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h4亚型禽流感病毒套式RT-PCR检测方法的建立

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动物医学进展 2015年第2期36卷 11-15页

作者：吴嫒琼谢芝勋胡庭俊谢丽基罗思思邓显文谢志勤黄莉黄娇玲曾婷婷广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 广西兽医研究所畜禽疫苗新技术重点实验室广西南宁530001

旨在建立一种快速、准确检测h4亚型禽流感病毒(AIV)的方法,针对h4亚型AIV hA基因保守序列,设计并筛选出2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了h4亚型AIV套式RT-PCR检测方法。特异性试验结果显示,该法可特异性检测出h4亚型AIV,对其他常... 详细信息

旨在建立一种快速、准确检测h4亚型禽流感病毒(AIV)的方法,针对h4亚型AIV hA基因保守序列,设计并筛选出2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了h4亚型AIV套式RT-PCR检测方法。特异性试验结果显示,该法可特异性检测出h4亚型AIV,对其他常见禽病病原体无交叉;敏感性试验结果显示,该法对h4亚型AIV检测下限为360fg/μL;用该法对106份临床样品进行检测,临床样品检测结果与病毒分离结果一致。本研究建立的套式RT-PCR方法为h4亚型AIV的早期诊断及有效防控提供了快速、特异和敏感的检测方法。

关键词： h4亚型禽流感病毒套式RT-PCR 检测

一株h4亚型禽流感病毒全基因组序列测定及遗传演化分析

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中国预防兽医学报 2011年第3期33卷 185-188页

作者：刘丽玲李雁冰张翼段振华施建忠田国彬曾显营刘娣华育平陈化兰黑龙江省农业科学院黑龙江哈尔滨150086 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北林业大学黑龙江哈尔滨150040

2008年对我国南方活禽市场进行流行病学监测时从鸭体内分离鉴定一株h4亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/duck/Guangxi/912/2008(h4N2)(缩写为DK/GX/912/08)。为了解该株h4亚型AIV的来源、特征及其分子演化规律,本研究对其全基因序列进行测定... 详细信息

2008年对我国南方活禽市场进行流行病学监测时从鸭体内分离鉴定一株h4亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/duck/Guangxi/912/2008(h4N2)(缩写为DK/GX/912/08)。为了解该株h4亚型AIV的来源、特征及其分子演化规律,本研究对其全基因序列进行测定,并与GenBank登录的相关病毒进行遗传演化分析。结果表明:DK/GX/912/08hA基因切割位点附近的氨基酸序列(PEKASR↓GLF)符合低致病力AIV的特征,其分子遗传演化关系属于东半球谱系的欧亚分支;NA基因与A/duck/Jiangxi/1286/2005(h5N2)在同一分支内,核苷酸同源性为98.1%;PB2基因与A/duck/Nanchang/4-165/2000(h4N6)处于同一分支;而NS基因与A/duck/Jiangxi/1786/03(h7N7)同源性最高。因此,推测DK/GX/912/08可能是不同来源的基因在鸭体内经过复杂重组演变的一株重组病毒。

关键词：禽流感病毒 h4亚型遗传演化分析

三株鸡源h4亚型禽流感病毒分离株hA基因的序列分析

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动物医学进展 2011年第12期32卷 15-19页

作者：张鹏黄娟陈杰蒋文明陈继明单虎青岛农业大学动物科技学院山东青岛266109 中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032

RT-PCR扩增出3株鸡源h4亚型禽流感病毒(AIV)分离株(A/chicken/Anhui/AB22/2010;A/chicken/Anhui/AB29/2010;A/chicken/Anhui/AB30/2010)的血凝素(hA)基因,进行了分子克隆与测序,对测得的hA序列用DNA Star软件分析,并同NCBI资源库里已有的序列用MEGA5软件进行比较分析其遗传变异。结果显示,3株分离株与湖南分离株A/duck/hunan/819/2009(h4N2)关系很近,同源性达98.4%以上。裂解位点的氨基酸序列均为PEKASRG,符合低致病性AIV的序列特征。全球谱系分析表明,这些分离株属东半球谱系的欧亚分支。本研究在国内首次报道了鸡源h4亚型禽流感病毒血凝素全基因序列,该结果对我国禽流感研究有一定参考价值。

关键词：禽流感病毒 h4亚型序列分析

环洞庭湖区活禽批发市场和水禽场h4亚型禽流感病毒监测

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畜牧与兽医 2014年第8期46卷 25-27页

作者：黄建龙谭丹王昌建范仲鑫朱春霞王伟国张朝阳刘道新邓国华湖南省动物疫病预防控制中心湖南长沙410014 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

调查2009—2013年洞庭湖地区活禽批发市场和水禽场h4亚型禽流感病毒的分布和流行情况,为该地区h4亚型禽流感的防控提供依据。结果显示:各年度均在环洞庭湖区活禽批发市场上分离到h4亚型禽流感病毒,总的分离率为3.14%;水禽场h4亚型禽流... 详细信息

