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hbx蛋白抑制乙型肝炎病毒诱导肝细胞表达I型干扰素的研究

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中国免疫学杂志 2022年

作者：潘颖杨凯陈谨孙蓓蓓田平平张发苏安徽医学高等专科学校医学技术学院安徽医科大学第二附属医院检验科

目的：研究乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）对I型干扰素(interferon， IFN)表达的影响，并进一步探讨相关机制。方法：以HepG2细胞和稳转HBV基因组的HepG2.2.15细胞为模型，转染针对乙型肝炎病毒X（hbx）基因的小干扰RNA(smalli... 详细信息

目的：研究乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）对I型干扰素(interferon， IFN)表达的影响，并进一步探讨相关机制。方法：以HepG2细胞和稳转HBV基因组的HepG2.2.15细胞为模型，转染针对乙型肝炎病毒X（hbx）基因的小干扰RNA(smallinterferingRNA，siRNA)hbx-siRNA至HepG2.2.15细胞，转染hbx蛋白表达质粒pEGFP-hbx至HepG2细胞，荧光定量PCR技术分析各细胞中的IFN-α、IFN-β mRNA含量，荧光显微镜观察HepG2细胞内质粒pEGFP-hbx的表达，Western blot技术分析各细胞中hbx和p-IRF3蛋白含量变化，以探讨乙型肝炎病毒通过hbx蛋白对I型干扰素表达的影响。结果：IFN-a和IFN-β mRNA在HepG2.2.15细胞中的含量略高于HepG2细胞，差异无统计学意义（P>0.05）；RNA干扰抑制HepG2.2.15细胞中hbx蛋白的表达后，细胞中IFN-a、IFN-β mRNA含量显著升高，转染pEGFP-hbx的HepG2细胞中I型干扰素的基因表达量和p-IRF3的蛋白表达量均降低。结论：HBV通过hbx蛋白抑制IRF3蛋白的活化，从而抑制I型干扰素的表达。

关键词：乙型肝炎病毒 hbx蛋白 I型干扰素 IRF3蛋白

hbx蛋白抑制乙型肝炎病毒诱导肝细胞表达Ⅰ型干扰素的研究

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中国免疫学杂志 2024年第2期40卷 252-255页

作者：潘颖杨凯陈谨孙蓓蓓田平平张发苏安徽医学高等专科学校医学技术学院合肥230601 安徽医科大学第二附属医院检验科合肥230601

目的:研究乙型肝炎病毒(HBV)对Ⅰ型干扰素表达的影响,并进一步探讨相关机制。方法:以HepG2细胞和稳转HBV基因组的HepG2.2.15细胞为模型,转染针对乙型肝炎病毒X(hbx)基因的小干扰RNA(siRNA)[hbx-siRNA]至HepG2.2.15细胞,转染hbx蛋白表达... 详细信息

目的:研究乙型肝炎病毒(HBV)对Ⅰ型干扰素表达的影响,并进一步探讨相关机制。方法:以HepG2细胞和稳转HBV基因组的HepG2.2.15细胞为模型,转染针对乙型肝炎病毒X(hbx)基因的小干扰RNA(siRNA)[hbx-siRNA]至HepG2.2.15细胞,转染hbx蛋白表达质粒pEGFP-hbx至HepG2细胞,荧光定量PCR技术分析各细胞中的IFN-α、IFN-β mRNA含量,荧光显微镜观察HepG2细胞内质粒pEGFP-hbx的表达,Western blot技术分析各细胞中hbx和p-IRF3蛋白含量变化,以探讨HBV通过hbx蛋白对Ⅰ型干扰素表达的影响。结果:IFN-α和IFN-β mRNA在HepG2.2.15细胞中的含量略高于HepG2细胞,差异无统计学意义(P>0.05);RNA干扰抑制HepG2.2.15细胞中hbx蛋白的表达后,细胞中IFN-α、IFN-β mRNA含量显著升高,转染pEGFP-hbx的HepG2细胞中Ⅰ型干扰素的基因表达量和p-IRF3的蛋白表达量均降低。结论:HBV通过hbx蛋白抑制IRF3蛋白的活化,从而抑制Ⅰ型干扰素的表达。

