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表达猪H1N1亚型流感病毒三聚体ha的重组慢病毒包装

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中国兽医学报 2012年第12期32卷 1828-1831,1845页

作者：李鑫宋战昀朱利塞樊娇王广美丛彦龙丁壮吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 吉林省出入境检验检疫局吉林长春130062

以RT—PCR扩增猪H1N1流感病毒ha基因，用GS-linker使ha与GCN4pⅡ连接。构建慢病毒蛋白表达系统。通过观察荧光、病毒转导效率、SDS—PAGE、Western blot验证重组慢病毒包装和ha—GCN4pⅡ融合蛋白表达情况。该系统能使外源基因得到持久... 详细信息

以RT—PCR扩增猪H1N1流感病毒ha基因，用GS-linker使ha与GCN4pⅡ连接。构建慢病毒蛋白表达系统。通过观察荧光、病毒转导效率、SDS—PAGE、Western blot验证重组慢病毒包装和ha—GCN4pⅡ融合蛋白表达情况。该系统能使外源基因得到持久和稳定的表达。结果，包装获得能够融合表达ha-GCN4pⅡ的重组慢病毒LV—ha-GCN4pⅡ，病毒滴度为1．1×10^6TU／mL；LV—ha—GCN4pⅡ能有效转导293T细胞。本试验成功构建了表达ha—GCN4PⅡ融合蛋白的慢病毒表达载体，获得的重组慢病毒不仅为后续动物试验测定其诱导的体液免疫和细胞免疫水平奠定了基础，同时也为研制猪H1N1亚型流感疫苗做出了有益尝试。

关键词：猪流感慢病毒载体 ha GCN4pⅡ

甲型H1N1流感病毒ha基因在昆虫细胞中的截短表达

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中国生物工程杂志 2011年第10期31卷 18-22页

作者：贾园沈阳邱亚峰史子学邵东华王晓杜邓绪芳王皓婷赵福广马志永中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 吉林农业大学长春130061

目的:利用Bac-to-Bac Baculovirus Expression System表达重组ha蛋白,Western blot及IFA方法鉴定其表达。方法:采用PCR方法扩增A/California/04/2009(H1N1)ha基因,将其克隆到pFastBacHT A载体上,重组质粒pFastBacHT-ha经双酶切及测序鉴定正确后,转化阳性重组载体进入*** DH10Bac感受态细胞中,通过Bluo-gal蓝白斑筛选、PCR鉴定获得重组转座子rBacmid-ha。从重组转座子中提取rBacmid-ha质粒DNA转染sf 9昆虫细胞,制备重组杆状病毒。重组杆状病毒感染sf 9细胞表达重组蛋白,Western blot及IFA鉴定重组蛋白表达情况。结论:成功构建了甲型H1N1流感病毒ha基因的昆虫杆状病毒表达载体,该表达载体转染昆虫细胞后制备的重组杆状病毒病毒滴度较高,重组杆状病毒表达的重组蛋白经Western blot及IFA鉴定后具有良好的免疫反应原性。

关键词：甲型 H1N1 Bac-to-Bac Baculovirus Expression System ha

ha和石灰组合剂对铜镍硫化矿浮选分离的影响

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中南矿冶学院学报 1991年第3期22卷 249-255页

作者：王毓华孟书青胡熙赓中南矿冶学院矿物工程系

通过黄铜矿和镍黄铁矿单矿物、混合矿和金川二矿区铜镍硫化矿矿石三产品浮选分离试验,证明在碱性矿浆中,用Z-200作捕收剂,ha和石灰作组合抑制剂,可有效地浮选分离黄铜矿和镍黄铁矿。

关键词： ha 石灰组合剂铜矿镍矿浮选

甲型流感病毒H1N1 ha蛋白在果蝇S2细胞中的表达及免疫原性研究

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中国人兽共患病学报 2012年第9期28卷 875-879页

作者：于虹温晶杨裔俞建萍佟双郭彦赵光宇寇志华周育森军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物安全国家重点实验室北京100071

目的在果蝇S2细胞表达甲型流感H1N1ha并分析其免疫原性。方法根据GenBank发表的甲型流感病毒(H1N1)ha基因序列,经过密码子优化,全基因合成编码ha的基因,并于其N端引入特定的空间折叠序列,定向连接至表达载体pMT/Bip/V5-His A,构建重组... 详细信息

