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塞来昔布对h22肝癌组织环氧合酶2及磷脂酶A2抑制作用

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中国实验诊断学 2010年第2期14卷 174-176页

作者：徐志刚陈立吕晓艳宋艳芳王进王春艳张卓吉林大学白求恩医学院药理学系吉林长春130021 吉林大学第一医院干部病房吉林大学第三临床医学系

目的考察塞来昔布对小鼠h22肝癌细胞移植瘤生长的抑制作用,并探讨其作用机制。方法40只BALB/c小鼠腋下接种h22肝癌细胞,然后随机分为对照组和低、中、高剂量(100、200、400mg/kg)组,于接种后3天灌胃给药,连续用药15天后处死,计算肿瘤的... 详细信息

目的考察塞来昔布对小鼠h22肝癌细胞移植瘤生长的抑制作用,并探讨其作用机制。方法40只BALB/c小鼠腋下接种h22肝癌细胞,然后随机分为对照组和低、中、高剂量(100、200、400mg/kg)组,于接种后3天灌胃给药,连续用药15天后处死,计算肿瘤的体积和重量;Western blot法检测瘤组织中胞浆磷脂酶A2和环氧合酶2的表达。结果塞来昔布低、中、高剂量治疗组的小鼠平均瘤重均低于对照组,与对照组相比较有显著性差异(Ph22肝癌具有抑制作用,其机制可能是通过抑制胞浆磷脂酶A2及环氧合酶2的表达而发挥抗肿瘤的作用,二者在此过程中具有协同效应。

关键词：塞来昔布 h22肝癌胞浆磷脂酶A2 环氧合酶-2

扶正解毒通络方对h22肝癌小鼠抗肝癌作用及对其细胞因子的影响

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中国急救医学 2016年第Z1期36卷 -页

作者：张景洲孟繁平长春中医药大学附属医院吉林长春130000 延边大学医学院免疫学与病原生物学教研室吉林延吉133000

随着医学技术的不断进步,中医治疗肝癌的理念得以广泛开展并得到了广大医疗研究人员的认可.扶正解毒通络方(FJTLF)是由黄芪、白术、姜黄、半边莲等多种中药复合而成,一些临床应用证明,FJTLF对于恶性肿瘤及改善免疫功能具有很好的作用.... 详细信息

随着医学技术的不断进步,中医治疗肝癌的理念得以广泛开展并得到了广大医疗研究人员的认可.扶正解毒通络方(FJTLF)是由黄芪、白术、姜黄、半边莲等多种中药复合而成,一些临床应用证明,FJTLF对于恶性肿瘤及改善免疫功能具有很好的作用.本课题以“毒损肝络”理论为核心,提出采用解毒通络法治疗肝癌,并通过扶正解毒通络方应用于治疗取得了一定的效果.本研究采用h22肝癌小鼠进行体内实验,探究扶正解毒通络方在抗肝癌的临床效果,现汇报如下.

关键词：扶正解毒通络方 h22肝癌细胞因子抗癌作用

干、鲜壁虎冻干粉对小鼠h22肝癌体内外抑制作用

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世界华人消化杂志 2007年第2期15卷 157-160页

作者：杨金霞王学美朱伟富宏刘庚信北京大学第一医院中西医结合研究室北京市100034

目的:研究干、鲜壁虎冻干粉对荷h22实体型移植瘤小鼠体内抑瘤作用及其含药血清体外对h22肝癌细胞的增殖抑制作用.方法:采用昆明小鼠h22移植瘤模型观察干、鲜壁虎冻干粉体内抑瘤活性及小鼠胸腺、脾脏指数变化:MTT法检测不同浓度干、鲜壁... 详细信息

目的:研究干、鲜壁虎冻干粉对荷h22实体型移植瘤小鼠体内抑瘤作用及其含药血清体外对h22肝癌细胞的增殖抑制作用.方法:采用昆明小鼠h22移植瘤模型观察干、鲜壁虎冻干粉体内抑瘤活性及小鼠胸腺、脾脏指数变化:MTT法检测不同浓度干、鲜壁虎冻干粉含药血清对h22肝癌细胞体外杀伤作用.结果:干、鲜壁虎低、中、高3个剂量组的抑瘤率分别为25.6%,40.0%,48.5%和20.7%,28.1%,51.1%.各壁虎组与西药5-FU组相比,不同程度提高了荷瘤小鼠的胸腺质量(Ph22细胞的增殖,干、鲜壁虎低、中、高含药血清组的增殖抑制率为17.4%,21.0%,34.5%和16.4%,26.3%,43.2%.结论:干、鲜壁虎冻干粉均具有良好的抗肿瘤作用.

