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两株鸭源h6n2亚型禽流感病毒的序列分析及对鸡的致病性研究

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中国预防兽医学报 2011年第4期33卷 270-275页

作者：丁晴微邓国华施建忠李印崔鹏飞齐瑛琳于杨崔佳莹邱伯根陈化兰湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了解鸭源h6n2亚型禽流感病毒(AIV)的生物学特性,本研究对两株鸭源h6n2亚型AIV[A/duck/hubei/Sd061/2008(hB/061/08)和A/duck/Fujian/S2080/2009(FJ/080/09)]进行序列分析和致病性试验。序列分析显示:两株病毒的hA和nA基因均来源于我国近年流行的h6亚型病毒株,但是hB/061/08株的内部基因可能来源于h9、h5等其他亚型。与病毒株hB/061/08nP、PA、PB2基因的核苷酸同源性最高的病毒株为A/environment/hunan/2-84/2007(h9n2);与M、PB1和nS基因的核苷酸同源性最高的病毒株分别为A/duck/Zhejiang/11/2000(h5n1)、A/chicken/hebei/7/2008(h9n2)和A/chicken/henan/L1/2008(h9n2)。两株病毒的抗原差异性较显著,相关系数为0.49;用106EID50病毒剂量感染4周龄SPF鸡,结果显示FJ/080/09株不能感染鸡,而hB/061/08株在鸡体内能够高效复制,并通过咽喉和泄殖腔持续排毒。鸡群感染后第3d采取脏器样品,在气管和肺部能够检测到病毒存在,部分脏器和器官的组织学观察显示存在一定程度的病理变化。以上数据表明,h6亚型AIV在跨越不同宿主感染的传播过程中,对新宿主适应能力的差异导致对其致病性的差异。

关键词：禽流感病毒 h6n2 基因组分析抗原分析致病性

1株重组h6n2禽流感病毒全基因组特征分析

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中国人兽共患病学报 2021年第1期37卷 91-98页

作者：曹蓝夏丹刘艳慧曾庆陈艺韵陆剑云李魁彪张周斌狄飚广州市疾病预防控制中心广州510440

目的掌握广州地区禽类市场h6n2亚型禽流感病毒的分子遗传特征,为禽流感的科学防控提供研究数据。方法对禽类市场外环境分离株A/En/Guangzhou/13565/2018(h6n2)进行全基因组序列测定,应用生物信息软件分析分子遗传特征。结果A/En/Guangzh... 详细信息

目的掌握广州地区禽类市场h6n2亚型禽流感病毒的分子遗传特征,为禽流感的科学防控提供研究数据。方法对禽类市场外环境分离株A/En/Guangzhou/13565/2018(h6n2)进行全基因组序列测定,应用生物信息软件分析分子遗传特征。结果A/En/Guangzhou/13565/2018(h6n2)毒株各基因片段最大相似度毒株均为国内h6n2禽流感病毒,核苷酸最大相似性在96.85%~98.22%之间,氨基酸最大相似性在96.30%~99.30%之间。各基因片段均属于欧亚谱系,hA、PB2、PB1、PA、M、nS基因归属于ST339-like分支,nP基因归属于hn573-like分支,发生多分支进化来源的重组。nA基因在hxn2亚型基因中归属于h6n2分支。该病毒为禽源低致病性病毒,但在PB2-89位、PB1-473位、PB1-F2蛋白、PA-409位、M1-30/215位、nS1-42/205位均发生对哺乳动物致病性增强的氨基酸变异。结论广州地区禽类市场监测发现的1株重组h6n2禽流感病毒,属于禽源低致病性病毒,但存在发生跨宿主传播的潜在风险,需加强监测。

关键词：禽流感病毒 h6n2 基因重组变异

1株野鸭源h6n2亚型AIV对SPF鸭的致病性

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中国兽医学报 2014年第5期34卷 761-765页

作者：管雪婷刘景利柴洪亮左欣悦王飞刘丽玲陈光华育平李雁冰东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040 东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150030 中国农科院哈尔滨兽医研究所黑龙江哈尔滨150001

本研究选取2周龄SPF鸭(绍兴麻鸭)自天然孔感染1株野鸭源h6n2亚型LPAIV,评价其对幼龄鸭的致病性。结果显示,试验感染鸭临床症状较轻微,病毒在鸭消化道复制能力较呼吸道内更强,且具有水平传播的能力。仅能在盲肠扁桃体和法氏囊2个组织器... 详细信息