目的在果蝇S2细胞表达甲型流感H1N1ha并分析其免疫原性。方法根据GenBank发表的甲型流感病毒(H1N1)ha基因序列,经过密码子优化,全基因合成编码ha的基因,并于其N端引入特定的空间折叠序列,定向连接至表达载体pMT/Bip/V5-His A,构建重组表达载体pMT-ha。酶切鉴定正确后,用脂质体转染法与辅助质粒pCoHygro共转染果蝇S2细胞,潮霉素加压筛选稳定细胞系,在无血清培养基中以硫酸铜溶液诱导表达,SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定,经镍柱纯化后免疫小鼠,ELISA检测其诱导的特异性抗体水平。结果获得了稳定表达ha的S2细胞株,目的蛋白以分泌形式表达于上清,并形成三聚体,可以被H1N1ha抗体识别;免疫小鼠后可诱导机体产生抗ha特异性抗体。结论获得了纯化的三聚体形式表达的ha蛋白,并具有较好的免疫原性,具有很好的疫苗应用前景。

关键词：甲型H1N1流感病毒昆虫S2 细胞 ha

乳腺癌和肝癌癌基因C—ha—ras第12位密码点突变测定的研究

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癌症 1990年第5期 406-407页

作者：孙文东何洛文邓国仁北京市肿瘤防治研究所北京市肿瘤防治研究所石河子新疆石河子医学院生化教研室

众所周知,点突变是导致癌瘤形成的重要机制之一,而在癌基因C—ha—ras第12位密码子的点突变,则是一个突变热点,正是由G被其它的碱基取代,使C—ha—ras基因被激活,它使C—ha—ras的产物P;蛋白第12位氨基酸从正常的甘氨酸变为实

关键词：乳腺癌乳腺肿瘤肝癌肝脏肿瘤 ha 点突变基因突变癌基因密码

共表达禽流感病毒ha和NA基因的重组禽痘病毒在SPF鸡的免疫效力试验

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中国农业科学 2004年第4期37卷 605-608页

作者：乔传玲姜永萍于康震田国斌陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

将禽流感病毒A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)毒株的ha和NA2个基因同源重组到禽痘病毒基因组中,获得了能同时高效表达这2种蛋白的重组禽痘病毒(rFPV-ha-NA)。将rFPV-ha-NA经翅膀刺种途径接种8周龄SPF鸡,免疫后4周分别用10LD50的高致病力... 详细信息

将禽流感病毒A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)毒株的ha和NA2个基因同源重组到禽痘病毒基因组中,获得了能同时高效表达这2种蛋白的重组禽痘病毒(rFPV-ha-NA)。将rFPV-ha-NA经翅膀刺种途径接种8周龄SPF鸡,免疫后4周分别用10LD50的高致病力禽流感病毒(HPAIV)A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)和A/FPV/Rostock/34(H7N1)毒株进行攻击。结果重组禽痘病毒免疫鸡群诱导产生了高水平的抗体,能够完全抵抗H5N1和H7N1亚型病毒的致死性攻击;并可有效阻止病毒在泄殖腔的排出。而禽痘病毒免疫组和非免疫对照组在攻毒后全部发病并死亡。

关键词：禽流感病毒 ha NA 重组禽痘病毒免疫效力

红花黄色素对大鼠中毒性肝纤维化血清和肝组织ha和LN及胶原含量的影响

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中国病理生理杂志 2001年第8期17卷 113-114页

作者：白娟王哲沈阳辽宁中医学院病理学教研室110032

目的:本实验以透明质酸(ha)、层粘连蛋白(LN)为指标,观察CCl4诱导大鼠中毒性肝损伤和肝纤维化后肝组织内储脂细胞变化和胶原的沉积及红花黄色素对其变化的影响,以探讨红花黄色素对中毒性肝纤维化防治作用的机制.方法: Wistar大鼠随机分... 详细信息

目的:本实验以透明质酸(ha)、层粘连蛋白(LN)为指标,观察CCl4诱导大鼠中毒性肝损伤和肝纤维化后肝组织内储脂细胞变化和胶原的沉积及红花黄色素对其变化的影响,以探讨红花黄色素对中毒性肝纤维化防治作用的机制.方法: Wistar大鼠随机分为3组:①病理模型组:接受40% CCl4一橄榄油皮下注射,剂量为1.2 mL/kg体重,每周2次,共12周,与治疗组等容量生理盐水灌胃;②红花黄色素治疗组接受40% CCl4一橄榄油注射,方法、剂量同病理模型组,同时红花黄色素550 mg/kg体重灌胃,每日1次,共12周;③正常对照组接受橄榄油皮下注射,方法、剂量同上.各组分别于实验开始后,每隔3周随机处死5只大鼠,剩余大鼠于12周末全部处死.断头采血,分离血清,取1 g新鲜肝组织匀浆,用放免法测定大鼠血清和肝匀浆中ha、LN含量.肝组织V-G染色,用病理图像分析系统进行胶原定量分析.用透射电镜观察肝组织内储脂细胞变化.结果: 红花黄色素治疗组大鼠血清和肝匀浆中ha、LN含量及肝组织内胶原含量和储脂细胞变化显著低于病理模型组.结论: 红花黄色素能抑制肝脏储脂细胞增殖转化及ha、LN的合成,减少胶原沉积,有防治CCl4诱发中毒性肝纤维化的作用.