关键词：壁虎抗肿瘤作用 h22肝癌小鼠

茯苓发酵液多糖的提取及对h22肝癌细胞体内、外作用的初步研究

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茯苓发酵液多糖的提取及对H22肝癌细胞体内、外作用的初步研究

作者：陈阳大连医科大学

学位级别：硕士

目的:恶性肿瘤近年来已经成为严重威胁我国人群健康的主要公共卫生问题之一,肿瘤的发病率和死亡率均呈上升趋势,防控形势十分严峻。当前人们迫切需求寻找发现抗肿瘤作用效果好且副作用小的天然抗肿瘤药物。有关茯苓多糖的研究也越来越多... 详细信息

目的:恶性肿瘤近年来已经成为严重威胁我国人群健康的主要公共卫生问题之一,肿瘤的发病率和死亡率均呈上升趋势,防控形势十分严峻。当前人们迫切需求寻找发现抗肿瘤作用效果好且副作用小的天然抗肿瘤药物。有关茯苓多糖的研究也越来越多,很多研究表明茯苓多糖具有较好的抗肿瘤作用,但大多数茯苓多糖提取自茯苓菌核,培养周期长、产量低,提取多糖一般用超声或酶解的方式获取。利用液体发酵的方法从茯苓菌丝体发酵液中提取茯苓多糖周期短,成本低,水溶性多糖含量高,其用于抗肿瘤的研究较少,因此本实验主要利用液体发酵的方法提取茯苓发酵液多糖(PFBP)并在体内、外初步验证其抗肿瘤活性。方法:1.利用真菌液体培养基制备茯苓菌丝体发酵液,通过水提醇沉法提取发酵液多糖,利用苯酚-硫酸法检测多糖含量,计算多糖得率;2.通过PFBP体外直接作用h22小鼠肝癌细胞,以生理盐水为空白对照,顺铂为阳性对照,利用CCK-8法检测PFBP的细胞毒作用;3.通过建立h22荷瘤Balb/c小鼠模型,利用PFBP不同浓度(50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg)和生理盐水、顺铂分组处理小鼠,观察小鼠生存期、测量小鼠体重和腹围,取小鼠尾静脉血涂片瑞氏-吉姆萨染色观察实验小鼠外周血炎性细胞的变化,处死小鼠取肝脏,脾脏和胸腺并称重,取小鼠眼球血使用细胞因子试剂盒采用ELISA(酶联免疫吸附测定)法检测IL-2(白细胞介素-2)、IFN-γ(干扰素-γ)、TNF-α(肿瘤坏死因子-α)取小鼠腹水离心后制作石蜡切片并做hE(苏木精—伊红)染色,观察对腹水肿瘤细胞和免疫细胞的影响。结果:1.茯苓菌丝体经液体发酵得到茯苓菌丝体发酵液,水提醇沉法提取多糖,经苯酚-硫酸法检测其多糖浓度为10.1mg/mL,粗多糖得率为4.5%;2.PFBP体外直接作用于h22细胞,CCK-8检测细胞毒性显示PFBP体外能直接抑制h22细胞,并呈现时间-剂量依赖性,其最高浓度(2mg/mL)24小时和48小时抑制率分别为23.12%、35.7%,其抑制率低于顺铂24小时和48小时43.34%、75.96%的抑制率(p0.05),表明各组对肝脏影响差异不大。而治疗组和顺铂组的脾脏指数和治疗组的胸腺指数相比空白对照组相应指数变大并呈现出浓度依赖性,顺铂组的脾脏指数也高于空白对照组(p0.05);6.PFBP治疗组在中浓度和高浓度时相比空白对照组能显著提高血清IL-2含量(p0.05);7.外周血涂片染色可见治疗组外周血大量炎症细胞浸润可见中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞等,红细胞数目较多,排布紧密,而生理盐水组和顺铂组血涂片中红细胞排布比较稀疏,很少见到炎症细胞。腹水肿瘤细胞染色可见治疗组腹水中肿瘤细胞形态不规则,细胞体积较小,核边集,有的可以看到核碎裂,腹水中有大量炎性细胞和免疫细胞,如中性粒细胞,淋巴细胞和巨噬细胞等,而生理盐水组肿瘤细胞核深染,形态较规则,少见炎性细胞,顺铂组肿瘤细胞形态不规则,可见核不完整排列紊乱,炎症细胞较少。结论:1.水提醇沉法提取茯苓菌丝体发酵液中的多糖,经检测多糖浓度为10.1mg/mL,粗多糖得率为4.5%。2.利用CCK-8法检测PFBP体外作用h22细胞的细胞毒性作用,证实其体外具有一定的直接杀伤h22细胞的作用。3.经PFBP干预的h22荷瘤小鼠的生存期延长,小鼠腹水的症状减轻。4.PFBP能够使h22荷瘤小鼠脾脏和胸腺指数增加,对肝脏指数无影响。5.PFBP能够促进h22荷瘤小鼠血清IL-2、IFN-γ、TNF-α分泌增加,小鼠外周血和腹水中炎性细胞浸润,其主要依靠激发机体免疫功能来间接发挥抗肿瘤作用。