本研究选取2周龄SPF鸭(绍兴麻鸭)自天然孔感染1株野鸭源h6n2亚型LPAIV,评价其对幼龄鸭的致病性。结果显示,试验感染鸭临床症状较轻微,病毒在鸭消化道复制能力较呼吸道内更强,且具有水平传播的能力。仅能在盲肠扁桃体和法氏囊2个组织器官中检测到病毒,但可对法氏囊等多个组织器官造成不同程度的损伤。此外感染鸭可产生hI抗体,并在第21天达到高峰。结果表明,该株h6n2亚型LPAIV对幼龄鸭的致病力较低,在AIV病毒传播中幼龄鸭起到了一定作用,为研究h6n2亚型LPAIV的致病机制及AIV发病机理提供了理论数据。

关键词：野鸟低致病性禽流感病毒 h6n2 致病性 SPF鸭

禽流感h6n2病毒nP、PA基因的RnAi研究

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禽流感H6N2病毒NP、PA基因的RNAi研究

作者：于丹吉林大学

学位级别：硕士

禽流感(Avian influenza,AI)是由正黏病毒科A型流感病毒引起的一种急性全身性或呼吸器官性传染病,严重威胁了世界养禽业,常造成巨大的经济损失。更严峻的是禽流感可以感染人类,并且死亡率较高。因此,加强禽流感疾病的防治研究,无论对于... 详细信息

禽流感(Avian influenza,AI)是由正黏病毒科A型流感病毒引起的一种急性全身性或呼吸器官性传染病,严重威胁了世界养禽业,常造成巨大的经济损失。更严峻的是禽流感可以感染人类,并且死亡率较高。因此,加强禽流感疾病的防治研究,无论对于养殖业,还是对于人类的健康都具有及其重要的意义。目前对于禽流感的防治主要采用切断传播途径和疫苗注射等综合防御措施,但由于禽流感病毒的变异率较高,目前所用疫苗的免疫效果并不是很理想,为此迫使全球科研人员都在努力寻求控制禽流感的新方法。 RnAi(RnA interference)即RnAi,是近年来发现的在生物体内普遍存在的一种古老的生物学现象,它可在转录水平、转录后水平和翻译水平上阻断基因的表达。作为一项新兴的生物技术,RnAi有着广泛的应用前景,特别是对于病毒性疾病的防治,是一种非常理想的方法。为了筛选出理想的禽流感病毒干扰序列,本实验针对禽流感h6n2病毒的nP和PA基因,分别设计了两对的siRnA,将siRnA转染到鸡胚和鸡胚成纤维细胞中,通过细胞病变观察、实时荧光RT-PCR和血凝实验检测,结果表明针对nP和PA基因设计的2对siRnA均抑制了病毒的增值。

关键词： h6n2 nP、PA基因 RnAi

广西鸭源h6n2亚型禽流感病毒分离株nA基因的进化分析

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广西畜牧兽医 2018年第4期34卷 182-183页

作者：莫胜兰陆文俊梁媛邹联斌粟艳琼屈素洁尹彦文郑敏李军甘海霞施开创广西壮族自治区动物疫病预防控制中心广西南宁530001

为了丰富禽流感病毒(AIV)神经氨酸酶(nA)的分子流行病学资料,通过对2016年在广西活禽市场分离的4株鸭源h6n2亚型AIV的nA基因进行分析,发现其nA基因全长约1 449bp,开放阅读框(ORF)位于第19~1 428位,长度均为1 410bp,ORF编码469个氨基酸... 详细信息

为了丰富禽流感病毒(AIV)神经氨酸酶(nA)的分子流行病学资料,通过对2016年在广西活禽市场分离的4株鸭源h6n2亚型AIV的nA基因进行分析,发现其nA基因全长约1 449bp,开放阅读框(ORF)位于第19~1 428位,长度均为1 410bp,ORF编码469个氨基酸。将广西4个毒株的nA基因与广东、湖北、华东地区等共14个h6n2毒株的nA基因进行比较,并绘制了基因遗传进化树。结果显示:广西的4株h6n2亚型分离株的nA基因之间的核苷酸相似性为99.7%~99.9%;而与其他14个毒株的相似性在93.5%~99.6%之间,与2009年广东分离株的相似性最高为99.6%、2008年湖北毒株分离株相似性次之为98.5%、2008年华东分离株的相似性最低为93.5%。表明h6n2亚型AIV流行毒株的nA基因亲缘关系与空间距离密切相关,在一定的时间内距离越近相似性越高,同时,亲缘关系随着毒株分离的时间变化而变化,年代相距越远,亲缘关系越低。