关键词：肝组织胶原含量大鼠红花黄色素中毒性肝纤维化肝疾病血清 LN ha

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肿瘤患者血清ha和LN检测的临床意义

中国肿瘤临床 1997年第7期24卷 534-536页

作者：尹石华山东胜利石油管理局胜利医院山东省东营市257055

透明质酸和层粘蛋白均属于细胞外间质成分（ECM），已有文献报道ha和LN在肝病患者血清中显著增加，特别是肝癌患者血清ha、LN含量增加非常显著。ECM是一组由胶原蛋白、糖蛋白及蛋白多糖等成分组成的细胞外环境，肿瘤的生长、浸润和转移... 详细信息

透明质酸和层粘蛋白均属于细胞外间质成分（ECM），已有文献报道ha和LN在肝病患者血清中显著增加，特别是肝癌患者血清ha、LN含量增加非常显著。ECM是一组由胶原蛋白、糖蛋白及蛋白多糖等成分组成的细胞外环境，肿瘤的生长、浸润和转移无不与ECM有着重要的关系。为此，我们对61例恶性肿瘤，15例良性肿瘤及37例正常人血清进行了ha、LN的含量测定，以探求ha、LN与肿瘤疾病的关系。1材料与方法1.1检测对象恶性肿瘤门例，男35例，女26例；年龄27～79岁。均为B超、CT影像、内窥镜及其它检查，并经病理学证实的中晚期癌症患者。其中肝癌18例，肺癌15例，胃癌8例，结肠癌13例，食管癌7例。良性肿瘤15例，男6例，女9例，年龄32～73岁。其中甲状腺瘤6例，子宫肌瘤5例，椎管瘤3例，垂体瘤1例。正常对照37例，男22例，女15例，年龄28～59岁，均为健康查体人员。经检查无心、肝、肾等其它疾病。1．2方法受检者均晨取空腹静脉血2～3毫升，分离血清，一25C冰冻保存待测。血清ha、LN检测采用RIA法，试剂由上海海军医学研究所供给，仪器为西安262厂生产的FJ－20OSP型全自动γ免疫计数器测定，数据由微机自动处理。...

关键词：肿瘤 ha LN 血清诊断

TGF-β3,ha,PTHrP对人脐带间充质干细胞成软骨分化的影响

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中国比较医学杂志 2019年第10期29卷 26-32页

作者：周晓旭彭俊胡海张映辉佟明华顾为望南方医科大学实验动物中心广州510000 南部战区空军医院广州510000 五邑大学广东江门529020

目的探讨TGF-β3、透明质酸(hyaluronic acid,ha)、甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormonerelated protein,PTHrP)对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUC-MSCs)成软骨分化的影响,优化培养条件的组合方式。方法体外分离培养人脐带间充质干细胞,形态学观察,流式检测表面抗体及成脂、成骨分化鉴定。取P3代细胞,加入不同组合的细胞因子进行成软骨诱导培养,分为1~21 d TGF-β3(G1)、1~28 d TGF-β3(G2)、1~21 d TGF-β3/1~21 d ha(G3)、1~28 d TGF-β3/1~28 d ha(G4)、1~21 d TGF-β3/1~21 d ha、14~21 d PTHrP(G5)、1~28 d TGF-β3、1~28 d ha、14~28 d PTHrP(G6)、1~28 d TGF-β3、1~28 d ha、21~28 d PTHrP(G7) 7组。结果诱导培养28 d和21 d相比较,TGF-β3组和TGFβ3/ha组COL2α1、COL10α1、SOX9、ACAN的表达量上升;TGFβ3/ha/PTHrP组COL2α1、SOX9、ACAN的表达量上升,COL10α1下降。培养相同天数时,TGFβ3/ha组较TGF-β3组COL2α1、SOX9、ACAN的表达量上升;TGFβ3/ha/PTHrP组同TGF-β3/ha组比较,COL2α1、ACAN、SOX9的表达量增加,COL10α1表达量下降,且PTHrP加入2周较1周效果更明显。差异均有统计学意义。HE和阿利新蓝染色结果与实时荧光定量PCR的结果一致。结论 TGF-β3、ha、PTHrP可以不同程度的促软骨分化,其中联合应用TGF-β3,ha 28 d,在第14天时加入PTHrP一起培养,这种组合方式促进HUC-MSCs成软骨分化效果最好,且能抑制细胞肥大。

关键词： TGF-β3 ha PTHrP 人脐带间充质干细胞成软骨分化