调查2009—2013年洞庭湖地区活禽批发市场和水禽场h4亚型禽流感病毒的分布和流行情况,为该地区h4亚型禽流感的防控提供依据。结果显示:各年度均在环洞庭湖区活禽批发市场上分离到h4亚型禽流感病毒,总的分离率为3.14%;水禽场h4亚型禽流感病毒场间阳性率达到8.72%,拭子的h4亚型病毒分离率为1.12%。提示洞庭湖区活禽批发市场和水禽场h4亚型禽流感病毒带毒率比较高。

关键词：禽流感病毒 h4亚型监测洞庭湖区

一株野禽源h4亚型禽流感病毒hA基因的序列测定及全球谱系演化分析

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中国动物检疫 2009年第4期26卷 26-28页

作者：嵇康蒋文明曹玉飞尚飞雪王洪斌黄保续陈继明东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

采用RT-PCR方法扩增出一株鄱阳湖地区野禽源h4亚型AIV的血凝素基因,并进行分子克隆与测序。与GenBank上已发表的不同来源的h4亚型AIV进行同源性对比,发现该毒株与亚洲分离株核苷酸同源性较高,达96%。全球谱系分析表明,该毒株属东半球谱... 详细信息

采用RT-PCR方法扩增出一株鄱阳湖地区野禽源h4亚型AIV的血凝素基因,并进行分子克隆与测序。与GenBank上已发表的不同来源的h4亚型AIV进行同源性对比,发现该毒株与亚洲分离株核苷酸同源性较高,达96%。全球谱系分析表明,该毒株属东半球谱系的欧亚分支。研究结果对于进一步深入研究野生鸟类的禽流感传播作用具有重要参考价值。

关键词：禽流感野禽 h4亚型谱系分析

h4和h6亚型禽流感病毒血凝素蛋白特异性单因子血清的制备

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中国兽医科学 2015年第10期45卷 1058-1063页

作者：杨佳运李旭勇贾艳娥郭晶翁少亭高雪朱启运中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046

为制备h4和h6亚型禽流感病毒血凝素蛋白特异性单因子血清,以便快速鉴定h4以及h6亚型禽流感病毒,根据GenBank中A/Duck/hunan/S11090/2012(h4N6)和A/Chicken/Guangdong/S1312/2010(h6N2)的血凝素基因序列,人工合成并进行密码子优化后插入真核表达载体pCAGGs,通过双酶切鉴定以及测序确定重组质粒构建成功。给每只SPF鸡注射免疫200μg重组质粒,免疫周期为30d,第3次免疫后第10天,通过心脏采血收获单因子血清。间接免疫荧光试验和Western-blot试验的结果表明,重组质粒中hA基因均被成功表达。利用h4和h6亚型禽流感病毒抗原进行血凝抑制试验,结果显示抗体效价均在64至128之间,表明制备的单因子血清抗体效价较高,敏感性强。使用其他亚型的禽流感病毒以及新城疫病毒为抗原进行血凝抑制试验发现结果均为阴性,表明制备的单因子血清与其他亚型禽流感病毒及新城疫病毒无交叉反应。

关键词：禽流感病毒 h4亚型 h6亚型单因子血清

两株h4N3禽流感病毒全基因组序列分析及对小鼠的致病性研究

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中国预防兽医学报 2012年第4期34卷 266-269页

作者：张文亮张曦朱占松谭丹崔鹏飞施建忠邓国华陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

2009年在我国南方活禽交易市场进行流行病学调查时,从鸭体内分离到2株h4N3亚型禽流感病毒(AIV),DK/FJ/S1419/09(h4N3)(FJ/419/2009)和DK/hUN/S1010/09(h4N3)(huN/010/2009)。为了解这2株h4N3亚型AIV的生物学特性,本研究对其进行全基因组分析及对小鼠致病性研究。结果显示:其hA基因来源于近两年流行的h4亚型病毒株,NA基因来源于其它亚型病毒株。内部基因来源较复杂,与FJ/419/2009内部基因同源性最高的病毒株均来自国内h5、h6等亚型分离株,但与huN/010/2009同源的内部基因则差异较大,与PA、M和NS同源性最高的病毒株分别为A/wild/duck/Korea/UP122/2007(h1N1),A/muscovy/duck/Thailand/CU-LM1983/2009(h4N6)and A/avian/Japan 8KI0068/2008(h3N6)。用106EID50病毒剂量感染6周龄BALB/c小鼠,结果显示试验组小鼠感染后第3 d采脏器样品,仅在鼻甲和肺部能检测到病毒存在。以上数据表明,尽管这2株h4N3特殊亚型组合病毒来源复杂,但对小鼠的致病性较低。

关键词：禽流感病毒 h4亚型基因组分析致病性