关键词：禽流感病毒鸭 h6n2 nA 序列分析

AIV的h6n2亚型nA与M2融合基因的原核共表达

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畜牧与兽医 2012年第S1期44卷 310-310页

作者：张珊珊王志宇卫吉芸刘桂林山西农业大学动物科技学院山西太谷030801 山西省农业科学院畜牧兽医研究所山西太原030032

禽流感(avian influenza,AI)是由A型流感病毒引起的禽类的一种从呼吸系统感染到败血症等多种症状的传染病,禽类感染后病死率很高。禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)的神经氨酸酶(neuraminidasen,nA)是一种表面抗原,在病毒感染宿... 详细信息

禽流感(avian influenza,AI)是由A型流感病毒引起的禽类的一种从呼吸系统感染到败血症等多种症状的传染病,禽类感染后病死率很高。禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)的神经氨酸酶(neuraminidasen,nA)是一种表面抗原,在病毒感染宿主细胞时,可以通过识别细胞表面的AIV受体来促进病毒进入靶细胞内。另一方面,还可为将要出芽的病毒粒子清理通道,

关键词：神经氨酸酶 nA h6n2 M2 AIV avian Influenza 类感染呼吸系统感染融合基因

辽宁省野鸟源h6亚型禽流感病毒的遗传进化规律与生物学特性分析

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辽宁省野鸟源H6亚型禽流感病毒的遗传进化规律与生物学特性分析

作者：苏超凡沈阳农业大学

学位级别：硕士

野鸟是A型流感病毒的自然储存宿主,在A型流感病毒的传播和遗传进化中起到了至关重要的作用。A型流感病毒宿主范围广泛,能够感染多种家禽,猪、马、水貂等哺乳动物和人类,给公共卫生造成极大的威胁。辽宁省位于东亚-澳大利亚候鸟迁徙路线... 详细信息

野鸟是A型流感病毒的自然储存宿主,在A型流感病毒的传播和遗传进化中起到了至关重要的作用。A型流感病毒宿主范围广泛,能够感染多种家禽,猪、马、水貂等哺乳动物和人类,给公共卫生造成极大的威胁。辽宁省位于东亚-澳大利亚候鸟迁徙路线上,是候鸟迁徙中的重要休憩地也是野鸟流感病毒监测的重点区域。h6亚型禽流感病毒(Avian Influenza virus,AIV)在1965年首次从美国火鸡中分离。1972年我国台湾省首次发现h6亚型AIV。自2002年以来,h6亚型AIV成为中国南方活禽市场中流行的主要亚型之一。目前,h6亚型AIV已具备感染多种哺乳动物的能力,但相关分子机制还有待研究。本研究于2021年在辽宁省开展的野鸟AIV监测中,分离到一株h6n2亚型AIV,命名为A/wild bird/Liaoning/DD535(Ln/DD535)。遗传进化分析发现,这株h6n2亚型野鸟AIV的七个基因片段属于欧亚谱系,而M基因属于北美谱系,因此Ln/DD535为跨洲际重组毒株。全基因组序列分析发现,Ln/DD535存在多个与哺乳动物适应性相关的氨基酸位点突变。生物学特性分析发现,Ln/DD535可在小鼠体内有效复制,对小鼠呈低致病性。在感染小鼠的肺脏中发现哺乳动物适应性突变株,PB2蛋白627位氨基酸由谷氨酸突变为赖氨酸,hA蛋白110位氨基酸由丙氨酸突变为缬氨酸。突变毒株在小鼠体内复制能力较亲本毒株增强。本研究在辽宁省候鸟监测过程中分离到一株跨洲际重组h6n2亚型野鸟AIV。此株h6n2亚型AIV具有小鼠适应性,且对小鼠呈低致病性。病毒感染小鼠后获得哺乳动物适应性突变。本研究证明h6n2亚型野鸟AIV对哺乳动物宿主适应性增强,应加强对辽宁省野鸟AIV监测力度,为辽宁省AIV防控提供预警信息。

关键词：野鸟禽流感病毒 h6n2 遗传进化适应性突变

2014～2017年广东省h6亚型禽流感病毒分子特征及致病性研究

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2014～2017年广东省H6亚型禽流感病毒分子特征及致病性研究

