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2008～2009年珠海市H3N2亚型流感病毒ha1基因特性分析

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病毒学报 2011年第2期27卷 117-121页

作者：李红霞魏泉德张丽荣张静涛林毅雄方艳梅郑予柯珠海市疾病预防控制中心卫生检验所珠海519000

为了解20082009年珠海市H3N2亚型流感病毒ha1基因变异情况,选择珠海市20082009年期间不同时间点的经狗肾传代细胞（MDCK）培养分离的H3N2亚型流感毒株20株,提取病毒RNA,通过RT-PCR扩增ha1基因片段,将产物纯化并测序,推导氨基酸序列,进... 详细信息

为了解20082009年珠海市H3N2亚型流感病毒ha1基因变异情况,选择珠海市20082009年期间不同时间点的经狗肾传代细胞（MDCK）培养分离的H3N2亚型流感毒株20株,提取病毒RNA,通过RT-PCR扩增ha1基因片段,将产物纯化并测序,推导氨基酸序列,进行基因进化特性分析。与同时期的疫苗株比较,2008年珠海市流行的H3N2亚型流感毒株ha1区抗原决定簇的氨基酸位点变异数少于4个;2009年珠海市流行的H3N2亚型流感毒株除09-0056外,ha1区存在5个位于抗原决定簇内的变异氨基酸位点。2008年H3N2亚型流感毒株的ha1区的糖基化位点与疫苗株一致;2009年H3N2亚型流感毒株ha1区丢失第144位糖基化位点。20082009年H3N2亚型流感毒株RBS氨基酸序列未见明显变异。与2008年H3N2亚型流感毒株比较,2009年H3N2亚型流感毒株ha1区抗原决定簇内存在多个位点的氨基酸替换。这些说明2008年珠海市流行的H3N2亚型流感病毒不是新变种;2009年流行的H3N2亚型流感病毒为新的变异株,这可能是H3N2亚型流感病毒在2009年6-9月为珠海地区季节性流感流行优势株的原因。

关键词： H3N2亚型流感病毒 ha1基因序列分析变异

2009年成都市流感活动情况及H3N2亚型流感病毒ha1基因特性分析

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四川大学学报（医学版） 2011年第2期42卷 260-263页

作者：龙冬玲张晓春曹冉冉邓琦刘衡川四川大学华西公共卫生学院医学检验教研室成都610041 成都市疾病预防控制中心成都610000 四川抗菌素工业研究所成都610052

目的分析2009年成都市流感流行情况,探讨甲3流感病毒（H3N2）亚型分离毒株的流行及ha1基因变异和进化。方法 MDCK细胞对咽拭子样品进行病毒分离鉴定,提取病毒核酸,用RT-PCR法扩增ha1基因,对H3N2分离株核酸及氨基酸序列进行亲缘关系分... 详细信息

目的分析2009年成都市流感流行情况,探讨甲3流感病毒（H3N2）亚型分离毒株的流行及ha1基因变异和进化。方法 MDCK细胞对咽拭子样品进行病毒分离鉴定,提取病毒核酸,用RT-PCR法扩增ha1基因,对H3N2分离株核酸及氨基酸序列进行亲缘关系分析。结果甲型流感H1N1、H3N2、甲1、B型流感病毒分离率分别为25.2%、7.2%、4.5%、1.5%,流感流行高峰为夏秋季。H3N2与同年疫苗株氨基酸序列比对,同源性为97.0%～98.8%,点突变率为1.8%～3.0%,在抗原决定簇及受体结合部位共有4个位点发生替换：160位N〉K、174位K〉R/N、189位K〉Q、277位R〉Q。部分毒株在160位插入糖基化位点,在181位出现糖基化位点缺失。结论 2009年成都市流感以甲型流感H1N1为主,甲1、甲3及B型流感病毒循环交替并存;H3N2基因特性发生改变,出现抗原漂移。

关键词： H3N2流感病毒 ha1基因序列分析

H5亚型AIV ha1基因与鸡IL-18基因共表达载体的构建及其表达

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中国兽医学报 2009年第8期29卷 986-990,1007页

作者：孔娜田夫林兰邹然杨林冯涛梁成珠赵宏坤山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 山东省畜牧局山东济南250022 山东出入境检验检疫局山东青岛266001

参考GenBank上发表的H5亚型禽流感(AIV)血凝素(ha)基因序列及鸡白细胞介素18成熟蛋白(mChIL-18)的cDNA基因序列,分别设计了ha1和mChIL-18基因的2对引物。然后分别以pMD18-T-ha质粒和pGEX-mChIL-18质粒为模板,扩增出了H5亚型AIV的ha1基因... 详细信息

