检索结果-南通市图书馆

作者：王晋霞天津医科大学

学位级别：硕士

【目的】Hepatitis B Virus(hbv)感染是肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)发生中最常见的原因,hbv基因组有4个开放读码框,其中P基因区是最大的一个开放读码框,目前已有研究发现hbv-dna聚合酶,(hbv-dnaP)通过基因突变从而达到免疫... 详细信息

【目的】Hepatitis B Virus(hbv)感染是肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)发生中最常见的原因,hbv基因组有4个开放读码框,其中P基因区是最大的一个开放读码框,目前已有研究发现hbv-dna聚合酶,(hbv-dnaP)通过基因突变从而达到免疫逃避及耐药性的效果,但其对宿主基因的作用机制尚不太清楚,因此本文主要来研究hbv-dna聚合酶对肝癌细胞的功能学机制的影响。并且借助RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验,通过深度测序找到了其特异性结合的mRNA,并且阐明了hbv-dnaP在肝癌发生中的作用机制。【方法】首先在肝癌细胞系Huh7和HepG2细胞中过表达hbv-dnaP基因,然后通过MTT实验、平板克隆实验、Transwell迁移以及侵袭实验表明了hbv-dnaP对肝癌细胞的活性、增殖、迁移及侵袭能力都具有促进作用。为了进一步研究其如何来实现以上功能,我们通过RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验,进行RIP-seq测序,然后将沉淀下来的复合物中的RNA进行分离、纯化。然后由北京诺禾致源公司进行深度测序,从而比较与hbv-dnaP特异性结合的mRNA表达丰度,并根据其提供的GO注释等对其功能的阐述,然后先筛选了5个与hbv聚合酶P特异性结合的基因,,然后构建了它们的过表达质粒,将其构建在带有Flag和Myc标签的载体上。然后通过Western blotting实验用外源性抗体检测发现hbv聚合酶P只对Von Hippel-Lindau(VHL)基因有明显影响,因此进一步通过RT-qPCR实验和Western blotting实验从转录和翻译水平证明了hbv-dnaP能够下调VHL的表达,并且还通过加入放线菌素D来检测hbv-dnaP对VHL mRNA稳定性的影响,从而证明其通过降解VHL mRNA水平从而下调了VHL的水平,我们又进一步探究了VHL对肝癌细胞的生物学功能的影响,表明VHL能够抑制对肝癌细胞活性、增殖、迁移以及侵袭能力的影响,因此,为明确hbv-dnaP是否通过VHL来实现其促进肝癌细胞恶性行为的功能,因此又通过挽救实验证明hbv-dnaP可通过VHL来发挥其对肝癌细胞活性、增殖、迁移以及侵袭能力的促进作用。【结果】在Huh7和HepG2肝癌细胞中通过细胞功能学实验表明hbv-dnaP能够促进肝癌细胞的生长、迁移、侵袭能力以及EMT进程,然后通过RNA结合蛋白免疫沉淀实验,将沉淀的RNA进一步通过RIP-seq测序,综合其提供的GO注释及KEGG分析寻找到了与hbv-dnaP特异性结合的mRNA,通过外源性检测hbv-dnaP对筛选基因蛋白水平是否有影响,从而确定了特异性基因VHL。然后从mRNA和蛋白水平证明了hbv-dnaP对VHL的影响,最后证明了其能够下调VHL的表达,而过表达VHL后能够抑制肝癌细胞的恶性行为,相反敲降VHL后能得到相反的结果,因此猜测hbv-dnaP可能是通过VHL来促进对肝癌细胞生长、转移及侵袭等恶性行为的影响,因此,最后通过挽救实验证明了hbv-dnaP能够通过靶向VHL来实现对肝癌细胞活性增殖、迁移以及侵袭能力的促进作用。【结论】本文发现在肝癌细胞系Huh7,HepG2中,过表达hbv-dnaP能够促进肝癌细胞的生长、迁移、侵袭能力以及EMT的发生,并且hbv-dnaP能够下调VHL的表达。而VHL能够抑制肝癌细胞的生长、迁移、侵袭能力以及EMT进程,进一步通过对其机制的研究,发现hbv-dnaP通过促进VHL mRNA的降解从而实现对肝癌细胞恶性行为的促进作用。为进一步揭示肝癌发生发展中的分子机制提供了新的探究基础。

关键词： hbv-dna聚合酶 VHL 肝细胞癌 RIP 侵袭

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恩替卡韦联合用药在肺结核合并慢性乙肝治疗中的作用及安全性探讨

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中国药物与临床 2018年第7期18卷 1208-1209页

作者：刁士琦吴昊山西省临汾市第三人民医院结核科 041000 首都医科大学附属佑安医院感染中心

乙型病毒性肝炎（简称乙肝）是由乙型肝炎病毒（hbv）引起的进行性、弥漫性、慢性传染性疾病。肺结核是由结核分枝杆菌引起的慢性传染性疾病,在我国的发病率较高,常采用多种药物联合应用、全程治疗,但抗结核药物的长期使用,使肺结核合... 详细信息

乙型病毒性肝炎（简称乙肝）是由乙型肝炎病毒（hbv）引起的进行性、弥漫性、慢性传染性疾病。肺结核是由结核分枝杆菌引起的慢性传染性疾病,在我国的发病率较高,常采用多种药物联合应用、全程治疗,但抗结核药物的长期使用,使肺结核合并慢性乙肝患者更容易出现肝功能异常,不仅增加肝功负担,加重肝脏损伤,反复停药还增加了结核耐药性,影响患者的临床治疗。恩替卡韦为鸟嘌呤核苷类似物,可抑制hbv-dna聚合酶和逆转录酶,具有较强的抗病毒作用。

关键词：慢性乙肝患者恩替卡韦全程治疗肺结核联合用药 hbv-dna聚合酶慢性传染性疾病安全性

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中草药抑制hbv作用机制的研究进展

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现代中西医结合杂志 2003年第18期12卷 2010-2012页

作者：王娟倪虹陈力宋文芹南开大学生命科学学院

乙型肝炎是由于感染了乙型肝炎病毒(hbv)或病毒亚颗粒或dna的整合作用, 机体合成异已成分, 产生免疫反应, 而造成的肝部位炎症. 乙型肝炎传染性强, 可发展成肝硬化和原发性肝细胞癌, 因此寻找治疗乙肝的高效低毒药物成为当务之急. 20世... 详细信息

乙型肝炎是由于感染了乙型肝炎病毒(hbv)或病毒亚颗粒或dna的整合作用, 机体合成异已成分, 产生免疫反应, 而造成的肝部位炎症. 乙型肝炎传染性强, 可发展成肝硬化和原发性肝细胞癌, 因此寻找治疗乙肝的高效低毒药物成为当务之急. 20世纪90年代以来, 随着我国中药学的迅速发展, 中药研究取得了一定的成就, 日益受到世界多个国家和地区人们的信赖与瞩目. 我国中草药资源丰富, 并在中药防治hbv方面积累了大量的经验. 中草药对人体副作用小, 不良反应相对少. 近年来由于现代生物技术的普遍应用, 人们对中药抑制hbv的机制进行了大量研究, 现笔者就中草药治疗hbv的现状及其作用机制作一简要综述.

关键词：中草药治疗 hbv表面抗原乙型肝炎基因结构 hbv-dna聚合酶

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