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6株鸡h9亚型禽流感病毒的鉴定及免疫原性分析

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6株鸡H9亚型禽流感病毒的鉴定及免疫原性分析

作者：何柳芬华南农业大学

学位级别：硕士

1990年早期,禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)在意大利首次确认,而今该病毒已经在世界各国流行分布。该病毒主要感染各种家禽、水禽和候鸟,同时也在人类和低等哺乳动物之间传播。1994年,我国陈伯伦等在发病鸡群中分离出h9亚型禽... 详细信息

1990年早期,禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)在意大利首次确认,而今该病毒已经在世界各国流行分布。该病毒主要感染各种家禽、水禽和候鸟,同时也在人类和低等哺乳动物之间传播。1994年,我国陈伯伦等在发病鸡群中分离出h9亚型禽流感病毒。近二十年来,我国各个地区每年均出现大量h9亚型禽流感的流行,该病毒主要引起家禽发育迟缓、呼吸困难和产蛋下降,严重影响我国养殖业的健康发展。为了解我国近年来流行的h9亚型禽流感病毒的遗传变异情况,本研究对2014年015年不同省份采集的疑似h9亚型禽流感病毒病料进行病毒分离,通过病毒鉴定和序列测定,分析现流行的h9亚型禽流感病毒的基因型和遗传变异情况;结合血清交叉抑制实验,对h9亚型禽流感病毒分离株和h9亚型禽流感病毒疫苗株进行抗原差异性分析,揭示2014015年来我国h9亚型禽流感病毒的流行情况。本研究结果表明,2014015年分离的6株禽流感病毒毒株均为h9亚型禽流感病毒毒株。通过hA基因的扩增和序列比对分析,分离株hA序列均与h9亚型禽流感病毒分支4.2.5遗传距离较近,与国内h9亚型禽流感F疫苗株和SS疫苗株(分支4.2.3)的遗传距离较远。通过hA序列推导的氨基酸序列比对分析,分离株与F、SS株的糖基化位点存在较大差异;hA蛋白裂解位点(33543位)附近均无连续碱性氨基酸插入,说明分离株符合低致病性禽流感病毒的分子特征。交叉hA-hI试验与抗原差异性结果表明,本研究h9亚型禽流感病毒分离株与疫苗株hI值相差较大,分离代表株WS-JL、WS-hD株与疫苗株F、SS株抗原性差异系数(R值)均低于0.125,抗原性差异显著。本研究为我国h9亚型禽流感防控提供重要参考。

关键词： h9亚型禽流感潜在糖基化位点进化树相似性

2010—2011年河南省部分地区h9亚型禽流感、新城疫和鸡传染性支气管炎的流行病学调查

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中国农学通报 2012年第8期28卷 72-76页

作者：岳旭龙陈礼朋李双亮高文明张宇耕崔保安李新生河南农业大学牧医工程学院郑州450002

为了解河南省h9亚型禽流感、新城疫和鸡传染性支气管炎的流行情况。从河南省15个地市发病鸡场采集病鸡组织样品309份,采用鸡胚尿囊腔传代接种法分离病毒,并利用血凝试验(hA)、血凝抑制试验(hI)和RT-PCR试验对分离毒株进行鉴定。结果表... 详细信息

为了解河南省h9亚型禽流感、新城疫和鸡传染性支气管炎的流行情况。从河南省15个地市发病鸡场采集病鸡组织样品309份,采用鸡胚尿囊腔传代接种法分离病毒,并利用血凝试验(hA)、血凝抑制试验(hI)和RT-PCR试验对分离毒株进行鉴定。结果表明:3类病毒的总检出率为26.54%,其中NDV、IBV和AIV(h9)的检出率分别为11.00%、3.88%和11.65%。2010年10月NDV和IBV检出率均最高,分别为30.00%、15.00%,2011年1月AIV(h9)检出率最高,为43.24%。2类病毒混合感染的检出率达3.24%。表明2010年7月—2011年4月h9亚型禽流感、新城疫以及鸡传染性支气管炎在河南省部分地区普遍流行,且存在一定程度的混合感染。为有效预防和控制河南省3种主要疫病提供了科学依据。