关键词：乙型肝炎病毒 hbx蛋白 Ⅰ型干扰素 IRF3蛋白

CytoTrap酵母双杂交筛选与乙型肝炎病毒hbx蛋白相互作用的肝细胞蛋白

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南方医科大学学报 2013年第4期33卷 486-490页

作者：焦佰海文艳刘晓佳冯悦张阿梅刘丽夏雪山昆明理工大学生命科学与技术学院云南昆明650500

目的筛选与乙型肝炎病毒hbx蛋白发生相互作用的肝细胞蛋白。方法构建诱饵重组载体pSos-hbx,经测序正确后将其转化酵母菌cdc25Hα中,检测其在酵母中的表达及有无自激活作用,并利用CytoTrap酵母双杂交的方法筛选与诱饵蛋白hbx相互作用的... 详细信息

目的筛选与乙型肝炎病毒hbx蛋白发生相互作用的肝细胞蛋白。方法构建诱饵重组载体pSos-hbx,经测序正确后将其转化酵母菌cdc25Hα中,检测其在酵母中的表达及有无自激活作用,并利用CytoTrap酵母双杂交的方法筛选与诱饵蛋白hbx相互作用的肝细胞蛋白。结果获得重组诱饵质粒pSos-hbx,验证可以在酵母中表达诱饵蛋白Sos-hbx,且诱饵质粒在此系统中没有自激活作用。利用此系统筛选出6个能与hbx相互作用的肝细胞蛋白,分别为纤连蛋白1、翻译调控肿瘤蛋白1、核受体结合蛋白IQ-WD1、软泡抑素、血清类粘蛋白1、二硫化物异构酶家族A3。结论成功克隆出乙型肝炎病毒hbx蛋白的结合蛋白,为进一步研究hbx蛋白在肝炎或肝癌过程中发挥的作用提供了新线索。

关键词： hbx蛋白 CytoTrap酵母双杂交蛋白质相互作用

乙型肝炎病毒hbx蛋白抑制阿霉素诱导的HepG2细胞凋亡

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中华肝脏病杂志 2008年第1期16卷 25-28页

作者：范红梅杨林谢奇峰韩晓燕吴盟张富程姚春斓李刚高志良中山大学附属第三医院感染病科、广东省肝脏疾病研究重点实验室广州510630 中山大学附属第三医院中心实验室广州510630

目的探讨乙型肝炎病毒hbx蛋白对阿霉素诱导的肝癌细胞凋亡的影响。方法将adr亚型hbx基因片段定向插入绿色荧光蛋白（GFP）真核表达载体pEGFPCl，构建重组体pGFP—hbx。将pEGFPCl、pGFPhbx转染HepG2细胞，采用G418筛选抗性克隆、荧光显... 详细信息

目的探讨乙型肝炎病毒hbx蛋白对阿霉素诱导的肝癌细胞凋亡的影响。方法将adr亚型hbx基因片段定向插入绿色荧光蛋白（GFP）真核表达载体pEGFPCl，构建重组体pGFP—hbx。将pEGFPCl、pGFPhbx转染HepG2细胞，采用G418筛选抗性克隆、荧光显微镜观察及RT—PCR检测hbx基因表达情况以建立稳定表达细胞株HepG2／GFP、HepG2／GFPhbx。用阿霉素（2．5μg／m1）分别处理HepG2、HepG2／GFP、HepG2／GFPhbx细胞，处理后不同时间在显微镜下观察细胞形态变化，并用锥虫蓝染色计数死亡细胞；流式细胞仪检测阿霉素处理36h后细胞凋亡率。结果HepG2／GFP、HepG2／GFPhbx细胞传70代后，仍表达强的GFP；RTPCR检测显示在HepG2／GFP—hbx细胞有hbx基因转录表达。锥虫蓝染色检测表明阿霉素处理的HepG2、HepG2／GFP细胞发生了明显的时间依赖性细胞死亡，而在HepG2／GFPhbx和对照组细胞未见明显细胞死亡；流式细胞仪检测显示阿霉素处理36h后，HepG2／GFP—hbx细胞凋亡率为3．94％，明显低于HepG2（59．03％）、HepG2／GFP细胞（61．38％）（P〈0．01），而与未处理对照组细胞凋亡率（2．12％，2．78％，2．55％）差异无统计学意义（P〉0．05）。结论成功建立了稳定表达GFP、GFPhbx的HepG2细胞株；hbx能够抑制阿霉素诱导的HepG2细胞凋亡。