作者：李智贤华南农业大学

学位级别：硕士

h6亚型禽流感病毒感染宿主范围非常广,在北美洲和亚洲鸟群中普遍存在,也是我国南方地区家禽和水禽常见的禽流感病毒亚型之一。我国自2000年以来在家禽中已有分离到h6亚型禽流感病毒的报道,其流行和传播呈上升趋势,导致h6亚型禽流感病毒... 详细信息

h6亚型禽流感病毒感染宿主范围非常广,在北美洲和亚洲鸟群中普遍存在,也是我国南方地区家禽和水禽常见的禽流感病毒亚型之一。我国自2000年以来在家禽中已有分离到h6亚型禽流感病毒的报道,其流行和传播呈上升趋势,导致h6亚型禽流感病毒与其他亚型禽流感病毒发生交流的可能性大大增加。与此同时,大量使用疫苗或药物预防禽流感病毒在禽类中发生并传播以及病毒存活环境的变化,均可能导致病毒发生基因突变。从而改变其生物学特性,这对禽类养殖经济和广大公共环境卫生带来极大的威胁。所以,对我国h6亚型禽流感病毒进行全基因组遗传演化分析和生物学特性的研究具有重要意义。本研究主要收集了广东省多个地区活禽交易市场分离所得的h6亚型禽流感病毒,综合国内报道的h6亚型禽流感病毒流行病学调查研究结果和获取分离株的地区和时间情况,筛选出92株2014年～2017年的病毒分离株。并对其进行遗传进化分析及致病性研究。其中包括了48株h6n2亚型禽流感病毒和44株h6n6亚型禽流感病毒。病毒分离与鉴定结果显示,分离所得的h6n2亚型禽流感病毒毒株,有5株来自于鸡只,其余毒株均从水禽中分离所得;h6n6亚型禽流感病毒毒株,有2株病毒分离于鸽子,3株从环境中分离所得,5株从鸡中分离所得,其余毒株均从水禽中分离所得。92株毒株的hA氨基酸裂解位点附近序列均为PQIETR↓GLF,符合低致病性禽流感病毒的典型分子标志。h6n2亚型禽流感病毒分离株编码hA蛋白的氨基酸,其位点对应h3亚型禽流感病毒序列位置为155位和190位分别有21株和25株毒株发生了变异。而h6n6亚型禽流感病毒分离株中有3株毒株发生编码hA蛋白的氨基酸138位突变。另外,h6n2亚型禽流感病毒分离株中,有7株毒株编码nA蛋白的氨基酸片段发生了单个潜在糖基化位点缺失,另外有3株毒株发生了单个潜在糖基化位点插入。h6n6亚型禽流感病毒分离株中,有4株毒株的编码nA蛋白的氨基酸片段发生了单个潜在糖基化位点的缺失。根据对病毒hA和nA基因信息,从首次筛选的毒株中选出20株h6n2亚型禽流感病毒毒株和20株h6n6亚型禽流感病毒毒株,并对其进行全基因信息获取与分析。所有分离毒株除编码病毒外部蛋白的氨基酸片段外,其余6个编码病毒蛋白的氨基酸片段均没有发生关键位点的突变和氨基酸数量的变化。根据观察病毒8个不同基因片段的在其遗传进化树上的位置,可总结出所分离的h6n2亚型禽流感病毒共有7种不同的基因型组合,h6n6亚型禽流感病毒共有10种不同的基因型组合,符合中国南方地区h6亚型禽流感病毒基因组合类型繁多的实际情况。经过对病毒基因信息分析,筛选出两株h6n2亚型禽流感病毒毒株和两株h6n6亚型禽流感病毒毒株,其病毒名称分别为A/chicken/heyuan/d752/2016(h6n2)、A/g oose/Guangdong/e488/2017(h6n2)、A/pigeon/Panyu/d9/2016(h6n6)和A/duck/Gua ngzhou/e168/2017(h6n6)。以10EID/200μL病毒剂量分别以滴鼻和点眼的方式感染SPF鸡,以滴鼻的方式感染BALB/c小鼠。实验结果发现毒株感染SPF鸡和BALB/c小鼠后引起攻毒动物血清的抗体转阳,并从实验动物的肺部及气管等组织器官研磨液中检出不同程度的病毒含量。毒株A/goose/Guangdong/e488/2017(h6n2)只能在攻毒组实验鸡的气管内明显复制,病毒滴度为3.75±0.5 logEID/200μL。毒株A/p igeon/Panyu/d9/2016(h6n6)只能在攻毒组实验鸡的肺部检测出明显的病毒滴度,滴度为3.25 logEID/200μL。在对SPF鸡感染实验中,除e168-h6n6实验组外,其余病毒实验组可以使同居组动物发生感染。而在小鼠实验中,h6n2亚型禽流感病毒攻毒组对小鼠体重的影响力明显大于h6n6亚型禽流感病毒攻毒组,但二者均存在对小鼠此类哺乳类动物造成感染和明显的体重变化。

关键词：禽流感病毒 h6n2 h6n6 致病性遗传演化分析