关键词：流行病学调查 h9亚型禽流感新城疫鸡传染性支气管炎河南省

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h9亚型禽流感的流行特点及其疫苗市场分析

兽医导刊 2010年第3期 69-71页

作者：李建丽刘国英张金花瑞普(保定)生物药业有限公司河北保定071000 藁城畜牧兽医工作站河北藁城052160

在禽类的一些重要传染病中，如新城疫、禽流感、传染性支气管炎、传染性法氏囊等，禽流感仍是危害养禽业发展的头号传染病。禽流感是由A型流感病毒引起的一种禽类感染和／或疾病综合征。自1878年在意大利的鸡群首次发现该病毒以来，世... 详细信息

在禽类的一些重要传染病中，如新城疫、禽流感、传染性支气管炎、传染性法氏囊等，禽流感仍是危害养禽业发展的头号传染病。禽流感是由A型流感病毒引起的一种禽类感染和／或疾病综合征。自1878年在意大利的鸡群首次发现该病毒以来，世界各地均有禽流感的暴发和流行，造成了巨大的经济损失。

关键词： h9亚型禽流感市场分析流行特点 A型流感病毒传染性支气管炎疫苗传染性法氏囊经济损失

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h9亚型禽流感的流行与防制

H9亚型禽流感的流行与防制

山西部分地区h9亚型禽流感病毒株的分离鉴定及抗体水平检测

中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会

作者：唐秀英付朝阳冯菊艳中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

禽流感自一百多年前,在意大利发现流行以来,在许多国家都有各种亚型禽流感的暴发和流行。近几年,我国部分地区也发现了h9亚型禽流感的流行,引起鸡群生产性能的下降,损失严重。因禽流感有广泛传播、临床症状和病理变化易于与其他疫病相... 详细信息

禽流感自一百多年前,在意大利发现流行以来,在许多国家都有各种亚型禽流感的暴发和流行。近几年,我国部分地区也发现了h9亚型禽流感的流行,引起鸡群生产性能的下降,损失严重。因禽流感有广泛传播、临床症状和病理变化易于与其他疫病相混淆的特点,易误诊或延误治疗,从而易造成巨大的经济损失,故应引起各界的高度重视,并应在全国范围内大力加强对h9亚型禽流感的鉴别诊断、预防和综合防制。

关键词： h9亚型禽流感流行预防防制

来源： cnki会议评论

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山西部分地区H9亚型禽流感病毒株的分离鉴定及抗体水平检测

作者：王卓山西农业大学

学位级别：硕士

禽流感(Avian Influenza,AI)是由正黏病毒科的禽流感病毒引起的一种急性传染病,由感染的禽流感病毒的致病力不同,分为高致病性禽流感和低致病性禽流感。h9N2亚型禽流感是流传最为广泛的低致病性禽流感,主要影响禽类的呼吸系统和消化系... 详细信息

禽流感(Avian Influenza,AI)是由正黏病毒科的禽流感病毒引起的一种急性传染病,由感染的禽流感病毒的致病力不同,分为高致病性禽流感和低致病性禽流感。h9N2亚型禽流感是流传最为广泛的低致病性禽流感,主要影响禽类的呼吸系统和消化系统。在我国已流行20多年,危害重大。本试验于2016年～2018年通过市场采样收集太原和晋中部分地区禽类的肛咽拭子样品共700份,通过接种鸡胚并盲传三代后,进行RT-PCR检测,成功检测出94份阳性样品。并针对其中的15份阳性样品的hA、NA、M、NS、NP、PA、PB1和PB2八个基因片段进行RT-PCR扩增,测序后进行序列相关分析。结果表明这15株毒株与一些经典疫苗株如F98株、SD696株相比均发生了较大的变异。另外这15株毒株的hA蛋白受体结合位点左侧臂中的第226位～228位氨基酸位点突变为LMG,使得该病毒就具有了结合唾液酸受体α-2,6-Gal的能力,从而有感染人类的风险。为了进一步了解山西省内禽流感的防控情况,本试验收集了2019年太原、忻州地区的血清和卵黄样品共1548份,进行了hI试验检测样品中的h9亚型AIV的抗体水平。发现各地区免疫情况均达标,但是部分地区也有超过25%的疑似感染率,怀疑是部分疫苗已经不能完全有效的保护机体不受当前山西流行的AIV毒株感染。综上所述,山西地区的h9亚型AIV在长期的免疫选择压力下,已经发生了较大程度的变异,一些经典的疫苗对机体的保护力有所下降。有必要持续监测AIV流行情况,了解AIV的变异情况,避免h9亚型禽流感在山西地区大范围流行,也为选择疫苗提供理论依据。