关键词：癌肝细胞细胞凋亡 hbx蛋白肝炎病毒乙型阿霉素绿色荧光蛋白

hbx蛋白表达载体pEYFP-C1-X的构建及对IGF-Ⅱ基因P4启动子活性影响的初步研究

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HBx蛋白表达载体pEYFP-C1-X的构建及对IGF-Ⅱ基因P4启动子活性影...

作者：杨敏英暨南大学

学位级别：硕士

目的:构建乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)hbx蛋白表达载体pEYFP-C1-X及人IGF-Ⅱ基因P4启动子调控的荧光素酶报告载体pGL3-P4,并初步探讨hbx蛋白对IGF-Ⅱ基因P4启动子活性的影响,为下一步研究hbx蛋白对IGF-Ⅱ基因P4启动子甲基化状... 详细信息

目的:构建乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)hbx蛋白表达载体pEYFP-C1-X及人IGF-Ⅱ基因P4启动子调控的荧光素酶报告载体pGL3-P4,并初步探讨hbx蛋白对IGF-Ⅱ基因P4启动子活性的影响,为下一步研究hbx蛋白对IGF-Ⅱ基因P4启动子甲基化状态的影响及其细胞信号转导通路奠定基础。方法:1.以pCMV-tag2B-X的乙型肝炎病毒X基因序列为模板,设计含有限制性内切酶位点EcoRⅠ和SalⅠ的引物,PCR扩增X基因,并将纯化的PCR产物定向克隆入pEYFP-C1质粒的EcoRⅠ-SalⅠ位点,构建成表达hbx蛋白的表达载体pEYFP-C1-X。2.根据Genbank数据库及相关文献,设计P4启动子片段的巢式PCR引物,以胎肝细胞基因组为模板,PCR扩增P4启动子片段,并将其定向克隆入荧光素酶报告载体pGL3-Basic的KpnⅠ-HindⅢ位点,构建P4启动子调控的荧光素酶报告载体pGL3-P4。3.将pGL3-P4报告载体用SssICpG甲基转移酶孵育,使pGL3-P4甲基化。4.将重组质粒pEYFP-C1-X转染HepG2和Hela经G418筛选后形成稳定细胞系列后,将体外甲基化pGL3-P4质粒转染上述细胞,并检测P4启动子荧光素酶的活性。结果:1.经限制性内酶切、PCR反应及测序结果鉴定,证实成功构建pEYFP-C1-X。2.经限制性内酶切及测序证实成功构建P4启动子的pGL3-Basic真核表达载体。3.双荧光素酶检测结果初步显示hbx蛋白能增加IGF-ⅡP4启动子活性。结论:1.本实验成功克隆了HBV X基因,并构建了表达hbx蛋白的真核表达载体pEYFP-C1-X。2.成功克隆IGF-ⅡP4启动子基因,并构建P4启动子的pGL3-Basic载体。3.初步显示hbx蛋白能增加IGF-ⅡP4启动子活性。4.为下一步IGF-ⅡP4启动子低甲基化机制的研究奠定基础。