参考GenBank上发表的H5亚型禽流感(AIV)血凝素(ha)基因序列及鸡白细胞介素18成熟蛋白(mChIL-18)的cDNA基因序列,分别设计了ha1和mChIL-18基因的2对引物。然后分别以pMD18-T-ha质粒和pGEX-mChIL-18质粒为模板,扩增出了H5亚型AIV的ha1基因和mChIL-18的cDNA片段。再以杆状病毒pFast-BacTMdual为载体,将H5亚型AIV ha中的ha1基因和mChIL-18基因分别插入到双表达载体pFastBacTMdu-al的p10启动子(PP10)和多角体蛋白启动子(PPH)的下游,构建携带ha1基因和mChIL-18基因的重组pFastBacTMdual-ha1-mChIL-18真核表达质粒。最后将构建的真核表达质粒转座入大肠杆菌DH10Bac,并利用昆虫细胞进行转染。这个重组载体的构建为考察mChIL-18作为免疫增强剂的作用及下一步AIV疫苗的研究奠定了坚实的基础。

关键词：禽流感病毒 ha1基因鸡白细胞介素18成熟蛋白基因真核表达转染

密码子优化的甲型H1N1流感病毒ha/ha1基因真核载体的构建及初步表达

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2010年第11期38卷 7-13页

作者：李捧花张晓光王晶钰马晶张晓梅西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所肿瘤病毒室北京100052

【目的】构建甲型流感病毒H1N1血凝素基因ha/ha1的真核表达载体,并检测其在BHK-21细胞中的表达。【方法】按照人的偏爱密码子,对H1N1流感病毒的ha/ha1基因进行优化改造,以提高其表达量,经全基因合成后插入到真核表达载体pSNAV中,构建了... 详细信息

【目的】构建甲型流感病毒H1N1血凝素基因ha/ha1的真核表达载体,并检测其在BHK-21细胞中的表达。【方法】按照人的偏爱密码子,对H1N1流感病毒的ha/ha1基因进行优化改造,以提高其表达量,经全基因合成后插入到真核表达载体pSNAV中,构建了真核表达质粒pSNAV-Mod. ha与pSNAV-Mod. ha1;质粒转染BHK-21细胞,G418筛选后,用免疫荧光及Western blot技术检测其表达情况。【结果】成功构建了血凝素基因ha/ha1的真核表达载体。经G418筛选得到单克隆,免疫荧光技术和Western blot检测10代,显示Mod. ha和Mod. ha1皆可在BHK-21细胞中稳定表达。【结论】成功构建的流感病毒ha和ha1真核表达载体,可为今后开展多基因表达的基因工程疫苗及H1N1检测试剂奠定基础。

关键词：流感病毒 ha基因 ha1基因密码子优化真核表达

H5亚型禽流感病毒ha1基因在Sf9昆虫细胞中的表达及其抗原性检测

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中国兽医科学 2006年第5期36卷 352-356页

作者：齐岩孙凌霜王彬孙进华王君伟师东方东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

利用pBlueBacHis2杆状病毒载体在昆虫细胞Sf9中表达H5亚型禽流感病毒(AIV)的 ha1基因。Western-blotting证明ha1在昆虫细胞中得到了表达,其产物具有抗原性;且不与 H7、H9 AIV的抗血清发生交叉反应,具有良好的特异性。Dot-ELISA结果显示... 详细信息

利用pBlueBacHis2杆状病毒载体在昆虫细胞Sf9中表达H5亚型禽流感病毒(AIV)的 ha1基因。Western-blotting证明ha1在昆虫细胞中得到了表达,其产物具有抗原性;且不与 H7、H9 AIV的抗血清发生交叉反应,具有良好的特异性。Dot-ELISA结果显示,表达蛋白可以在非变性条件下与相应抗体作用,同样具有良好的抗原性。试验结果证明,表达的H5亚型AIV的 ha1蛋白,为检测禽类体内是否感染H5亚型AIV和监测免疫禽类血清H5抗体水平提供了优良的检测抗原。

关键词：禽流感病毒 ha1基因杆状病毒真核表达

1990～2000年间我国乙型流感病毒ha1基因演变的特征

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中华实验和临床病毒学杂志 2002年第3期16卷 278-280页

作者：陈继明郭元吉郭俊峰董婕中国预防医学科学院病毒学研究所流感室北京100052

目的　了解 1990～ 2 0 0 0年间我国乙型流感病毒ha1基因的演变特征。方法　提取病毒RNA ,经逆转录和聚合酶链式反应扩增后测序 ,测定的序列和Genbank中已有的相关序列进行比较。结果　①我国乙型流感病毒在此期间一直存在两个差别较大... 详细信息

目的　了解 1990～ 2 0 0 0年间我国乙型流感病毒ha1基因的演变特征。方法　提取病毒RNA ,经逆转录和聚合酶链式反应扩增后测序 ,测定的序列和Genbank中已有的相关序列进行比较。结果　①我国乙型流感病毒在此期间一直存在两个差别较大的谱系 ,除 1994年和 1997年Victoria谱系为主外 ,其余各年均以Yamagata谱系为主 ;② 1992年以后Yamagata谱系又分化出两个组 ,彼此间氨基酸序列差异达 6 % ;③ 1990～ 2 0 0 0年间非回复突变的、大的变异株引导乙型流感的流行 ;④除了个别毒株之外 ,同一年份我国不同地区流行的属于同一谱系的乙型毒株ha1基因序列差别不大。结论　我国乙型流感病毒 1990～ 2 0 0 0年间一直存在两个差别较大的谱系 ,其中Yamagata谱系在此期间又分化出两个组 ,谱系的更换和同一谱系内出现大的变异株具有重要的流行病学意义。