关键词：茯苓发酵液多糖 h22肝癌

蝎毒多肽提取物抑制h22肝癌血管生成的作用机制研究

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蝎毒多肽提取物抑制H22肝癌血管生成的作用机制研究

作者：隋文文济南大学

学位级别：硕士

目的：观察蝎毒多肽提取物(PESV)对小鼠h22肝癌移植瘤肿瘤组织中PTEN、PI3K、P-Akt、COX-2、hIF-1α、VEGF-A的表达及肿瘤新生微血管密度(MVD)的影响，并进一步揭示PESV抗肿瘤血管生成的可能机制，为临床肝癌的治疗提供实验依据。方法：... 详细信息

目的：观察蝎毒多肽提取物(PESV)对小鼠h22肝癌移植瘤肿瘤组织中PTEN、PI3K、P-Akt、COX-2、hIF-1α、VEGF-A的表达及肿瘤新生微血管密度(MVD)的影响，并进一步揭示PESV抗肿瘤血管生成的可能机制，为临床肝癌的治疗提供实验依据。方法：1．建立h22肝癌皮下荷瘤模型，随机分为荷瘤对照组（对照组），PESV高(40mg/kg)、低(10mg/kg)剂量组，5-FU(20mg/kg)组，每组10只。连续干预14天。绘制肿瘤体积生长曲线并计算抑瘤率，观察PESV对肿瘤生长的抑制作用。2．常规hE染色，观察各组肿瘤组织病理变化。3．采用免疫组织化学法检测各组肿瘤组织MVD、PTEN、PI3K、P-Akt、COX-2、hIF-1α、VEGF-A蛋白水平表达。4．Western blot检测各组肿瘤组织PTEN、PI3K、P-Akt、Akt、COX-2、hIF-1α、VEGF-A蛋白水平表达。5．ELISA法检测h22肝癌小鼠血清中PTEN、PI3K、P-Akt、COX-2、hIF-1α、VEGF-A的水平。结果：1．PESV对h22肝癌生长的影响随着干预时间的增长，各组小鼠移植瘤的体积逐渐增加，5-FU组，PESV高、低剂量组分别从第15、17、19天起与对照组肿瘤体积比较差异有统计学意义（Ph22肝癌肿瘤组织病理学变化经h＆E染色显示，h22肝癌细胞表现出片状或巢状不规则的增长。在对照组中，肿瘤血管丰富，少见核固缩，核碎裂和核凋亡等形态学变化。5-FU组和PESV高、低剂量组显示多个大片状坏死区，大多数肿瘤细胞表现出多种凋亡形态，如核固缩和核碎裂。3．PESV对肿瘤组织中微血管密度的影响CD34表达于肿瘤新生血管内皮细胞的细胞质或细胞膜。以胞浆呈现棕黄色染色为阳性结果。对照组、5-FU组、PESV高、低剂量组的MVD计数分别为7.7±1.4、4.4±1.8、5.3±1.6、5.4±1.5。PESV高、低剂量组的MVD与对照组相比，差异均有统计学意义（PhIF-1α和VEGF-A表达的影响4.1免疫组化法检测结果免疫组织化学染色结果显示，PTEN、PI3K、P-Akt、COX-2、VEGF-A和CD34表达于细胞质或细胞膜，hIF-1α表达于肿瘤细胞的细胞核和细胞质中，均以呈现棕黄色或棕褐色为阳性结果。用Leica Qwin V3图像分析软件进行灰度值分析，与荷瘤对照组相比，PESV高剂量组和低剂量组中PI3K、P-Akt、COX-2、hIF-1α和VEGF-A的蛋白表达均降低（PhIF-1α、VEGF-A的蛋白表达呈正相关（r=0.912，PhIF-1α、VEGF-A的蛋白表达呈正相关（r=0.890，PhIF-1α、VEGF-A的蛋白表达呈正相关（r=0.969，PhIF-1α与VEGF-A的蛋白表达呈正相关（r=0.973，PhIF-1α、VEGF-A的蛋白表达呈负相关（r=-0.895，PhIF-1α、VEGF-A表达均减弱。与对照组相比，PESV高、低剂量组PTEN蛋白表达均增强。用ImageJ软件分析显示，PESV高、低剂量组PI3K、P-Akt、COX-2、hIF-1α、VEGF-A表达均减弱(P<0.05或P<0.01)，且PE