关键词：肝细胞癌 hbx蛋白 P4启动子 pEYFP-C1 pGL3-Basic载体双荧光素酶检测

hbx蛋白介导的自噬在肝癌多药耐药中的作用及机制研究

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HBX蛋白介导的自噬在肝癌多药耐药中的作用及机制研究

作者：王吉苏州大学

学位级别：硕士

原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，且其恶性程度高。化疗是肝癌重要的治疗手段，但肝癌细胞对化疗药物敏感性差，容易产生多药耐药（multidrug resistance,MDR）。在肝癌的发生机制中，乙肝病毒（HBV）感染是肝癌的发生的重要因素... 详细信息

原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，且其恶性程度高。化疗是肝癌重要的治疗手段，但肝癌细胞对化疗药物敏感性差，容易产生多药耐药（multidrug resistance,MDR）。在肝癌的发生机制中，乙肝病毒（HBV）感染是肝癌的发生的重要因素。整合于宿主细胞的乙型病毒肝炎hbx基因作为重要的功能基因，是影响肝癌生物学特征的重要影响因素。既往有研究表明hbx参与介导了肝癌的多药耐药。同时在研究中我们也发现凋亡并非是肝癌细胞死亡的唯一方式，对凋亡水平的调控也并不能完全干预肝癌细胞的MDR。因此，我们需从非凋亡的角度进一步探索hbx诱发肝癌细胞耐药的一些新的可能机制，以期全面地多方面诠释肝癌发生MDR的分子机制。自噬（autophagy）作为真核细胞所特有生命现象，已被证明其参与了肿瘤细胞对化疗药物的耐受调控。肿瘤细胞可通过自噬保护性地排除受损蛋白或细胞器，隔离有害物质，加快大分子物质循环，导致肿瘤细胞表达耐药表型。机体通过这种特殊的方式来保持内环境的稳定。细胞内存在感知外周环境变化的信号通路，Gα干扰蛋白（Gα-interactingprotein, GAIP）作为重要的自噬调节上游蛋白，参与了肿瘤细胞的自噬水平改变的调节。因此，我们需进一步探究hbx蛋白是否介导Gα干扰蛋白的表达而改变了细胞的自噬水平，进而影响了肿瘤细胞多药耐药表型的变化。我们将从hbx介导自噬角度去深入地加以研究及探讨。第一部分：hbx蛋白转染后肝癌细胞对化疗药物的抵抗目的：探究hbx蛋白对肝癌细胞多药耐药所产生影响，并对多药耐药蛋白表达起到调节作用。方法：培养及鉴定稳定表达hbx蛋白的HepG2人肝癌细胞系及普通HepG2人肝癌细胞系。MTT法观察hbx蛋白转染后肝癌细胞系对化疗药物的抵抗。Westernblotting方法检测多药耐药蛋白p170的表达。