关键词：乙型流感病毒 ha1基因变异 1990~2000年中国

青海省2011-2012年乙型流感病毒ha1基因特性研究

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中国人兽共患病学报 2014年第1期30卷 32-35页

作者：于娟饶华祥李红卢囡囡易虎赵生仓青海省疾病预防控制中心西宁810007

目的了解2011—2012年青海省乙型流感病毒ha1基因变异情况。方法随机选择2011—2012年流感病原监测中分离到的乙型流感毒株，提取病毒RNA，通过RT—PCR法扩增病毒ha1基因，纯化产物进行核苷酸序列测定，采用DNA Star5．0MegAlign和MEGA4... 详细信息

目的了解2011—2012年青海省乙型流感病毒ha1基因变异情况。方法随机选择2011—2012年流感病原监测中分离到的乙型流感毒株，提取病毒RNA，通过RT—PCR法扩增病毒ha1基因，纯化产物进行核苷酸序列测定，采用DNA Star5．0MegAlign和MEGA4．0生物软件对测序结果进行分析处理，推导出氨基酸序列并进行基因特性分析。结果12株Victoria系乙流感病毒ha1区域核苷酸序列与2009—2011年WHO推荐疫苗株B／Brisbane／60／2008同源性为88．6％～95．7％，氨基酸替换数在2～5个，所有分离株均在1个相同的氨基酸位点发生了相同的替换，部分分离株在320位减少了一个糖基化位点。5株Yamagata系乙型流感病毒hal区域核苷酸序列与2011-2012年WHO推荐疫苗株B／Wisconsin／01／2010ha1区相比较同源性为97．7％～99．3％，氨基酸替换数在2—3个，所有分离株均在2个相同的氨基酸位点发生了相同的替换（N116K，D196N），在196位增加了一个糖基化位点。结论青海省2011—2012年乙型流感病毒ha1基因特性正在逐渐发生变异，但尚未形成抗原漂移，今后在流感监测工作中要加强流感病原学的监测，及时发现新的乙型流感病毒变异株。

关键词：乙型流感病毒 ha1基因抗原决定簇糖基化位点

H3N2亚型犬流感病毒ha1基因的原核表达及抗原性分析

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中国预防兽医学报 2011年第2期33卷 157-159页

作者：张敦伟熊永忠远立国贾坤张桂红李守军华南农业大学兽医学院广东广州510642 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨维科生物技术开发公司黑龙江哈尔滨150069

为原核表达H3N2亚型犬流感病毒(CIV)ha1蛋白,本研究利用特异性引物扩增CIV H3分离株的ha1基因,将其克隆到pMD18-T载体后进行序列测定。再将其亚克隆于pET-32a(+)中构建重组表达质粒pET-ha1。将该质粒转化于大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱... 详细信息

为原核表达H3N2亚型犬流感病毒(CIV)ha1蛋白,本研究利用特异性引物扩增CIV H3分离株的ha1基因,将其克隆到pMD18-T载体后进行序列测定。再将其亚克隆于pET-32a(+)中构建重组表达质粒pET-ha1。将该质粒转化于大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳分析,表达的重组蛋白约为58 ku。纯化的ha1蛋白经western blot和Dot-ELISA鉴定表明,表达的重组ha1蛋白可以与H3N2亚型CIV阳性血清发生特异性反应。

关键词：犬流感病毒 ha1基因原核表达抗原性

H7亚型禽流感病毒ha1基因在重组杆状病毒中的表达及其表达产物的抗原性

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中国兽医科学 2007年第3期37卷 232-235页

作者：贾珊珊孙凌霜齐岩孙进华姜亦飞王君伟东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

从pMD18-T-ha阳性质粒中扩增出H7亚型禽流感病毒(AIV)ha1基因,并亚克隆至昆虫杆状病毒转移载体pBlueBacHis2A,将筛选的重组质粒命名为pBlueBacHisH7-ha1,与线性化杆状病毒DNA(Bac-N-BlueDNA)共转染sf9昆虫细胞,挑取蓝色蚀斑,经3次蚀斑纯... 详细信息

从pMD18-T-ha阳性质粒中扩增出H7亚型禽流感病毒(AIV)ha1基因,并亚克隆至昆虫杆状病毒转移载体pBlueBacHis2A,将筛选的重组质粒命名为pBlueBacHisH7-ha1,与线性化杆状病毒DNA(Bac-N-BlueDNA)共转染sf9昆虫细胞,挑取蓝色蚀斑,经3次蚀斑纯化,得到重组杆状病毒rpBlueHisH7ha1。Western-blotting和间接免疫荧光试验结果显示,ha1在昆虫细胞中得到表达,且表达产物具有抗原性。抗原特异性试验证明,重组ha1蛋白与鸡H5、H9亚型AIV抗血清不发生交叉反应。血凝试验证明,重组ha1蛋白具有良好的血凝性。

关键词：禽流感病毒 ha1基因重组杆状病毒 H7亚型