关键词：蝎毒多肽提取物 h22肝癌 PI3K/Akt信号转导通路缺氧诱导因子-1α 血管内皮生长因子-A 血管生成微血管密度

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不同品类铁观音抗h22肝癌的研究

不同品类铁观音抗H22肝癌的研究

作者：朱秋芳福建农林大学

学位级别：硕士

众所周知,茶叶具有抗癌效果。前人主要集中研究绿茶、红茶、黑茶的抗癌作用,对铁观音抗癌领域的研究甚少。为探明铁观音的抗癌效果,本论文以h22肝癌为研究对象,系统探讨了不同浓度清香型铁观音和不同品类铁观音对h22肝癌的抑瘤作用、全... 详细信息

众所周知,茶叶具有抗癌效果。前人主要集中研究绿茶、红茶、黑茶的抗癌作用,对铁观音抗癌领域的研究甚少。为探明铁观音的抗癌效果,本论文以h22肝癌为研究对象,系统探讨了不同浓度清香型铁观音和不同品类铁观音对h22肝癌的抑瘤作用、全血象、炎症因子(IL1α、RANTES、Ax1、MIP-2)、生物活性因子(IL-2、IL-4、IL-9、Foxp3、FasL、Perforin、Granzyme B、IL-17、VEGF、survivin、NF-κB)、细胞增殖能力、细胞凋亡的影响,实验结果如下:(1)不同品类铁观音对h22肝癌荷瘤鼠的抑瘤作用以不同浓度清香型铁观音(浓度梯度设置为茶水比1:100、1:50、1:25)和不同品类铁观音(包括茶水比1:50的清香型铁观音、1:50的浓香型铁观音、1:50的陈香型铁观音、1:50的铁观音茶末和茶水比1:12.5铁观音鲜叶,茶水比1:250的铁观音速溶茶和1:250的高咖啡碱铁观音速溶茶)为材料,以凉开水为空白对照,以5-FU药物为阳性对照,通过测量肿瘤重量、计算抑瘤率,得到不同浓度清香型铁观音对h22肝癌荷瘤鼠抑瘤作用分别为:1:50组(53.29%)、5-FU组(42.76%)、1:25 组(35.53%)、1:100 组(30.92%);不同品类铁观音对h22肝癌荷瘤鼠抑瘤作用分别为:浓香组(71.05%)、陈香组(67.76%)、茶末组(66.45%)、高咖组(65.79%)、鲜叶组(59.87%)、清香组(53.29%)、速溶组(52.63%)、5-FU 组(42.76%)。(2)不同品类铁观音对h22肝癌荷瘤鼠全血象的影响不同浓度清香型铁观音处理后,各组的红细胞总数、血红蛋白含量和红细胞压积极显著上升。不同品类铁观音处理后,鲜叶组和高咖组的红细胞总数、血红蛋白含量极显著升高,红细胞压积显著升高。清香组极显著提高血红蛋白含量,显著提高红细胞总数和红细胞压积。茶末组显著提高红细胞总数、血红蛋白含量和红细胞压积。因此不同浓度清香型铁观音组、鲜叶组、高咖组、清香组和茶末组有利于提高h22肝癌荷瘤鼠血液中造血功能的趋势,并可减缓或消除贫血的发生。