关键词： h9亚型禽流感分离鉴定遗传进化抗体水平分析

河南部分地区h9亚型禽流感病毒的分离鉴定及交叉免疫攻毒保护试验

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中国农学通报 2012年第26期28卷 67-70页

作者：张晓娟刘媛媛王俊亚李新生高文明李双亮李燕崔保安河南农业大学牧医工程学院郑州450002

为了分离鉴定河南漯河、郑州h9亚型禽流感病毒及交叉免疫攻毒保护试验。于2011年用SPF鸡胚从河南漯河、郑州疑似感染h9亚型禽流感病毒的病料中分离出2株病毒,通过血凝及血凝抑制试验和RT-PCR方法进行鉴定,确定为AIVh9亚型;用河南省动物... 详细信息

为了分离鉴定河南漯河、郑州h9亚型禽流感病毒及交叉免疫攻毒保护试验。于2011年用SPF鸡胚从河南漯河、郑州疑似感染h9亚型禽流感病毒的病料中分离出2株病毒,通过血凝及血凝抑制试验和RT-PCR方法进行鉴定,确定为AIVh9亚型;用河南省动物性食品安全重点实验室于2001年分离的2株h9亚型禽流感病毒分别制成油乳剂灭活疫苗免疫SPF鸡,然后再用上述4株病毒对免疫鸡群进行交叉攻毒,进行交叉免疫保护试验,测定其交叉免疫保护作用。结果表明:成功分离出2株h9亚型禽流感病毒;用2001年分离毒株所制备出的灭活疫苗免疫鸡后,试验鸡体内抗h9亚型禽流感hI抗体效价均明显上升,平均hI效价均大于11log2,不同毒株所诱导产生的hI抗体效价存在一定的差异;不同时期及地点分离的h9亚型禽流感流行毒株间均产生了较好的交叉保护,且同一地区的保护率更高,2001年的分离株对目前的流行毒株仍有很好的保护作用。

关键词： h9亚型禽流感分离鉴定毒株交叉保护

新城疫和h9亚型禽流感抗体胶体金定量检测方法的建立

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新城疫和H9亚型禽流感抗体胶体金定量检测方法的建立

作者：杨帆华中农业大学

学位级别：硕士

新城疫(Newcastle disease,ND)与禽流感(Avian influenza,AI)是目前危害我国养禽业发展的重要呼吸道疾病。疫苗免疫是其有效的预防手段,免疫抗体监测是评价免疫效果,掌握疫情动态最直接、最有效的方法,因此,免疫抗体水平监测已成为各地... 详细信息