结果：鉴定及培育了稳定表达hbx蛋白的HepG2人肝癌细胞系。稳定转染hbx蛋白的HepG2细胞对盐酸多柔比星及顺铂化疗敏感性低，存在明显耐药性，且多药耐药蛋白p170（MDR-1表达的跨膜糖蛋白）的表达明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论：hbx蛋白的稳定表达对HepG2细胞的生物学行为产生了影响。稳转hbx蛋白的HepG2细胞对多种化疗药物的敏感性较普通HepG2细胞降低。增强化疗药物外排作用的多药耐药蛋白p170的表达上调，提示hbx蛋白参与调控了该蛋白表达，实验组细胞出现耐药性增强的现象。第二部分：hbx蛋白对肝癌细胞自噬水平的调节作用目的：探究hbx蛋白对肝癌细胞自噬水平的调节作用。方法：Western blotting方法检测hbx蛋白对自噬蛋白Becline1、LC3-Ⅱ表达的调节作用。结果：稳定转染hbx蛋白的HepG2细胞较对照组肝癌细胞内自噬蛋白Beclin1和LC3-Ⅱ表达升高，差异有显著性（P＜0.01），提示hbx蛋白上调了HepG2细胞的自噬水平。结论：hbx蛋白对肝癌细胞的自噬水平产生了调节作用。稳定转染hbx蛋白的HepG2细胞较普通HepG2细胞的自噬蛋白Beclin1和LC3-Ⅱ的表达量均增高，表明其自噬水平上调。第三部分：改变自噬水平影响肝癌细胞对化疗药物的敏感性目的：改变肝癌细胞的自噬水平后观察细胞对化疗药物敏感性变化及其对多药耐药蛋白p170表达的影响。方法：上调自噬水平的雷帕霉素及下调自噬水平的3-MA、溶酶体抑制剂E64作用于二组肝癌细胞系后，Western blotting方法及MTT法检测不同自噬水平对肝癌细胞化疗敏感性的影响。结果：自噬水平的上调使HepG2细胞对化疗药物的敏感性下降，多药耐药蛋白p170表达上调（P＜0.05），耐药性增强;而E-64、3-MA对肝癌细胞自噬水平的抑制提高了HepG2细胞的化疗敏感性，多药耐药蛋白p170表达下调（P＜0.01），耐药性降低。结论：自噬水平改变调节了肝癌细胞的化疗敏感性，证明了hbx蛋白介导自噬参与了多药耐药。第四部分：GAIP在hbx蛋白诱导肝癌细胞自噬中的作用目的：探究hbx蛋白对肝癌细胞自噬上游Gα干扰蛋白的调节作用。方法：荧光定量PCR方法、Western blotting方法检测GAIP在hbx蛋白诱导肝癌细胞自噬中的表达情况。结果：在稳定转染hbx蛋白的HepG2细胞中，自噬调节蛋白GAIP在mRNA和蛋白水平表达均显著增高，提示hbx蛋白可上调自噬调节蛋白GAIP的表达，较对照组差异性显著（P＜0.01）;结论：hbx蛋白可上调肝癌细胞内自噬蛋白GAIP的表达。