(3)不同品类铁观音对h22肝癌荷瘤鼠多种炎症因子的影响不同浓度清香型铁观音和不同品类铁观音处理后,三个浓度清香组、鲜叶组、茶末组和高咖组均下调了肿瘤组织中Ax1的表达,其中三个不同浓度组和鲜叶组达极显著性差异,其他达显著性差异。茶水比1:50和1:25的清香组、鲜叶组、浓香组、陈香组和茶末组均下调了肿瘤组织中MIP-2的表达,其中鲜叶组和茶末组达极显著性差异,其他达显著性差异。陈香组和清香组均上调了血清中RANTES的表达,其中陈香组达极显著性差异,清香组达显著性差异。(4)不同品类铁观音对h22肝癌荷瘤鼠肿瘤组织中生物活性因子mRNA表达的影响1:25组、陈香组、茶末组通过极显著上调IL-2、IL-4、IL-9、Perforin、Granzyme B和Foxp3 mRNA的表达,促进h22肝癌细胞凋亡,抑制肿瘤生长。1:100组极显著下调survivin的表达、显著下调VEGF和NF-κB的表达,1:50组极显著下调survivin和NF-κB的表达,浓香组和高咖组极显著降低VEGF、survivin和NF-κB的表达,鲜叶组极显著降低VEGF和survivin的表达、显著降低NF-κB的表达,抑制新血管生成、抑制癌细胞增殖及转移、促进凋亡信号通路的转导。速溶组极显著上调IL-4和Perforin的表达,显著上调FasL的表达,极显著下调survivin的表达,显著下调VEGF的表达,降低炎症程度,诱导h22癌细胞凋亡,抑制肿瘤生长。(5)不同品类铁观音在体外对h22肝癌细胞的抑制研究以不同品类铁观音为处理(不同品类铁观音原液包括茶水比1:12.5的清香型铁观音、1:12.5的浓香型铁观音、1:12.5的陈香型铁观音、1:12.5的铁观音茶末,茶水比1:3.125铁观音鲜叶,茶水比1:62.5铁观音速溶茶和1:62.5的高咖啡碱铁观音速溶茶),以5-FU药物为阳性对照(原液浓度为25 mg/mL),以1640培养基为空白对照组,通过MTT(噻唑蓝)和Annexin V(磷脂酰丝氨酸外翻分析)法检测细胞的增殖和凋亡,结果表明:不同品类铁观音均有抑制h22细胞增殖的作用,其生存率随时间的延长呈下降趋势。不同品类铁观音会促进h22肝癌细胞的凋亡和坏死,且主要作用在晚期凋亡。其中陈香组出现的晚期凋亡率最高,高咖组出现的早期凋亡率最高,鲜叶组出现的细胞坏死率最高。

关键词：铁观音 h22肝癌抗癌作用抗癌基因细胞凋亡

笃斯越桔浆果提取物对小鼠h22肝癌腹水移植瘤抑制作用的实验研究

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笃斯越桔浆果提取物对小鼠H22肝癌腹水移植瘤抑制作用的实验研究

作者：唐亮延边大学

学位级别：硕士

目的：观察笃斯越桔浆果提取物对小鼠h22移植型肝癌增殖的抑制作用,并检测荷瘤小鼠血清IL-2,TNF-α及细胞凋亡相关蛋白Cyclin E和p27kip1的表达以研究其作用机制。方法：建立小鼠h22肝癌腹水移植瘤模型。将60只体重18-22g雄性昆明小鼠... 详细信息

