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现代肿瘤医学 2012年第12期20卷 2447-2450页

作者：杨静悦高琳付蓉薛妍刘文超第四军医大学西京医院肿瘤科陕西西安710032 第四军医大学西京医院皮肤科陕西西安710032 第四军医大学西京医院小儿科陕西西安710032

目的:制备一种新型负载hbsag基因的外切体(exosome)瘤苗,并探讨其生物学特性、免疫学功能。方法:运用分子克隆和病毒载体转染hbsag基因构建AdVhbsag-DC肝癌瘤苗,采用流式细胞术鉴定转染基因表达;提取exosome;以透射电镜观察、Western b... 详细信息

目的:制备一种新型负载hbsag基因的外切体(exosome)瘤苗,并探讨其生物学特性、免疫学功能。方法:运用分子克隆和病毒载体转染hbsag基因构建AdVhbsag-DC肝癌瘤苗,采用流式细胞术鉴定转染基因表达;提取exosome;以透射电镜观察、Western blot法鉴定exosome。结果:构建的重组AdVhbsag腺病毒载体,经PCR和酶切鉴定,结果显示hbsag基因片段已正确插入腺病毒载体中。包装的腺病毒载体具有良好的感染性,可以在293细胞中形成病毒颗粒。提取的exosome在透射电镜下可观察到直径为50-100nm的膜性微囊,圆形或椭圆形,有完整包膜。Western blot检测结果表明,exosome含有DC的特征分子和hbsag基因。结论:成功制备并获得hbsag基因修饰树突状细胞为来源的exosome瘤苗,为治疗乙肝相关肝癌提供新的思路。

关键词：树突状细胞 hbsag腺病毒载体免疫治疗 exosome

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腺病毒介导的hbsag基因修饰树突状细胞抗HBV相关肝癌免疫治疗的实验研究

腺病毒介导的HBsAg基因修饰树突状细胞抗HBV相关肝癌免疫治疗的实...

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第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议

作者：杨静悦刘文超曹大勇斯小明第四军医大学西京医院肿瘤科第四军医大学西京医院肿瘤科第四军医大学西京医院肝胆外科第四军医大学西京医院肿瘤科

目的:探讨hbsag作为HBV相关肝癌基因治疗和免疫治疗靶点的可行性以及应用腺病毒介导hbsag基因修饰树突状细胞瘤苗对表达hbsag肝细胞癌的免疫治疗的效果。方法:将hbsag基因亚克隆到pIND载体和Shuttle2载体中,构建重组载体Shuttle2-S。用P... 详细信息

目的:探讨hbsag作为HBV相关肝癌基因治疗和免疫治疗靶点的可行性以及应用腺病毒介导hbsag基因修饰树突状细胞瘤苗对表达hbsag肝细胞癌的免疫治疗的效果。方法:将hbsag基因亚克隆到pIND载体和Shuttle2载体中,构建重组载体Shuttle2-S。用PI—Sce I和I—Ceu I双酶切后将所获得的hbsag基因片段再与线性化的腺病毒载体 pAdeno—X连接,构成AdVhbsag腺病毒表达载体。通过酶切PCR对腺病毒载体进行鉴定。经293细胞包装腺病毒后, 收获病毒并作滴度测定。其后将腺病毒表达载体AdVhbsag 转染人单个核细胞来源的DC细胞,构建AdVhbsag—DC 癌瘤苗,采用免疫荧光,Western blot法鉴定转染基因表达: FACS检测DC细胞表面分子,hbsag基因表达率以及树突状细胞凋亡率。MTT法检测hbsag基因修饰树突状细胞瘤苗诱导的CTL活性。结果:重组质粒Shuttle2-S经Nhe I 和Xba I酶切后,得到630 bp的片段,与插入的目的片段的大小相一致,说明穿梭载体的构建成功。构建的重组 AdVhbsag腺病毒载体,经PCR和酶切鉴定,结果显示 hbsag基因片段已正确插入腺病毒载体中。包装的腺病毒载体具有良好的感染性,可以在293细胞中形成病毒颗粒。 AdVhbsag基因转染DC后经流式细胞仪检测及免疫荧光、 Western blot法检测结果示hbsag基因表达于转染的DC, 表明腺病毒介导的hbsag基因转染的有效性。流式细胞仪检测AdVhbsag-DC细胞表面分子结果显示可高表达CD1a、 CD11c、CD86、CD80和HLA-DR。并且CD1a、CD11c、 CD86、CD80和HLA—DR表达量明显高干未转染的不成熟 DC组,与未转染的成熟DC组差异不明显,说明腺病毒转染未影响DC功能,并可以诱导DC成熟,不会明显的诱导DC 凋亡。CTL结果显示AdVhbsag—DC对表达hbsag的肝癌细胞HepG2．2．15有较强的杀伤作用,明显高于DC对照组和 AdVLacZ-DC组（P＜0．05）。结论构建成功的含hbsag腺病毒载体可以在树突状细胞中表达hbsag肝癌相关基因。 hbsag可作为抗原发性HBV感染肝癌基因治疗的切入点, 该研究为HBV相关肝癌树突状细胞体内免疫治疗提供了实验依据。

关键词：树突状细胞 hbsag腺病毒载体免疫治疗肝肿瘤

来源： cnki会议评论

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