关键词： hbx蛋白肝细胞癌自噬多药耐药

hbx蛋白在肝细胞癌中上调PD-L1表达的作用及机制

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HBx蛋白在肝细胞癌中上调PD-L1表达的作用及机制

作者：田金鑫青岛大学

学位级别：硕士

背景原发性肝癌是最常见的恶性肿瘤之一,其肿瘤相关死亡率在我国恶性肿瘤中排名居第二位。手术切除、肝脏移植、放化疗、姑息治疗虽然能让患者得到康复,但疗效有限。最近几年以来,免疫疗法研究进展迅速,已成为继上述方法后最具希望的肿... 详细信息

背景原发性肝癌是最常见的恶性肿瘤之一,其肿瘤相关死亡率在我国恶性肿瘤中排名居第二位。手术切除、肝脏移植、放化疗、姑息治疗虽然能让患者得到康复,但疗效有限。最近几年以来,免疫疗法研究进展迅速,已成为继上述方法后最具希望的肿瘤治疗方式之一。是以,对肝癌免疫治疗进行深入探究具有深远的意义。程序性死亡因子配体1(PD-L1)作为免疫监测点因子,在多种肿瘤细胞中异常上调,从而抑制T淋巴细胞的免疫活性,造成肿瘤的免疫逃逸。PD-L1的表达受多种机制调控,部分研究发现其表达与病毒感染有关,但具体的机制仍然不是很清楚。乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是肝癌最常见的病因之一,其中的X基因表达产物(hbx)在肝癌发生与发展过程中起着至关重要的作用。目的阐明hbx和PD-L1在肝细胞癌中的作用,探索hbx蛋白对肝细胞癌PD-L1表达的影响,并深入研究其中的机制。研究hbx蛋白在肝癌患者中的临床意义。方法免疫荧光染色法检测SMMC7721(乙肝阴性的肝癌细胞)和PLC/PRF/5(乙肝阳性的肝癌细胞)中hbx和PD-L1的含量及定位。实时荧光定量法检测SMMC7721和PLC/PRF/5细胞中hbx和PD-L1在m RNA上的表达水平。Western Blot法检测SMMC7721和PLC/PRF/5细胞中hbx和PD-L1在蛋白上的表达水平。相关性曲线表明hbx和PD-L1在基因和蛋白表达水平上的相关性。质粒转染技术将hbx质粒和空载质粒转染到SMMC7721细胞,并用实时荧光定量法和Western Blot法检测hbx和PD-L1在基因和蛋白水平上的表达变化。si RNA沉默技术应用于PLC/PRF/5细胞后用实时荧光定量法和Western Blot法检测hbx和PD-L1在基因和蛋白水平上的表达变化。Western Blot法检测各种细胞中NF-κB,p-NF-κB,JAK2,p-JAK2,STAT3,p-STAT3蛋白表达的变化,探索其中的分子机制。Transwell法测定各种细胞迁移和侵袭能力的大小。免疫组织化学法检测肝癌患者组织标本中PD-L1的表达。结果hbx能上调SMMC7721细胞中PD-L1的表达,并且两者呈正相关。抑制hbx后,PLC/PRF/5细胞中PD-L1的表达也随之下降。hbx转染和沉默后NF-κB,JAK2,STAT3蛋白表达量基本没变化,而p-NF-κB,p-JAK2,p-STAT3随着hbx的变化而变化。对细胞迁移和侵袭能力方面的影响,转染hbx后SMMC7721的能力升高,而沉默hbx后PLC/PRF/5细胞的能力下降。感染HBV的肝癌患者组织标本中PD-L1表达的阳性率高于未感染HBV的肝癌患者。结论hbx能诱导肝细胞癌细胞PD-L1的表达,而si RNA能沉默这个过程,降低PD-L1的表达。hbx可能通过活化NF-κB、JAK/STAT信号通路中的某些核心因子介导肝癌细胞中PD-L1的表达。hbx转染后肝癌细胞的迁移和侵袭能力都有所增强,暗示预防乙肝感染或许能降低肝细胞癌的迁移和侵袭能力。预防HBV的感染和切断PD-1/PD-L1分子路径的传递能降低PD-L1的表达,降低癌细胞的迁移和侵袭能力,这可能为乙肝相关性肝细胞癌的治疗挖掘新的思路和方向。

关键词：肝细胞癌程序性死亡因子配体1 hbx蛋白免疫治疗乙型肝炎病毒

hbx蛋白与Hepsin共表达可促进HBV复制

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中国病毒学 2004年第4期19卷 345-348页

作者：赵伟光张建林吴建国朱应李雁朱忠超刘志苏武汉大学生命科学学院病毒学教育部重点实验室湖北武汉430072 武汉大学医学院中南医院湖北武汉430071

运用RT-PCR技术从原发性肝癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC)患者的癌旁组织中扩增了Hepsin基因编码区序列,该序列已被克隆并构建了pCMV-tag-HS表达质粒。将pCMV-tag-HS表达质粒和表达hbx蛋白的载体共转染HepG2.***.1.5细胞,观察hbx蛋白和Hepsin蛋白相互作用对HBV病毒复制和病毒蛋白表达的影响。研究结果表明共表达hbx蛋白、Hepsin蛋白可以协同提高HBV病毒颗粒在培养液中的拷贝数,并提高HBV病毒蛋白HBs、HBe的表达水平。这说明hbx蛋白和Hepsin蛋白相互作用可以增强HBV病毒的复制。

关键词： RT-PCR技术 hbx蛋白 Hepsin蛋白表达 HBV 复制乙型肝炎病毒

hbx蛋白在乙肝相关型肝细胞癌及癌旁组织中的表达意义及其对预后的影响

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HBx蛋白在乙肝相关型肝细胞癌及癌旁组织中的表达意义及其对预后...