目的：观察笃斯越桔浆果提取物对小鼠h22移植型肝癌增殖的抑制作用,并检测荷瘤小鼠血清IL-2,TNF-α及细胞凋亡相关蛋白Cyclin E和p27kip1的表达以研究其作用机制。方法：建立小鼠h22肝癌腹水移植瘤模型。将60只体重18-22g雄性昆明小鼠随机分成空白对照组、5-氟尿嘧啶对照组、模型组、笃斯越桔高、中、低剂量组,每组10只,除空白组外其他各组均为h22荷瘤小鼠。连续给药10天,观察笃斯越桔提取物对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用和小鼠体重变化。最后一次给药后,禁食不禁水24h后,称重并眼球取血。脱颈处死小鼠,获得瘤体、脾、胸腺并称重,计算抑瘤率、胸腺指数和脾指数。ELISA检测血清中IL-2和TNF-α含量,DNA Ladder琼脂糖电泳检测细胞凋亡,western blot检测肿瘤细胞中Cyclin E、p27kip1蛋白表达。结果： 1.建立了小鼠h22肝癌腹水移植瘤模型。 2.笃斯越桔高、中、低剂量组,5-氟组、模型组瘤重分别为0.4134±0.14g、0.6106±0.18g、0.6832±0.42g、0.3565±0.11g、1.3736±0.59g,笃斯越桔高、中剂量组、5-氟组平均瘤重显著低于模型组(Ph22移植瘤抑制率分别为74.1%、69.9%、55.6%。笃斯越桔浆果提取物高、中、低剂量组、5-氟组、模型组用药前后体重变化分别为8.2±1.9g、7.7±3.1g、8.4±2.2g、7.9±2.6g、8.6±2.7g,各组之间无显著性差异(P>0.05)。笃斯越桔浆果提取物高、中、低剂量组、5-氟组、模型组各组胸腺指数分别为1.42±0.07、0.875±0.16、0.922±0.08、0.787±0.11、0.874±0.09,笃斯越桔高剂量组显著高于模型组(P0.05);脾指数分别为15.68±0.57、9.94±0.81、9.64±0.75、8.91±0.87、9.71±0.38,笃斯越桔高剂量组显著高于模型组(P0.05)。 3.将h22肿瘤组织提取DNA,用1%琼脂糖凝胶电泳发现笃斯越桔高剂量组出现明显DNA Ladder现象,5-氟组和肿瘤组没有出现DNA Ladder现象。 4.将h22肿瘤组织提取细胞总蛋白,进行western blot分析。5-氟组、笃斯越桔浆果提取物高、中、低剂量组、模型组细胞中,Cyclin E与β-actin相比相对含量分别为0.3567±0.0092、0.6110±0.0284、0.5668±0.0285、0.3184±0.0047、0.5830±0.0451,5-氟组和笃斯越桔高剂量Cyclin E表达量与模型组相比有显著性降低(P2297±0.0188、0.2343±0.0029,笃斯越桔高中p27kip1表达量与模型组相比显著性升高(P0.05)。 5.ELISA检测得到空白组、笃斯越桔浆果提取物高、中、低剂量组、5-氟组、模型组小鼠血清IL-2水平分别为7.18±0.38ng/ml、3.63±2.07ng/ml、5.73±1.48ng/ml、6.03±1.56ng/ml、5.68±1.7ng/ml2、5.73±2.07ng/ml,模型组和5-氟组血清IL-2含量显著低于空白组(P0.05)。 6.ELISA法检测空白组,5-氟组、笃斯越桔浆果提取物高、中、低剂量组、模型组小鼠血清TNF-a含量分别为1.33±0.87ng/ml、2.03±1.41ng/ml、1.83±1.08ng/m1、2.43±1.08ng/m1、2.63±1.24ng/ml、2.53±0.66ng/ml,各组与空白组相比,血清TNF-α含量无显著性差异(P>0.05)。笃斯越桔高、中、低剂量组、5-氟组血清TNF-a含量与模型组无显著性差异(P>0.05),笃斯越桔高、中、低剂量组与5-氟组血清TNF-a无显著性差异(P>0.05)。结论：笃斯越桔浆果提取物对小鼠h22肝癌有抑制作用,并能提高荷瘤小鼠的胸腺指数和脾指数;能够诱导h22肝癌肿瘤细胞发生细胞凋亡,可能通过诱导下调cyclin E水平,上调p27kip1水平发挥作用;笃斯越桔浆果提取物没有显著改变荷瘤小鼠血清IL-2和TNF-α水平。

关键词：笃斯越桔 h22肝癌细胞凋亡抗癌 Cyclin E P27kip1

99mTc-RGD显像评价血管内皮抑制素对h22肝癌疗效的研究

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99mTc-RGD显像评价血管内皮抑制素对H22肝癌疗效的研究