新城疫(Newcastle disease,ND)与禽流感(Avian influenza,AI)是目前危害我国养禽业发展的重要呼吸道疾病。疫苗免疫是其有效的预防手段,免疫抗体监测是评价免疫效果,掌握疫情动态最直接、最有效的方法,因此,免疫抗体水平监测已成为各地养禽场和诊断室的常规监测项目。目前新城疫、禽流感抗体定量检测方法主要为hI与ELISA检测方法,该类方法操作步骤繁琐,耗时长,需要专业人员进行操作,无法实现圈边快速检测,因此建立简便、快速、定量且能实现圈边检测的检测方法对于禽流感、新城疫的防控具有重要意义。本研究利用胶体金免疫层析方法,结合免疫定量速测仪的信号识别,以hI方法为标准,分别建立了NDV与h9 AIV亚型抗体快速定量检测方法。该方法可用于圈边快速检测,为NDV、h9 AIV亚型抗体水平检测及免疫效果评估提供了新的方法。具体研究结果如下:1.目的蛋白的表达纯化分别构建重组原核表达质粒pSmart-hN与pSmart-hA,表达重组蛋白NDV-hN与AIV-h9-hA,纯化获得浓度为1.0 mg/mL的hN蛋白与1.1 mg/mL的hA蛋白。2.检测方法的建立及条件优化本研究采用胶体金免疫层析方法,利用双抗原夹心原理分别建立NDV抗体与h9 AIV亚型病毒抗体快速定量检测方法。NDV抗体定量检测方法最佳反应体系为:吸水垫h5073,金标垫Fusion4,样品垫RB65,包被液为ph 7.2且含2%BSA的PB缓冲液,样品封闭液为PB缓冲液,质控(C)线包被0.5 mg/mL的羊抗兔IgG,包被量为0.9μL/cm,检测线1、2(T1、T2)分别包被0.8 mg/mL与0.6 mg/mL的NDV-hN,包被量为0.9μL/cm;h9 AIV亚型抗体定量检测方法最佳反应体系为:吸水垫h5073,金标垫Fusion4,样品垫Ahlstrom 8964,包被液为ph 7.2且含2%BSA的PB缓冲液,样品封闭液为Tris缓冲液,质控(C)线包被0.5 mg/mL的羊抗兔IgG,包被量为0.9μL/cm,检测线1、2(T1、T2)分别包被1.0 mg/mL与0.8 mg/mL的AIV-h9-hA,包被量为0.9μL/cm。3.检测方法的性能测定用免疫定量速测仪分别测定不同hI效价的标准阳性样品的T1、T2及C线信号值,以hI效价为X轴,以信号比值[(T1+T2)/C]为Y轴,建立标准曲线,NDV抗体快速定量检测方法的曲线方程为y=0.0967x-0.5143x+1.2017,相关系数R为0.9903,检测卡检测限为2,特异性高,检测卡的批内变异系数在6.63-9.07%,批间在7.96-9.81%,保存期为6个月;h9 AIV亚型抗体快速定量检测方法的曲线方程为y=0.3896x-0.6842,相关系数R为0.9656,检测卡检测限为2,特异性高,检测卡的批内变异系数在2.00-3.80%,批间在2.10-4.18%,重复较好。保存期为6个月。4.检测方法的初步应用用本研究建立的快速定量检测方法对临床血清样品进行了检测,以hI检测为对照,NDV与h9 AIV亚型抗体快速定量检测方法与hI的符合率分别为82.21%与80.56%,表明本研究建立的检测方法可应用于临床样品的检测。

关键词：新城疫 h9亚型禽流感胶体金免疫层析抗体定量检测

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h9亚型禽流感流行病学调查

上海畜牧兽医通讯 2012年第3期 36-37页

作者：金爱华沈强余红梅何海红方桂明李守刚上海市奉贤区动物疫病预防控制中心 201400

禽流感（Avian Influence,AI）是禽流行性感冒的简称,是由正粘病毒科、流感病毒属A型流感病毒引起的禽类（家禽或野禽,亦有部分哺乳动物）的一种传染病。根据禽流感致病力的不同可分为非致病性禽流感（NPAI）、低致病性禽流感（LPAI）... 详细信息

禽流感（Avian Influence,AI）是禽流行性感冒的简称,是由正粘病毒科、流感病毒属A型流感病毒引起的禽类（家禽或野禽,亦有部分哺乳动物）的一种传染病。根据禽流感致病力的不同可分为非致病性禽流感（NPAI）、低致病性禽流感（LPAI）和高致病性禽流感（hPAI）3种。在我国,高致病性禽流感以h5N1亚型为代表,低致病性禽流感以h9N2亚型为主型。

关键词： h9亚型禽流感流行病学调查高致病性禽流感低致病性禽流感 A型流感病毒禽流行性感冒 h5N1亚型 h9N2亚型

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h9亚型禽流感病毒变异的研究进展

河南农业 2016年第12期 43-44页

作者：李燕杨小杰肖杰河南农业职业学院

对国内外h9亚型禽流感已分离毒株的基因序列分析、流行情况及变异等方面的研究进行了综述,分析了目前h9亚型低致病流感的流行变异情况,为以后的研究方向提供科学的理论依据。

关键词： h9亚型禽流感抗原变异致病性变异