作者：余咸辉南昌大学

学位级别：硕士

背景:原发性肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是指来源于肝细胞的原发性恶性肿瘤,是世界范围内发病率、死亡率最高的消化道恶性肿瘤之一,其发病隐匿、进展迅速、治疗困难、预后极差已成为公认的世界难题。目前研究表明:在我国乃... 详细信息

背景:原发性肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是指来源于肝细胞的原发性恶性肿瘤,是世界范围内发病率、死亡率最高的消化道恶性肿瘤之一,其发病隐匿、进展迅速、治疗困难、预后极差已成为公认的世界难题。目前研究表明:在我国乃至东南亚各国导致原发性肝癌最主要的原因是慢性乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染,而HBV所致的HCC的具体机理则是纷繁复杂的,包括HBV-DNA随机插入人类染色体、hbx广泛的反式激活功能和干扰调控基因转录、HBV核心启动子自然突变及慢性肝细胞受损继发肝细胞转化再生的形成等,最终诱导肿瘤的发生。近年来,由于对hbx蛋白研究的不断深入,发现其广泛的反式基因激活作用、参与调节多种细胞信号转导通路、DNA损伤修复及表观遗传学修饰等功能与乙肝相关型肝癌的发生发展密切相关,而引起广泛关注。此外,hbx蛋白可结合于P53蛋白C末端阻碍其促凋亡、中断异常细胞生长和DNA修复功能;hbx竞争性结合于APC(adenomatous polyposis coli,APC)蛋白使β连环蛋白从降解复合物中分离,导致β-连环蛋白在细胞核聚集,激活Wnt信号通路诱导肿瘤生成;甚至促进了毛玻璃样肝细胞向癌细胞的转化。目的:本研究通过免疫组化方法检测hbx蛋白在乙肝相关型肝细胞癌癌组织及癌旁组织(距肿瘤边缘hbx蛋白的表达特点以及与数个临床因素之间的关系,进一步阐述其致癌机制并为HCC的预防和诊治提供有效的理论依据。方法:通过使用免疫组织化(Elivision二步法)的研究方法,检测我院单一治疗组40例临床资料完整、根治性手术切除的肝细胞癌癌组织以及对应的癌旁组织中的hbx蛋白的表达特点,分析其与数个临床因素的关系,包括:性别、年龄、TNM分期、HBV-DNA负荷、AFP、是否合并肝硬化、是否合并脉管侵犯、肿瘤淋巴细胞浸润(TIL)、Edmondson-Steiner病理分级及术后无瘤生存时间(本研究中为24个月内有无复发)。结果:1、在40例HBV相关HCC中,hbx蛋白在癌旁组织中阳性率为75%(30/40)高于癌组织中(40%,16/40)的表达,差异有统计意义(Phbx阳性表达率33.33%(2/6);在HBV-DNA≥500 IU/ml病例中,hbx阳性表达率82.35%(28/34),差异有统计意义(Phbx的表达与年龄、性别、肝硬化及血清AFP水平相关性不显著;3、在癌组织合并脉管侵犯的病例中,hbx阳性表达率66.67%(8/12);在无脉管侵犯的病例中,hbx阳性表达率28.57%(8/28),差异有统计意义(Phbx的表达与TNM分期、Edmondson-Steiner病理分级关系不显著;4、在癌旁组织淋巴细胞浸润的病例中,hbx阳性表达率86.67%(26/30);在少淋巴细胞浸润的病例中,hbx阳性表达率40%(4/10),差异有统计意义(Phbx阳性表达率69.23%(9/13);在无瘤生存期(DFS)≥24月的病例中,hbx阳性表达率25.93%(7/27),差异有统计意义(Phbx蛋白在HBV相关HCC癌旁组织中高表达,癌组织中低表达,并且在癌旁组织中与患者血清HBV-DNA负荷、淋巴细胞浸润正相关;癌组织中与脉管侵犯正相关、DFS负相关。癌组织中高hbx的表达可能预示较差的预后、癌旁组织中hbx的高表达可能预示着较好的预后。

关键词：乙肝相关型肝癌癌旁 hbx蛋白免疫组化预后