 详细信息

肿瘤形成机制的研究一直是人们关注的焦点，关键在于细胞周期的调控，如能使细胞停滞于G1期，则可以避免肿瘤的发生或诱导肿瘤细胞的分化。多数肿瘤细胞的G1期调控基因表达异常，p21WAF1、c-myc和CDK4是其中三种主要的作用于G1期的细胞周期调控因子。本实验通过对它们相互调控作用的研究，深入探讨肿瘤的发生与细胞周期G1期调控的关系。 WAF1基因表达产物p21WAF1 是细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白（cyclin-dependent kinase inhibitor, CDI）家族中最早被发现的成员，是细胞周期调控的主要因子之一，通过一系列基因作用于细胞周期的G1-S检测点，使细胞停滞在G1期。c-myc基因表达产物c-myc蛋白具有调节细胞增殖分化的作用，被激活的c-myc蛋白，能使大量细胞通过G1期进入细胞周期S期，在多种癌细胞中过度表达。当抑制c-myc的表达可引起细胞周期G1期停滞。CDK4基因表达产物细胞周期素依赖激酶4（cyclin-dependent kinase 4,CDK4）主要与细胞周期素Cyclin D1形成Cyclin D1/ CDK4复合物的形式存在，当Cyclin D1/ CDK4复合物过表达时，将使细胞由G1期进入S期。本实验以大肠癌细胞株hct/8细胞为研究对象，分hct/8细胞转染WAF1基因组、hct/8细胞转染空质粒组及对照组（hct/8细胞）进行研究。应用免疫荧光技术鉴定WAF1基因的表达，应用免疫组织化学技术测定三组细胞c-myc和CDK4基因的表达情况，分析p21 WAF1、c-myc和CDK4三种调控因子之间的相互作用关系。并用流式细胞仪检测三组细胞的细胞周期变化，进而探讨p21 WAF1、c-myc和CDK4三种调控因子的变化对肿瘤细胞周期的影响。实验结果：1、p21WAF1免疫荧光检测结果：空质粒组p21WAF1表达阳性细胞的百分数与对照组计数结果相比无统计学差异。而转染WAF1基因组p21WAF1表达阳性细胞91.68%±6.24%与空质粒组及对照组计数结果相比有显著差异（5.02%±3.61% 和 3.63%±2.89% ，p8%与空质粒组及对照组计数结果相比有显著差异（26.00%±5.69% 和 27.93%±3.99%，p8% 和33.80%±4.35%，p G2/M各期的计数结果与对照组相比无统计学差异。而重组基因组G1期(80.56%±2.96%)及S期（14.16%±4.39%）与对照组及空质粒组计数结果相比有显著差异（phct/8细胞周期的进行，使细胞周期停滞于G1期。2、转染WAF1基因可抑制c-myc的表达，从而加强了p21 WAF1对细胞周期的抑制作用。3、p21 WAF1是通过抑制CDK4的活性而抑制细胞周期的，而非抑制CDK4的表达。4、根据各基因间的相互关系，建立了细胞周期G1期的部分调控网络。本实验深入探讨了p21 WAF1、c-myc和CDK4在肿瘤细胞周期调控中的关系，建立起相应的调控通路，从分子水平研究肿瘤的发生机制，为肿瘤的基因治疗提供了依据。

关键词： WAF1 hct/8 c-myc CDK4

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