作者：李晓东河北医科大学

学位级别：硕士

目的:本研究采用99mTc标记的环形CDCRGDCKC多肽(99mTc-RGD-4CK)作为显像剂,对抗血管生成药(恩度)治疗过的h22肝癌小鼠进行显像及体内分布研究,探讨恩度与99mTc-RGD-4CK之间是否存在竞争关系及显像剂(99mTc-RGD-4CK)在监测恩度对h22肝癌... 详细信息

目的:本研究采用99mTc标记的环形CDCRGDCKC多肽(99mTc-RGD-4CK)作为显像剂,对抗血管生成药(恩度)治疗过的h22肝癌小鼠进行显像及体内分布研究,探讨恩度与99mTc-RGD-4CK之间是否存在竞争关系及显像剂(99mTc-RGD-4CK)在监测恩度对h22肝癌疗效方面的价值。方法: 第一部分:检测恩度是否抑制肿瘤组织对显像剂(99mTc-RGD-4CK)的摄取选取12只生长良好,肿瘤大小无明显差异的荷瘤KM小鼠,随机分为三个实验组(a、b、c)和一个对照组(d),每组3只,实验组分别于尾静脉注射高、中、低浓度的恩度及固定剂量的显像剂;对照组注射相同体积的生理盐水及显像剂。两小时后,行SPECT显像,利用感兴趣区技术(ROI),测量肿瘤组织(T)与对侧肢体肌肉组织(NT)的放射性计数,计算T/NT值;显像完毕后眼球取血,脱颈处死,取肿瘤组织,称重并测量放射性计数,计算每克组织的百分注入活度(%ID/g)。然后对每组肿瘤组织的T/NT值及%ID/g值进行统计学分析。第二部分:监测疗效选取36只生长良好,肿瘤大小无明显差异的荷瘤KM小鼠,按随机数字表法平均分为4组(A、B、C、D),每组9只,分别于腹腔注射高、中、低浓度的恩度及相同体积的生理盐水,每天用药一次。再将各组随机分为三组,分别给予三天、五天、七天的上述药物治疗后进行疗效的监测。 1 SPECT显像:各组荷瘤小鼠尾静脉注射显像剂18.5MBq(500uCi)/0.2ml后两小时进行显像,利用感兴趣区(ROI)技术,测量肿瘤部位(T)与对侧肢体肌肉部位(NT)的放射性计数,计算(T/NT)值,并对各组的T/NT值进行统计学分析。 2生物分布的研究:显像完毕后眼球取血,脱颈处死,完整取下肿瘤组织,测量其最大径(L)及最短径(W)计算体积V=LW2/2。然后取心、肝、肺、脾、胃、小肠、肾及肿瘤对侧肢体肌肉和骨,称重并测量放射性计数,计算各个脏器及肿瘤的每克组织百分注入活度(%ID/g),进行统计学分析,并与SPECT显像所得的T/NT值进行相关性分析。 3免疫组织化学的研究:取适量肿瘤组织,以10%的福尔马林固定,常规石蜡切片,CD34免疫组化染色,BCIP/NBT显色,判断微血管密度(MVD),对各组微血管密度进行统计学分析,并与肿瘤的%ID/g值进行相关性分析。结果: 第一部分:检测恩度是否抑制肿瘤组织对显像剂摄取的研究中,a、b、c、d四组肿瘤组织的%ID/g值及T/NT值分别进行统计分析,结果显示差异无统计学意义(P>0.05),这表明恩度与显像剂之间无竞争作用,且其注射剂量不影响肿瘤组织对显像剂的摄取。第二部分:监测恩度对h22肝癌疗效的研究 1第一次疗效监测 1.1 SPECT显像的结果治疗三天,各组肿瘤与肌肉组织的放射性比值(T/NT),中剂量组最小(2.92±0.30),生理盐水组最大(3.26±0.37)。方差分析显示四组之间差异无统计学意义(P=0.3191>0.05)。 1.2肿瘤的体积治疗三天,各组肿瘤组织的体积(cm3),中剂量组最大(0.94±0.37),低剂量组最小(0.49±0.6),方差分析结果显示四组之间差异无统计学意义(P=0.1163>0.05)。 1.3生物分布的结果治疗三天,各组肿瘤组织的每克组织百分注入活度分别为(%ID/g):5.12±0.35、5.29±0.36、5.59±0.25、5.70±0.26,经统计学分析四组之间的差异无统计学意义(P=0.1582>0.05)。 1.4免疫组化的结果治疗三天,各组肿瘤组织的微血管密度(MVD)值分别为(个/视野):14.6±2.07,16.2±1.92,17.2±2.59,18.0±3.87经统计学分析各组间差异无统计学意义(P=0.27>0.05)。 2第二次疗效监测 2.1 SPECT显像的结果治疗五天,各组肿瘤组织的T/NT值经单因素方差分析,差异无统计学意义(P=0.4836>0.05)。 2.2肿瘤体积的结果治疗五天,各组的肿瘤体积经单因素方差分析,差异无统计学意义 (P=0.88>0.05)。 2.3生物分布的结果治疗五天,各组肿瘤组织的%ID/g值分别为(%ID/g):4.02±0.08、5.54±0.27、5.37±0.25、5.63±0.35,经单因素方差分析高剂量组与其余三组之间差异有统计学意义(P=0.0002<0.05)。中剂量组、低剂量组与对照组之间差异无统计学意义。 2.4免疫组化的结果治疗五天,各组中肿瘤组织的MVD值(个/视野),高剂量组最低(11.2±1.5),对照组最高(19.4±2.7),中、低剂量组居中(13.4±2.3,15.8±1.6),经单因素方差分析四组间差异有统计学差异(P<0.0001),其中三个治疗组与对照组之间的差异有统计学意义,高剂量组与低剂量组差异也有统计学意义。 3第三次疗效

关键词： 99mTc-RGD 恩度 h22肝癌整合素αvβ3受体血管内皮抑素

顺铂低剂量节律化疗对小鼠h22肝癌血管生成的影响

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顺铂低剂量节律化疗对小鼠H22肝癌血管生成的影响

作者：侯继院青岛大学

学位级别：硕士

目的探讨顺铂低剂量节律(low-dose metronomic,LDM)化疗对小鼠h肝癌血管生成的影响,观察其抑瘤效果和毒副作用,为肝癌的临床治疗提供新思路。方法48只昆明小鼠皮下接种h肝癌细胞,随机分为4组(每组12只),节律组A:顺铂0.6mg/(kg.d)每日... 详细信息

目的探讨顺铂低剂量节律(low-dose metronomic,LDM)化疗对小鼠h肝癌血管生成的影响,观察其抑瘤效果和毒副作用,为肝癌的临床治疗提供新思路。方法48只昆明小鼠皮下接种h肝癌细胞,随机分为4组(每组12只),节律组A:顺铂0.6mg/(kg.d)每日腹腔注入,每周连续5次;节律组B:顺铂1mg/(kg.d)隔日腹腔注入,每周3次;最大耐受剂量(maximum tolerated dose,MTD)组:顺铂9mg/(kg.d)1次腹腔注入;对照组:生理盐水0.2mL每日腹腔注入,每周连续5次。观察小鼠体质量、肿瘤体积和毒副作用。实验结束时称瘤质量,苏木精-伊红(hE)染色行组织学观察及免疫组化法检测肿瘤内微血管密度(MVD),血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果①节律治疗组肿瘤生长持续缓慢,而MTD组用药初期肿瘤生长较慢,14天后生长加快。实验末,节律治疗组肿瘤体积及瘤质量显著低于对照组和MTD组(F=59.30,68.49,q=4.08～19.01,P＜0.01)。从化疗副作用来看:节律治疗组小鼠体质量逐渐增加,无行动迟缓、反应迟钝、精神食欲差等毒副反应,而MTD组小鼠体质量持续减轻、毒副反应明显。镜下节律治疗组瘤体内可见大量的变性坏死和少量的间质血管。②免疫组化结果示:节律组MVD计数,VEGF、MMP-2表达显著低于对照组和MTD组(F=9.56,9.38,10.17,q=3.56～6.18,P＜0.05),而MTD组与对照组差异没有显著性(q=1.36～2.27,P＞0.05);节律组PCNA表达稍低于对照组,无统计学意义(F=11.95,q=0.87,P＞0.05),而MTD组显著低于对照组和节律组(q=6.10,6.17,P＜0.01)。结论顺铂LDM化疗可显著抑制小鼠h肝肿瘤的生长及血管生成,比MTD化疗疗效好且毒性低;其抗血管生成作用可能与肿瘤内VEGF、MMP-2表达下调有关。

关键词：顺铂 h22肝癌化学疗法血管生成小鼠